拉米夫定治疗慢性乙型肝炎患者定量检测HBeAg的意义

目的探讨拉米夫定治疗的慢性乙型肝炎患者血清HBeAg和HBV DNA载量的变化规律。方法采用免疫化学发光和荧光定量聚合酶链反应技术分别检测了64例HBeAg阳性的慢性乙型肝炎患者在接受拉米夫定治疗过程中血清HBeAg和HBV DNA水平的变化。结果治疗12个月,HBV DNA完全转阴49例(76.6%),HBeAg转阴17例(26.6%),他们的HBV DNA和HbeAg水平呈同步下降趋势;11例治疗无效的患者血清HBV DNA和HBeAg水平也呈下降趋势,但始终未转阴;4例HBV DNA短暂转阴的患者,在治疗6个月后又转为阳性,HbeAg也未阴转。结论在拉米夫定抗病毒治疗过程中动态检测HBeAg水平可用于评估抗病毒的效果。     

表达白细胞介素-12质粒DNA抗小鼠肝癌皮下移植瘤的作用

目的 探讨瘤内注射mIL-12质粒DNA抗小鼠肝癌皮下移植瘤的作用。方法：构建真核表达质粒载体pDC511mIL-12，ELISA方法检测质粒载体在真核细胞中的表达，淋巴母细胞增殖法检测mIL-12的生物学活性；分别于小鼠肝癌H22皮下移植瘤内直接注射质粒DNA，观察各组小鼠存活时间、肿瘤体积变化及各组小鼠脾脏细胞毒T淋巴细胞(CTL)的活性：注射质粒DNA后1月进行瘤体组织病理学观察：结果：mIL-12基因治疗组与空载体对照组相比，肿瘤生长显著受抑制(F=4．10，P=0．03)，小鼠存活期显著延长(X^2=4．48，P=0．03)．并且小鼠脾细胞CTL杀伤活性增强。质粒DNA瘤内注射1月后，pDC511mIL-12组肿瘤病灶炎性细胞浸润明显，病灶内肿瘤细胞广泛坏死。结论：瘤内注射mIL-12表达质粒DNA可抑制小鼠肝癌皮下移植瘤生长，能提高机体抗肿瘤免疫应答。     

潮霉素抗性HBV包装细胞系的构建

目的 配合HBV载体的研究，为HBV载体提供包装。方法 HBV全基因经删除包装信号e区后，插入到潮霉素抗性pMEP4载体，转染HepG2细胞系，用潮霉素筛选形成细胞克隆。检测表达HBsAg及HBcAg较多者作为HBV包装细胞系，进一步转染稳定表达复制缺损型HBV的质粒，PCR方法观察上清液中病毒的形成。结果 包装细胞系高表达HBsAg和HBcAg：携带重组HBV的G418抗性重组逆转录病毒感染潮霉素抗性包装细胞系后，经两种抗生素同时筛选，在细胞培养上清液中能检出突变型HBV，未检出野生型HBV。结论 删除了包装信号的HBV次全基因，失去了形成完整HBV颗粒的能力，但能为复制缺损型HBV提供包装所需的结构蛋白。     

人工合成免疫刺激DNA联合HBsAg DNA疫苗在HBV转基因鼠的免疫应答研究

目的 :探讨免疫刺激DNA序列联合基因免疫在HBV转基因鼠的免疫应答。方法 :用人工合成硫代修饰的免疫刺激DNA寡核苷酸 (CpGODN)与HBVS区基因真核表达载体 (V HBs)联合免疫HBsAg转基因鼠 ,通过ELISA观察小鼠血清HBsAg及抗 HBs抗体水平 ,并用免疫组化 (SP法 )及病理HE染色观察小鼠肝组织HBsAg表达量的改变及肝组织炎症活动度。结果 :V HBs联合CpGODN组 6只免疫鼠中有 2只血清抗 HBs抗体阳性 ,其平均效价为 (5 6 2 1± 15 16 )mU ml,血清HBsAg浓度在免疫后第 8周时有 2只转阴 ,而单用V HBs组及V 10 12对照组小鼠血清抗 HBs抗体均阴性、HBsAg含量无明显降低。V HBs +CpGODN组肝组织HBsAg的表达量低于V HBs组及对照组 ,并可见大量炎细胞浸润 ,炎症组织活动度积分明显高于V HBs组及对照组。结论 :CpGODN联合V HBs可增强其免疫应答及抗病毒效应。     

包膜蛋白和核心蛋白共突变体对乙型肝炎病毒在 HepG2细胞中表达的抑制作用

目的探讨包膜蛋白和核心蛋白共突变体对乙型肝炎病毒(HBV)在HepG2细胞中表达的抑制作用。方法构建包膜蛋白和核心蛋白共突变的HBV载体pHBV-mSIS／△C。瞬时转染HepG2细胞,以adwR9转染HepG2细胞为对照;用ELISA方法检测上清液中和细胞内HBV S抗原;重组载体与adwR9共转染HepG2细胞,以pcDNA3与adwR9共转染为对照组。用荧光定量PCR检测胞内和上清液中病毒量。结果突变载体转染细胞胞内和上清液中S蛋白表达量及分泌量与adwR9无明显差别;突变载体与adwR9共转染组上清液和胞内病毒量较pcDNA3与adwR9共转染组低。结论包膜蛋白和核心蛋白共突变对HBV S蛋白的表达量和分泌量没有影响,但干扰病毒复制和包装,具有抗HBV作用。     

