高血压大鼠左室肥厚差异蛋白质组学研究

目的 运用蛋白质组学技术探讨腹主动脉缩窄(AAC)高血压大鼠左室肥厚差异蛋白质表达及其在左室肥厚发生机制中的作用.方法 8周龄SD大鼠随机分为AAC组及假手术组,9周后行心脏超声、血流动力学、病理学检查,并对二组心肌组织行双向电泳(2DE)找出差异点,MALDI-TOF-MS质谱鉴定蛋白质及West-ern-blot验证.结果 AAC组心率、收缩压、舒张压、左室收缩末压、左室压力变化速率、室间隔厚度与左室后壁厚度及心质量、心质量/体质量较假手术组均显著增加(P<0.05),心肌细胞排列紊乱、细胞核增大、畸形、染色加深.2DE中以浓度相差2倍以上为差异点.鉴定的21个蛋白质中,AAC组相对于假手术组有14个蛋白质上调,4个蛋白质下调,3个蛋白为AAC组新出现,上调蛋白质包括:肌球蛋白轻链、心肌α肌动1蛋白原、β肌球蛋白重链、3磷酸甘油醛脱氢酶、线粒体核糖体蛋白L15、G蛋白偶联受体34、酪氨酸蛋白激酶ZAP-70、RIKENcDNA 9030617003、天冬氨酸tRNA合成酶等,下调蛋白为H 转运ATP合成酶、L-3脂酰辅酶A脱氢酶等,两组蛋白表达差异有统计学意义(P<0.05).结论 AAC大鼠心肌中参与糖酵解蛋白、信号转导通路蛋白、基因表达调控蛋白增加,最终心肌细胞结构蛋白增加导致心肌肥厚.     

心肌特异表达基因p93的激酶及丝氨酸结构域在大肠杆菌中的高效表达

目的在大肠杆菌中高水平表达并分离纯化心脏特异表达基因p93的激酶与丝氨酸结构域片段.方法利用DNA重组技术,构建C末端带有6×His标签的p93激酶与丝氨酸结构域(p93-C)片段的原核表达载体pET28a-p93-C.对诱导表达条件和包涵体洗涤条件优化后,用Ni2 金属螯合吸附层析柱纯化.结果成功构建了pET28a-p93-C原核表达载体,诱导后摇床转速在350r/min下表达量最高,包涵体洗涤在超声条件下较好,分离纯化后从100ml菌液中可获得2.5mg蛋白.结论建立了高效稳定的p93-C原核表达体系以及较好的包涵体洗涤方法.     

扩张型心肌病蛋白质组学研究

目的:通过蛋白质组学方法比较扩张型心肌病(DCM)患者和正常人心肌组织差异蛋白质谱,找出与DCM相关的差异蛋白,进一步探讨DCM发生的分子生物学机制。方法:选择9例原发病为DCM、左心室射血分数<35%且接受心脏移植手术的患者作为DCM组:心肌组织取自患者自有心脏的左心室游离壁。对照组:心肌组织取自6例不能用作移植的供体心脏。采用双向凝胶电泳(2-DE)分析蛋白质谱差异,热考马斯亮蓝染色,串联质谱(MS-MS)鉴定差异蛋白。采用生物医学研发软件及资料库Ingenuity PathwaysAnalysis分析差异蛋白的定位、功能和相互作用。结果:DCM组和对照组心肌组织2-DE图像中蛋白点的整体分布比较相似,可以检测到超过1 000个蛋白点。通过比较分析,共鉴定出25种差异蛋白,其中在DCM组15种上调,10种下调。使用LOCATE数据库分析差异蛋白的亚细胞定位,提示其中大分子蛋白占40%,细胞骨架蛋白为28%,线粒体蛋白为28%。蛋白的PANTHER分类显示大多数差异蛋白参与了细胞的结构、肌肉收缩、钙离子转运和水解酶的活性等功能。生物学途径分类揭示差异蛋白参与了组织的形成过程、生物调节、发育过程、代谢过程和对刺激的应答过程等。结论:对DCM患者心肌组织蛋白质组学研究发现25种差异蛋白,其中上调表达的蛋白有15种,下调表达的有10种;这些蛋白参与了线粒体能量代谢、心肌收缩、凋亡等过程;提示这些过程可能在DCM发生发展中发挥重要作用。     

光动力治疗对尖锐湿疣HPV DNA载量的影响

目的:确定光动力治疗对尖锐湿疣(CA)人乳头瘤病毒(HPV)的影响。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测65例CA患者光动力治疗前、治疗3次后HPV DNA拷贝数。随访3个月观察复发情况,并分析复发与HPV DNA载量的关系。结果:3次治疗后HPVDNA拷贝数(3.10×10~3)较治疗前(5.12×10~6)显著下降(P0.05);复发患者(12例)治疗前平均拷贝数(4.62×10~7)高于未复发患者(6.75×10~4)(P0.05)。结论:光动力治疗CA能显著降低HPV病毒载量;患者疣体中HPV DNA载量与复发有关。     

女性尖锐湿疣患者宫颈亚临床感染与复发关系的研究

目的探讨女性尖锐湿疣(CA)患者宫颈中人乳头瘤病毒(HPV)亚临床感染与CA复发的关系.方法根据临床及病理结果,收集107例女性CA患者及65例正常女性患者的宫颈拭子,将其分为高复发组(52例)、低复发组(55例)和正常对照组(65例),利用基因芯片技术检测患者宫颈中是否存在HPV病毒及其亚型,并进行统计学分析.结果高复发组中67.3%(35/52)例检测出HPV病毒,低复发组中34.5%(19/55)检测出HPV病毒,正常对照组4.6%(3/65)检测出HPV病毒,各组间差异有统计学意义.结论女性CA患者宫颈中存在HPV病毒感染的潜在病灶可能是CA复发的原因之一.     

