过氧化氢降解肝素制备肝素寡糖的工艺研究

以收率为考核指标,采用正交试验筛选出过氧化氢降解肝素制备相对分子量为1.2～2kD的肝素寡糖的最佳工艺条件.结果表明,优化条件为55℃、pH 7.0时一次性加入过氧化氢使其浓度达12%.     

葡萄糖3,5-二硝基苯甲酸酯在合成葡萄糖苷和相关寡糖中的应用

目的探索一种新型的糖基化方法.方法以TMSOTf为催化剂, 1-α-O-(3, 5-二硝基苯甲酰基)-2, 3, 4, 6-四-O-苄基-D-吡喃葡萄糖分别与一系列的羧酸、酚、醇和单糖反应, 得到糖基化产物, 采用1H、13C NMR谱确证了产物的构型.结果 高立体选择性、较好收率地得到了α-葡萄糖苷和相应的寡糖.结论 3,5-二硝基苯甲酰氧基作为良好的糖端基离去基用于寡糖的合成, 具有反应条件温和、收率较高、立体选择性好的特点.     

四种不同类型酶降解壳聚糖的效果比较

目的：对4种不同类型酶水解壳聚糖的效果进行比较。方法：通过碱性铁氰化钾测定还原端基法测定了酶活性和溶液中还原糖浓度，研究并评价了纤维素酶、脂肪酶、溶菌酶和胃蛋白酶对壳聚糖溶液的降解条件和效果。结果：分别在4种酶的最适宜条件下反应，胃蛋白酶对壳聚糖水解速度最快，纤维素酶的水解速度仅次于胃蛋白酶，溶菌酶的水解速度最慢。结论：胃蛋白酶对壳聚糖的降解速度优于纤维素酶、脂肪酶和溶菌酶。     

壳聚糖酶的纯化、基因克隆、及其酶学特性的鉴定

从被污染的酵母培养液中分离到-菌株,经鉴定为一种革兰氏阳性杆菌,其所分泌的主要蛋白产物经纯化后,测定了它的N-端氨基酸序列,与已知的几种内切壳聚糖酶十分类同.根据其同源DNA序列,通过PCR方法克隆了其全长基因.该菌株生长极快,其组成型分泌产物主要为内切壳聚糖酶.该酶通过疏水层析和分子筛两步即得到纯化.进一步研究了该酶的酶学性质及其催化壳聚糖降解为壳寡糖的条件.提高该壳聚糖酶的产率后,有望用于壳寡糖的生产,有实际应用价值.     

产几丁质酶海洋细菌的筛选及发酵条件的优化

目的:筛选产几丁质酶活力的菌株,研究菌株产酶的最适发酵条件,并对酶解产物进行检测.方法:利用平板透明圈法初筛产几丁质酶的菌株,再利用DNS法复筛菌株,将初酶液和胶体几丁质在37℃水浴反应,经离心,透析,浓缩,再通过薄层色谱(TLC)和高效液相色谱(HPLC)对酶解产物进行检测.结果:SG-05海洋细菌能降解几丁质为3～5聚合度的几丁寡糖.其发酵液最大酶活可达0.85 U·mL-1.结论:利用平板透明圈法和DNS法相结合,可以较为迅速准确筛选到产几丁质酶活力的菌株,利用薄层色谱和商效液相色谱法可准确对酶解产物进行定性分析,通过发酵条件的优化,产酶活力提高近2倍.     

