Toll样受体在真菌性鼻及鼻窦炎的表达及意义

目的研究Toll样受体2(Toll—like receptor 2,TLR2)和Toll样受体4(Toll—like receptor 4,TLR4)在真菌性鼻及鼻窦炎(fungal rhinosinusitis,FRS)患者鼻黏膜中的表达,并探讨其在FRS发病中的可能作用。方法采用逆转录-聚合酶链反应和免疫组化SP法分别检测24例FRS、24例慢性鼻及鼻窦炎(chronic rhinosinusitis,CRS)和15例鼻中隔偏曲手术患者正常下鼻甲鼻黏膜中TLR2和TLR4 mRNA和蛋白的表达水平。结果TLR2和TLR4 mRNA在FRS组的表达水平(0.208±0.063和0.1 59±0.059)明显低于CRS组(0.505±0.097和0.406±0.102)和鼻中隔偏曲患者组(0.327±0.047和0.232±0.088,P均<0.05)。FRS组TLR2和TLR4蛋白的阳性表达率明显低于CRS组和鼻中隔偏曲组(P<0.05)。结论TLR2和TLR4在FRS中表达下调,提示Toll样受体介导的天然免疫在鼻黏膜抗真菌防御反应中作用下降,是引起鼻黏膜真菌清除率下降和真菌易感性增加的原因之一。     

TLR2和TLR4在慢性鼻窦炎鼻息肉中的表达及临床意义

目的检测Toll样受体2(toll-like receptor 2,TLR2)和Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)蛋白在慢性鼻窦炎鼻息肉黏膜组织中的表达,并探讨其在鼻窦炎鼻息肉发病机制中的作用。方法采用免疫组织化学技术检测62例鼻窦炎鼻息肉黏膜组织中TLR2和TLR4蛋白的表达和分布,同期选取5例正常筛窦黏膜组织进行对照。按照1997年海口制定的"慢性鼻窦炎鼻息肉临床分型分期及鼻内镜下鼻窦手术疗效评定标准"将其分组,比较各组间TLR2和TLR4表达程度的差异。结果①TLR2、TLR4主要表达在鼻腔黏膜上皮细胞、固有层炎性细胞及黏膜下层腺体的胞浆和胞膜上。②慢性鼻窦炎鼻息肉各型各期均较对照组高;并且随着分型的升高,TLR2、TLR4的表达量也随之增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 TLR2和TLR4在鼻窦炎鼻息肉中的表达可能与鼻窦炎鼻息肉的发病机制存在着一定的相互关联,TLR在该机制中可能扮演重要角色。     

鼻黏膜中Toll样受体5的表达

目的研究鼻黏膜中Toll样受体5(Toll-likereceptor-5,TLR-5)的表达以了解TLR-5在鼻黏膜天然免疫中的作用。方法鼻息肉和下鼻甲组织从接受鼻内镜手术治疗的慢性鼻及鼻窦炎和鼻中隔偏曲患者取得。应用免疫组化法检测17例鼻息肉和13例下鼻甲黏膜中TLR-5蛋白的表达,应用实时荧光定量RT-PCR(real-time fluorescentquantitative RT-PCR,real-time FQ-RT-PCR)检测14例鼻息肉和9例下鼻甲黏膜中TLR-5 mRNA的表达。结果在所有标本中均检测到TLR-5 mRNA和蛋白表达。免疫组化显示TLR-5蛋白主要表达于鼻黏膜上皮细胞和腺体上皮细胞。在细胞核和细胞浆中均有表达。在鼻黏膜上皮,染色最强的区域位于黏膜上皮表面一侧的细胞膜和细胞核。另外在间质单核样炎症细胞及NK细胞也有表达。鼻息肉组织中TLR-5蛋白表达指数5.529±0.653较下鼻甲2.346±0.619增高,差异有统计学意义(Z=-3.107,P=0.002)。结论本次研究确认了TLR-5在鼻黏膜和鼻息肉组织的表达,鼻息肉组织中TLR-5表达的增高可能与鼻息肉内持续的炎症状态有关。提示TLR-5有可能成为鼻息肉、慢性鼻及鼻窦炎一个新的治疗靶点。     

