高体积分数氧致慢性肺疾病新生大鼠肺组织基质金属蛋白酶-13和基质金属蛋白酶组织抑制剂-1表达的意义

目的 观察高体积分数氧(高氧)致慢性肺疾病(CLD)新生大鼠肺组织基质金属蛋白酶.13(MMP-13)和基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)的动态变化,探讨CLD发病与MMPs的关系.方法 将新生大鼠于出生24 h内随机分为高氧组和对照组,每组各40只;于出生第1、3、7、14、21天处死,留取其肺组织,苏木素-伊红(HE)、Masson染色,酶联免疫吸附法检测其Ⅰ型胶原(ColⅠ)表达;免疫组织化学法检测其肺组织MMP-13和TIMP-1的表达.结果 随高氧暴露时间的延长,新生大鼠肺组织光镜下表现为次级隔数目和肺泡数目减少,终末气腔扩张,肺泡间隔增宽.随高氧暴露时间的延长,肺组织Col Ⅰ型胶原蛋白沉积在第14天较对照组显著增加(p<0.01),第21天差异更为显著(P<0.001).MMP-13和TIMP-1 主要在上皮细胞、内皮细胞、间质细胞、肺泡巨噬细胞等细胞胞质中表达;第21天高氧组肺组织MMP-13表达与对照组比较明显下降(P<0.05),其余时间点二组比较无明显差异(Pa>0.05),TIMP-1 表达随高氧暴露时间延长逐渐增加,高氧组第14、21天较对照组表达均显著增加(Pa<0.01).结论 高氧致CLD新生大鼠肺组织存在MMP-13/TIMP-1表达失衡,是高氧后期以Col I为代表细胞外基质异常沉积的关键.     

支气管肺发育不良新生鼠模型肺泡上皮细胞标志物的表达变化及意义

目的 研究高氧致支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia,BPD)新生鼠模型中Ⅰ型肺泡上皮细胞(typeⅠalveolar epithelial cells,AECⅠ)和Ⅱ型肺泡上皮细胞(typeⅡalveolar epithelial cells,AECⅡ)特异性标志物表达变化及其意义.方法 80只新生Wistar大鼠,于生后12 h内随机分为模型组(吸入氧浓度为85%)和对照组(吸入空气),每组40只.于暴露第7、14、21天,分别进行肺组织HE染色观察病理学改变,免疫荧光双标染色观察AECⅠ标志物水通道蛋白5(aquaporin 5,AQP5)及AECⅡ标志物表面活性蛋白C(surfactant protein C,SP-C)表达及定位,Western blot方法检测AQP5和SP-C的蛋白表达水平,real-time PCR方法检测AQP5和SP-C的mRNA表达水平.结果 模型组大鼠肺组织表现出肺泡数目减少,体积增大,结构简单化,肺泡间隔增厚,次级分隔减少等肺泡化障碍表现.免疫荧光双标染色可见,模型组AQP5及SP-C表达明显增多,表达位置紊乱,且双染细胞/SP-C阳性细胞的比例明显增高(P<0.001).与对照组比较,模型组中AQP5及SP-C蛋白表达从高氧暴露7 d开始增加,增高的趋势持续至21 d.模型组中mRNA表达水平,AQP5从暴露7 d开始,SP-C从14 d开始较对照组明显升高(P<0.05),且两组间差异随高氧暴露时间延长更加明显(P<0.05).结论 暴露高氧中的新生鼠BPD模型肺组织中,AECⅠ标志物AQP5及AECⅡ标志物SP-C均表达上调,发生转分化的AECⅡ明显增多,表明在BPD肺损伤后的修复中存在AECⅡ过度转分化现象.     

