结核分枝杆菌CFP-10单克隆抗体的研制与初步鉴定

目的:制备抗结核分枝杆菌CFP-10蛋白的单克隆抗体(mAb).方法:应用淋巴细胞杂交瘤技术,以重组菌BL21(DE3)-pET-30a(+)-lhp原核表达的融合蛋白His-CFP-10作为抗原免疫BALB/c小鼠,以纯化的融合蛋白GST-CFP-10作为检测抗原,制备抗结核分枝杆菌CFP-10 mAb;采用间接ELISA、Dot-ELISA和Western blot鉴定mAb的特异性.结果:获得2株稳定分泌抗结核分枝杆菌CFP-10 mAb的杂交瘤细胞株6E8、2E7,其Ig亚类分别为IgG1、IgG2b.mAb 6E8、2E7腹水的ELISA效价分别为1:1 000 000,1:1 024 000.在Dot-ELISA试验中,这2株mAb均只与表达His-CFP-10及GST-CFP-10的重组大肠杆菌反应,与其他5种菌株均不发生反应.在Western blot试验中,2株mAb只与CFP-10蛋白发生反应,出现特异性条带.结果表明,mAb 6E8、2E7是针对结核分枝杆菌CFP-10的特异性mAb.结论:成功地制备抗结核分枝杆菌CFP-10的mAb,它们在结核分枝杆菌诊断和致病机理研究等方面有重要应用价值.     

产单核细胞李斯特菌plcB基因的克隆与原核表达

目的克隆并原核表达产单核细胞李斯特菌plcB基因。方法利用PCR技术从产单核细胞李斯特菌基因组中扩增不含编码信号肽的plcB基因。采用T-A克隆构建pGEM-T-plcB重组质粒,BamHI、XhoI双酶切pGEM-T-plcB获得plcB片段后再插入pGEX-6p-1原核表达载体,获得pGEX-6p-1-plcB重组表达质粒并在表达宿主菌BL21中诱导表达。对表达产物进行纯化和SDS-PAGE、Western-blotting、磷脂酶活性实验分析。结果克隆的plcB基因长834bp,与GenBank上公布的序列完全相同;表达的与GST标签蛋白融合的广谱磷脂酶C蛋白(GST-PC-PLC)具有磷脂酶生物活性和免疫原性。结论成功构建产单核细胞李斯特菌plcB基因的原核表达质粒,并在大肠杆菌中得到有效表达,这为进一步研究PC-PLC蛋白的致病与免疫机理奠定了基础。     

2002-2012年人和动物李斯特菌感染报告数据流行病学分析

目的 调查国内近11年来单核细胞增生性李斯特菌所引起的人及动物李斯特菌病的流行现状,为李斯特菌病的预防和控制提供理论依据。方法 利用检索工具(系统)检索文献信息的方法收集我国2002-2012年李斯特菌病的文献报告资料,并对各个文献资料中李斯特菌病的临床特征与流行病学信息进行统计分析。结果 本文所统计的李斯特菌感染病例涉及到全国27个(79%)省。共统计动物单核细胞增生性李斯特菌感染报道次数123次,其中猪感染报道次数最多(39%),次之为羊;感染类型以中枢神经系统感染最多(72%)。人李斯特菌感染报道病例共计84例,其中非围产期病例占35%,围产期病例占65%,以败血症症状居多(51%)。结论 2002-2012年间,每年均有人和动物李斯特菌病的发生,且报告病例涉及全国大部分省,提示应加强人及动物李斯特菌病的预防和控制。     

流式细胞术检测重组LLO溶血的效果

目的：分析rLLO在溶血过程中对CD45^＋细胞的影响。方法：利用流式细胞术，通过与商品化裂解液和自制NH4C1裂解液的比较，观察rLLO与以上2种裂解液裂解效果的差异。结果：rLLO具有较强的裂解红细胞的能力，裂解效果与商品化裂解液和自制NH4C1裂解液基本一致。另外，三种裂解液对细胞膜的渗透性均有较大影响。结论：rLLO对细胞膜CD45表面抗原的损伤程度低于商品化裂解液。