芪红胶囊对柯萨奇病毒黏附和穿入的抑制作用

目的观察芪红胶囊(QH)对柯萨奇病毒的抑制作用,并探讨芪红胶囊作用机制。方法首先在HeLa细胞水平研究芪红胶囊对柯萨奇病毒的抑制作用,以利巴韦林作为阳性对照药物。通过细胞活性测定(XTT)实验和空斑形成实验确定芪红胶囊的半数有效剂量(IC50)以及半数毒性剂量(CC50)。在病毒感染后的不同时间段加入芪红胶囊或利巴韦林,观察药物发挥作用的主要时间点。通过黏附实验和穿入实验观察芪红胶囊是否对病毒的吸附和穿入具有抑制作用。结果芪红胶囊具有显著抗病毒作用,XTT实验和空斑形成实验结果显示:芪红胶囊的IC50值分别是:(7.2±0.8)μg/ml和(2.6±0.5)μg/ml;芪红胶囊细胞毒性是利巴韦林的16倍(芪红胶囊的CC50值为:(1648±219)μg/ml,利巴韦林CC50值:(103±14)μg/ml。病毒抑制时程实验提示芪红胶囊主要在病毒感染后0～4h内发挥作用;黏附实验和穿入实验证实芪红胶囊的抗病毒作用主要通过抑制病毒吸附和穿入发挥作用。结论芪红胶囊能够在体外有效抑制病毒对细胞的入侵,且毒性较低,其抗病毒作用主要源于对病毒吸附和穿入的抑制作用。     

白花丹素的体外肾毒性及酸性成纤维细胞生长因子对白花丹素所致肾损伤的保护作用

目的：观察白花丹素在体外对人胚肾细胞293的毒性,以及酸性成纤维细胞生长因子（aFGF）对白花丹素所致肾损伤的保护作用。方法：采用四噻唑蓝（MTT）法检测不同浓度白花丹素对人胚肾细胞293的毒性,以及aFGF对白花丹素IC50值的影响,并测定培养上清液中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二酰二醛（MDA）和乳酸脱氢酶（LDH）的活性。结果：白花丹素在体外对人胚肾细胞293的毒性呈现剂量依赖性,24、48和72 h的IC50值分别为（150.421±3.014）、（88.426±1.965）和（84.811±1.035）μg/mL。在aFGF作用下,24、48和72 h的IC50值分别升至（342.624±2.887）（、176.835±1.097）和（133.278±1.124）μg/mL。aFGF保护组与白花丹素损伤组的SOD、MDA和LDH测定结果有显著性差异（P〈0.05）。结论：白花丹素可抑制人胚肾细胞293的增殖,对肾脏有一定的毒性。aFGF对白花丹素所致肾损伤有明显的保护作用。     

红树林淡紫拟青霉胞外多糖分离提取及体外抗HSV-1活性初探

目的初步探讨红树林淡紫拟青霉胞外多糖体外抗单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)感染的可能机制,为开发新型抗病毒药物提供基础研究。方法以非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)为病毒感染靶细胞,以不同浓度多糖作用于HSV-1感染过程的各个阶段,以细胞病变程度(CPE)测定病毒半数感染量(TCID50),四甲基偶氮唑盐(MTT)法测得多糖对Vero细胞的毒性作用及多糖抗HSV-1的活性。结果淡紫拟青霉胞外多糖对Vero细胞的半数有毒浓度(CC50)为1 374.04μg/mL,多糖浓度在500μg/mL以下时,细胞存活率达80%以上,且对细胞无增殖作用;在25~800μg/mL浓度范围内该多糖可在一定程度上抑制病毒吸附和生物合成,并表现出一定的量效关系,其半数抑制浓度分别为414.98μg/mL和390.47μg/mL,当多糖浓度达800μg/mL时,对病毒吸附的抑制率为77.1%,对生物合成的抑制率为88.3%;未发现该多糖对HSV-1有直接灭活作用。结论淡紫拟青霉胞外多糖对Vero细胞毒性较小,是一种较安全的多糖;该多糖具有一定的抗病毒作用,在一定浓度范围内可抑制HSV-1吸附和生物合成,且对生物合成的抑制作用稍强于对吸附的抑制作用。     