持续吸入高体积分数氧对新生大鼠肺组织Ⅰ型和Ⅳ型胶原信使核糖核酸表达的动态影响

目的 探讨新生大鼠持续吸入高体积分数氧(高氧)后肺组织病理学变化,以及肺组织Ⅰ型和Ⅳ型胶原mRNg表达的动态改变和在高氧致慢性肺疾病(CLD)发生中的作用.方法 足月新生大鼠出生12 h内,依据吸入氧体积分数的不同随机分为高氧组和空气对照组.分别于实验1、3、7、14、21 d,从2组中抽取5只,水合氯醛麻醉后取肺组织制备石蜡切片;行HE染色镜下观察肺组织病理变化;应用原位杂交方法检测其肺组织Ⅰ型和Ⅳ型胶原mRNA的动态表达和定位.采用SPSS 11.0软件进行统计学分析.结果 高氧组早期出现炎性反应,7 d出现肺泡发育阻滞,最终形成纤维化.原位杂交光镜下可见,Ⅰ型胶原在新生大鼠肺组织中主要表达于肺泡上皮细胞和血管内皮细胞;与对照组比较7 d时在高氧组Ⅰ型胶原mRNA表达显著降低(P<0.05),14 d时差异更为显著(P<0.01);Ⅳ型胶原在新生大鼠肺组织中主要表达在血管内皮细胞,各时间点上2组Ⅳ型胶原mRNA表达水平比较无明显差异(Pa>0.05).结论 持续吸入高氧可引起新生大鼠肺发育受阻和肺间质纤维化等,与CLD相似改变,而Ⅰ型和Ⅳ型胶原mRNA表达水平与其蛋白的沉积不平行,提示此2型胶原的调节可能不是以转录水平为主.     

高迁移率族蛋白B1在高氧致支气管肺发育不良的表达

目的：检测高迁移率族蛋白B1（HMGB1）在高浓度氧（60% O2）暴露新生小鼠肺组织损伤模型中的表达水平,探讨HMGB1在支气管肺发育不良（BPD）发病机制中的作用。方法：新生足月C57BL/6小鼠随机分为BPD组和对照组,制备高氧浓度致新生鼠BPD模型,应用苏木精-伊红染色、Masson染色、放射性肺泡计数（RAC）、免疫荧光和实时荧光定量PCR技术,观察氧暴露后3 d、7 d、14 d肺组织病理改变及HMGB1的蛋白和mRNA表达水平。结果：BPD组在氧暴露后随时间推移,出现肺泡上皮肿胀,肺泡壁增厚,间质水肿,炎症细胞浸润,胶原样物质产生,肺泡结构紊乱,数量减少,较空白对照组明显发育迟滞。在氧暴露后7 d、14 d,HMGB1及其mRNA表达均强于对照组（P＜0.05）。结论：高氧暴露所致BPD中,HMGB1表达增加。BPD的病理过程可能与HMGB1表达增加有关。［中国当代儿科杂志,2010,12（3）：219-223］     

大黄对高氧致新生大鼠支气管肺发育不良的影响

目的 探讨大黄对高氧致新生大鼠支气管肺发育不良（BPD）的影响。方法 将64只生后4 d大鼠随机分成空气对照组、大黄对照组、高氧模型组和高氧+大黄组（n=16）。大鼠暴露于60%氧浓度中构建BPD模型。造模同时,两个大黄干预组每天给予600 mg/kg大黄提取物混悬液灌胃1次。各组大鼠于生后14 d、21 d,苏木精-伊红（HE）染色观察肺组织形态学改变;分光光度计法检测丙二醛（MDA）水平及超氧化物歧化酶（SOD）活性;RT-PCR、Western blot法检测肺组织中TNF-α、IL-6 mRNA和蛋白表达水平。结果 高氧模型组大鼠肺组织出现肺泡数目减少、体积增大、结构简单化等发育受阻的表现,并随高氧暴露时间的延长损伤加重;高氧+大黄组大鼠肺组织病理改变明显减轻。大鼠生后14 d及21 d,与两对照组相比,高氧模型组放射状肺泡计数（RAC）明显减少,肺组织中SOD活性降低,MDA水平、TNF-α mRNA及蛋白水平、IL-6 mRNA及蛋白水平均升高（P < 0.05）。与高氧模型组相比,高氧+大黄组RAC明显增加,肺组织中SOD活性升高,MDA水平、TNF-α mRNA及蛋白水平、IL-6 mRNA及蛋白水平均降低（P < 0.05）。结论 大黄可能通过抑制炎症和氧化应激反应对高氧致新生大鼠BPD发挥保护作用。     

