14—3—3蛋白与肿瘤

一、14—3—3蛋白慨述 14-3-3蛋白是一种酸性可溶性蛋白,于1967年由Moor和Perez从牛的脑组织中分离,并因其经二乙氨乙基纤维素层析中的组分分布数量和在淀粉-凝胶电泳中的迁移位置而得名。由于14—3—3蛋白在脑组织中的含量最高,约占脑可溶性蛋白的1％,因而在很长一段时间内,它被认为是脑特异性蛋白,并且是动物所特有的、对维持脑神经功能具有独一无二作用的蛋白质。     

TIMP-3、MMP-3与缺血性脑损伤

在脑缺血损伤机制中,基质金属蛋白酶(MMPs)及其内源性抑制剂(TIMPs)的作用日益受到重视。研究表明,TIMP-3、MMP-3及其复合体介导了多种细胞生理和病理发生、发展机制;它们参与了脑缺血再灌注损伤后炎性级联反应及细胞凋亡等机制;同时也参与动脉粥样硬化斑块形成与破裂等。通过研究TIMP-3、MMP-3与脑缺血再灌注损伤的相关性,将有利于脑缺血后神经保护治疗及预防脑缺血发生。     

14-3-3蛋白在神经疾病中的临床研究

114-3-3蛋白的生理特性和检测方法14-3-3蛋白是高度保守的酸性蛋白家族,其分子量在25～30Kda,有7种亚型,分别为β、ε、γ、η、σ及τ,由不同的基因编码,各亚型之间有高度的同源性。它们几乎在所有的组织中表达,在神经系统中含量最丰富,约占全部可溶性蛋白质的1%。所有神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞、小胶质细胞的胞浆与胞核中都有表达。14-3-3蛋白对众多的靶蛋白具有调节作用,主要依赖于磷酸化方式。14-3-3蛋白主要参与信号转导、细胞内蛋白质的转运、细胞增殖周期和凋亡的调节、细胞骨架构建等,尚有一些作用目前还不清楚。1.114-3…     

pcDNA3/NT-3真核表达载体的构建及其表达

目的构建大鼠神经营养因子3（NT-3）基因真核表达载体并观察其在真核细胞内的表达情况。方法采用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）技术从大鼠脑组织总RNA中扩增NT-3基因cDNA序列,将其克隆到真核表达载体pcDNA3中,经酶切鉴定和序列分析后,以阳离子脂质体Li-pofectamine2000介导转染L929细胞,应用免疫细胞化学和western blot鉴定NT-3在细胞内的表达。结果RT-PCR产物为822bp的特异片段,重组质粒pcDNA3/NT-3酶切后产生822bp和5.2kb的片段,DNA测序证实822bp片段的碱基序列与大鼠NT-3基因序列完全一致,成功构建了pcDNA3/NT-3重组质粒。将其转染真核细胞后,免疫细胞化学、western blot结果表明NT-3能在真核细胞中正确表达。结论成功构建了重组真核表达质粒载体pcDNA3/NT-3,为后续的研究奠定基础。     

14—3—3蛋白在细胞凋亡中的作用

14—3—3蛋白是存在于所有真核细胞中的蛋白家族分子，参与蛋白激酶信号通路。通过磷酸化丝氨酸或磷酸化苏氨酸的方式，14—3—3蛋白与磷酸化依赖的蛋白间相互作用，调控细胞周期的进展，启动并维持了DNA损害的枪金点，激活促分裂素原活化蛋白激酶（mitogen—activated protein kinases，MAPK），调节生存信号及细胞骨架，对细胞凋亡发挥重要作用。本文对近年来关于14—3—3蛋白与细胞凋亡的研究进展作一综述。     

14-3-3蛋白在星形细胞瘤中的表达及意义

目的探讨14-3-3蛋白在星形细胞瘤中的表达与肿瘤病理分级和预后间的关系。方法采用免疫组化ABC法检测10例正常脑组织和67例确诊并有随访的人脑星形细胞瘤石蜡标本中14-3-3蛋白的表达情况。分析14-3-3蛋白的表达与肿瘤恶性程度及预后间的关系。结果在正常脑组织标本中，14-3-3蛋白主要表达于神经元胞体和突起，而在少数的胶质细胞中仅见其弱表达。绝大部分星形胶质细胞瘤中可见14-3-3蛋白阳性表达，其阳性表达率为：Ⅱ级76．5％（13／17），Ⅲ级76．2％（16／21），Ⅳ级79．3％（23／29）。不同恶性级别的星形细胞肿瘤中，14-3-3蛋白的阳性表达率无显著差别（P〉0．05），但14-3-3蛋白表达的强度和范围有随肿瘤的恶性度增高而增加的趋势（P〈0．05）。52例14-3-3蛋白阳性表达患者的生存期明显短于15例14-3-3蛋白表达阴性的患者（P〈0．01）。结论14-3-3蛋白在人脑星形细胞瘤中的表达上凋与肿瘤的恶性程度及预后相关。14-3-3蛋白有望成为星形细胞瘤基因治疗的新靶点。     