人肾小管上皮细胞及正常肝细胞在药物毒性器官选择中的应用

目的：探讨人肾小管上皮细胞（HK－2）及人正常肝细胞（L－02）在药物毒性器官选择中的应用。方法以肾毒性药物庆大霉素、顺铂、环孢素A及肝毒性药物硫唑嘌呤作用于HK－2及L－02细胞24 h,考察并比较药物对2种细胞的形态、存活、凋亡及酶学指标变化的影响。结果肾毒性药物在较低浓度下即可引起HK－2细胞的形态、存活、凋亡及酶学指标的显著性变化,肝毒性药物则在较低浓度下即可引起L－02细胞相关指标的显著性变化;比较4种药物的IC10值发现：3种肾毒性药物对HK－2的IC10值均小于对L－02的IC10值;而肝毒性药物硫唑嘌呤的IC10值则HK－2大于L－02。结论基于HK－2及L－02细胞评价药物的毒性器官选择性是可行性的。     

IL-10抑制脂多糖诱导的Hela细胞IL-15和IL-6转录

目的研究IL-10对脂多糖(LPS)诱导的Hela细胞IL-15mRNA和IL-6 mRNA表达的影响,分析其激活的信号转导通路。方法培养的Hela细胞,经不同浓度的LPS及IL-10单独或联合处理后,提取细胞总RNA和总蛋白,RT-PCR分析IL-15和IL-6转录水平的变化,Westernblot分析信号转导通路蛋白变化。结果RT-PCR分析得知①1ng～10μgLPS刺激Hela细胞12h后,IL-15 mRNA和IL-6 mRNA水平均明显上调(与对照组比较:P<0.01),且存在剂量依赖关系,100ng/mL时达峰值;100ng/mLLPS刺激Hela细胞0～24h,IL-15 mRNA和IL-6 mRNA水平亦明显上调(与对照组比较:P<0.01),24h内存在时间依赖关系,12h时达峰值。②单独IL-10(10ng/mL)作用于Hela细胞12h后,IL-15 mRNA和IL-6 mRNA没有明显变化(与对照组比较:P>0.05)。不同浓度的IL-10(1,10,100ng/mL)均下调100ng/mLLPS诱导的Hela细胞IL-15 mRNA和IL-6 mRNA的表达,且浓度越高IL-10抑制作用越明显。Western blot分析显示LPS主要通过磷酸化信号蛋白PI3K/AKT和ERK1/2上调IL-15和IL-6转录,IL-10能阻断AKT的磷酸化而对ERK1/2的磷酸化没有影响。结论IL-10可抑制LPS诱导的炎症细胞因子IL-15和IL-6的转录,这可能与其阻断AKT的磷酸化有关,因而,IL-10可能应用于某些临床感染性疾病的预防和治疗。     

马齿苋水煎液抗单纯疱疹病毒的实验研究

目的测定马齿苋水煎液在细胞培养条件下抗单纯疱疹病毒I型（HSV-I）的作用。方法在人胚肺二倍体细胞系统中,采用对病毒所致细胞病变的抑制实验,观察马齿苋水煎液抗HSV-I的药效,加入细胞培养板内观察病毒致细胞病变作用,以能抑制最大病毒感染量的药物浓度为判断结果的标准。结果马齿苋水煎液的半数抑制浓度（IC50）为0.98μg/ml;最小有效浓度（MIC）为1.95μg/ml;治疗指数（TI）为128。结论马齿苋水煎液有较显著的抗HSV-I作用,且对细胞毒性低。     

白介素-2靶向5-氟尿苷棕榈酸酯脂质体的制备及细胞毒性研究

目的制备了白介素-2（IL-2）靶向5-氟尿苷棕榈酸酯（5-FURP）脂质体,并进行了体外细胞毒性,初步考察其对IL-2受体高表达的肿瘤细胞的靶向作用。方法采用逆相蒸发法制备5-FURP脂质体,通过交联剂将IL-2连接到脂质体的表面,得IL-2靶向5-FURP脂质体（IL-2-5FURP-L）;UV法测定包封率;用考马斯亮蓝结合法测定IL-2与脂质体的结合率;用MTT法测定脂质体对IL-2受体高表达的皮肤T细胞淋巴瘤Hut-102细胞的生长抑制作用。结果 IL-2-5-FURP-L的粒径为180 nm;药物平均包封率为91.3%;IL-2的结合率为56.0%;在pH7.4的释放介质中,脂质体具有缓释作用;MTT实验结果显示,IL-2-5-FURP-L呈剂量依赖性抑制肿瘤细胞的生长,72 h细胞毒性试验表明IL-2-5-FURP-L对Hut-102的杀伤作用（IC50=1.04μg.mL-1）明显优于5-FURP-L（IC50=6.11μg.mL-1）及5-FURP（IC50=7.35μg.mL-1）。结论 IL-2修饰的载药脂质体具有明显的抑瘤作用和主动靶向作用。     