血管生成素-1在高氧诱导新生鼠支气管肺发育不良的表达及与肺发育的关系

目的探讨血管生成素(Ang-1)在高氧诱导支气管肺发育不良(BDP)新生大鼠中的表达。方法 48只生后2~3日龄的新生大鼠随机分为高氧组和对照组,每组24只,分别置于高氧(氧浓度≥95%)和空气中持续喂养;于高氧暴露第1、3、7天,光镜下观察大鼠肺组织形态结构变化,并采用实时荧光定量PCR和Western blotting方法分别检测大鼠肺组织中Ang-1 mRNA和蛋白表达水平。结果随着高氧暴露时间延长,光镜下高氧组逐渐表现出肺组织发育不良、肺泡结构简单化、肺泡数目减少和肺微血管发育受阻等病理改变。高氧暴露第7天,高氧组的Ang-1 mRNA和蛋白相对表达为0.33±0.18和0.20±0.07,低于对照组的0.83±0.46和0.57±0.44,差异有统计学意义(P均0.05)。结论 Ang-1是肺血管发育过程中的重要调节因子,参与了BPD病理发生。     

维甲酸对高氧暴露下新生大鼠肺组织中Ⅰ型胶原含量的影响

为探讨维甲酸对高氧暴露下新生大鼠肺组织中Ⅰ型胶原含量的影响。将生后2d的SD大鼠随机分为4组：（1）空气 生理盐水组；（2）高氧 生理盐水组；（3）高氧 地塞米松组；（4）高氧 维甲酸组。（2），（3）和（4）组持续暴露于85%O2中，于生后14d采用免疫组化和原位杂交方法对肺组织中Ⅰ型胶原蛋白，转化生长因子βⅠ，Ⅱ型受体，肺组织中Ⅰ型胶原mRNA行定位，半定量检测，作HE染色行辐射状肺泡计数，结果显示，与高氧 生理盐水组相比，高氧 维甲酸组辐射状肺泡计数显著增加，肺组织中Ⅰ型胶原蛋白表达明显增强，而Ⅰ型胶原基因表达和转化生长因子βⅠ，Ⅱ型受体表达显著减弱，阳性表达明显改变的分布主要在支气管上皮细胞，肺泡上皮细胞和肺内间质细胞，提示维甲酸通过对Ⅰ型胶原mRAN转录后调控和调节Ⅰ型腾的蛋白的降解而啬 肺内胶原含量，从而起到逆转高氧对肺发育抑制作用。     

茶碱减少肺泡间隔厚度以改善高氧暴露新生大鼠肺发育的研究(英文)

目的明确高氧暴露新生大鼠肺组织的肺泡间隔增厚是否由肺泡间隔细胞凋亡抑制引起,进一步研究茶碱是否可以通过减少肺泡间隔厚度改善高氧暴露新生大鼠的肺发育。方法建立新生SD大鼠高氧暴露(85%O2)肺损伤模型,将新生大鼠随机分为3组。①新生大鼠每日注射生理盐水并予高氧暴露;②新生大鼠每日注射生理盐水并置正常空气中;③新生大鼠注射茶碱20 mg/(kg.d)并予高氧暴露。并运用TUNEL法检测肺泡间隔中的凋亡细胞,用免疫组织化学技术检测肺泡间隔中的肌成纤维细胞。结果高氧暴露7 d的新生大鼠肺组织肺泡间隔增厚,肺泡间隔细胞凋亡减少,肺泡间隔肌成纤维细胞数量增加;而茶碱可以使高氧暴露后新生大鼠肺组织肺泡间隔细胞变薄,肺泡间隔细胞凋亡增加,肺泡间隔肌成纤维细胞减少。结论茶碱可以通过减少肺泡间隔厚度,减少肺泡间隔内的肌成纤维细胞数量,进而改善高氧暴露新生大鼠的肺发育。增加肺泡间隔细胞凋亡可能是茶碱的作用机制之一。肌成纤维细胞作为一种重要的间质细胞,可能在高氧引起的肺泡间隔细胞凋亡异常及肺泡间隔增厚等变化中起重要作用。[临床儿科杂志,2010,28(12):1101-1107]     