Toll样受体及其传导通路在慢性鼻窦炎鼻息肉中的表达

目的：探讨Toll样受体（TLRs）及其传导通路在慢性鼻窦炎鼻息肉组织中的表达及意义。方法：慢性鼻窦炎鼻息肉及正常对照组各10例分别抽提RNA,逆转录成eDNA后扩增cRNA并标记,采用SuperArray第2代功能分类芯片技术检测TLRs及其传导通路表达,化学发光的芯片图像通过X胶片和台式扫描仪获得。使用GEArray表达分析配套软件进行完整的芯片数据分析。结果：与正常对照组织相比,鼻息肉组织中表达上调2倍的基因有4条,表达下调2倍的基因有15条。结论：TLRs及其传导通路在慢性鼻窦炎鼻息肉组织与正常鼻黏膜中的表达差异提示天然免疫在慢性鼻窦炎发病中发挥一定的作用。TLR9及其激动剂在慢性鼻窦炎发病及治疗中的作用需进一步研究。     

Toll样受体mRNA在慢性鼻窦炎患者鼻黏膜上皮细胞中的表达

目的　探讨Toll样受体 2 (Toll likereceptor 2 ,TLR 2 )及其Toll样受体 4(Toll likereceptor 4,TLR 4)mRNA在慢性鼻窦炎患者和健康成人鼻黏膜上皮细胞中的表达 ,分析TLR 2和TLR 4在鼻黏膜天然免疫中的作用。方法　应用核酸分子原位杂交技术检测 3 0例慢性鼻窦炎患者和 2 1例健康成人鼻黏膜上皮细胞中TLR 2和TLR 4mRNA的表达。结果　TLR 2和TLR 4mRNA在 3 0例慢性鼻窦炎上皮细胞中均有表达 ,且分别与对照组间差异有显著性意义 (t =8 60 5,P <0 0 0 0 5,t =9 0 50 ,P <0 0 0 0 5)。结论　鼻黏膜上皮细胞中可以产生TLR 2和TLR 4,表明鼻黏膜上皮不仅是单纯的物理屏障 ,更可以通过Toll样受体对病原微生物进行识别 ,以直接启动有效的抗感染机制。     

p38在慢性鼻-鼻窦炎和鼻息肉中的表达及意义

目的探讨p38在慢性鼻-鼻窦炎、鼻息肉以及正常下鼻甲黏膜组织中的表达及对免疫学细胞因子的影响。方法分别采用Western blot法、ELASE法检测p38、IL-4和IFN-γ在20例慢性鼻-鼻窦炎组织（实验组1）、20例鼻息肉组织（实验组2）和15例正常下鼻甲黏膜中的表达（对照组）,比较它们在不同组织中表达的差异;分析p38与IL-4、IFN-γ的相关性。结果①p38在两实验组间的表达差异无统计学意义（P>0.05）,但均高于对照组（P<0.05）;②IL-4只在鼻息肉组表达高于对照组（P<0.05）;③IFN-γ在实验组的表达均高于对照组（P<0.05）,且以慢性鼻窦炎组更显著（P<0.05）;④在慢性鼻-鼻窦炎组,p38与IFN-γ呈正相关,而在鼻息肉组p38与IL-4呈正相关。结论①IL-4、IFN-γ在慢性鼻-鼻窦炎组与鼻息肉组表达优势不同;②p38 MAPK高表达可能会促进T细胞向Th1、Th2两方面分化;③慢性鼻-鼻窦炎、鼻息肉的炎症反应过程不尽相同。     

