庆大霉素诱导粪肠球菌耐药及其对氯霉素协同敏感相关特性研究

目的 通过研究庆大霉素诱导粪肠球菌耐药突变株对氯霉素协同敏感(collateral sensitivity, CS)的相关特性,为基于协同敏感治疗策略的临床应用提供依据。方法 采用庆大霉素通过梯度浓度平板对3株庆大霉素敏感的粪肠球菌临床分离株和1株粪肠球菌标准菌株ATCC29212进行体外实验诱导耐药(experimental evolution);通过微量肉汤稀释法测定庆大霉素诱导后耐药突变株对常见抗菌药物的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentrations, MICs),分析抗菌药物间交叉敏感性;PCR检测诱导耐药菌株氨基糖苷类修饰酶编码基因携带情况;通过琼脂平板稀释法测定庆大霉素诱导耐药(evolved gentamicin-resistant)菌株和亲本菌株对其协同敏感药物(氯霉素)的防耐药突变浓度(mutant prevention concentration, MPC),最后,测定氯霉素对庆大霉素诱导耐药菌株和亲本菌株的时间杀菌曲线。结果 结果显示4株粪肠球菌亲本菌株经过庆大霉素诱导后,对庆大霉素MICs升高了16～64倍,并对阿米卡星表现出交...     

单克隆抗体夹心ABC-ELISA检测包虫病人循环抗原

应用生物素标记单克隆抗体进行夹心ABC-ELISA检测包虫病人血清循环抗原(HcAg),共检测包虫病人血清103份,62价呈阳性(60.19％);检测囊虫病人血清22份,其它寄生虫病血清54份,正常人血清101份,均未出现假阳性反应。常规ELISA血清抗体阴性的10例包虫病人HcAg 5例呈阳性。HcAg的检测对血清抗体阴性的包虫病人具有辅助诊断意义。     

稳定期双相障碍患者静息态脑低频振幅与功能连接研究

目的:探讨稳定期双相障碍患者静息态脑功能特点。方法:选取17例稳定期双相障碍患者(患者组)和18名健康对照者(对照组)进行静息状态全脑功能磁共振扫描检查;比较两组受试者全脑的低频振幅(ALFF)值的大小差异,然后将两组差异有统计学意义的脑区极值点作为种子点做全脑功能连接并进行组间差异比较。结果:与对照组相比,患者组右侧海马、左侧丘脑、左内侧和旁扣带脑回、左侧补充运动区的ALFF值(P均0. 01,GRF校正)显著增高[MNI坐标分别为:(39,-18,-15);(-6,-18,3);(-6,3,36);(-12,18,60)];患者组右侧海马与左侧内侧和旁扣带脑回(-3,-15,39)、左侧丘脑与左侧中央后回(-63,-3,27)、右侧中央前回(45,-9,39)以及左内侧和旁扣带脑回和右侧颞中回(60,9,-15)功能连接显著增强(P均0. 005,GRF校正);患者组左侧补充运动区与右侧缘上回(51,-39,39)功能连接显著增强,与枕叶(brodmann area 17)(-18,-81,9)功能连接显著减弱(P均0. 01,GRF校正)。结论:稳定期双相障碍患者静息态局部脑区功能活动异常,并存在局部脑功能连接异常。     

单细胞碱性凝胶电泳用于检测小鼠胸腺细胞DNA链断裂

目的 引进单细胞凝胶电泳(SCGE)实验方法,用以检测小鼠胸腺细胞DNA链断裂。方法 载有经紫外线和H2O2作用过的胸腺细胞和凝胶的玻片首先在pH10的弱碱性裂解液中作用1h,在电泳缓冲液中解旋30min,电泳30min,胸腺细胞核用20mg／L的EB染色5min,用荧光显微镜和显微细胞图像分析系统观察和分析H2O2和紫外线在体外条件下对正常胸腺细胞的DNA损伤作用。结果 紫外线和不同浓度H2O20．001、0．01、0．1、1．0mmoL／L均可导致小鼠胸腺细胞DNA损伤,且随着H2O2浓度的增加DNA损伤逐渐加重。结论 SCGE可用于检测小鼠胸腺细胞DNA链断裂,使用这一实验方法成功地检测出H2O2和紫外线引起的胸腺细胞DNA损伤。     