持续高氧暴露降低新生大鼠肺组织血管内皮生长因子的表达

目的：高氧肺损伤是导致支气管肺发育不良(BPD)的最常见原因。血管内皮生长因子(VEGF)在新生肺中具有促进内皮细胞增殖、分化、诱导血管发生的作用。本研究动态观察高氧暴露对新生鼠肺组织VEGF表达的影响,探讨BPD的发生机制。方法：新生Wistar大鼠出生后随机分为空气组和高氧组(均n=30)。高氧组在生后12h内开始,予以持续吸入95%氧气。分别于生后1、2、3、7、14、21d各处死5只大鼠,留取肺组织标本。苏木精-伊红染色观察病理改变,免疫组化检测VEGF蛋白表达,原位杂交方法检测VEGFmRNA表达。结果以切片视野灰度值表示,值越高说明蛋白或mRNA表达越少。结果：新生鼠高氧暴露7d后肺泡间隔减少,肺微血管发育异常,间质纤维化,且病变随高氧暴露时间延长而加重。高氧组大鼠第3,7天时肺组织VEGF蛋白表达明显低于相应空气对照组(81.9±0.8vs80.8±1.0,82.8±1.2vs79.2±1.6,均P<0.01)。VEGFmRNA表达亦显著减少(89.5±1.1vs88.0±1.0,91.1±1.5vs87.7±1.7,均P<0.001)。随着暴露时间的延长,VEGF蛋白和mRNA进行性降低,在高氧暴露14、21d时几乎检测不到VEGF蛋白和mRNA的表达。结论：高氧暴露抑制新生鼠肺VEGF的表达,这可能与高氧诱导BPD的发生有关。     

维A酸对新生大鼠高体积分数氧性肺纤维化的干预作用

目的 探讨维A酸(RA)对新生大鼠高体积分数氧(高氧)性肺组织纤维化的影响,观察转化生长因子-β1(TGF-β1)及平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在高氧肺纤维化中的作用.方法 将出生12 h内SD大鼠随机分为空气对照组(Ⅰ组),空气加RA组(Ⅱ组),高氧组(Ⅲ组),高氧加BA组(Ⅳ组),每组各20只.Ⅲ、Ⅳ组持续暴露于850mL/L氧气中,余2组暴露于空气中.Ⅱ、Ⅳ组腹腔注射RA(溶于亚麻油)500μg/(kg·d),Ⅰ、Ⅲ组腹腔注射等量亚麻油.暴露后14 d,用HE染色法观察各组肺组织病理改变及放射状肺泡计数(RAC),应用Masson三色染色、纤维化评分判断各组肺纤维化程度.免疫组织化学染色法检测各组肺组织TGF-β1、α-SMA表达.应用SPSS 13.0软件进行统计学分析.结果 光镜观察Ⅰ、Ⅱ组大鼠14 d时肺泡无纤维化表现;Ⅲ组肺组织纤维增生;Ⅳ组病理改变明显减轻,未见成纤维细胞及胶原沉积.高氧14 d时,Ⅲ组大鼠肺组织肺纤维化评分、TGF-β1及α-SMA蛋白表达水平明显升高,与Ⅰ、Ⅱ及Ⅳ组比较均有显著性差异(Pa＜0.05),RAC值明显低于各组(Pa＜0.05).Ⅳ组病理改变减轻,肺纤维化评分、TGF-β1及α-SMA表达水平Ⅳ组与Ⅰ、Ⅱ组比较均无显著性差异(Pa＞0.05).结论 TGF-β1、α-SMA在高氧性肺纤维化中可能起重要作用.RA早期干预高氧性肺纤维化可明显减轻肺纤维化的发生.     