鼻息肉组织及上皮细胞的形态学特征与嗜酸粒细胞阳离子蛋白韵表达

目的：研究鼻息肉组织及其上皮细胞的形态学特征，检测嗜酸粒细胞阳离子蛋白（ECP）在其中的表达，探讨其发病机制及病理特点、ECP的作用。方法：慢性鼻-鼻窦炎不伴鼻息肉（鼻窦炎组）5例，慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉（鼻息肉组）5例，正常下鼻甲黏膜（对照组）5例，标本均分成2份，一份放入4％的戊二醛液中固定，常规电镜制片；另一份放入10％甲醛中固定，石蜡包埋行ECP原位杂交检测。结果：电镜下见鼻息肉组黏膜上皮排列紊乱，基底膜增厚，纤毛排列不整齐，倒伏，其中基底层有脱颗粒现象，鼻窦炎组上皮层破坏、基底膜水肿；对照组上皮层连续，基底层排列整齐。鼻窦炎组、鼻息肉组ECP阳性表达于上皮层、黏膜下层及血管周，呈棕褐色，但鼻窦炎组表达较鼻息肉组低。结论：鼻息肉组织及上皮细胞内有活化的嗜酸粒细胞，脱颗粒现象，鼻息肉组织中ECP高表达，说明鼻窦炎和（或）鼻息肉组织中有活跃的炎症反应，引起组织上皮损伤和脱落，最终形成鼻息肉。     

变应性因素及变应性鼻炎与慢性鼻-鼻窦炎鼻息肉的相关性探讨

目的：探讨变应性因素及变应性鼻炎（AR）与慢性鼻-鼻窦炎鼻息肉的临床相关性。方法：将200例研究对象分为A、B组,A组诊断为AR（110例）,B组诊断为慢性鼻-鼻窦炎鼻息肉（90例）,通过欧蒙印迹法定量检测血清sIgE浓度并观察慢性鼻-鼻窦炎鼻息肉手术治疗后的复发率、AR并发慢性鼻-鼻窦炎鼻息肉的发生率。结果：A组sIgE总阳性率为89.09%,B组sIgE总阳性率为74.44%。B组中sIgE阳性者术后复发率为58.21%,sIgE阴性者术后复发率为8.70%。A组41例（37.27%）并发慢性鼻-鼻窦炎鼻息肉,血清sIgE阳性率为97.56%;69例（62.73%）未并发慢性鼻-鼻窦炎鼻息肉,血清sIgE阳性率为79.71%;组内slgE阳性率比较差异有统计学意义（χ2=6.96,P〈0.01）。结论：变应性因素及AR与慢性鼻-鼻窦炎鼻息肉的发生有一定的相关性,提示避免接触变应原、合理治疗AR能够有效控制慢性鼻-鼻窦炎鼻息肉的复发率。     

Toll样受体-4介导诱发型一氧化氮合酶mRNA在鼻黏膜上皮细胞中的表达

目的 :探讨Toll样受体 4 (TLR 4 )对诱发型一氧化氮合酶 (iNOS )在鼻黏膜上皮细胞中表达的上调作用。方法 :应用核酸分子原位杂交技术检测 30例慢性鼻窦炎患者 (鼻窦炎组 )和 2 1例健康者 (对照组 )鼻黏膜上皮细胞中TLR 4和iNOSmRNA的表达。结果 :TLR 4和iNOSmRNA在鼻窦炎组鼻黏膜上皮细胞中的表达 ,分别为 (0 .14 33± 0 .0 184 0 ) /A和 (0 .136 8± 0 .0 0 76 5 ) /A ,分别与对照组 [(0 .10 2 4± 0 .0 1133) /A和 (0 .0 72 4± 0 .0 136 4 ) /A ]比较 ,差异有统计学意义 (均P <0 .0 1) ,且二者表达呈正相关 (r =0 .4 35 ,P <0 .0 1)。结论 :鼻黏膜上皮细胞通过TLR 4识别病原微生物 ,上调iNOSmRNA的表达 ,增加NO的合成 ,以杀伤、清除病原菌 ,增强宿主防御和免疫应答。     

