金茵利胆口服液指纹图谱及峰归属研究

摘要：目的:建立金茵利胆口服液的高效液相指纹图谱,提高金茵利胆口服液质量控制水平。方法:采用HPLC法,迪马Ⅱ钻石C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,流动相乙腈-0.1%磷酸梯度洗脱,流速:1.0 ml·min-1,检测波长:254 nm。采用"中药色谱指纹图谱相似度评价系统"进行相似度计算,确定金茵利胆口服液指纹图谱研究方法。结果:各批次金茵利胆口服液共获得20个共有峰,超过总面积95%,所得指纹图谱方法学考察结果良好,采用色谱指纹图谱相似度评价软件,对指纹图谱进行相似度计算,其10批样品相似度均大于0.9。结论:运用指纹图谱分析技术,能体现金茵利胆口服液有效成分群的指纹信息,为提高金茵利胆口服液质量控制提供有效方法。     

清喉利咽颗粒的UPLC指纹图谱建立及主成分分析

目的:建立清喉利咽颗粒的超高效液相色谱(UPLC)指纹图谱,并结合主成分分析法(PCA)为其质量控制提供参考。方法:采用UPLC法。色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C18,流动相为乙腈(A)-0.1%磷酸水溶液(B)(梯度洗脱),流速为0.4 m L/min,检测波长为280 nm,柱温为30℃,进样量为2μL。以鞣花酸为参照物,分析12批清喉利咽颗粒样品,采用"中药指纹图谱相似度评价系统"软件进行相似度分析,并根据对照品对其中的共有峰进行指认,同时对共有峰进行主成分分析。结果:12批清喉利咽颗粒指纹图谱标定了18个共有峰,指认了6个主要色谱峰(没食子酸、鞣花酸、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、黄芩苷);12批样品与对照指纹图谱相似度均≥0.984。经主成分分析,18个共有峰可综合为3个主成分,累计方差贡献率为78.277%;黄芩苷和16号峰为清喉利咽颗粒指纹图谱中影响比较大的指标。结论:该方法可为清喉利咽颗粒的质量评价提供参考。     

复方石淋通片质量评价方法研究

目的 建立复方石淋通片的质量评价方法。方法 色谱柱为Waters Sunfire C18柱（200 mm×4.6 mm,5μm）,流动相为乙腈-0.17%磷酸水溶液（梯度洗脱）,流速为0.9 mL/min,检测波长分别为327 nm（绿原酸、咖啡酸）,334 nm（夏佛塔苷、异夏佛塔苷）,240 nm（芒果苷、马钱苷）,柱温为35℃,进样量为10μL。以夏佛塔苷峰为参照峰,利用中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012A版）建立10批样品的高效液相色谱（HPLC）指纹图谱,标定、指认共有峰,并进行相似度评价,并采用HPLC法测定6个成分的含量。采用聚类分析和主成分分析对10批样品进行质量评价。结果 共标定21个共有峰,指认出其中6个,分别为夏佛塔苷、异夏佛塔苷、绿原酸、咖啡酸、马钱苷、芒果苷;相似度为0.979～0.996。上述6个成分质量浓度分别在13.96～279.3μg/mL、5.468～109.4μg/mL、10.07～201.3μg/mL、2.762～55.24μg/mL、5.390～107.8μg/mL、5.252～105.0μg/mL范围内与峰面积线性关系良好（r> ...     