泛素-特异性蛋白酶7在高氧暴露早产鼠肺组织中的表达及意义

目的 探讨泛素-特异性蛋白酶7（USP7）及Wnt信号通路中关键因子在高氧暴露早产大鼠肺组织中的表达及意义。方法 将180只新生早产Wistar大鼠随机均分成空气对照组、空气干预组、高氧对照组及高氧干预组,每组45只。干预组早产鼠每天腹腔注射USP7特异性抑制剂P5091（5 mg/kg）,高氧组建立早产大鼠高氧暴露肺损伤动物模型。分别于实验过程第3、5、9天时处死动物收集早产鼠肺组织标本,通过苏木精-伊红染色病理切片观察肺组织病理变化;采用RT-PCR及Western blot技术检测肺组织中USP7及Wnt信号通路关键因子β-catenin、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的mRNA及其蛋白表达水平。结果 空气各组肺组织形态结构基本正常;高氧对照组3 d、5 d时可见肺泡明显压缩、结构紊乱,有明显炎症细胞、红细胞渗出及间质水肿改变;高氧对照组9 d时可见肺泡结构紊乱、肺泡间隔明显增厚;高氧干预组肺组织结构紊乱、炎症细胞浸润、红细胞渗出情况均较相应时间点的高氧对照组有所减轻;各时间点高氧各组放射状肺泡计数（RAC）均明显低于相应空气各组（P < 0.05）,且高氧干预组RAC较高氧对照组明显升高（P < 0.05）。实验第3、5、9天时,高氧各组USP7、β-catenin mRNA及USP7、β-catenin、α-SMA蛋白表达均较相应空气各组增加（P < 0.05）;高氧干预组β-catenin mRNA及β-catenin、α-SMA蛋白表达较高氧对照组减少（P < 0.05）;高氧干预组USP7 mRNA及蛋白表达与高氧对照组相比差异无统计学意义（P > 0.05）,空气干预组USP7、β-catenin mRNA及USP7、β-catenin、α-SMA蛋白表达与空气对照组相比差异无统计学意义（P > 0.05）。结论 高氧暴露可激活Wnt/β-catenin信号通路;USP7可能通过Wnt/β-catenin信号通路参与高氧肺损伤;USP7特异性抑制剂P5091可能通过加强β-catenin的泛素化来加速其降解,减少肺上皮-间质转化,从而对高氧肺损伤具有一定的保护作用。     

泛素-特异性蛋白酶7在高氧暴露早产鼠肺组织中的表达及意义

目的 探讨泛素-特异性蛋白酶7（USP7）及Wnt信号通路中关键因子在高氧暴露早产大鼠肺组织中的表达及意义。方法 将180只新生早产Wistar大鼠随机均分成空气对照组、空气干预组、高氧对照组及高氧干预组，每组45只。干预组早产鼠每天腹腔注射USP7特异性抑制剂P5091（5 mg/kg），高氧组建立早产大鼠高氧暴露肺损伤动物模型。分别于实验过程第3、5、9天时处死动物收集早产鼠肺组织标本，通过苏木精-伊红染色病理切片观察肺组织病理变化；采用RT-PCR及Western blot技术检测肺组织中USP7及Wnt信号通路关键因子β-catenin、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的mRNA及其蛋白表达水平。结果 空气各组肺组织形态结构基本正常；高氧对照组3 d、5 d时可见肺泡明显压缩、结构紊乱，有明显炎症细胞、红细胞渗出及间质水肿改变；高氧对照组9 d时可见肺泡结构紊乱、肺泡间隔明显增厚；高氧干预组肺组织结构紊乱、炎症细胞浸润、红细胞渗出情况均较相应时间点的高氧对照组有所减轻；各时间点高氧各组放射状肺泡计数（RAC）均明显低于相应空气各组（P < 0.05），且高氧干预组RAC较高氧对照组明显升高（P < 0.05）。实验第3、5、9天时，高氧各组USP7、β-catenin mRNA及USP7、β-catenin、α-SMA蛋白表达均较相应空气各组增加（P < 0.05）；高氧干预组β-catenin mRNA及β-catenin、α-SMA蛋白表达较高氧对照组减少（P < 0.05）；高氧干预组USP7 mRNA及蛋白表达与高氧对照组相比差异无统计学意义（P > 0.05），空气干预组USP7、β-catenin mRNA及USP7、β-catenin、α-SMA蛋白表达与空气对照组相比差异无统计学意义（P > 0.05）。结论 高氧暴露可激活Wnt/β-catenin信号通路；USP7可能通过Wnt/β-catenin信号通路参与高氧肺损伤；USP7特异性抑制剂P5091可能通过加强β-catenin的泛素化来加速其降解，减少肺上皮-间质转化，从而对高氧肺损伤具有一定的保护作用。     