淋巴细胞在慢性鼻-鼻窦炎组织中的表达及意义

目的：探讨B淋巴细胞（CD20）和T淋巴细胞亚群（CD4、CD8）在慢性鼻-鼻窦炎（CRs）中的表达及在炎症反应中的作用。方法：采用免疫组织化学技术检测B淋巴细胞（CD20）和辅助性T细胞（CD4）、细胞毒性T细胞（CD8）在实验组[分为15例CRS不伴鼻息肉（CRSsNP）组、12例CRS伴鼻息肉（CRSwNP）组、7例复发性CRSwNP组]和对照组（13例下鼻甲黏膜对照）中的表达。采用Mann-WhitneyU检验分析实验组和对照组B淋巴细胞、T淋巴细胞亚群的表达情况,实验组组间淋巴细胞浸润比较用单因素方差分析One—WayANOVA。结果：与对照组相比,实验组有明届的13淋巴细胞（CD20）和T淋巴细胞亚群（CD4、CD8）浸润（P〈0．05）：T淋巴细胞、亚群（CD4、CD8）在CRSwNP组和复发性CRSwNP组病变中的表达明显高于CRSsNP组（P〈0．05）;CD4在复发性CRSwNP组中的表达明显高于CRSwNP和CRSsNP组（P〈0．01）。结论：实验组鼻腔黏膜中B淋巴细胞、辅助性T细胞和细胞毒性T细胞高表达,均参与炎症的形成,其炎症匣应与T淋巴细胞浸润密切相关。     

慢性鼻-鼻窦炎患者鼻腔黏膜CD55和CD59的表达及其意义

目的　通过观察CD55和CD59在慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉（chronic rhinosinusitis with nasal polyp,CRSwNP）组织中的表达。探讨其与CRSwNP发病的关 系。方法　采用免疫组织化学方法检测60例CRS患者,分为CRSwNP组和慢性鼻-鼻窦炎不伴鼻息肉（chronic rhinosinusitis without nasal polyp,CRSsNP）组,鼻腔黏膜及鼻息肉组织中CD55和CD59的表达,并以30例单纯行鼻中隔偏曲矫正术患者为对照组。观察CD55和CD59在细胞中的表达情况。结果　CD55和CD59在对照组及CRSwNP组织中均有表达,二者在对照组的表达高于CRSwNP组织（P <0.05,P <0.01）。与CRSsNP组相比,CRSwNP组CD55和CD59表达进一步下降（P <0.05）。结论　CRSwNP患者鼻腔黏膜CD55和CD59表达降低,提示补体调节蛋白表达下降,进而导致补体活化,可能参与CRS发病机制。     

Sinonasal epithelial cell expression of toll-like receptor 9 is decreased in chronic rhinosinusitis with polyps

BACKGROUND: Innate immune recognition of pathogens by sinonasal epithelial cells may play an important role in the pathogenesis of chronic rhinosinusitis (CRS). Previous studies have indicated that toll-like receptor (TLR) mRNA is present in sinonasal mucosa, and levels of TLR9 expression are decreased in recalcitrant CRS with nasal polyps (CRSwNP). However, the cellular source and function of TLR9 in the sinonasal epithelium is not known. In this study, primary epithelial cell cultures were analyzed from control subjects and CRSwNP patients to determine the presence and function of TLR9 protein. METHODS: Primary epithelial cell cultures were established from 5 controls and 10 CRSwNP patients undergoing sinus surgery. Flow cytometry was used to confirm purity of epithelial cells and to assess expression of TLR9 protein. Epithelial cells were stimulated with TLR9 agonist, and mRNA was analyzed by real-time PCR for expression of human beta-defensin (HBD) 2 and interleukin (IL)-8. RESULTS: Flow cytometry showed TLR9 protein in 100% of epithelial cells from controls and CRSwNP patients. The level of expression was 50% lower in CRS patients than in controls. Stimulation of epithelial cells with TLR9 agonist produced a 1.5- to 9-fold increase in HBD-2 and IL-8 mRNA expression. CONCLUSION: Functional TLR9 protein is expressed by normal and diseased sinonasal epithelial cells. The level of TLR9 expression is decreased in CRSwNP patients, consistent with the previous finding of decreased TLR9 mRNA in whole sinonasal tissue. These findings suggest that impaired innate immune responses to pathogens via TLR9 on sinonasal epithelial cells may represent a critical mechanism in chronic inflammatory sinus disease.     