酒萸肉超高效液相色谱指纹图谱的建立及化学计量分析

目的建立酒萸肉的超高效液相色谱指纹图谱,并进行聚类分析和主成分分析。方法色谱柱为ACE3 C18-AR柱(100 mm×2.1 mm,3μm),流动相为乙腈-0.3%磷酸溶液(梯度洗脱),流速为0.2 m L/min,检测波长为254 nm,柱温为25℃,进样量为1μL。以马钱苷为参照峰绘制76批酒萸肉药材样品的指纹图谱,并与10批山萸肉药材样品的指纹图谱进行比较。采用Chempattern化学计量学软件进行相似度评价,并进行聚类分析和主成分分析。结果76批酒萸肉药材指纹图谱共确定7个共有峰、6种成分,分别为没食子酸、5-羟甲基糠醛、莫诺苷、马钱苷、獐牙菜苷、山茱萸新苷;76批酒萸肉药材样品中有60批次的相似度大于0.8;76批酒萸肉药材样品和10批山萸肉药材样品聚为两大类,两大类的5-羟甲基糠醛含量差异明显;经主成分分析,峰6和峰2均是导致药材样品质量差异的重要因素。结论所建立的超高效液相色谱指纹图谱可用于酒萸肉的质量评价。     

基于HPLC指纹图谱、多指标成分含量测定及化学计量学的槐芩软膏质量评价

目的:建立指纹图谱和多指标定量与化学计量学相结合的槐芩软膏质量评价方法。方法:采用Agilent Extend C₁₈色谱柱(4.6 mm×250 mm, 5μm),柱温25℃,流动相为乙腈-0.2%磷酸水溶液,梯度洗脱,体积流量为1.0 mL·min^-1,检测波长230 nm。利用中药色谱指纹图谱相似度评价软件(2012A版)对10批槐芩软膏建立指纹图谱,确定共有峰并进行相似度评价,并对芍药苷、芦丁、染料木苷、槐角苷、柚皮苷、新橙皮苷、黄芩苷、汉黄芩苷和丹皮酚的含量测定方法进行方法学验证。基于指纹图谱共有峰峰面积测定结果,采用聚类分析和主成分分析等化学计量学方法对不同批次的槐芩软膏进行质量评价。结果:在指纹图谱研究中,标定了21个共有峰,通过与对照品比较指认其中9个色谱峰,并对指认共有峰进行了含量测定。10批槐芩软膏与对照图谱的相似度均在0.90以上。9个成分在各自的质量浓度范围内线性关系良好,平均加样回收率为97.4%～99.2%,RSD为0.86%～1.4%;10批次样品中芍药苷、芦丁、染料木苷、槐角苷、柚皮苷、新橙皮苷、黄芩苷、汉黄芩...     

五参二连颗粒高效液相色谱指纹图谱研究及多成分定量分析

建立了五参二连颗粒的高效液相色谱指纹图谱及多指标成分(丹酚酸B、橙皮苷、哈巴俄苷和盐酸小檗碱)的含量测定方法.采用Agilent Zorbax SB-C18色谱柱,以乙腈-0.04 mol/L乙酸铵溶液(用冰乙酸调至pH 4.2)为流动相,梯度洗脱,检测波长270 nm.丹酚酸B、橙皮苷、哈巴俄苷和盐酸小檗碱分别在8～160、9.6～192、1.6～32和4.8～96 μg/ml范围内线性关系良好,平均回收率分别为100.5％、99.8％、98.6％和100.1％,RSD分别为0.9％、1.2％、1.6％和1.1％.在指纹图谱研究中,以盐酸小檗碱为参照峰,标定了22个共有峰,10批五参二连颗粒的指纹图谱平均相似度大于0.96.     

大黄利胆片指纹图谱研究

目的:建立大黄利胆片HPLC指纹图谱,为其质量评价提供依据。方法:采用Agela Venusil×BP C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇-0.2%磷酸,梯度洗脱,流速为1.0 ml·min^-1,进样量为20μl,检测波长为256 nm,柱温为30℃;对10批样品进行分析,运用2012版"中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件"建立大黄利胆片的HPLC指纹图谱,并进行相似度评价,对其共有峰进行归属并对主要特征峰进行化学指认。结果:建立了大黄利胆片的HPLC指纹图谱;10批样品相似度均在0.98以上,涵盖方中3味药材的26个共有峰得以确定,指认了8个特征成分,分别是:没食子酸(1号峰)、柯里拉京(6号峰)、鞣花酸(14号峰)、芦荟大黄素(22号峰)、大黄酸(23号峰)、大黄素(24号峰)、大黄酚(25号峰)、大黄素甲醚(26号峰)。结论:建立的大黄利胆丸HPLC指纹图谱分析方法稳定可靠,可用于大黄利胆片的质量控制。     