六氯联苯诱导新生雄性大鼠睾丸细胞凋亡的体内体外研究

[目的]观察2,2’,4,4’,5,5’-六氯联苯（PCB153）对新生SD大鼠睾丸细胞凋亡的影响。[方法]体内实验：一将出生3d（postnatal day3,PND3）的sD大鼠随机分组,每组24只,经口给予溶剂对照（玉米油）和PCB153（0．02500．250、2．500mg／ks）,连续暴露5d。最后一次暴露24h后解剖每组一半的动物,取睾丸组织做成切片,原位末端凋亡法（TUNEL法）检测睾丸细胞凋亡水平并电镜观察细胞形态;剩余动物在无暴露条件下继续喂养至12周龄（成鼠）解剖,进行精子计数。体外实验：新生大鼠（postnatal day5,PND5）睾丸组织分离精原一支持细胞共培养48h后,用0、1、10．50μmol／L的PCB153染毒24h,染色观察细胞核凋亡,流式细胞仪测定细胞早期凋亡率和晚期凋亡率O[结果]新生期大鼠不同。剂量PCB153暴露后,与对照组相比,0．250mg／kg和2．500mg／kg剂量组12周龄睾丸每日精子生成量明显下降（P〈0．05）。PND8时,TUNEL法检测发现PCB153染毒组大鼠睾丸中凋亡细胞各组间差异无统计学意义。电镜下观察曲细精蕾,可见染毒组支持细胞线粒体肿胀,生殖细胞核固缩凝结。体外共培养细胞染毒24h后,流式细胞仪检测发现,与对照组比较,50μmol／L组早期细胞凋亡率明显升高（P〈0．05）;但晚期凋亡率各组差异无统计学意义。荧光显微镜下观察,从PCB153染毒浓度10μmol／L起可见明显的凋亡细胞核形态特征。[结论]新生期大鼠暴露PCB153可直接诱导睾丸细胞凋亡,引起雄性大鼠生殖功能的远期损害。     

兴奋性氨基酸递质系统在乐果诱导星形胶质细胞活化中的作用

Objective To study the involvement of excitatory amino acid system in astrocytes activation caused by dimethoate. Methods Pure-cultured astrocytes were gained by three passages from primary cultured rat nerve cells, then treated with 10-6,10-5,10-4 mol/L dimethoate for 48 h, 50 μmol/L and 100μmol/L MK801, a NMDA receptor blocker, was used to intervene the effects induced by 10-4 mol/L dimethoate.HPLC-FLD was utilized to measure the concentrations of excitatory amino acid (EAA), RT-PCR was used to detect the expression levels of NR2B, GLT-1, GLAST, GFAP and S100β mRNA, and immunofluresence staining method was applied to measure the expression levels of GFAP and S100β proteins. Results The expression levels of GLAST mRNA in all exposure groups were 67.8% ,68.6% and 76.2% of control level,respectively, which were significantly lower than that of control group (P＜0.05); The concentrations of EAA significantly decreased in 10-4 mol/L dimethoate group, as compared with control group (P＜0.01); the expression levels of GFAP mRNA in 10-4 mol/L dimethoate group, of S100β mRNA in 10-5 mol/L dimethoate group, of GFAP protein in 10-4 mol/L and 10-5 mol/L dimethoate groups and S100β protein in 10-4 mol/L dimethoate group were significantly higher than those in control group (P＜0.01). The expression levels of GLT-1 and GLAST mRNA in 10-4 mol/L dimethoate plus 50 μ mol/L or 100 μ mol/L MK801 groups increased significantly, as compared with 10-4 mol/L dimethoate group (P＜0.01), the expression levels of NR2B mRNA in 10-4 mol/L dimethoate plus 50 μ mol/L or 100 μmol/L MK801 groups increased significantly, as compared with control group (P＜0.05 or P＜0.01); the concentration of Glu in 10-4 mol/L dimethoate plus 100 μ mol/L MK801 group increased significantly, as compared with 10-4 mol/L dimethoate group (P＜0.01); the expression levels of GFAP mRNA and protein in10-4 mol/L dimethoate plus 50 μ mol/L or 100 μ mol/L MK801 groups decreased significantly (P＜0.01); S100β protein expression level in 50 μ mol/L MK801 intervention group was significantly higher than thatl in control group (P＜0.01). Conclusion Excitatory amino acid system involved in astrocytes activation caused by dimethoate. MK801 was useful to control astrocytes gliosis.     

结缔组织生长因子及α平滑肌肌动蛋白在百草枯致大鼠肺纤维化中的作用

目的 观察急性百草枯(PQ)中毒大鼠肺组织结缔组织生长因子(CTGF)及α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达水平的变化,探讨PQ致肺纤维化的机制.方法 SD大鼠随机分为对照组(生理盐水)和染毒组(PQ).染毒组给予生理盐水稀释的PQ(80 mg/kg)一次性灌胃,对照组给予生理盐水1ml/kg一次性灌胃.于不同处理后1、3、7、14、28、56 d分别以免疫组化(SABC)法检测大鼠肺组织中CTGF及α-SMA的表达强度和定位;免疫印迹(Western blot)法检测肺组织中CTGF及α-SMA蛋白的表达水平;初步分析两者表达的相关性及其表达与肺组织纤维化指标的相关性;同时观察中毒大鼠的肺组织病理变化.结果 与对照组比较,免疫组化和Western blot法检测染毒后大鼠肺组织中CTGF、α-SMA的表达变化规律较为一致,均随时间延长而逐渐升高,3、7 d时升高幅度缓慢,14～56d时增幅较大,各时段均明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).CTGF与α-SMA、病理评分及羟脯氨酸含量均呈正相关(r=0.74,r=0.87,r=0.71,P＜0.05或P＜0.01).病理学Masson染色可见大鼠肺组织中14～28 d时成纤维细胞大量增殖,胶原纤维数量逐渐增多.结论 在染毒大鼠肺组织中CTGF及α-SMA的表达持续增高;CTGF可能通过促使肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化,增加胶原分泌和基质合成,在PQ所致肺纤维化的发生发展中起重要作用.     

