帕金森病的干细胞移植及其基因治疗研究进展

随着神经干细胞研究的发展以及分子生物学技术的进步，神经干细胞移植及基因治疗已成为帕金森病治疗的主要研究方向。本文回顾了帕金森病的治疗现状、移植神经干细胞的来源、相关的修复机制及神经干细胞联合基因治疗帕金森病的进展作一综述。     

基因转染神经干细胞移植治疗脑胶质瘤的研究进展

脑胶质瘤发病率占颅内肿瘤的第一位,目前采用手术、放疗、化疗等综合治疗,但其预后仍差。其治疗难点在于肿瘤细胞的浸润性生长方式,而基因治疗将成为将来治疗方案的最佳选择之一。神经干细胞具有在中枢神经系统内迁移分化能力,是基因治疗的良好载体细胞。胞嘧啶脱氨酶基因和自介素-4基因、白介索-12基因、TRAIL基因修饰神经干细胞移植治疗脑胶质瘤是当前脑胶质瘤基因治疗的前沿。     

实验性帕金森病基因治疗的策略

目前实验性PD基因治疗的策略主要以神经保护、神经修复及功能重建为主 ,可供移植目的基因和载体得到了前所未有的发展。随着人类首次PD基因治疗临床实验的开展 ,预测PD基因治疗将在未来的几年内取得更大的突破和进展。     

基因修饰的神经干细胞与帕金森病

神经干细胞具备自我更新能力，可在特定环境下定向分化为神经元和胶质细胞，通过分泌神经营养因子、调控神经炎症、增强神经元可塑性等机制修复帕金森病(PD)多巴胺神经元损伤。目前PD治疗主要是多巴胺替代治疗，但不能阻止PD病情进展，且不能彻底根治。干细胞在PD中具有较好的治疗前景，尤其神经干细胞优势引起较多关注。尽管神经干细胞移植在PD治疗中取得了一定的效果，但临床中的应用仍受到很多条件限制。本文就神经干细胞基因修饰在PD治疗中的研究进展进行综述，旨在探讨神经干细胞治疗PD的关键调控机制。     

TH基因修饰的神经干细胞移植治疗帕金森病的实验研究

目的 探讨TH基因修饰的神经干细胞脑内移植对帕金森病(PD)的治疗作用。方法 构建pN：ATH逆转录病毒载体质粒，用PA317细胞包装，G418筛选阳性克隆，病毒上清感染神经干细胞，将表达TH的神经干细胞植入：PD大鼠纹状体内，测定：PD大鼠旋转行为改善，DA和DOPAC含量变化，以及TH在纹状体的表达。结果 TH基因修饰的神经干细胞移植8周时能显著降低PD大鼠旋转行为，增加纹状体DA和DOPAC含量，TH在纹状体内的表达增加，疗效好于单纯神经干细胞移植组。结论 TH基因修饰的神经干细胞移植对PD大鼠有明显的治疗作用，可望为PD治疗提供新的途径。     

神经干细胞在脊髓损伤中的应用与进展

背景：神经干细胞来源广泛，取材方便，分离培养容易，且神经干细胞易于外源基因的导入和表达，可为基因治疗神经系统的疾病提供良好的载体。 目的：对神经干细胞在脊髓损伤中的应用进行回顾性研究。 方法：由通讯作者检索2006/2009 PubMed数据(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/PubMed)及万方数据库(http://www. wanfangdata.com.cn)有关神经干细胞的培养，鉴定，分化，及其应用于脊髓损伤的组织工程修复等方面的文献，英文检索词为“neural stem cells，spinal cord injury ，cellular transplantation”，中文检索词为“神经干细胞，脊髓损伤，细胞移植”。排除重复性研究。计算机初检得到82篇文献，根据纳入标准保留23篇进一步归纳总结。 结果与结论：神经干细胞移植的动物实验已广泛开展。目前神经干细胞在修复脊髓损伤中的应用主要集中以下几方面：一是直接细胞移植进行替代治疗，通过神经干细胞的移植或激活体内的神经干细胞，使其分化为神经元和胶质细胞，并与已经存在的神经细胞结构整合到一起而达到治疗疾病的目的；二是以神经干细胞作为基因载体，携带治疗作用的目的基因进行移植，从而达到细胞替代和基因治疗的双重作用；三是通过对生长因子和细胞因子的研究，诱导自身的神经干细胞分化进行神经自我修复。     