清脂胃舒佐餐茶HPLC法指纹图谱的研究及4个成分的含量测定

目的 建立清脂胃舒佐餐茶水溶性成分的高效液相色谱（HPLC）法指纹图谱,并测定没食子酸、绿原酸、柚皮苷、橙皮苷的含量。方法 采用HPLC法,色谱条件：Kromasil C₁₈柱（250 mm×4.6 mm, 5 μm）;流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱;流速为0.8 ml/min;检测波长为300 nm;柱温为35℃。结果 通过中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2004A）,确定了清脂胃舒佐餐水溶性成分的HPLC指纹图谱共有模式,标定了26个共有峰,整体相识度为0.934~0.995;并测定了10批制剂中绿原酸、柚皮苷、橙皮苷的含量分别为0.672、0.194、1.247和0.532 mg/g,RSD分别为1.35%、1.89%、0.69%和0.79%。结论 清脂胃舒佐餐水溶性成分的HPLC指纹图谱及其中没食子酸、绿原酸、柚皮苷、橙皮苷的含量检测方法简便、稳定、科学,为本品的质量控制提供了科学依据。     

五积散酒的多成分HPLC指纹图谱

建立了五积散酒的多成分HPLC指纹图谱.采用C18色谱柱,以甲醇-0.2%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱,检测波长294nm.在此条件下,可同时检测出阿魏酸、甘草苷、柚皮苷、橙皮苷、桂皮醛、欧前胡素、和厚朴酚以及厚朴酚8种成分,确认了18个共有峰,10批五积散酒指纹图谱的相似度均大于0.9.     

杏苏止咳颗粒HPLC指纹图谱及7种成分含量的研究

摘要：目的:采用HPLC法,建立杏苏止咳颗粒指纹图谱和7种成分定量分析的测定方法,为杏苏止咳颗粒的质量控制提供更为可靠的方法和依据。方法:采用HPLC法,同时测定杏苏止咳颗粒中苦杏仁苷、甘草苷、橙皮苷、迷迭香酸、甘草酸铵、白花前胡甲素、白花前胡乙素的含量,采用ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,流动相为乙腈-0.01%磷酸溶液,梯度洗脱;检测波长为250 nm、320 nm,柱温为30℃,流速为1.0 ml·min-1,进样量为10μl。选取橙皮苷为参照峰,并使用中药色谱指纹图谱相似度评价系统对指纹图谱进行相似性评价,确定共有峰,并采用SPSS 22.0软件对含量测定结果进行聚类分析。结果:苦杏仁苷、甘草苷、橙皮苷、迷迭香酸、甘草酸铵、白花前胡甲素、白花前胡乙素检测质量浓度的线性范围分别为4.515～63.210μg·ml-1（r=0.999 6）,0.488～6.829μg·ml-1（r=0.999 8）,2.288～32.030μg·ml-1（r=0.999 5）,0.390～5.461μg·ml-1（r=0.999 7）,1.781～24.930μg·ml-1（r=0.999 6）,1.321～18.490μg·ml-1（r=0.999 4）,0.378～5.288μg·ml-1（r=0.999 6）μg·ml-1;平均加样回收率分别为98.6%,98.5%,99.0%,98.7%,99.1%、98.7%,98.5%（RSD<2.0%,n=6）。12批杏苏止咳颗粒的指纹图谱与其指纹图谱共有模式相比较相似度均大于0.9,标定了共有峰22个,并对其中7个共有指纹峰进行了指认和归属。通过聚类分析,12批样品聚成2类。结论:所建立的HPLC指纹图谱分离效果良好,特征性强,方法稳定简单,多指标成分含量测定同时结合指纹图谱分析能更为全面地对杏苏止咳颗粒的质量进行控制。     