不同水解模式下琼二糖多聚体的HPLC定量分析

目的琼二糖多聚体具有多种生物活性 ,建立不同水解模式下的琼二糖聚合体的定量分析方法具有重要意义。方法将降解产物用Sephadex柱纯化得到聚合度为 2～ 10的琼寡糖 ,对每一种寡糖进行α 萘胺衍生化后采用高效液相色谱分析 ,并利用此方法对 4种水解模式 (盐酸、柠檬酸、固态酸及羟基自由基降解 )的产物进行分析。结果各种聚合度的寡糖衍生物在HPLC上得到了很好的分离 ,最低检测限达到 0 .1～ 2 μg·mL 1。应用固态酸降解琼胶 ,其产物中的寡糖含量可达 33.2 % ,其中琼二糖含量高达 5 7.8% ;盐酸降解产物较为分散 ,包含 2～ 10糖 ;柠檬酸降解产率过低 ;羟基自由基降解产物过杂。结论建立的琼胶寡糖定量方法可有效地应用于寡糖制备分析中。     

羧甲基壳聚糖的制备研究

目的 :研究壳聚糖羧甲基化条件、收率及产物的某些性质。方法 :在碱性条件下壳聚糖与一氯醋酸缩合成羧甲基壳聚糖 ,产物用等电点沉淀法分离纯化 ,同时测定了产物等电点。结果 :壳聚糖羧甲基化产率在 90 %～95 %之间。等电点为 7.17～ 7.5 6 ,除了溶液的 pH值在等电点外 ,产物在水溶液中完全溶解。 结论 :壳聚糖羧甲基化后 ,溶解性改变 ,扩大了其在医药领域的用途。     

一种饱和褐藻胶寡糖的制备方法

目的报道一种饱和褐藻胶寡糖的制备方法。方法以褐藻胶为原料,用酸水解法降解,在pH2.85处分级获得均聚古罗糖醛酸片段(PG)和均聚甘露糖醛酸片段(PM),分别在稀盐酸中水解(PG:pH3.8,120℃,3h;PM:pH4,120℃,4h)。水解物经凝胶渗透色谱法分离,获得寡糖组分,反复纯化后,获得系列褐藻胶寡糖。用红外光谱(IR)、核磁共振谱(NMR)、质谱(MS)等方法分析了寡糖的结构。结果褐藻胶经酸水解法降解,分离纯化后获得古罗糖醛酸寡糖二糖到六糖和甘露糖醛酸寡糖二糖到六糖,结构分析表明寡糖保持了原褐藻胶大分子的结构特征。结论本研究为褐藻胶低分子寡糖的制备提供了一种有效、简便的方法。     

绿藻多糖CH1-1的可控降解及其寡糖的制备研究

目的 研究绿藻多糖CH1-1的可控降解及其寡糖的制备。方法 采用不同浓度的三氟乙酸（TFA）或盐酸（HCl）对绿藻多糖CH1-1进行水解,通过薄层色谱和凝胶渗透色谱法研究了水解过程中不同的反应温度和反应时间对多糖降解产物的影响;通过控制酸浓度、反应温度和反应时间,通过Bio-Gel P4凝胶色谱柱分离得到寡糖产物;采用质谱法对得到的寡糖产物进行分析。结果 采用0.1 mol?L-1 和0.05 mol?L-1 TFA或HCl,随着反应温度的升高和反应时间的延长,多糖的分子量降低,其中0.1 mol?L-1 TFA、80 ℃及0.1 mol?L-1 HCl、80 ℃水解条件对多糖的降解作用较好;最终选取0.1 mol?L-1 HCl、80 ℃、3 h的水解条件对多糖进行降解制备寡糖,并采用Bio-Gel P4凝胶色谱柱对寡糖混合物进行分离纯化,电喷雾质谱分析表明,这些寡糖组分为聚合度为1～8的硫酸阿拉伯糖。结论 建立了绿藻多糖CH1-1可控降解方法,制备得到新颖的海洋硫酸寡糖。     

青霉菌产壳聚糖酶制备低分子量壳聚糖的研究

利用Penicilliumsp.ZD-Z1发酵培养生产壳聚糖酶,研究其降解特性,并制备特定低分子量的壳聚糖。结果表明,在30℃、pH5、加内切酶ChA0.01u/ml的条件下降解4%壳聚糖,通过MHS方程η=1.02×10-4Mw1.27控制反应时间,可以得到低分子量的壳聚糖。