小鼠胚胎干细胞诱导的神经前体细胞纹状体移植对PD大鼠的治疗作用

目的 观察来源于小鼠胚胎干细胞的神经前体细胞移植PD大鼠纹状体后的存活、分化以及细胞移植对PD大鼠的治疗作用。方法 采用无血清方法将小鼠胚胎干细胞定向诱导为神经前体细胞，免疫组化技术观察移植细胞的存活、分化。结果 胚胎体在N2选择性培养基选择生长5d后，85％以上的小鼠胚胎干细胞分化为nestin阳性的神经前体细胞。移植到PD大鼠纹状体后大部分神经前体细胞存活良好，移植细胞分别保持为未分化的nestin阳性的神经前体细胞和TH阳性的神经元。移植后3周，PD大鼠的旋转次数明显减少。结论 胚胎干细胞来源的神经前体细胞移植PD大鼠纹状体后能分化为TH阳性的神经细胞，对PD有治疗作用。     

神经干细胞植入阿尔茨海默病鼠脑后的效果观察

神经干细胞移植治疗阿尔茨海默病鼠包括细胞替代治疗和基因治疗,神经干细胞移植阿尔茨海默病鼠脑后其组织形态学与行为学效应均可以得到不同程度的修复和改善。细胞替代治疗中,神经干细胞与神经营养因子联合移植效应优于单纯的神经干细胞移植,但目前对神经干细胞体内分化机制的不确定导致了神经干细胞移植治疗的盲目性,同时对影响其疗效的各种可能因素也缺乏比较研究。神经干细胞基因治疗具有细胞替代和基因治疗的双重作用,但尚处于研究的初期阶段,仍以NGF,BDNF,GDNF等单一营养因子基因修饰的神经干细胞移植治疗为主,且转基因神经干细胞移植入阿尔茨海默病鼠脑后外源基因表达效率、促分化、功能修复情况以及安全性的研究还很缺乏。目前神经干细胞移植治疗阿尔茨海默病鼠脑后的疗效检测技术手段比较单一,免疫组化方法与活体示踪技术的结合、形态学指标与功能学指标的综合检测是疗效检测的发展趋势。     

帕金森病的细胞移植治疗

在众多帕金森病(PD)细胞移植的供体中,肾上腺髓质细胞由于其存活率低已被淘汰。人胚胎腹侧中脑虽然研究最深入、广泛,但严重的伦理道德问题限制了其临床的应用。视网膜色素上皮细胞和异种胚脑组织是近年来发展前景良好的新型供体。神经干细胞-基因联合治疗为干细胞移植治疗PD提供了一个新方向。本文就PD细胞移植的这些供体研究做一综述。     

基因修饰的神经干细胞脑内移植后TH表达和神经递质的变化

目的：探讨经TH基因修饰的神经干细胞脑内移植后，PD模型动物脑内TH表达和神经递质的变化。方法：构建pN2ATH逆转录病毒载体质粒，用PA317细胞包装，G418筛选阳性克隆，病毒上清感染神经干细胞，将神经干细胞和表达TH的神经干细胞植入PD大鼠纹状体内，观察移植后TH的表达情况以及DA和DOPAC含量变化。结果：TH基因修饰的神经干细胞移植2月内，TH在纹状体内的表达增加，纹状体DA和DOPAC含量增高，好于单纯神经干细胞移植组和对照组，但比正常水平低，结论：TH基因修饰的神经干细胞，脑内移植能增加纹状体内TH的表达以及DA和DOPAC含量，为其脑内移植治疗PD提供了理论基础。     