脑脊液14-3-3蛋白对Creutzfeldt-Jakob病的诊断价值

目的　探讨脑脊液中 14 3 3蛋白质对Creutzfeldt Jakob病 (CJD)的诊断价值。方法　应用蛋白质印迹WesternBlot方法检测 61例病人的脑脊液中是否存在 14 3 3蛋白质 ,其中 5例为CJD病人 ,18例为伴有痴呆症状的非CJD疾病 ,3 8例为不伴有痴呆症状的神经系统疾病。在检测 2例肯定的CJD病人的不同条件下保存的脑脊液中 14 3 3蛋白质的稳定性。结果　 5例CJD病人CSF14 3 3检测均为阳性。 18例伴有痴呆症状的非CJD的CSF检测均为阴性。而且检测结果说明脑脊液 14 3 3蛋白质是非常稳定的蛋白质 ,保存条件不是决定因素。结论　脑脊液 14 3 3蛋白质的检测对临床上高度怀疑的CJD病例有实验室协助确诊的作用。     

H3K27me3与高级别胶质瘤生存预后的关系

目的 探讨组蛋白H3第27位赖氨酸三甲基化（H3K27me3）与高级别胶质瘤生存预后的关系。方法 选取2015年6月至2017年9月手术切除的64例高级别胶质瘤标本,另选取颅脑损伤内减压术中切除的非肿瘤脑组织10例为对照,免疫组织化学染色法检测组织H3K27me3表达,根据染色评分分为高表达和低表达。随机选取3例非肿瘤脑组织、3例WHO分级Ⅲ级胶质瘤组织、3例WHO分级Ⅳ级胶质瘤组织,应用免疫印迹法检测H3K27me3的蛋白表达。胶质瘤病人随访截止2022年10月,记录总体生存期。结果 免疫组化染色检测结果显示,高级别胶质瘤组织H3K27me3高表达率（59.37%）明显高于非肿瘤脑组织（20.00%;P<0.05）。免疫印迹法检测结果显示,WHO分级Ⅳ级胶质瘤组织H3K27me3蛋白表达水平明显高于WHO分级Ⅲ级胶质瘤组织和非肿瘤脑组织（P<0.05）。64例胶质瘤中位随访时间为62.23个月,5年生存率为37.5%。多因素Cox回归分析显示,H3K27me3高表达是高级别胶质瘤不良生存预后的独立影响因素（P<0.05）。生存曲线分析显示,H3K27me3高表达高级...     

3D-FIESTA联合3D-TOFMRA对三叉神经微血管减压术的指导价值

目的探究三维稳态进动快速成像(3D-FIESTA)及三维时间飞跃法血管成像(3D-TOF MRA)对三叉神经微血管减压术的指导价值。方法分析2012年2月~2015年12月徐州医科大学附属医院脑科医院神经外科行微血管减压术的121例三叉神经痛患者的临床表现、影像资料、术中所见、手术疗效。使用3.0 T磁共振机行3D-FIESTA及3D-TOF MRA序列扫描,重点从轴位、冠状位、矢状位上观察两种序列中患侧三叉神经脑池段与周围血管的位置关系,与手术结果进行对照分析。结果本组119例患者手术中探查到三叉神经REZ区有血管压迫或接触。3D-FIESTA、3D-TOF MRA及3D-FIESTA联合3D-TOF MRA对于判断有无血管压迫或接触的总符合率分别为82.6%、74.4%、98.3%。术前3D-FIESTA联合3D-TOF MRA检查与术中所见结果的差异无统计学意义(P0.05)。3D-FIESTA联合3D-TOF MRA对判断血管类型的准确性明显高于单独3D-FIESTA及3D-TOF MRA,差异有统计学意义(均P0.001)。结论 3D-FIESTA联合3D-TOF MRA可准确判断患侧三叉神经是否有血管接触,明确责任血管及其血管的类型(动脉或静脉),有助于制定手术方案,提高手术疗效;对于三叉神经微血管减压术具有十分重要的意义。     

