穿心莲二萜类化合物对B16细胞致敏小鼠CTL杀伤活性的影响

目的研究穿心莲二萜类化合物(DAP)对B16细胞致敏小鼠脾脏CTL杀伤活性的影响。方法将♂BALB/c小鼠分为对照组、致敏组、50mg·kg-1及150mg·kg-1DAP给药组,制备小鼠脾脏淋巴细胞悬液,流式细胞术分析T淋巴细胞亚群,乳酸脱氢酶(LDH)法和DiO/PI双染色法分别测定CTL杀伤活性。结果50mg·kg-1及150mg·kg-1DAP口服给药可以增加B16细胞致敏小鼠脾脏淋巴细胞中T细胞及CD8+T细胞比例,降低T细胞中CD4+/CD8+比值并增强CTL对B16细胞的杀伤活性。结论DAP可增加B16细胞致敏小鼠脾脏T细胞比例及提高CTL杀伤活性。     

ζ链低水平表达T淋巴细胞参与类风湿关节炎的炎症过程

目的探讨T细胞受体ζ(zeta)链低水平表达细胞(TCRζdim)的功能以及在类风湿关节炎(RA)发病机制中的作用。方法通过细胞表面染色、细胞内染色和流式细胞仪等方法在单个细胞水平分析TCRζdim细胞的功能,并通过细胞分选和实时聚合酶链反应(PCR)方法进一步在分子水平证实这些细胞的功能。结果活动性RA患者关节滑液中TCRζdim细胞的数量明显高于相应的外周血。经过肉豆蔻酸酯和Ionomycin刺激同时在Mo-nensin存在的情况下,TCRζdim细胞产生大量的肿瘤坏死因子(TNF)-α和干扰素(IFN)-γ。细胞表型分析显示细胞内TCRζdim的表达水平与细胞表面CD52的表达水平呈正相关,因此依据CD52分子的表达水平并借助于流式细胞分离器分离得到了TCRζdim细胞。实时PCR检测发现TCRζdim细胞表达多种致炎性细胞因子、趋化因子和趋化因子受体,包括TNF-α、CCR5、CXCR3、CCL5等。结论TCRζdimT细胞为体内的一种效应细胞,具有产生多种致炎性细胞因子和趋化因子(受体)的功能,它们在RA关节内聚集,在RA发病机制中起作用。     

异基因骨髓间充质干细胞对类风湿关节炎患者主要细胞因子表达的影响

目的探讨在体外环境中,异基因骨髓间充质干细胞(bMSCs)对类风湿关节炎(RA)患者的白细胞介素(IL)-1、肿瘤坏死因子(TNF)-α和转化生长因子(TGF)-β1表达的影响。方法采集健康供者的骨髓标本,经密度梯度离心分离、纯化获得其bMSCs,进行体外培养扩增。同时采集RA患者的外周血,分离单个核细胞。将来源于健康供者的bMSCs分别与来源于RA患者的单个核细胞和健康供者的单个核细胞在体外进行共培养,用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测细胞内细胞因子IL-1、TNF-α和TGF-β1表达的变化。结果经bMSCs与RA单个核细胞共培养7d后,IL-1和TNF-α表达量低于单独RA组,差异有统计学意义(P<0.05)。但是单独正常单个核细胞和bMSCs与正常单个核细胞共培养后比较IL-1和TNF-α表达差异无统计学意义(P>0.05);经bMSCs与RA单个核细胞共培养7d后,TGF-β1表达量高于单独RA组(P<0.05)。单独正常单个核细胞和bMSCs与正常单个核细胞共培养后比较TGF-β1表达差异统计学意义(P<0.05)。结论异基因骨髓间充质干细胞在体外可以特异性调节RA患者细胞因子的表达。bMSCs可能在RA发病发展中起一定的作用,bMSCs有可能用于RA的治疗。     