帕金森病的干细胞治疗进展☆

传统帕金森病的治疗方法主要有药物治疗和外科治疗,近来发展较快的治疗方法则包括干细胞移植及基因治疗等。用于治疗帕金森病的干细胞有胚胎干细胞、神经干细胞、间充质干细胞,干细胞移植在帕金森病动物模型和临床上都取得了一定的治疗成果,干细胞联合基因治疗也取得了较好的研究结果。干细胞移植治疗帕金森病的机制主要有替代作用、对多巴胺能神经元的保护及营养作用及促进内源性多巴胺能神经元的发生,但干细胞来源的多巴胺能神经元移植后能否存活、恢复纹状体的神经支配、移植干细胞的远期疗效等还有待于进一步证明。     

神经干细胞治疗脑缺血性疾病

神经干细胞具有低免疫源性、自我更新及多潜能分化等特性,它既能参加与神经功能的修复,又是基因治疗的理想载体,因而可望用于脑缺血性疾病的治疗。目前神经干细胞治疗脑缺血性疾病的途径有:１、激活自身神经干细胞,并诱导其向缺血区迁徙分化;２、异体神经干细胞脑内移植。而较为可行的策略是将转染神经营养因子的神经干细胞移植于缺血边缘区,早期利用其分化的基因产物。阻止宿主神经细胞的坏死和凋亡;晚期,利用其迁徙、分化特性来达到结构和功能修复的目的。     

AADC和NURR1基因联合c17.2神经干细胞移植治疗帕金森病的实验研究

目的研究芳香族氨基酸脱羧酶(AADC)基因和NURR1基因联合c17．2神经干细胞脑内移植后对帕金森病模型大鼠的治疗效果。方法人类神经元性AADC基因和NURR1基因真核表达载体分别转染至c17．2神经干细胞内。将帕金森病(PD)模型大鼠随机分为4组,分别予以脑内毁损侧纹状区移植含空质粒的c17．2神经干细胞(A组),pCDNA3-AADC转染后的c17．2神经干细胞(B组),pCDNA3-NURR1转染后的c17．2神经干细胞(C组)以及含有pCDNA3-AADC和pCDNA3-NURR1转染后的c17．2 神经干细胞(D组)。观察其病理性旋转行为的改善,采用酪氨酸羟化酶(TH)的免疫组化方法研究脑内多巴胺含量的变化,并用荧光示踪方法观察c17．2细胞在PD模型脑内的移行。结果各组动物脑内移植后动物旋转行为较前均有改善(P<0．05),尤以D组改善最为明显,其行为学最大改善达73．7％,且同A、B、C组间差异具有显著性(P<0．05)。免疫组化可见各组移植TH阳性细胞明显增多,TH染色的神经元树突或轴突密集,体内TH阳性区域明显较PD模型组扩大,其中尤以D组病理学改善最为明显。荧光示踪观察c17．2神经干细胞有突触形成,并与临近的细胞建立突触联系。结论 AADC基因联合NURR1基因共转染c17．2神经干细胞脑内移植后改善了动物的旋转行为,增加了脑内多巴胺的表达,且植入的神经干细胞可同宿主神经元形成突触联接,为研究多基因联合神经干细胞移植治疗帕金森病提供了新方法。     

神经干细胞死亡的机制及改善策略

神经干细胞的研究一直是神经医学基础研究的热点之一，神经干细胞移植或促进自体脑内神经干细胞再生为治疗多种损伤性或退行性中枢神经系统疾病提供了新的希望．体外培养的胚胎或骨髓源性神经干细胞也为基因治疗提供了新的载体，但如何避免体外传代培养及移植后神经干细胞的衰退和死亡，维持其长期存活、发育、分化并行使功能依然是一个复杂而重要的问题。     