辛伐他汀涂层内固定对大鼠骨质疏松骨折愈合晚期的影响

背景：降脂类药物辛伐他汀具有一定的促进骨形成作用潜能,局部应用效果更佳。先前研究对骨质疏松大鼠骨折愈合中期的观察证实辛伐他汀涂层内固定可促进骨质疏松大鼠骨折愈合,但其对骨折愈合晚期的影响未见报道。 目的：观察局部应用辛伐他汀涂层内固定对骨质疏松大鼠骨折愈合晚期进程的影响。 方法：将雌性SD大鼠分为单纯骨折组、骨质疏松性骨折组及辛伐他汀干预组。单纯骨折组仅暴露腹腔卵巢不予切除,其余2组采用双侧卵巢切除法建立骨质疏松模型。卵巢切除后6周,所有大鼠建立股骨中段开放性骨折模型,单纯骨折组、骨质疏松性骨折组及辛伐他汀干预组分别采用无涂层、聚乳酸涂层和辛伐他汀复合聚乳酸涂层克氏针内固定。骨折造模后12周分析骨折侧股骨骨密度,X射线摄片和苏木精-伊红染色分析骨折愈合情况,免疫组织化学分析骨形态发生蛋白2在骨折局部的表达。 结果与结论：骨密度检测结果提示股骨全长及中段骨密度骨质疏松性骨折组、辛伐他汀干预组显著低于单纯骨折组,辛伐他汀干预组骨折部位骨密度显著高于骨质疏松性骨折组。X射线摄片结果提示,单纯骨折组骨折两端对位、对线良好,骨痂与骨皮质密度接近相同并相互连接,塑形基本完成;骨质疏松性骨折组愈合质量差,骨痂密度浅淡,部分标本仍见模糊的骨折线;辛伐他汀干预组骨折线消失,骨痂填满骨缺损,骨膜反应深,单纯骨折组、辛伐他汀干预组X射线评分显著高于骨质疏松性骨折组(P < 0.05)。苏木精-伊红染色提示,骨质疏松性骨折组骨折愈合进程较单纯骨折组延迟,辛伐他汀干预组骨小梁较骨质疏松性骨折组更规则有序。免疫组化结果提示各组大鼠骨形态发生蛋白2的表达水平差异无显著性意义。提示辛伐他汀局部应用可有效促进骨质疏松大鼠骨折愈合。中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料;骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性;组织工程全文链接：     

探索实验室生物安全管理的有效途径

实验室生物安全管理是实验室从业人员以及管理人员都在探讨的一个持久性的话题~([1-4]).在2003年抗击SARS、2008年北京奥运会、2009年国庆60周年庆典,以及预防甲型H1N1流感期间,实验室生物安全管理问题都被提到了空前的高度.北京市卫生局曾多次下发文件,要求在京单位各实验室要加强管理,避免实验室生物安全事件的发生.为做好实验室生物安全管理工作,我院结合自身特点,重点加强了实验室内部安全管理长效机制的建设.通过开展实验室安全保障基础建设,建立5项循环检查制度,有效排除了生物安全隐患.我们希望通过此种管理方法能够形成良性循环,通过不断的实践与经验积累逐步探索出实验室生物安全管理的有效途径.     

女性尖锐湿疣患者宫颈亚临床感染与复发关系的研究

目的探讨女性尖锐湿疣(CA)患者宫颈中人乳头瘤病毒(HPV)亚临床感染与CA复发的关系.方法根据临床及病理结果,收集107例女性CA患者及65例正常女性患者的宫颈拭子,将其分为高复发组(52例)、低复发组(55例)和正常对照组(65例),利用基因芯片技术检测患者宫颈中是否存在HPV病毒及其亚型,并进行统计学分析.结果高复发组中67.3%(35/52)例检测出HPV病毒,低复发组中34.5%(19/55)检测出HPV病毒,正常对照组4.6%(3/65)检测出HPV病毒,各组间差异有统计学意义.结论女性CA患者宫颈中存在HPV病毒感染的潜在病灶可能是CA复发的原因之一.     

凝胶内长片段基因克隆的实验方法研究

目的量少、片段长的目的基因受纯化回收效率低的影响而难于克隆,本实验的目的是探索快速高效克隆量少,片段长DNA的实验方法。方法以lnc RNA AL110200 5’RACE大片段PCR产物为目的基因,应用高纯度、高分辨率的低熔点琼脂糖,分离得到含5.0 kb和2.0 kb的凝胶,直接用于连接和转化反应,通过克隆PCR和Sanger测序法鉴定克隆的正确性。结果经测序验证了5.0 kb和2.0 kb重组克隆的正确性,说明应用高纯度的低熔点琼脂糖凝胶可以快速克隆长达5.0kb基因片段。结论该方法是一种省时、高效、易行的长片段基因克隆方法。     

DNA解链分析法的原理及应用

ＤＮＡ解链分析法是测定ＤＮＡ在碱性条件下变性解链后，双链ＤＮＡ含量的方法，它可用于判断ＤＮＡ的损伤程度。运用该技术测定了Ｈ２Ｏ２对ＬＬＣ－ＰＫ１细胞ＤＮＡ的损伤。结果：对照组双链ＤＮＡ的含量为８５．４％，Ｈ２Ｏ２组双链ＤＮＡ的含量为３４．８％；氯离子通道阻断剂ＮＰＰＢ、ＤＰＣ和甘氨酸，可使受损的ＤＮＡ得到保护，双链ＤＮＡ的含量分别是６６．０％、６０．３％、５７．８％。