阿魏酸钠对肝星状细胞中Ⅰ型前胶原和CTGF mRNA表达的影响

目的考察阿魏酸钠对氧化应激条件下,肝星状细胞中I型胶原及其相关调控因子CTGF mRNA表达的干预作用.方法以50μmol·L-1H2O2处理的HSC-T6细胞为氧化应激模型组,采用RT-PCR方法检测并分析125μmol·L-1和500μmol·L-1SF对细胞中I型前胶原及其相关调控因子CTGF表达的影响.结果肝星状细胞在氧化应激条件下I型前胶原mRNA和CTGF mRNA表达水平都明显上调,而阿魏酸钠可以下调二者的表达水平.结论阿魏酸钠从转录水平调控胶原表达可能对肝纤维化有重要防治作用.     

咖啡酸苯酯对大鼠肝星状细胞增殖和细胞凋亡的影响

目的观察核因子KB(NFKB)抑制剂咖啡酸苯酯(CAPE)在大鼠肝星状细胞(HSCs)增殖,胶原合成和细胞凋亡方面的作用。方法经在体灌流消化大鼠肝脏分离HSCs,培养于DMEM培养基中,用3HTdR和3Hproline掺入试验测定CAPE对HSCs的增殖和胶原合成影响,并用原位杂交方法和TUNEL法探讨了其对HSCⅠ、Ⅲ型前胶原基因的表达和细胞凋亡作用。结果对于培养活化的HSCs,CAPE分别在5、10μmol·L-1时,剂量依赖地抑制HSCs摄取3HTdR和3Hproline,并降低Ⅰ型前胶原基因表达(P<0.05),40μmol·L-1CAPE作用12、24h后,HSCs凋亡指数分别由(2.82±0.73)%和(3.15±0.88)%增加到(7.66±1.25)%和(10.61±2.88)%(P<0.01).结论CAPE降低HSCs增殖和胶原合成,并在较高浓度条件下诱导细胞凋亡。     

重组人肝再生增强因子可抑制肝星状细胞I、Ⅲ型胶原的基因表达

在培养在肝星状细胞系中加入不同浓度的重组人肝再生增强因子（hALR）,于不同的时间点收集细胞,提取总RNA,用逆转录定量PCR方法测定I、Ⅲ型胶原的基因表达水平。结果表明,高（0.2ng/L）、中（0.02ng/L）、低(0.002ng/L）浓度的hALR3组肝星状细胞I型胶原基因表达水平在3、24、48、72h4个时间点均明显低于对照组;大剂量组较中、低剂量组I型胶原基因表达水平亦明显为低。中、低剂量hALR组肝星状细胞Ⅲ型胶原基因表达水平在24、48、72h3个时间点明显低于对照组;大剂量hALR组肝星状细胞Ⅲ型胶原基因表达水平在8、24、48、72h4个时间点均明显低于对照组,,较中、小剂量组亦显著降低。提示重组人肝再生增强因子对肝星状细胞I、Ⅲ型胶原基因表达有明显的抑制作用。     

立体定向术对难治性精神分裂症患者脑脊液中DA、HVA及PRL的影响

目的 :探讨立体定向术对精神分裂症患者脑脊液 (CSF)中多巴胺 (DA)、高香草酸 (HVA)及催乳素 (PRL)的影响。方法 :立体定向术治疗难治性精神分裂症 ;高效液相色谱 -电化学检测法测定手术前后患者CSF中DA及HVA ,放射免疫分析法测定PRL。结果 :精神分裂症患者手术前CSF中DA( 3 .2 3± 0 .3 6) μmol·L-1、HVA( 1.99± 0 .49) μmol·L-1水平显著高于对照组 ( 2 .44±0 .3 2 ) μmol·L-1,PRL水平 ( 0 .99± 0 .3 1)ng·ml-1显著低于对照组 ( 1.48± 0 .46) μmol·L-1;手术后DA( 2 .49± 0 .3 5 ) μmol·L-1、HVA( 1.42± 0 .2 8) μmol·L-1水平显著下降 ,PRL水平 ( 1.5 4± 0 .5 1)ng·ml-1显著上升。结论 :支持精神分裂症中枢DA亢进假说 ,DA可以抑制PRL的释放 ,立体定向手术具有明显的抗DA能神经阻滞作用     