Creutzfeldt-Jakob病脑组织14-3-3蛋白表达及其意义

目的探讨Creutzfeldt—Jakob病（CJD）脑组织内14-3-3蛋白表达及其诊断意义。方法实验组为5例cJD额叶组织，对照组为4例非CJD额叶组织。采用14-3-3B和s抗体，通过链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶（S—P）免疫组织化学方法进行检测。并参照KB、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、PrP免疫组织化学染色和129基因型检测结果。结果实验组5例脑组织14—3-3蛋白有较多地表达，其中3例灰质与星形胶质细胞尤著。其表达程度与PrP沉积类型有关，而与PrP129基因型无关。对照组4例中除2例急性脑挫伤仅个别神经细胞有表达外，肾上腺脑白质营养不良与额颞叶痴呆灰质和白质均无表达。结论14-3．3蛋白在脑内较多地表达，有利于CJD的病理诊断。     

14-3-3蛋白在人脑胶质瘤中的表达及生物学意义

目的检测14-3-3蛋白在人脑胶质瘤中的表达情况,探讨其在胶质瘤发生发展中的生物学意义。方法采用免疫组化亲和素-生物素过氧化物酶复合物(ABC)法检测5个胶质瘤细胞系(U251MG,U87MG,BT325,SHG44和C6)、121例人脑胶质瘤石蜡标本和10例正常脑组织中14-3-3蛋白的表达情况。分析14-3-3蛋白的表达在胶质瘤发生发展中的作用。结果在正常脑组织标本中,13-3-3蛋白主要表达于神经元的胞体和突起,仅在少数的胶质细胞中可见14-3-3蛋白的弱表达。然而,5个胶质瘤细胞系和绝大部分星形细胞瘤中可见14-3-3蛋白的阳性表达,其表达阳性率为:Ⅰ级78.6%(11/14),II级75%(18/24),III级76.2%(16/21),IV级80%(20/25)。不同恶性级别的星形细胞瘤中,14-3-3蛋白的阳性表达率无显著差别,但14-3-3蛋白的表达强度和范围有随肿瘤的恶性度增高而增加的趋势。其它类型的胶质瘤中也可见14-3-3蛋白的大量表达,其表达阳性率为:少突胶质细胞瘤66.7%(4/6),间变型少突胶质细胞瘤100%(4/4),室管膜瘤50%(2/4),间变型室管膜瘤66.7%(2/3),脉络从乳头状瘤100%(5/5),松果体细胞瘤100%(3/3),髓母细胞瘤66.7%(8/12)。结论14-3-3蛋白在人脑胶质瘤中有大量的表达。14-3-3蛋白表达上调可能是胶质瘤细胞对抗调亡的一种共同机制,以14-3-3蛋白为靶点有望成为一种有前景的新的胶质瘤生物学治疗方法。     

3D-CTA、3D-DSA对颅内动脉瘤临床诊断价值的对比

目的探讨多层螺旋CT三维血管造影(Three-dimension computed tomographic angiography 3D-CTA)在颅内动脉瘤诊断中的临床应用及价值。方法 88例自发性蛛网膜下腔出血患者同时进行了3D-CTA和三维数字减影血管造影(Three dimensional digital subtraction angiography,3D-DSA)检查,用2种方法分别评价动脉瘤的检出率,测量瘤颈和瘤体长径。结果 88例患者,3D-CTA检出75例患者中80个动脉瘤,13例患者未检测到动脉瘤,3D-DSA检出78例患者中90个动脉瘤,10例患者未检测到动脉瘤。3D-CTA检测动脉瘤患者的诊断敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为96.2%、100.0%、100.0%和76.9%。对所有动脉瘤以及长径为≥5mm、3～5mm、≤3mm的动脉瘤的诊断敏感性分别为88.9%、100%、93.3%、57.9%。3D-CTA和3D-DSA所测动脉瘤瘤颈和长径经Pearson积差相关系数检验,两种方法所测瘤颈(ρ=0.94,P0.01,R2=0.88)和长径(ρ=0.93,P0.01,R2=0.86)有强相关;Wilcoxon配对符号秩检验3D-CTA和3D-DSA所测瘤颈(Z=-1.49,P0.1)和长径(Z=-1.33P0.1)无显著性差异。结论 3D-CTA对长径3mm颅内动脉瘤的诊断有很高的敏感性和特异性,可作为一种无创性的常规筛查方法。但对长径≤3mm的颅内动脉瘤仍有部分漏诊,3D-CTA检查未发现颅内动脉瘤的蛛网膜下腔出血患者应进一步3D-DSA检查。     