VEGF在伴鼻息肉的慢性鼻-鼻窦炎中的表达及克拉霉素对其的调节作用

目的：探讨血管内皮生长因子（VEGF）在伴鼻息肉的慢性鼻-鼻窦炎（CRSwNP）患者鼻黏膜中的表达及克拉霉素对其的调控作用。方法：收集16例CRSwNP组织及21例单纯鼻中隔偏曲患者下鼻甲黏膜,采用实时定量RT-PCR方法检测样本中VEGF的表达。另外收集10例伴鼻息肉的慢性鼻窦炎鼻息肉组织及5例单纯鼻中隔偏曲患者下鼻甲黏膜,采用体外组织块培养及ELISA方法,观察克拉霉素对VEGF表达的调节作用。结果：①VEGF mRNA在CRSwNP组的表达较对照组增高,差异有统计学意义（P〈0.01）;②经克拉霉素刺激前后比较,CRSwNP组织中VEGF蛋白的表达量下降,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：CRSwNP组织中VEGF的表达显著升高,推测VEGF在鼻息肉的发病机制中具有极其重要的作用。克拉霉素可能通过抑制VEGF的表达而达到治疗慢性鼻-鼻窦炎的作用。     

慢性鼻-鼻窦炎中转化生长因子β1与胶原纤维的表达及意义

目的：探讨转化生长因子（TGF—β1）及胶原纤维在慢性鼻-鼻窦炎中的表达及在鼻腔上皮黏膜组织重塑中的作用,及TGF-β1与胶原纤维沉积的关系。方法：62例鼻内镜手术患者分为CRSwNP组21例,CRSs—NP组15例,复发性鼻息肉组11例及对照组15例,其标本均进行免疫组织化学和Masson胶原染色。人工计数阳性细胞个数,通过Mann—WhitneyU检验方法分析CRSwNP组、CRSsNP组、复发性鼻息肉组与对照组的表达情况。实验各组与对照组组间用单因素的方差分析One—wayANOVA进行分析。结果：实验各组与对照组均有TGF-131表达,也都有胶原的沉积。其中,TGF-β1在CRSsNP组较对照组表达明显减低（P〈0．05）,CRSwNP组较CRSsNP组表达明显增加（P〈0．05）;Masson胶原染色中,CRSsNP组较对照组表达明显减低（P〈0．01）。复发性鼻息肉组较对照组表达明显增加（P〈0．05）。TGF-β1和Masson胶原染色之间呈正相关（P〈0．05）。结论：TGF-β1和胶原纤维沉积不仅与慢性鼻-鼻窦炎的组织重塑相关,而且TGF-β1的表达增加与胶原纤维过多沉积也呈正相关。     

115例农村慢性鼻-鼻窦炎患者分泌物病原菌培养分析

目的：了解农村地区慢性鼻-鼻窦炎（CRS）的细菌分布、药物敏感性特征及抗生素使用对病原菌培养的影响。方法：选取115例居住在农村地区的CRS患者的鼻腔鼻窦分泌物,分别行需氧菌、厌氧菌培养及药物敏感试验。统计患者2周及近2个月内使用抗生素的情况。结果：115例标本中共检出37例17种致病菌,需氧菌阳性率为32.17%。表皮葡萄球菌为农村地区CRS中最常见的需氧菌。17例上颌窦标本厌氧菌培养无结果。115例患者中近2个月内使用抗生素者有90例（78.26%）,近2周内使用抗生素者有73例（63.48%）。采用χ2检验发现在伴鼻息肉的CRS组中,细菌培养率高（P〈0.05）,提示细菌性因素与鼻息肉生成有关联。CRS患者细菌培养阳性者对氧氟沙星、头孢噻肟、头孢他啶、头孢吡肟等敏感,而对青霉素G、氨苄西林、红霉素等有较高的耐药现象。结论：农村地区CRS细菌分布无特异性差异,CRS患者抗生素滥用及厌氧菌培养技术原因是导致培养阳性率低最主要的因素。合理使用抗菌药物应建立在细菌培养和药物敏感试验的基础上。     

先天免疫分子Toll-Like-Receptor-9在慢性鼻窦炎鼻息肉发病机制中的作用探讨

目的:检测先天免疫分子Toll-Like-Receptor-9(TLR-9)蛋白在鼻息肉黏膜上皮细胞中的存在及表达,以期探讨其在鼻息肉发病中的作用及功能.方法:取鼻窦内镜下摘除的鼻息肉标本10例(鼻息肉组),鼻中隔偏曲和鼻外伤等手术切除的下鼻甲标本10例作对照组,消化法行原代细胞培养,流式细胞仪双抗纯化上皮细胞和检测上皮细胞中TLR-9蛋白含量.结果:①消化法培养人鼻黏膜原代细胞中上皮占98%;②鼻息肉组和对照组上皮细胞均有TLR-9表达,但鼻息肉组的TLR-9表达(11%～15%)显著低于对照组(49%～60%).结论:TLR-9存在于正常和鼻息肉的黏膜上皮中,但鼻息肉组水平下降,推测先天免疫分子TLR-9可以在鼻息肉发病机制中起作用.     