高氧暴露对新生鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞转分化水平的调节作用

目的 研究体内及体外高氧暴露对Ⅱ型肺泡上皮细胞(typeⅡalveolar epithelial cells,AEC Ⅱ)转分化水平的影响,旨在阐明支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia,BPD)肺上皮损伤的发生机制.方法 新生Wistar大鼠生后随机分为对照组(吸入空气)和模型组(吸入氧浓度为85％),于7d、14 d、21 d进行动物模型肺组织取材并分离AECⅡ.细胞标本检测Ⅰ型肺泡上皮细胞(type Ⅰalveolar epithelial cells,AEC Ⅰ)特异性标志物水通道蛋白5(aquaporin 5,AQP5)及AECⅡ标志物表面活性蛋白C(surfactant protein C,SP-C)表达.从正常新生鼠肺分离的AECⅡ在体外原代培养24h后随机分为常氧组(21％ O2)和高氧组(85％ O2),培养48 h后收集细胞,应用免疫荧光双标染色观察AQP5和SP-C表达及定位,Western blot方法检测AQP5和SP-C蛋白表达水平,荧光实时定量PCR方法检测AQP5和SP-CmRNA表达水平.结果 BPD模型组大鼠AECⅡ中AQP5蛋白表达从7d开始较对照组增多,SP-C蛋白表达从14 d开始较对照组减少.模型组中AQP5 mRNA从7d开始表达增多,SP-C mRNA从7d开始表达减少(P＜0.05),且随高氧暴露时间延长两组间差异更加显著.由正常新生鼠肺分离的AECⅡ进行体外原代培养后,免疫荧光双染可见高氧组较常氧组AQP5表达增多,SP-C表达减少,双染细胞明显增多.蛋白和mRNA定量检测结果均提示高氧组较常氧组AQP5表达增多,SP-C表达减少(P＜0.01).结论 无论体内还是体外高氧暴露下,AECⅡ特异性标志物SP-C表达下调,而AEC Ⅰ特异性标志物AQP-5表达上调,提示AECⅡ过度转分化参与高氧肺损伤后的修复过程.     