金茵清热口服液HPLC指纹图谱研究

目的：研究金茵清热口服液的HPLC指纹图谱测定方法.方法：采用HPLC方法测定金茵清热口服液,色谱柱 WATERS AtlantisT3（150 mm×215;4.6 mm,3 μm）; 流动相A：0.05%磷酸溶液;流动相B：乙腈,进行梯度洗脱;检测波长：254 nm;柱温：30℃;流速：0.8 ml·min^-1.结果：标示出金茵清热口服液15个共有峰,并确证3个已知峰为绿原酸、栀子苷、丹酚酸B.结论：本次HPLC指纹图谱为金茵清热口服液的质量控制提供了更全面的信息.     

金茵清热口服液对PBMC中TLRs mRNA表达的影响

目的：研究金茵清热口服液（试药）对人外周血单个核细胞（PBMC）中Toll样受体（TLRs）mRNA水平的影响,探索试药在TLRs信号通路中的免疫调节作用。方法：体外分离、培养人PBMC,设试药组和空白对照组,试药组加入试药刺激PBMC,与空白组经37℃,5% CO₂培养24 h后,用Trizol抽提PBMC总RNA,采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测PBMC中TLR1-10 mRNA水平。结果：与空白对照组比较,试药组PBMC中,除TLR5、TLR7、TLR8、TLR10 mRNA水平下调（^aP<0.05,^cP>0.05）,其他TLRs mRNA表达均上调,其中TLR1、TLR2和TLR6上调最为显著,分别上调4.11,6.32和5.58倍（^bP<0.01）。结论：金茵清热口服液可能主要通过影响TLR1、TLR2和TLR6来激活天然免疫应答,发挥免疫调节作用。     

益脑康提取液指纹图谱的建立及4种成分含量的测定

目的：建立益脑康提取液的HPLC指纹图谱及其指标成分含量测定方法,结合指纹图谱和含量测定结果,为评价益脑康的质量提供依据。方法：采用HPLC法,建立10批益脑康提取液的HPLC指纹图谱,标定共有峰,并进行相似度评价;对采用对照品对比确认的盐酸益母草碱、阿魏酸、毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷等4个成分进行含量测定,比较不同批次样品的质量差异。结果：10批益脑康提取液相似度均大于0.9,确定了22个共有峰,指认出峰5为盐酸益母草碱、峰8为阿魏酸、峰9为毛蕊异黄酮苷、峰18为芒柄花苷;4种成分在各自范围内线性关系良好（R²≥0.999 6）,精密度、稳定性、重现性试验中的RSD均小于5%,平均加样回收率为99.00%~103.62%,10批益脑康提取液中4种成分的含量为0.703~1.099,0.918~2.428,0.258~0.475,0.112~0.222 mg·g^-1。结论：所建立的指纹图谱和含量测定方法准确可靠,重现性好,可用于益脑康提取液的质量控制,并为益脑康相关制剂开发与质量评价提供参考。     

银翘解毒液超快速液相色谱指纹图谱研究

目的建立银翘解毒液的超快速液相色谱(UFLC)指纹图谱,为整体控制和评价银翘解毒液的质量提供依据。方法以银翘解毒液为研究对象,应用UFLC,色谱柱为Eclipse XDB C18(100 mm×4.6 mm2,.2μm),流动相为甲醇-0.1%甲酸水溶液,二元梯度洗脱,流速为0.5 mL/min,检测波长为280 nm,建立了10批哈药集团中药二厂生产的银翘解毒液样品的UFLC指纹图谱。结果应用"中药色谱指纹图谱相似度评价系统("2004A)版对10批银翘解毒液进行了质量评价。结论该方法简便、可靠,可用于银翘解毒液的质量评价。     