包膜蛋白和核心蛋白共突变体对乙型肝炎病毒在 HepG2细胞中表达的抑制作用

目的探讨包膜蛋白和核心蛋白共突变体对乙型肝炎病毒(HBV)在HepG2细胞中表达的抑制作用.方法构建包膜蛋白和核心蛋白共突变的HBV载体pHBV-mSIS/△C.瞬时转染HepG2细胞,以adwR9转染HepG2细胞为对照;用ELIS A方法检测上清液中和细胞内HBV S抗原;重组载体与adwR9共转染HepG2细胞,以pcDNA3与ad-wR9共转染为对照组.用荧光定量PCR检测胞内和上清液中病毒量.结果突变载体转染细胞胞内和上清液中S蛋白表达量及分泌量与adwR9无明显差别;突变载体与adwR9共转染组上清液和胞内病毒量较pcDNA3与adwR9共转染组低.结论包膜蛋白和核心蛋白共突变对HBVS蛋白的表达量和分泌量没有影响,但干扰病毒复制和包装,具有抗HBV作用.     

乙型肝炎病毒包膜大蛋白检测与病毒复制的相关性研究

目的探讨乙型肝炎病毒外膜大蛋白(LHBs)与乙肝病毒DNA(HBV DNA)和乙型肝炎e抗原(HBeAg)之间的关系,寻找既方便操作又能反映病毒复制的指标,为乙型肝炎的诊断及疗效评估提供科学依据。方法 410例临床标本分别采用荧光定量PCR技术检测HBV DNA载量,LHBs检测用ELISA法,HBeAg采用化学发光法检测。结果不同HBV-M模式的HBV DNA与LHBs检出结果均无显著性差异(P0.05)。LHBs含量与HBV DNA拷贝数呈正相关(r=0.958,P0.001)。在HBV DNA(+)模式群体中LHBs阳性率明显高于HBeAg(+)人群,差异具有统计学意义(P0.001)。结论血清LHBs与HBV DNA复制密切相关,可作为反映HBV复制的指标。LHBs检测方法特异性优于HBeAg检测方法,LHBs在HBV的诊断和疗效评估方面有重要的临床应用价值。     

复制缺损型HBV表达显性阴性突变体抗HBV作用的研究

目的　探索HBV作为基因治疗载体的可能性及检验HBV点突变表达显性阴性突变体抗HBV的作用。方法　在表达完整HBV颗粒的质粒上 ,经基因修饰后分别表达核心 P蛋白及核心 表面抗原的融合蛋白 ,整合于具有HBV复制的 2 2 15细胞 ,形成细胞克隆 ,ELISA法检测细胞培养上清液中HBsAg和HBeAg ,斑点杂交法检测细胞内HBV核壳中HBVDNA ,PCR检测上清液中重组HBV颗粒。结果　 2 2 15 pMEP4组、2 2 15 CP组、2 2 15 CS组 ,对HBsAg平均抑制率分别为 2 74 %±3 83%、4 0 0 8%± 2 0 5 % (P <0 0 1)和 5 2 94 %± 1 93% (P <0 0 1) ;对HBeAg平均抑制率分别为4 4 6 %± 4 2 5 %、5 2 86 %± 1 32 % (P <0 0 1)和 4 1 6 0 %± 1 6 5 % (P <0 0 1) ;对HBV复制的抑制率分别为 15 3%、82 0 %和 6 7 2 %。仅在 2 2 15 CP组培养上清液中能检测出突变型HBV颗粒。结论　在细胞内表达显性阴性突变体具有干扰HBV复制及抑制HBV抗原表达的作用 ;经修饰后的HBV基因组在野生型HBV辅助下 ,仍能包装并分泌完整的HBV样颗粒。     

地下工程建设中的环境地质问题研究及对策

结合地下工程的特点，分析了城市地下工程建设中引起或遇到的地面变形、洞室围岩失稳、地下水环境变异和地质生态环境恶化等环境工程地质问题，阐述了其中应解决的关键问题，提出了相应的预防途径和措施。     

HBV C基因截短型突变体抗HBV作用研究

目的探讨C基因截短型HBV突变体对HBV复制的影响.方法构建C基因截短的HBV表达载体pHBV-ΔC,瞬时转染HepG2细胞,聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）Western blot检测S蛋白的表达;酶联免疫吸附实验（ELISA）定量分析S蛋白的表达量.pHBV-ΔC与adwR9共转染HepG2细胞,以pcDNA3与adwR9共转染为对照,荧光定量PCR检测培养上清液及胞内病毒量.结果HBV C基因截短对S蛋白的表达量没有影响,pHBV-ΔC与adwR9共转染组上清液和细胞内病毒量较对照组降低.结论C基因截短型HBV突变体可导致HBV复制下降.