多聚谷氨酰胺长度依赖性的突变型ataxin-3片段募集野生型ataxin-3

目的脊髓小脑共济失调Ⅲ型（spinocerebellar ataxia type3,SCA3）／马查多-约瑟夫病（Machado—Joseph disease,MJD）是MJD—1基因中编码谷氨酰胺的密码子CAG的数量非正常扩增引起的一种多聚谷氨酰胺疾病,也是神经退行性疾病的一种。该病的主要病理特征为突变的ataxin-3在患者易感脑区的神经元胞核内聚集形成核内包涵体,但其致病机制和突变蛋白在核内聚集的机制仍不清楚。本研究是为了探讨突变型ataxin-3的病理学特性以及其聚集特性。方法将野生型ataxin-3及不同多聚谷氨酰胺长度的突变型ataxin-3片段共转染到人胚胎。肾细胞（HEK293 cells）和鼠成神经母细胞（neuroblastoma cells）中,用荧光显微镜观察。共转染48小时后,收集在细胞中表达的蛋白,用免疫印迹、免疫共沉淀和GST—pull down实验检测蛋白的表达及结合。结果用荧光显微镜观察到突变型ataxin-3片段在细胞内形成聚集,其聚集体上募集有野生型全长ataxin-3;突变型和野生型ataxin-3在细胞内聚集体上有共定位现象。野生型ataxin-3片段并不形成聚集体,与野生型全长ataxin-3在细胞内无聚集现象发生。免疫共沉淀技术及GST—pulldown实验显示,突变型ataxin-3片段与野生型全长ataxin-3存在相互作用,且该作用强度呈现出多聚谷氨酰胺长度依赖性。结论结果提示,野生型ataxin-3通过与突变型ataxin-3片段的相互作用沉积于突变片段形成的聚集体中,这可能影响野生型ataxin-3的正常功能,进而可能对脊髓小脑共济失调Ⅲ型（SCA3）／马查多-约瑟夫病（MJD）的发病产生影响。     

PI3K/GSK-3在LPA诱导PC12细胞凋亡中的作用

目的 探讨PI3K/GSK-3通路在溶血磷脂酸(LPA)诱导PC12细胞凋亡中的作用。方法 培养PC12细胞,CCK8测定不同水平LPA处理下PC12细胞的细胞活力,Tunel法测定不同水平LPA处理下PC12细胞的细胞凋亡,测定PI3K、GSK-3抑制剂预处理对LPA诱导的PC12细胞活力和细胞凋亡的影响; Western Blot测定不同水平LPA处理下PC12细胞裂解液的凋亡蛋白酶Caspase 3水平,测定PI3K、GSK-3抑制剂预处理对LPA介导的PC12细胞裂解液Caspase 3水平变化的影响。结果 LPA剂量依赖导致PC12细胞活力下降,PI3K、GSK3α抑制剂能够减轻LPA介导的PC12细胞活力下降,GSK3β抑制剂能够促进LPA介导的PC12细胞活性损失; LPA以剂量依赖的方式诱导PC12细胞凋亡,PI3K、GSK3α抑制剂可减轻LPA介导的PC12细胞凋亡,GSK3β抑制剂可促进LPA介导的PC12细胞凋亡; LPA以剂量依赖的方式增加PC12细胞Caspase 3表达,PI3K、GSK3α抑制剂可抑制LPA介导的PC12细胞Caspase 3表达增加,GSK3β抑制剂可促进LPA介导的PC12细胞Caspase 3表达增加。结论 LPA/PI3K/GSK-3通路在神经细胞死亡的病理生理过程中起重要作用,干预LPA/PI3K/GSK-3通路将是一种潜在的创伤后治疗措施。     

《CCMD-3》读后感

《中国精神障碍分类与诊断标准 ,第 3版》(CCMD- 3)获得中华精神科学会通过并正式出版 ,这是我国精神医学发展中的一件大事 ,本刊已收到一些对此进行讨论的稿件 ,作为“专题讨论”刊出 ,欢迎读者们就以下 3方面继续来稿 ,但希望避免重复 :1对 CCMD- 3学习、应用中的体会 ;2对 CCMD- 3的评价 ,意见与商榷 ;3对我国精神疾病分类与诊断标准制定工作的瞻望与建议。     

3D-CTA与3D-DSA在颅内动脉瘤影像诊断中的对比研究

目的 对比分析三维螺旋CT血管造影(3D - CTA)和三维数字减影血管造影(3D -DSA)在颅内动脉瘤影像诊断中的价值.方法 对2009年6月至2010年6月期间因自发性蛛网膜下腔出血(sSAH)入院临床拟诊颅内动脉瘤的46例患者同时进行头颅3D -CTA和3D - DSA检查.研究并比较动脉瘤的检出情况、瘤颈显示情况、瘤体与载瘤动脉的关系等影像特点.结果 46例患者,阴性3例,余43例患者共检出52个动脉瘤.将3D -CTA和3D - DSA检查的准确性进行比较,差异无统计学意义.结论 3D -CTA可作为sSAH病因诊断的首选检查方法,但结合3D - DSA可以获得更多的信息,进而为治疗动脉瘤制定出最佳方案.     