STI571体外对急性非淋巴细胞白血病细胞分化及c-kit表达的影响

目的 :探讨STI5 71对ANLL白血病细胞c-kitmRNA表达及细胞分化的影响。方法 :不同浓度STI5 71培养前后逆转录 -聚合酶链反应方法测定c -kitmRNA的表达 ,涂片吉姆萨染色及过氧化物酶染色观察细胞的分化情况。结果 :①培养后不同药物浓度组的粒细胞及单核细胞均有不同程度的分化 ,随着药物浓度的增加 ,原早幼粒细胞逐渐减少 ,中晚幼粒和成熟单核细胞数增加 ,有诱导向同系成熟分化作用 ,并且过氧化物酶染色阳性程度增加 ;②c -kit受体mRNA的表达培养前 2 .2± 0 .4 9,培养后 (对照、0 .1、1、10 μmol·L-1)浓度组c-kitmRNA表达的平均值分别为 2 .1± 0 .6、1.2± 0 .4、0 .8± 0 .4、0 .5± 0 .2 ,培养前与培养后各药物浓度组有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,各浓度组与对照组之间差异显著 (P <0 .0 5 ) ,且 0 .1μmol·L-1与 10 μmol·L-1两个浓度组之间差异显著 (P <0 .0 5 )。结论 :STI5 71对急性非淋巴细胞白血病原代细胞有诱导向同系成熟分化作用 ,对c -kit酪氨酸激酶有明显的抑制作用 ,且与药物浓度相关。     

胍丁胺抗抑郁作用的研究

目的　本研究观察了胍丁胺 (agmatine,AG)的抗抑郁作用 ,并初步探讨其可能的作用机理。方法与结果　在小鼠悬尾实验及强迫游泳实验中 ,首次发现灌胃给予AG 4 0 ,80mg·kg-1或皮下注射 2 0mg·kg-1可以显著缩短悬尾或强迫游泳不动时间。同样 ,AG 10mg·kg-1灌胃或皮下注射 1.2 5～ 5mg·kg-1显著缩短大鼠强迫游泳不动时间。MTT比色法及LDH法的研究表明 ,AG1～ 10 0 μmol·L-1,去甲丙米嗪 (DIM)及NMDA受体拮抗剂MK80 1均可以对抗NMDA 30 0 μmol·L-1诱导的PC12细胞损伤。同时运用fura- 2 /AM荧光标记法发现 ,AG 1,10 μmol·L-1或DIM 1,5 μmol·L-1均减轻NMDA 2 0 0 μmol·L-1诱导的PC12细胞内Ca2 + 超载。结论　AG具有明确的抗抑郁作用 ,抑制NMDA诱导的细胞损伤并减弱细胞内Ca2 + 超载可能是其抗抑郁作用机理之一。     

过氧化氢对肠上皮细胞线粒体膜电位及细胞凋亡的影响

目的 :探讨过氧化氢在体外对肠上皮细胞线粒体膜电位的影响及其与细胞凋亡的关系。方法 :肠上皮细胞株 (SW -4 80 ) ,采用过氧化氢 (H2 O2 )损伤模型 ,用 5 0、10 0、2 0 0、4 0 0 μmol·L-1和 4mmol·L-1作用 1、3、6、12及 2 4h。线粒体功能采用噻唑蓝法 (MTT法 ) ;用罗丹明 (Rhodamine- 12 3)荧光探针检查活细胞线粒体膜电位变化 ;用Annexin -Ⅴ荧光探针 ,流式细胞仪检测早期凋亡细胞 ;同时观察细胞形态学和线粒体超微结构的改变。结果 :H2 O2 在低浓度 (5 0、10 0、2 0 0 μmol·L-1)时线粒体功能未见明显改变 ,在高浓度 (4 0 0 μmol·L-1、4mmol·L-1)时可导致线粒体功能不可逆的进行性下降 ,线粒体内嵴减少、肿胀 ;同时使线粒体膜电位显著降低 ,细胞凋亡率显著增加。结论 :线粒体参与了H2 O2 诱导肠上皮细胞的早期程序性死亡及随后的细胞死亡 ,这种损伤作用与线粒体结构、功能改变和膜电位下降密切相关。     