骨髓基质细胞脑内移植治疗帕金森病的研究现状

骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BM-SCs)是一种具有多分化潜能的干细胞,可作为多种疾病细胞替代治疗和基因治疗的载体。近年来发现其在体内外均能成功诱导成为表达特异性神经抗原的神经细胞、胶质细胞和少突细胞,并分泌具有神经保护作用的细胞因子[1～3]。由于BMSCs取材方便,能在体外通过培养扩增,通过自体移植可避开免疫排斥反应和道德伦理方面的因素。这就提示了BMSCs有可能取代神经干细胞用于治疗帕金森病(Parkin-son’s disease,PD)。因此,BMSCs脑内移植治疗PD已成为神经科学领域研究的热点。1骨髓基质细胞1.1BMSCs…     

Neurturin基因的克隆及其在C17.2神经干细胞中表达的研究

目的 探讨Neurturin(NTN)基因转染的C17．2神经干细胞移植后对帕金森病(PD)大鼠模型的保护作用，为其提供基因修饰的神经干细胞。方法 用RT—PCR方法获取Prepro-NTN cDNA，并克隆至pBlueskipt Ⅱ载体中，再将Prepro-NTN基因克隆至pcDNA3．1—hygro真核表达载体中，经量Lipofectamine 2000转染C17．2神经干细胞，挑选稳定表达的克隆，用RT—PCR及Western Blot印迹分析鉴定。结果 pcDNA3．1—hygro-NTN质粒转染C17.2神经干细胞后有5个稳定表达的克隆生长，克隆1有NTN蛋白的高表达。结论 获得了稳定表达NTN蛋白的C17．2神经干细胞克隆，为移植治疗PD打下了坚实的实验基础。     

神经干细胞移植治疗小儿脑性瘫痪及所存在的问题

脑性瘫痪是儿童时期最常见且终生存在的运动性残疾,目前尚无有效治疗手段,细胞移植和基因治疗技术的飞速发展为治疗此类疾病带来了希望。近两年国内外出现有关神经干细胞移植治疗脑性瘫痪的报道,这给脑性瘫痪的治疗研究提供了新的思路。文章阐述了小儿脑性瘫痪的神经干细胞机制,并回顾近年来国内外关于神经干细胞移植在动物实验及临床中的有效应用,为神经干细胞治疗小儿脑性瘫痪的可行性提供依据。但神经干细胞移植治疗脑性瘫痪还存在一些问题：移植仍然存在免疫排斥反应;如何促进神经干细胞的快速增殖;如何实现神经干细胞的定向诱导分化;如何评价神经干细胞移植以后患儿的改善情况,移植时机,移植量,移植部位,移植方式等一系列问题均有待于基础和临床学科的共同研究和探讨。     

神经干细胞及其临床应用前景

近年研究证实胚胎期和成年哺乳动物的神经组织及人脑中可以分离出神经干细胞。干细胞可被生长因子诱导而增殖并保持分化成神经元及胶质细胞的潜能，移植后能在宿主的神经组织中良好地生存、整和及分化，并且通过基因操作可表达外源性基因。本文就神经干细胞的生物学特性及其在颅脑损伤和其它神经系统疾病中的基因治疗前景进行综述。     

神经干细胞与基因治疗

作为神经组织发育和自我修复的细胞学基础，神经干细胞已成为中枢神经系统损伤和疾病研究的焦点。神经干细胞领域的进展如生物学特性研究以及神经干细胞建系成功等为神经干细胞的临床应用奠定了理论基础。近年来，随着分子生物学、分子遗传学的发展，人们对多种神经系统疾病的相关基因基础有了新的认识，加上基因工程技术的突破，极大地推动了神经系统疾病的基因治疗进展。神经干细胞的临床应用与基因治疗的有机结合为多种神经系统遗传性和获得性疾病的治疗带来了新的希望。     

神经干细胞与脑肿瘤基因治疗

基因治疗是脑肿瘤治疗的重要辅助手段,但由于肿瘤细胞常常浸润到周围正常脑组织,使得脑肿瘤治疗难以彻底。随着对神经干细胞的深入研究,发现神经干细胞能够迁移追踪肿瘤细胞,并具有多潜能分化、免疫原性低等诸多优点。此外,在动物实验中发现,神经干细胞能整合于宿主细胞,长期、稳定表达外源性基因。因此,神经干细胞是脑肿瘤基因治疗的理想载体。