果酸对金免疫层析法检测粪便潜血试验的影响

目的探讨不同浓度的果酸对胶体金免疫层析法检测粪便潜血试验的影响.方法以蒸馏水为对照,用试带检测不同浓度的果酸.结果体外试验显示维生素C片剂、酒石酸、柠檬酸及柠檬酸钠浓度分别为：1.50、1.30、0.01及7.50g/L时与对照组相比,结果有显著性差异（P均＜0.01）,柠檬酸组的pH值越低,越容易出现假阳性.结论在体外,一定浓度的果酸会引起胶体金免疫层析检测粪便潜血试验的假阳性反应.     

转座子tnpU基因在多重耐药革兰阴性杆菌中的分布情况

目的研究转座子tnpU基因和β-内酰胺酶在多重耐药革兰阴性杆菌中的分布情况。方法用纸片扩散初筛试验、扩散确证试验进行超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）表型检查,头孢西丁三维试验进行AmpC β-内酰胺酶的表型检查,纸片协同试验筛选产金属β-内酰胺酶（MBL）菌株;用多重聚合酶链反应（PCR）技术扩增转座子tnpU基因,并进行DNA测序;用MIC药敏法分析多重耐药革兰阴性杆菌的药物敏感性。结果转座子tnpU的总检出率为25．5％。在各菌种的检出率分别为大肠埃希菌占6.3％（3株）、肺炎克雷伯菌占8．3％（1株）、鲍曼不动杆菌占33-3％（20株）、铜绿假单胞菌占43．2％（16株）;β-内酰胺酶表型检测中,ESBLs的检出率最高,转座子tnpU基因阳性的菌株大多数B．内酰胺酶表型为阳性;转座子tnpU基因阳性菌株对抗生素的耐药率显著高于转座子阴性菌株（P〈0．05）。结论转座子tnpU基因在非发酵菌中的分布较广泛,可能在多重耐药机制中起重要作用。     

鲍曼不动杆菌AmpC酶和AmpC耐药基因检测分析

目的检测临床分离的45株鲍曼不动杆菌的AmpC酶和AmpC耐药基因,并探讨产AmpC酶菌株的耐药情况。方法采用超声破碎法提取45株细菌的β-内酰胺酶粗提物,进行三维试验,提取45株细菌的总DNA,聚合酶链反应(PCR)扩增AmpC结构基因和ACT-1、CMY-G1、CMY-G2、DHA、FOX耐药基因,最低抑菌浓度药物敏感试验分析菌株的耐药性。结果 45株鲍曼不动杆菌中三维试验和PCR检测AmpC基因同时阳性的有11株,确认产AmpC酶菌株为11株。三维试验方法和PCR基因检测方法比较对AmpC酶的检出率差异无统计学意义(χ2=3.500,P>0.05)。ACT-1的检出率为4.4%,未检出FOX、DHA、CMY-G1、CMY-G2。产AmpC酶菌株的药物敏感度最高是丁胺卡那霉素(90.9%),其次是亚胺培南(54.5%),产AmpC酶菌株耐药率高,对氨苄西林、氨曲南、头孢曲松、头孢替坦、头孢唑啉、呋喃妥因、头孢他啶达到100.0%,产AmpC酶菌株对抗菌药物的耐药性显著高于不产AmpC酶菌株。结论三维试验方法和PCR基因检测方法对AmpC酶的检出率无明显差别,但仍存在假阳性与假阴性。产AmpC酶菌株耐药情况严重,提示临床应慎重用药。     

白假丝酵母菌吡咯类药物相关耐药基因的突变和表达

目的：了解白假丝酵母菌吡咯类药物相关耐药基因的突变和表达情况。方法采用裂解法提取白假丝酵母菌 DNA,扩增 ERG11基因后测序,选取3种吡咯类药物（氟康唑、酮康唑、咪康唑）均耐药的全耐药菌株DNA 片段进行 TA 克隆;利用荧光定量 PCR 技术对 CDR1、CDR2、MDR1基因表达的 mRNA 进行相对定量,比较耐药株与敏感株表达水平的差异。结果37株耐吡咯类白假丝酵母菌中,ERG11存在41个碱基突变位点,其中20个同义突变,21个错义突变,发现新变异：N12I、Y13F、S16F、V36F、V51L、G129E、T123I、E194K、K344N、E517G、V234A;CDR1基因2－ΔΔCt值敏感株为1．09±0．27,耐药株为1．46±0．24,两者比较差异有统计学意义（P ＜0．05）;敏感株与耐药株间 CDR2和 MDR1基因的表达水平比较差异无统计学意义（P ＞0．05）。结论白假丝酵母菌耐药机制较为复杂,可能与 ERG11某些位点突变导致的氨基酸变异和 CDR1高表达有关,CDR2和 MDR1表达与耐药关系有待进一步研究。     