盐酸埃他卡林对正常大鼠肺内动脉平滑肌细胞钾电流的影响

目的　观察盐酸埃他卡林 (Iptakalimhydrochloride ,Ipt)对大鼠动脉平滑肌细胞钾电流的作用。方法　用胶原酶I消化、分离大鼠肺内动脉平滑肌细胞 ,用全细胞记录 (wholecellrecording)技术记录细胞钾电流 ,通过浴槽内给药 ,观察药物对钾电流的影响。结果　以给药前记录钾电流为 10 0 % ,在给予盐酸埃他卡林 1.0、10 0 .0 μmol·L-1后 ,1min记录的钾电流幅度分别为(114 .9± 3.8) % (n =8)和 (114 .0± 3.5 ) % (n =5 ) ,与溶媒对照组 (87.0± 3.5 ) % (n =8)相比 ,有显著性差异 (P <0 .0 1)。在相同条件下给予吡那地尔 (Pinacidil) 1.0 μmol·L-1后 ,钾电流幅度为 (93.6± 4 .1) % (n =8) ,与溶媒对照组相比无显著性差异(P >0 .0 5 ) ;但当吡那地尔浓度增加到 10 0 .0 μmol·L-1时 ,钾电流幅度为 (12 8.1± 13.3) % (n =4 ) ,与溶媒对照组相比有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论　Ipt对动脉平滑肌细胞钾电流有增强作用。     

谷氨酸对皮质与海马脑片sAPP释放促进作用的差异

目的　观察谷氨酸对皮质与海马脑片可溶性淀粉样前体蛋白 (sAPP)释放促进作用的差异。方法　♂SD大鼠断头取皮质与海马后于 0～ 4℃Krebs-Ringer液中快速振动切片 ,切片于 37℃预孵育后置含 5 0 μmol·L-1 的谷氨酸或不含谷氨酸Krebs-Ringer液 (对照 )中孵育后于 1 5 0 0 0g离心取上清 ,应用二辛可宁酸法测定上清总蛋白含量 ;释放入孵育液中的sAPP以West ernblot方法测定。结果　 5 0 μmol·L-1 的谷氨酸作用于皮质与海马脑片后 ,其释放的sAPP均在 97～ 1 1 6KD之间 ,sAPP含量都非常低。而皮质中sAPP含量相对较高 ,且 5 0 μmol·L-1 的谷氨酸对于其影响较影响海马大。结论　 5 0 μmol·L-1 的谷氨酸促进sAPP的释放作用对皮质脑片的影响较其对海马脑片的影响显著     

重组人肝再生增强因子可抑制肝星状细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原的基因表达

在培养的肝星状细胞系中加入不同浓度的重组人肝再生增强因子(hALR),于不同的时间点收集细胞,提取总RNA,用逆转录定量PCR方法测定Ⅰ、Ⅲ型胶原的基因表达水平.结果表明,高(0.2ng/L)、中(0.02 ng/L)、低(0.002ng/L)浓度的hALR 3组肝星状细胞Ⅰ型胶原基因表达水平在8、24、48、72h 4个时间点均明显低于对照组;大剂量组较中、低剂量组Ⅰ型胶原基因表达水平亦明显为低.中、低剂量hALR组肝星状细胞Ⅲ型胶原基因表达水平在24、48、72h 3个时间点明显低于对照组;大剂量hALR组肝星状细胞Ⅲ型胶原基因表达水平在8、24、48、72h 4个时间点均明显低于对照组,较中、小剂量组亦显著降低. 提示重组人肝再生增强因子对肝星状细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原基因表达有明显的抑制作用.     