转化生长因子β1对高体积分数氧暴露早产新生大鼠肺纤维化的调控作用

目的 探讨转化生长因子(TGF-β1)对高体积分数氧(高氧)暴露早产新生大鼠肺纤维化的调控作用.方法 将80只早产新生SD大鼠随机分为空气组和高氧组,每组40只;每组又随机分为3、7、14、21 d4个亚组.采用原位杂交法检测各亚组早产大鼠肺组织TGF-β1 mRNA表达与分布;采用免疫组织化学法检测各亚组早产大鼠肺组织TGF-β1蛋白、Ⅰ型与Ⅲ型胶原表达与分布;并用图像分析方法 检测各亚组早产大鼠肺组织TGF-β1 mRNA及其蛋白与Ⅰ型、Ⅲ型胶原阳性表达的PU值.结果 高氧第3天,肺组织TGF-β1mRNA及其蛋白呈现弱阳性表达,第7、14、21天呈强阳性表达,其表达量于第7天开始增高,第14天达高峰;肺组织TGF-β1 mRNA及其蛋白阳性表达的Pu值在第7、14、21天均高于空气组(Pa<0.01).Ⅰ型胶原在第3、7天时呈弱阳性表达,第14、21天时呈强阳性表达,其表达量从第14天开始增加,第21天时达高峰;Ⅲ型胶原表达强度在第3天时呈弱阳性,第7天时开始增强呈中等阳性表达,第14、21天时呈强阳性表达,其表达量在第7天时开始增加,第14天时达高峰,表达量高于Ⅰ型胶原;肺组织Ⅰ型、Ⅲ型胶原阳性表达的PU值在第14、21天时均明显高于空气组(Pa<0.01).高氧组肺组织TGF-β1 mRNA及其蛋白与Ⅰ型、Ⅲ型胶原阳性表达均分布于支气管和血管周围结缔组织及肺间质中;在第14、21天高氧组肺组织TGF-β1蛋白表达与Ⅰ型胶原呈显著正相关(r=0.881,0.793 P.<0.01),与Ⅲ型胶原亦呈显著正相关(r=0.866,0.891 Pa<0.01).结论 TGF-β1过度表达而介导的细胞外基质(ECM)过度合成是肺纤维化发生的重要机制,在肺纤维化形成过程中TGF-β1对Ⅰ型、Ⅲ型胶原等ECM的沉积发挥重要的调控作用.     

高氧暴露对早产鼠肺组织HO-1和GCLC表达的影响

目的探讨高浓度氧暴露对新生早产大鼠肺组织中血红素加氧酶-1（HO-1）和谷氨酰-L-半胱氨酸连接酶催化亚单位（GCLC）动态表达的影响。方法受孕21 d大鼠行剖宫产取出早产鼠80只，喂养1 d后随机分为空气组和高氧组。空气组早产鼠放置在室内常压空气中饲养，高氧组早产鼠放置在同一室内常压氧箱中（氧浓度85%~95%）饲养，分别于第1、4、7、10、14天，每组取8只大鼠，采集两组早产鼠肺组织标本。采用苏木精-伊红染色法检测两组早产鼠不同时间点肺组织结构的病理变化；采用Western blot技术和RT-qPCR检测两组早产鼠不同时间点肺组织HO-1和GCLC蛋白及mRNA的表达变化。结果与空气组相比，高氧组早产鼠体重下降显著（P < 0.05）。与空气组相比，高氧组早产鼠肺组织病理切片显示肺组织结构紊乱、肺泡间隔增宽、肺泡数目减少和肺泡简单化。高氧组早产鼠肺组织中HO-1 mRNA相对表达量在第7天时低于空气组，在第10、14天时高于空气组（P < 0.05）。高氧组早产鼠肺组织中GCLC mRNA表达量在第1、4、7天时低于空气组，在第10天时高于空气组（P < 0.05）。与空气组比较，高氧组早产鼠肺组织中HO-1蛋白表达水平在各时间点均升高；除第1天外，GCLC蛋白表达水平在其他各时间点均升高（P < 0.05）。结论高氧暴露导致早产鼠生长发育迟缓、肺发育阻滞。早产鼠肺组织HO-1和GCLC蛋白及mRNA的表达变化可能与高氧暴露导致早产鼠肺损伤发病过程相关。     