表皮生长因子受体基因突变与肺腺癌亚型关系的研究

目的探讨表皮生长因子受体(EGFR)基因突变类型与肺腺癌亚型的相关性。方法收集2011~2015年该院3 028例非小细胞肺腺癌(NSCLC)患者的肿瘤组织,提取DNA后采用突变阻滞扩增系统(ARMS)检测EGFR基因突变。结果 3 028例NSCLC患者标本中,EGFR基因突变率为39.7%,其中第19号外显子缺失突变543例,第21号外显子L858R点突变535例,共占89.8%;新分类中浸润前病变与微浸润性腺癌、浸润性腺癌的EGFR基因突变比较,差异有统计学意义(P0.05);中分化肺腺癌有较高的EGFR突变率,不同分化程度的EGFR突变率比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论新分类表现出与分子诊断的相关性,不同亚型EGFR突变率有差异,EGFR基因突变与腺癌组织分化程度存在一定的相关性。     

泌尿生殖道支原体耐药性分析及其合并细菌念珠菌感染情况

目的了解我院近年泌尿生殖道支原体：解脲支原体（Uu）、人型支原体（Mh）感染和耐药情况,及其合并细菌、念珠菌感染的情况。方法采用泌尿生殖道分泌物进行Uu、Mh的检测和药敏试验,白带直接涂片革兰氏染色后进行真菌、细菌等镜检。结果862例支原体培养标本中,阳性检出率为53．3％,其中uu为43％,Mh为2．4％,Uu和Mh混合感染为7．9％;Uu对抗菌药物耐药率较高的为氧氟沙星,司巴沙星和左氧氟沙星;Mh和Uu合并Mh对抗菌药物耐药率较高的为克拉霉素,阿齐霉素和罗红霉素。433例女性支原体感染阳性者的白带合并阴道念珠菌感染占16．6％,合并革兰氏阴性杆菌感染占30．9％,合并革兰阳性球菌感染占16％,清洁度Ⅲ度及以上占51％。结论加强支原体耐药性监测,并尽可能同时检查细菌和念珠菌,合并治疗以提高治愈率。     

CMY型AmpC酶新基因亚型的序列分析与表达载体构建

目的 对两株弗劳地枸橼酸杆菌所产CMY型AmpC酶进行基因克隆、序列分析和重组表达载体的构建.方法 以产CMY型AmpC酶的弗劳地枸橼酸杆菌30、31号总基因组DNA为模板,PCR扩增CMY基因,将其克隆人pGEM-T载体后测定该核苷酸序列.30、31号菌与受体菌进行质粒接合实验,构建pBV220-CMY重组表达载体.对原菌株和重组菌株进行AmpC酶检测.结果 PCR扩增出大小为1146 bp的基因片段,与GenBank上多种CMY亚型的基因序列同源性为97%.质粒接合实验证实质粒上含CMY基因,为可转移质粒.三维实验结果显示30、31号菌和重组菌株所产的酶均能水解头孢西丁.结论 30、31号菌所产的CMY型AmpC酶为CMY新基因亚型.成功构建重组表达载体pBV220-CMY,为下一步酶的表达和纯化提供了依据.     

CTX—M一3型超广谱β-内酰胺酶原核表达条件的研究

目的探讨重组质粒pET一28a（＋）／CTX—M一3分别在大肠埃希菌ER2566和BL21（DE3）中进行原核表达的最佳条件。方法分别在不同的宿主菌、诱导温度、诱导时间和诱导剂浓度中诱导pET．28a（＋）／CTX—M一3融合表达载体,目的产物经SDS—PAGE和BandScan凝胶分析软件分析,以获得最佳表达条件。结果表达载体的最佳诱导条件是重组质粒在BE21（DE3）中18℃诱导24h,IPTG终浓度为0．8mmol／L;表达载体在最佳条件下表达时,目的蛋白的最高表达量占菌体总蛋白的33％。结论获得pET一28a（＋）／CTX—M一3在大肠埃希菌中表达CTX—M一3型超广谱β一内酰胺酶（extended—spectrumB—lactamase,ESBLs）蛋白的最佳条件,为此酶的大量纯化奠定了基础。     

多重耐药鲍曼不动杆菌的耐药性与AmpC耐药基因的研究

目的了解我院临床分离的60株多重耐药鲍曼不动杆菌（multi-drug resistant Acinetobater baumannii,MDRAB）的耐药性和AmpC耐药基因的存在状况。方法采用VITEK-2全自动细菌鉴定仪检测鲍曼不动杆菌对18种抗生素的药敏结果,对该细菌进行总DNA的提取,用聚合酶链反应（PCR）检测耐药基因,结合药物敏感试验分析菌株的耐药特征。结果检出结构基因ampC型49株,占81.7%;blaADC基因型50株,占83%;ACT基因型2株;41株菌同时携带blaADC和ampC结构基因,占68%;2株同时携带blaADC、ACT和ampC结构基因;未检测到其它AmpC耐药基因（MOX、CIT、FOX、DHA）。携带AmpC耐药基因的菌株耐药率高,特别是对头孢曲松、氨苄西林、头孢替坦、头孢唑啉、呋喃妥因的耐药率已接近或达到100%,而对于丁胺卡那霉素和头孢哌酮/舒巴坦的耐药率最低,分别为5%和20%。结论多重耐药鲍曼不动杆菌的blaADC耐药基因和ampC结构基因同时携带率高,并且是鲍曼不动杆菌多重耐药的主要原因。