基于血浆药理学的鳖甲超微粉抗肝纤维化作用研究

目的用血浆药理学方法,体外观察鳖甲超微粉含药血浆抗肝纤维化作用。方法采用体外肝纤维化细胞模型,以大鼠含药血浆对HSC-T6细胞增殖的影响为指标,采用效应动力学方法,确定大鼠给药方案和采血时间,并优选体系中血浆添加量。制备鳖甲超微粉和普通粉含药血浆,MTT法检测含药血浆对HSC-T6细胞增殖的影响,ELISA法测定含药血浆对HSC-T6细胞胶原分泌的影响。结果鳖甲超微粉和普通粉含药血浆对HSC-T6细胞增殖和Ⅰ型胶原合成均有显著抑制作用（P〈0.01）,超微粉组的抑制作用强于普通粉组,且有显著性差异（P〈0.01）。结论鳖甲超微粉碎后可提高其抗肝纤维化疗效。     

bcl-2、c-myc和caspase-3蛋白在乙醛刺激的大鼠肝星状细胞中的表达

目的：探讨乙醛刺激的大鼠肝星状细胞株（HSC-T6）中bcl-2、c-myc和caspase-3蛋白表达，进一步了解酒精导致肝纤维化的发病机制。方法：用不同浓度乙醛对大鼠HSC-T6株进行处理，MTT比色法检测细胞增殖，SABC法检测bcl-2、c-myc和caspase-3蛋白表达。结果：乙醛刺激HSC-T6细胞增殖（P〈0．01），bcl-2和c-myc蛋白表达阳性率增加（P均〈0．01），而caspase-3蛋白表达阳性率降低（P〈0．05）。结论：乙醛刺激HSC细胞增殖可能与bcl-2、c-myc蛋白表达增加和caspase-3蛋白表达降低有关。     

sp600125对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞凋亡及Fas蛋白表达的影响

目的：探讨c-Jun氨基末端激酶（c-JunN-terminal kinase，JNK）信号传导通路特异阻断剂sp600125对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞株（HSC-T6）凋亡以及Fas蛋白表达的影响。方法：不同浓度sp600125对乙醛刺激的大鼠HSC-T6进行处理后，用Hoechst 33258染色后，观察凋亡细胞的形态变化，FCM法检测细胞凋亡率，SAN2法检测Fas蛋白表达。结果：不同浓度的sp600125能诱导乙醛刺激的HSC-T6凋亡，表现为细胞核浓缩、碎裂，形成凋亡小体；随着sp600125浓度增加，HSC-T6凋亡率逐渐增高（F=42．57，P〈O．01），HSC-T6细胞内Fas蛋白阳性表达率也逐渐增高（F-72．58，P〈0．01）。结论：不同浓度sp600125能诱导乙醛刺激的HSC-T6凋亡，这可能与上调Fas蛋白表达有关。     

表皮生长因子对肝星状细胞c-fos基因表达的影响

目的了解表皮生长因子（EGF）对肝星状细胞c-fos基因表达的影响。方法在培养的肝星状细胞系中加入不同浓度的EGF（终浓度20ng/ml、100ng/ml、500ng/ml）,于8h、24h、48h、72h四个时间点分别收集细胞,提取肝星状细胞总RNA;用逆转录定量PCR方法测定c-fos基因的表达水平。结果EGF三组HSC-T6细胞c-fos基因表达水平在8h、24h、48h、72h四个时间点均显著高于对照组;随剂量加大,HSC-T6细胞c-fos基因表达水平逐渐升高,三组间也有显著差异。结论表皮生长因子对肝星状细胞c-fos基因表达有明显的上调作用。     

银杏叶提取物对大鼠肝星状细胞增殖的影响及机制研究

目的：研究肝纤维化过程中银杏叶提取物（GbE）抑制肝星状细胞（HSC）增殖的机制。方法用不同浓度 GbE （0、50、100、200、300 mg/ L）处理 HSC 24 h 后,MTT 法检测 GbE 对 HSC-T6增殖的影响,Western blotting 和 RT-PCR 法测定 GbE对 P21/ P27蛋白和 mRNA 表达的影响。结果 MTT 检测结果显示,GbE 在100 mg/ L 时,抑制 HSC-T6的增殖（P ﹤0.05）,浓度为200和300 mg/ L 时,抑制增殖作用明显增强（P ﹤0.01）;Western blotting 检测结果显示,GbE 明显增加 P21/ P27蛋白的表达,且促进 P27蛋白表达的作强于 P21;进一步用 RT-PCR 检测发现,GbE 也能增加 P21/ P27 mRNA 的表达。结论 GbE 能够抑制 HSC-T6的增殖,这种增殖抑制作用主要是通过增加 P21/ P27蛋白和 mRNA 的表达实现的。     