柴胡对呼吸道合胞病毒感染大鼠肺组织病毒载量的影响

目的 研究柴胡对呼吸道合胞病毒感染大鼠肺组织病毒载量及辅助型T细胞1/辅助型T细胞2（Th1/Th2）细胞因子影响。方法 大鼠分成对照组、模型组（呼吸道合胞病毒感染）、阳性组（呼吸道合胞病毒感染,利巴韦林治疗）和低(呼吸道合胞病毒感染,1.25 mL·kg^-1柴胡治疗)、中(呼吸道合胞病毒感染,2.5 mL·kg^-1柴胡治疗)、高剂量实验组(呼吸道合胞病毒感染,5.0 mL·kg^-1柴胡治疗),每组12只。检测大鼠肺指数,以实时荧光逆转录聚合酶链反应（RT-qPCR）法检测病毒载量,以酶联免疫吸附（ELISA）法检测肺组织中Th1/Th2、细胞因子干扰素-γ（IFN-γ）、白细胞介素-4 （IL-4）含量,对肺泡灌洗液进行炎性细胞分类计数,以蛋白质印迹（Western blot）法检测核因子-κBp65（NF-κBp65）、Toll样受体4（TLR4）蛋白表达。结果 模型组、阳性组和高剂量实验组大鼠肺组织病毒载量分别为（190.07±25.29）×10⁵,（22.72±1.55）×10^5<...     

异甘草酸镁对人表皮角质形成细胞炎症因子的产生和外周血白细胞趋化功能的影响

目的：研究异甘草酸镁对角质形成细胞产生促炎症细胞因子、黏附分子和对白细胞趋化功能的影响,以获得异甘草酸镁治疗炎症性皮肤病的药理学基础.方法：采用2 000 U/mL rhIFN-γ诱导人表皮角质形成细胞Ha-CaT细胞,用ELISA法检测不同浓度的异甘草酸镁对HaCaT细胞IL-8、IL-6和ICAM-1产生的影响;通过琼脂糖平板法在显微镜下观察药物对10 nmol/L甲酰甲二磺酰-亮氨酰-苯丙氨酸（fMLP）诱引的人白细胞移动距离的影响.结果：异甘草酸镁能剂量依赖性地抑制rhIFN-γ刺激引起的IL-8、IL-6和ICAM-1的产生,其IC50值分别为1.21、7.23和4.17μg/mL;对fMLP诱引的人外周血白细胞趋化功能有明显影响,其抑制作用呈剂量依赖性,IC50值为8.58 μg/mL.结论：异甘草酸镁可通过抑制人表皮角质形成细胞IL-8、IL-6、ICAM-1产生和白细胞趋化达到治疗炎症相关性皮肤病的作用.     

穿心莲内酯磺化物体外抗流感病毒药效学研究

目的探讨穿心莲内酯磺化物（andrographolide sulfonated,ADS）体外对甲型流感病毒H1N1、H3N2以及乙型流感病毒（B）的抑制作用及最佳浓度。方法采用细胞病变观察法（CPE）、四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法,观察药物对狗肾传代细胞（MDCK）的毒性作用,计算半数有毒浓度（TC50）和最大无毒浓度（TC0）;3种流感病毒分别接种于MDCK,观察不同浓度的药物对病毒致CPE的影响,测定药物对病毒的增殖抑制率,Probit回归法计算药物的半数有效浓度（EC50）和治疗指数（TI）;红细胞血凝素滴定法测定ADS对流感病毒血凝素抑制作用。结果 CPE、MTT法测得ADS对MDCK的TC0≤0.781 3 mg.mL-1,TC50为2.280 8 mg.mL-1。ADS对H1N1、H3N2、B流感病毒的EC50分别为0.072 6、0.152 7、0.158 5 mg.mL-1,TI分别为31.42、14.93、14.39,此外ADS对不同流感病毒血凝素抑制作用,最低抑制浓度分别为0.048 9、0.097 8、0.097 8 mg.mL-1,且呈现出量效关系。结论 ADS体外抗H1N1、H3N2以及B型流感病毒感染作用,可能是通过药物抑制流感病毒表面的血凝素的活性而实现的。