金茵清热口服液对甲型H1N1流感病毒致细胞病变效应的影响

目的：研究金茵清热口服液（试药）抑制甲型H1N1流感病毒的作用及其对喉癌上皮细胞（Hep-2细胞）免疫机能的影响。方法：甲型H1N1流感病毒感染狗肾细胞（MDCK细胞）和Hep-2细胞后,给予不同浓度的试药。显微镜观察细胞病变效应（cytopathic effect,CPE）,MTT法检测细胞活性,荧光定量PCR（qRT-PCR）检测试药作用于Hep-2细胞后细胞因子（TNF-α,IFN-1α,IFN-1β,IL-1α和IL-6）mRNA的水平。结果：实验细胞感染病毒后用试药处理,当试药质量浓度为3 mg·mL^-1时,MDCK细胞存活率提高了61.6%;试药质量浓度为4 mg·mL^-1时,Hep-2细胞存活率提高了40.6%,显著高于药物空白组细胞的存活率（P<0.05）。同时,试药显著上调Hep-2细胞的TNF-α（2.39倍）和IFN-1α（1.98倍）水平,下调炎症因子IL-1α（90%）和IL-6（64%）水平（P<0.05）,而IFN-1β水平的差异无统计学意义（P>0.05）。结论：金茵清热口服液可以显著提高染毒细胞的存活率,并能显著上调Hep-2细胞抗病毒免疫分子,同时抑制炎症反应,推测金茵清热口服液调节细胞免疫应答可能是其抗流感病毒作用机制之一。     

基于指纹图谱、化学模式识别及多成分定量评价十一方药酒质量

目的:基于HPLC指纹图谱、化学模式识别及多指标同时定量的方法研究不同批次十一方药酒,为该制剂的质量评价提供参考。方法:建立11批十一方药酒样品的HPLC指纹图谱,并对其进行相似度评价、主成分分析(principal component analysis,PCA),采用偏最小二乘-判别分析(partial least square-discriminate analysis,PLS-DA)考察不同批次十一方药酒的差异性成分。采用HPLC多波长法对6种化学成分进行含量测定。结果:建立的指纹图谱标定33个共有色谱峰,相似度0.977~0.997,共指认12个色谱峰。PCA将样品分成2类,通过PLS-DA,表明差异性成分共16个,包含定量分析的6个成分。含量测定中各色谱峰分离度较好,线性关系良好(r≥0.999 4),平均加样回收率95.34%~102.41%,RSD≤2.90%。结论:该研究建立的HPLC指纹图谱及含量测定方法准确、简单,可为十一方药酒提供质量评价。     

杜仲补天素丸的HPLC指纹图谱建立、化学模式识别分析及含量测定

目的:建立杜仲补天素丸的指纹图谱并进行化学模式识别分析,测定杜仲补天素丸中7个成分的含量,为该制剂的质量控制提供参考。方法:采用高效液相色谱法(HPLC),以Pntulips BP-C18 Plus为色谱柱,以0.2%磷酸水溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,检测波长为330 nm,柱温为35℃,进样量为20μL。以丹皮酚为参照,使用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件(2012版)》建立12批杜仲补天素丸(S1~S12)的指纹图谱,确定共有峰并进行相似度评价,通过与对照品比对进行色谱峰指认。采用SPSS 21.0软件和SIMCA 13.0软件进行聚类分析和主成分分析,对22个共有峰进行评价。采用上述HPLC法测定12批样品中指认成分的含量。结果:从12批杜仲补天素丸的HPLC指纹图谱中标定共有峰22个,相似度均不低于0.960;共指认化学成分7个,分别为没食子酸(峰1)、绿原酸(峰3)、甘草苷(峰6)、金丝桃苷(峰7)、毛蕊花糖苷(峰8)、淫羊藿苷(峰14)和丹皮酚(峰15)。12批样品中,S1、S3~S5、S7、S9、S11聚为一类,S2、S10、S12聚为一类,S6聚为一类,S8聚为一类;22个共有峰被分为3个主成分,主成分1的特征值(15.130)和方差贡献率(68.775%)最大,其中峰3(0.305)和峰4(0.298)对应成分的得分系数最高。12批样品中,上述7个成分的含量分别为18.1962~31.9513、0.0006~0.0494、0.2348~0.4159、0.0395~0.0791、0.0535~0.2493、0.0005~0.0008、0.6464~1.1469 mg/g。结论:成功建立了杜仲补天素丸的HPLC指纹图谱。12批样品被聚类分成4类,峰3(绿原酸)和峰4(未知)可能是造成样品差异的重要因素。7个成分中没食子酸的含量最高。     