高血糖对肝纤维化大鼠肝组织α—SMA和CTGF表达的影响

目的探讨高血糖对肝纤维化大鼠肝组织α－平滑肌肌动蛋白（α－SMA反映肝星状细胞HSC活化）和结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响。方法将52只SD雄性大鼠随机分为糖尿病肝纤维化组、正常血糖肝纤维化组与正常对照组。通过链脲佐菌素（streptozocin,STZ）诱导糖尿病,后用四氯化碳诱导肝纤维化。肝组织HE染色检测病理改变。免疫组化法检测肝组织α－SMA、CTGT蛋白表达。结果高血糖肝纤维化组α—SMA（灰度值142．5±3．67）和CTGF（灰度值144．2±5．01）表达水平较正常血糖肝纤维化组（α—SMA灰度值158．9±2．18,CTGF灰度值157．7±6．80）显著升高（P〈0．05）。结论高血糖可通过诱导肝脏α—SMA、CTGF表达,加重大鼠肝纤维化的程度,促进肝纤维化的形成。其机制与促进肝星状细胞的增殖活化及细胞外基质的合成分泌等有关。     

慢性阻塞性肺部疾病大鼠支气管成纤维细胞体外培养条件下结缔组织生长因子水平检测及意义

目的:探讨慢性阻塞性肺部疾病(COPD)大鼠和正常大鼠支气管成纤维细胞体外培养下结缔组织生长因子(CTGF)的蛋白活性、转录水平以及胶原合成水平。方法:以正常大鼠(对照组)和COPD模型大鼠(实验组)为细胞来源,组织块法进行成支气管成纤维细胞原代培养,应用第5代细胞为研究对象。比色法进行培养液羟脯氨酸含量检测,免疫组织化学染色技术、RT-PCR、免疫印迹方法进行CTGF定位检测、蛋白活性及转录水平观察。结果:实验组羟脯氨酸含量显著高于对照组。对照组大鼠支气管成纤维细胞有一定水平的CTGF表达,实验组成纤维细胞CTGF阳性表达增强,免疫印记及RT-PCR结果显示CTGF蛋白活性增强、转录水平升高。结论:CTGF在成纤维细胞中的高表达是大鼠COPD发生发展的重要环节。     

模拟失重条件下骨形态发生蛋白-2对大鼠骨肉瘤成骨样细胞基因表达的影响

目的观察回转器模拟失重条件下骨形态发生蛋白 2 (BMP 2 )对大鼠骨肉瘤成骨样细胞 (ROS1 7/ 2 .8)基因表达的影响。方法在 1G和回转器模拟失重条件下对ROS1 7/ 2 .8细胞进行培养 ,培养液中含5 0 0ng/ml的BMP 2。在实验的 2 4、48和 72h提取细胞总RNA ,进行反转录PCR ,检测Ⅰ型胶原α1链(COL Ⅰα1 )及碱性磷酸酶 (ALP)mRNA的表达 ,并计算与内参照 β -肌动蛋白 ( β actin)mRNA水平的比值。结果BMP 2诱导组的COL Ⅰα1mRNA表达在 2 4h和 48h显著高于无BMP 2组 (P <0 .0 1 ) ,ALPmRNA水平在 48h和 72h显著高于无BMP 2组 (分别为P <0 .0 1 ,P <0 .0 5 ) ;BMP 2诱导 48h后模拟失重组的COL Ⅰα1mRNA水平显著低于 1G对照组 (P <0 .0 1 ) ,模拟失重 48h和 72h后ALPmRNA表达显著低于 1G对照组 (P <0 .0 1 )。结论BMP 2可促进大鼠骨肉瘤成骨样细胞的分化相关基因的表达 ,在模拟失重条件下细胞对BMP 2的促分化作用的反应性下降。