解剖型钢板在胫骨远端骨折中的应用

探讨解剖型钢板治疗胫骨远端骨折的临床疗效。方法从化市中心医院骨科自2006年1月至2010年10月应用解剖型钢板治疗胫骨远端骨折58例,根据AO分型:A型8例,B型37例,C型13例。结果术后随访5～24个月,平均12个月。疗效优38例,良16例,可3例,差1例,优良率93.1%。术后所有患者均获得骨性愈合,愈合时间为8～16周(平均11.5周)。结论应用胫骨远端解剖型钢板治疗胫骨远端骨折,手术内固定牢固,可以获得良好的临床疗效。     

益气、化瘀、化痰中药制剂及其合剂对肾间质纤维化大鼠TGF-β1/Smad通路及TRB3的影响

目的：观察益气、化瘀、化痰中药制剂及其合剂———益气化瘀化痰制剂对单侧输尿管结扎（unilateral ureteral obstruc－tion,UUO）模型大鼠肾间质纤维化的影响及其可能机制。方法：42只雌性SD大鼠,随机分为假手术组、模型组、替米沙坦组、益气组、化瘀组、化痰组及益气化瘀化痰组,每组6只。除假手术组外,其余各组采用UUO法建立肾间质纤维化模型。UUO术后3周,模型组及假手术组以等量生理盐水灌胃,其余各组以相应制剂灌胃治疗,每日1次,连续用药12周后处死大鼠。检测大鼠血清尿素氮（blood urea nitrogen,BUN）、肌酐（serum creatinine,Scr）水平。取大鼠术侧肾组织,HE染色观察组织形态学改变,Masson染色观察胶原纤维沉积情况,Western blot检测转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）、α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）蛋白表达水平;qRT-PCR 检测TGF-β1、Smad3、Smad7、TRB3、α-SMA、E-cadherin mRNA 表达水平。结果：与假手术组比较,模型组肾间质纤维化明显,BUN、Scr水平明显升高（P<0.01）,而各药物干预组肾间质纤维化程度及BUN、Scr水平均较模型组明显改善,其中益气化瘀化痰组、替米沙坦组及益气组改善较明显（P<0.05）。与模型组相比,益气化瘀化痰组、替米沙坦组及益气组TGF-β1、Smad3、TRB3、α-SMA mRNA表达明显降低（P<0.05）,E-cadherin mRNA表达明显升高（P<0.05）。各组间Smad7 mRNA表达无显著差异。TGF-β1、α-SMA、E-cadherin的蛋白表达与其mRNA表达趋势一致。结论：益气、化瘀、化痰及益气化瘀化痰中药制剂和替米沙坦均能改善UUO大鼠肾间质纤维化,且以益气化瘀化痰制剂、替米沙坦及益气制剂的改善作用较为明显,其机制可能是通过调控TRB3、TGF-β1/Smad信号通路,进而抑制肾小管上皮细胞向间充质细胞转化。     

肺炎克雷伯菌对复方新诺明的耐药性及其整合子分布差异的研究

目的探讨肺炎克雷伯菌对复方新诺明的耐药性、整合子分布及其对耐药性的影响。方法收集温州医科大学附属第一医院2013年1月至2015年5月临床分离的肺炎克雷伯菌共812株,采用VITEK2Compact全自动微生物分析仪测定肺炎克雷伯菌临床分离株对临床常用的以复方新诺明为代表的抗菌药物耐药性,PCR方法筛查其Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型整合子,分析不同耐药表型菌株内整合子分布的差异。结果肺炎克雷伯菌对多种抗菌药物耐药率呈上升趋势,仅对复方新诺明耐药率呈逐年递减趋势,亚胺培南和厄他培南耐药肺炎克雷伯菌对复方新诺明保持相对较低的耐药率;肺炎克雷伯菌中Ⅰ型整合子总阳性率为37.2%,未检测到Ⅱ、Ⅲ型整合子,复方新诺明耐药菌株组Ⅰ型整合子阳性率明显高于敏感组（P＜0.01）;整合子阳性菌株组对临床常用抗菌药物的非敏感率（中介率与耐药率之和）几乎均明显高于整合子阴性菌株组（均P＜0.05）;复方新诺明耐药组和敏感组中,多重耐药菌株的Ⅰ型整合子阳性率均显著高于非多重耐药菌株,广泛耐药菌株的Ⅰ型整合子阳性率也均显著高于非广泛耐药菌株（均P＜0.01）。结论2013至2015年,肺炎克雷伯菌仅对复方新诺明的耐药率呈现逐年降低趋势,且耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌对复方新诺明敏感性良好;肺炎克雷伯菌主要携带Ⅰ型整合子,由整合子介导的耐药基因的传播与复方新诺明耐药性、多重耐药表型、广泛耐药表型均密切相关。