GSK3B基因3'-UTR多态性与阿尔茨海默病发病风险的相关性分析

目的研究中国汉族人群中糖原合成酶激酶3β基因(GSK3B)3'端非翻译区(3'-UTR)基因多态性与阿尔茨海默病(AD)发病风险的相关性。方法采用直接测序的方法,对535例AD病例及464例正常对照的GSK3B基因3'-UTR单核苷酸多态性(SNPs)位点进行基因分型。结果 GSK3B基因3'-UTR各SNPs位点的等位基因频率和基因型分布在AD组和正常对照组之间的差异无统计学意义(P0.05)。其中rs60393216、rs56728675和rs3732361存在强连锁不平衡,其构成的三种单体型的频率在AD组和正常对照组之间的差异无统计学意义(P0.05)。结论 GSK3B基因3'-UTR多态性与中国汉族人群AD发病风险无关。     

信号蛋白质14-3-3ζ的高效融合表达和鉴定

目的　利用分子克隆技术在原核细胞中研究 1 4-3 -3ζ蛋白的表达。方法　 1 4-3 -3ζ c DNA经测序后 ,亚克隆至 p BK-CMV表达载体 ,转化大肠杆菌 BL2 1菌株 ,筛选阳性克隆 ,经异丙基硫代 -β-D-半乳糖苷 (IPTG)诱导表达。结果　经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE)和蛋白印迹 (Western blot)分析 ,表达的融合蛋白相对分子质量为 3 2 0 0 0左右 ,能与 1 4-3 -3ζ蛋白特异性多克隆抗体发生免疫结合反应。结论　人 1 4-3 -3ζ蛋白在原核细胞中有大量表达 ,且具有良好的免疫反应性     

Creutzfeldt-Jakob病脑脊液14-3-3蛋白变化特征及其影响因素分析

目的分析47例临床可能或很可能克雅氏病(CJD)患者的脑脊液(CSF)14-3-3蛋白特征,为CJD早期临床评估及诊断提供参考。方法收集2013年1月至2016年1月以"可疑CJD"诊断在首都医科大学宣武医院住院的患者,对其一般资料及CSF 14-3-3蛋白特征进行分析。比较CSF 14-3-3蛋白阳性组与阴性组年龄、病程、临床表现及脑电图(EEG)、磁共振(MRI)的特点,并采用Spearman法分析CJD患者CSF 14-3-3蛋白与年龄、病程、MRI、EEG及临床表现的相关性。结果 47例患者中有46例患者进行了腰椎穿刺并送检CSF 14-3-3蛋白,其中有5例既往CSF 14-3-3蛋白检查为阴性者在复查后结果转为阳性,由阴性转为阳性时间为1~3个月。最终CSF 14-3-3蛋白阳性的患者占58.70%(27/46),14-3-3蛋白阳性组锥体束(P=0.015)、小脑症状(P=0.012)和视力障碍(P=0.044)均高于阴性组,仅磁共振(MRI)阳性率阳性组低于阴性组(P=0.025),且Spearman法相关性分析显示CJD患者CSF 14-3-3蛋白与锥体束(P=0.029)、视力障碍(P=0.039)及MRI(P=0.006)相关。结论 1 CSF 14-3-3蛋白含量可能与锥体束、小脑症状等运动系统及视力损害有关系,可间接反应CJD患者大脑神经细胞的功能状态;2 CSF 14-3-3蛋白为CJD早期诊断提供参考依据之一,CSF14-3-3蛋白含量随病情进展发生变化,对于首次检查阴性的患者实际工作中要注意复查,以免漏诊。     

原位心脏移植3例

2001-08/2003-12南昌大学第一附属医院心胸外科分别为3例终末期心脏病患者进行了原位心脏移植,3例供者均为青年男性脑死亡者,供者与受者体质量差异均小于20%。3例受者均采用双腔静脉吻合法,移植后采用环孢素A、强的松及霉酚酸酯联合免疫抑制治疗。3例患者均顺利出院,心功能恢复至NYHAⅠ~Ⅱ级,围手术期无感染或严重排斥反应发生。提示良好的心肌保护、完善的围手术期处理以及合理的抗排斥治疗是心脏移植成功的关键。