早产鼠高氧暴露后肺组织血管内皮生长因子和一氧化氮合酶的动态变化及相互关系

目的：最近研究表明,血管内皮生长因子（VEGF）及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)功能的缺失,在支气管肺发育不良（BPD）发病机制中发挥了重要的作用。该文通过动态观察持续中浓度高氧暴露（60％O2）对早产大鼠肺内VGEF蛋白及mRNA和eNOS蛋白及mRNA表达的影响,探讨BPD的发病机制。方法：将21 d 孕早产鼠随机分为高氧暴露组(简称高氧组) 和空气对照组(简称空气组) ,分别置于常压高氧仓中（60％O2）和正常空气中暴露。分别于生后1,4,7,11,14 d每组各处死6只大鼠,留取肺组织标本。苏木精-伊红染色观察病理改变,免疫组化检测VEGF和eNOS蛋白表达,逆转录-聚合酶链反应方法检测VEGF和eNOS mRNA表达。结果：早产鼠高氧暴露4 d后出现肺泡间隔减少,微血管发育异常,间质纤维化,且病变随着高氧暴露时间的延长而加重。高氧组大鼠第4,7天时肺组织VEGF蛋白表达明显低于相应空气对照组(P< 0. 05), VEGF mRNA表达亦显著减少(P< 0. 05)。随着暴露时间的延长,VEGF蛋白和mRNA进行性降低。高氧组大鼠在高氧暴露过程中肺组织eNOS蛋白和mRNA表达亦随着暴露时间的延长而降低。结论：高氧暴露导致早产鼠肺组织VEGF和eNOS表达持续性减少,微血管发育异常和肺泡化受阻。这些由高氧暴露诱导产生的BPD样损害,可能与VEGF和eNOS的表达下调有关,且二者之间存在着密切的联系。［中国当代儿科杂志,2007,9（5）：473-478］     

Lgl1 is suppressed in oxygen toxicity animal models of bronchopulmonary dysplasia and normalizes during recovery in air

Bronchopulmonary dysplasia (BPD), a major cause of morbidity in premature infants, is characterized by arrest of lung growth and inhibited alveologenesis. We had earlier cloned late-gestation lung 1 (LGL1), a glucocorticoid (GC)-induced, developmentally regulated gene in lung mesenchyme, and showed that reduced levels of late-gestation lung 1 protein (lgl1) inhibit lung branching. Maximal fetal expression of LGL1 is concordant with the onset of alveolar septation, suggesting an additional role for lgl1 in alveologenesis. At postnatal d 7, during the period of maximal septation in postnatal rat lung, lgl1 concentrates at the tips of budding secondary alveolar septa. We studied two models of impaired postnatal alveologenesis generated by exposure of newborn rats to 60% O2 for 2 wk or 95% O2 for 1 wk. A profound decrease of lgl1 expression with oxygen exposure was observed in both animal models. Animals exposed to 95% O2 for 1 wk recovered in air over a 3-wk period, associated with normalization of lgl1 levels. Changes in lung levels of alpha-actin (a marker of myofibroblast differentiation associated with alveologenesis) and the mesenchymal marker vimentin were significant but less marked. Our findings support a role for lgl1 in postnatal lung development. We speculate that deficiency of lgl1 contributes to the arrested alveolar partitioning observed in BPD and that recovery is associated with normalization of lgl1 levels.     

基质金属蛋白酶-8及其组织抑制因子-1在高氧致新生鼠肺纤维化中的基因表达及其意义

目的：近年来研究发现细胞外基质（ECM）的过度沉积与肺纤维化发生密切相关，而ECM合成与降解在新生儿慢性肺疾病的肺纤维化发生、发展中作用如何尚不清楚。本文着重研究基质金属蛋白酶-8（MMP-8, Ⅰ型胶原的降解酶）及其组织抑制因子-1（TIMP-1）基因在高氧致新生鼠肺损伤中的表达，并探讨其在纤维化中的作用。方法：80只足月新生大鼠依吸氧浓度（FiO2）随机分为高氧组（FiO2＝0.90）和对照组（FiO2＝0.21）,每组均为40只。采用高浓度氧诱导新生鼠肺损伤模型，应用酶联免疫吸附法（ELISA）、免疫组织化学及反转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术，动态研究MMP-8及TIMP-1 mRNA表达，并同时观察肺组织Ⅰ型胶原蛋白的表达强度及其含量变化。结果：实验后14 d 和21 d的高氧组肺组织中，Ⅰ型胶原蛋白表达和Ⅰ型胶原水平均高于对照组， 差异有显著性意义。 而实验后14 d 和21 d，高氧组肺组织MMP-8 mRNA表达降低，TIMP-1 mRNA表达增高，与对照组比较差异有显著性意义。结论：高氧通过下调MMP-8及上调TIMP-1基因表达，导致ECM降解减少，过量ECM沉积于肺组织, 这可能是高氧致肺纤维化的机制之一。［中国当代儿科杂志，2007，9（1）：1-5］