Th2 cytokines associated with chronic rhinosinusitis with polyps down-regulate the antimicrobial immune function of human sinonasal epithelial cells

BACKGROUND: Chronic rhinosinusitis with nasal polyps (CRSwNPs) is a disorder characterized by persistent eosinophilic Th2 inflammation and frequent sinonasal microbial colonization. It has been postulated that an abnormal mucosal immune response underlies disease pathogenesis. The relationship between Th2 inflammatory cytokines and the innate immune function of sinonasal epithelial cells (SNECs) has not been explored. METHODS: Human SNECs (HSNECs) isolated from control subjects and patients with CRS were assessed for expression of antimicrobial innate immune genes and proinflammatory cytokine genes by real-time polymerase chain reaction, ELISA, and flow cytometry. A model of the Th2 inflammatory environment was created by exposure of primary HSNEC to the Th2 cytokine interleukin (IL)-4 or IL-13 for 36 hours, with subsequent assessment of innate immune gene expression. RESULTS: HSNEC obtained from CRSwNP patients displayed decreased expression of multiple antimicrobial innate immune markers, including toll-like receptor 9, human beta-defensin 2, and surfactant protein A. Baseline expression of these genes by normal and CRS HSNEC in culture is significantly down-regulated after incubation with IL-4 or IL-13. CONCLUSION: Expression of multiple innate immune genes by HSNEC is reduced in CRSwNP. One mechanism appears to be a direct effect of the leukocyte-derived Th2 cytokines present in the sinonasal mucosa in CRSwNP. Impaired mucosal innate immunity may contribute to microbial colonization and abnormal immune responses associated with CRSwNP.     

Toll样受体mRNA在鼻息肉中的表达及意义

目的探讨Toll样受体-2(Toll-like receptor2,TLR-2)及Toll样受体-4(Toll-like receptor-4,TLR-4)mRNA在鼻息肉中的表达,分析TLR-2和TLR-4在鼻息肉发病中的作用。方法应用核酸分子原位杂交技术检测25例鼻息肉患者和20例鼾症患者下鼻甲中TLR-2和TLR-4 mRNA的表达。结果TLR-2和TLR-4 mRNA在25例鼻息肉中均有表达,且分别与对照组间差异有显著性意义。结论TLR-2和TLR-4在鼻息肉中高表达,表明感染性因素仍然是鼻息肉发病中的重要因素。     

Expression of TLR2 and TLR4 messenger RNA in the epithelial cells of the nasal airway

BACKGROUND: Epithelium of nasal mucosa is the first line of defense against invading pathogens. This study investigated the expression of Toll-like receptor (TLR) 2 and TLR4 in epithelial cells of nasal mucosa and understood the role of TLRs in the innate immunity of nasal mucosa. METHODS: Human nasal epithelial cells were obtained by scraping the middle one-third of inferior turbinates from 30 patients with chronic rhinosinusitis and 20 healthy adult volunteers. The epithelial cells are made into smears. In situ hybridization was performed for TLR2 and TLR4 messenger RNA (mRNA). RESULTS: TLR2 and TLR4 mRNA were expressed in the nasal epithelial cells. The expression of the two genes was significantly higher in the chronic rhinosinusitis group than in the normal control (TLR2, t = 8.605, p < 0.0005; TLR4, t = 9.050, p < 0.0005). CONCLUSION: This study is the first to establish the presence of both TLR2 and TLR4 mRNA on epithelial cells of nasal mucosa, and their expression can be up-regulated in infectious conditions. These results show that TLR2 and TLR4 may play a important role in local host defense of nasal mucosa.