基于指纹图谱结合多成分化学模式分析的复方垂盆草降酶颗粒质量控制研究

目的 建立复方垂盆草降酶颗粒的HPLC指纹图谱,测定其中4种有效成分的含量并结合化学模式识别技术对其进行系统、科学的质量评价。方法 采用HPLC法,以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,检测波长为254nm,建立10批复方垂盆草降酶颗粒样品的指纹图谱,并对主要有效成分芍药内酯苷、芍药苷、甘草素、甘草酸铵进行定量测定。通过相似度分析并结合聚类分析(CA)、主成分分析(PCA)及正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)等模式识别技术对样品的总体质量进行分析评价。结果 样品的指纹图谱有22个共有峰,经对照品进行化学指认并鉴定了其中的4个色谱峰。10批供试品的相似度均在0.9以上,4种有效成分定量结果相差不大,表明该药物的总体质量较为稳定。但通过CA及PCA均发现不同批次药物质量之间仍然存在有微小差异,且主要分为两大类,最后进一步采用OPLS-DA筛选出了导致批次间药物质量差异的4个共有峰,分别为9号峰、19号峰(甘草酸铵)、7号峰(芍药苷)和4号峰。结论 指纹图谱结合有效成分化学模式识别的分析方法简便、准确、科学且可靠,可更加系统、全面地评价复方垂盆草降酶颗粒的药物质量。     

小儿解表止咳口服液中盐酸麻黄碱含量测定

目的 建立测定小儿解表止咳口服液中盐酸麻黄碱含量的高效液相色谱法.方法 采用C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,以乙腈-含0.1％三乙胺的0.1％磷酸溶液（3：97）为流动相,流速为1.0 mL/min,检测波长为205 nm,柱温为30℃.结果 盐酸麻黄碱质量浓度在0.01～0.32 g/L范围内与峰面积呈良好线性关系,精密度RSD为0.13％,平均加样回收率为99.95％,RSD为2.22％（n=9）.结论 该方法简便、快捷、重现性好,可作为小儿解表止咳口服液的质量控制方法.     

枳壳饮片标准汤剂质量评价研究

目的 建立枳壳标准汤剂的质量控制方法，为枳壳配方颗粒及其他枳壳产品的质量评价提供参考。方法 按照标准汤剂制备要求，制备13批枳壳饮片标准汤剂，建立HPLC特征图谱。采用高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱（high performance liquid chromatography-quadrupole time-of-flight mass spectrometry，HPLC-Q-TOF-MS），电喷雾离子源，在正负离子模式下采集数据，对主要色谱峰进行定性鉴别。采用HPLC测定标准汤剂中芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷4种成分含量，计算标准汤剂的出膏率、4种成分转移率和pH。结果 HPLC特征图谱中共6个共有峰，通过质谱定性分析结合对照品比较，对6个共有峰进行了指认，分别为新北美圣草苷、芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷和枳属苷，13批枳壳饮片标准汤剂相似度均>0.98。枳壳标准汤剂中芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷质量分数分别为0.07%~0.26%，1.30%~3.40%，0.14%~0.34%，0.85%~3.64%，转移率分别为31.4%~50.6%，31.3%~48.9%，22.9%~48.2%，25.3%~50.9%；出膏率为19.3%~30.71%；pH为3.45~4.64。结论 建立的系统评价枳壳饮片标准汤剂的质量方法稳定可行，为枳壳标准汤剂及其相关制剂的质量评价提供科学依据。