金黄色葡萄球菌对达托霉素临床耐药性的研究进展

达托霉素(daptomycin,DAP)是一种环脂肽类抗生素,DAP作用机制与其他许多抗生素不同。DAP通过扰乱细胞膜对氨基酸的转运,从而阻碍细菌细胞壁肽聚糖的磷壁(酸)脂质(LTA)的生物合成。DAP主要作用于病菌细胞膜,DAP具有在体外抗绝大多数革兰阳性菌的作用。最近国际病例报告显示,有较多患者在服用此药治疗过程中产生了DAP耐药性(DAP-R)。金黄色葡萄球菌对DAP可能存在多种耐药机制,对DAP耐药性的临床产生过程也较为复杂,预防对DAP的耐药发生和合理治疗耐DAP金黄色葡萄球菌感染就显得尤为重要。     

丹参酮ⅡA对Hela细胞增殖和细胞周期的影响

目的通过体外细胞培养的方法,研究丹参酮ⅡA(TanⅡA)对Hela细胞增殖和细胞周期的影响,并与甲氨蝶呤(MTX)比较,探讨TanⅡA在类风湿关节炎治疗方面的潜在价值。方法用MTT法计算不同浓度的TanⅡA及MTX处理后细胞生长抑制率(IR%);用碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)检测不同浓度TanⅡA作用及MTX作用下细胞周期变化。结果TanⅡA、MTX均可对体外培养的Hela细胞产生增殖抑制作用,且均有剂量依赖关系。MTX的IC50值小于TanⅡA,而TanⅡA的最大抑制率约为MTX的4倍。TanⅡA、MTX均可使Hela细胞细胞周期的构成发生明显的变化,使S期细胞减少、G0/G1期细胞增多。结论TanⅡA、MTX均可对体外培养的Hela细胞产生增殖抑制作用,且均表现出剂量依赖关系。TanⅡA、MTX均可对Hela细胞细胞周期的构成产生影响,使S期细胞减少、G0/G1期细胞增加。通过以上实验提示TanⅡA在抑制细胞增殖方面类似于MTX在治疗RA方面有潜在价值。     

小剂量雷帕霉素治疗活动性类风湿关节炎临床疗效及重建调节性T细胞介导的免疫耐受的研究

目的研究小剂量雷帕霉素治疗活动性类风湿关节炎(RA)患者的临床疗效及安全性,观察其对调节性T细胞(Treg细胞)介导的免疫耐受的重建。方法选取活动性RA患者62例按2∶1随机分为雷帕霉素组42例和对照组20例,2组均给予改善病情抗风湿药(DMARDs)及/或小剂量激素,雷帕霉素组加用雷帕霉素0.5mg 1次/隔日,2组患者分别于0、3、6、12周进行临床和常规实验室指标评估,并在0、12周采用流式细胞术检测患者外周血以CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞、辅助性T细胞(CD4+IL-17+Th)17为主的CD4+T亚群细胞绝对计数及百分比,比较2组之间及治疗前后患者的临床及实验室指标,并记录不良反应。结果共55例患者完成研究,分为雷帕霉素组37例和对照组18例,经12周治疗后2组28个关节疾病活动脂数(DAS28)评分、肿胀关节数(SJC)、关节压痛数(TJC)、红细胞沉降率(ESR)均下降,差异有统计学意义(P<0.05);2组中仅雷帕霉素组的免疫抑制用量明显少于传统治疗组,且2组均无不可逆的不良反应出现;雷帕霉素组Treg细胞、Th17绝对计数显著高于对照组[12周2组Treg分别为(29±23)个/μl和(16±16)个/μl,P=0.042;Th17分别为(7.3±5.5)个/μl和(3.5±2.4)个/μl,P=0.011];雷帕霉素组Treg细胞、Th17细胞绝对计数治疗前后无明显差异,而对照组2种细胞绝对计数显著下降[Treg:0周(35±20)个/μl,12周(16±16)个/μl,P=0.016;Th17:0周(8.9±4.2)个/μl,12周(3.5±2.4)个/μl,P=0.028]。结论 DMARDs药物可能通过减少RA患者Treg细胞、Th17细胞数缓解病情,而加用小剂量雷帕霉素可以明显提高RA患者外周血中Treg细胞水平,提示雷帕霉素可能通过重建Treg细胞介导的免疫耐受缓解病情,为活动性RA的治疗提供新思路。     

羟氯喹对佐剂性关节炎大鼠滑膜组织学的影响

目的：探讨羟氯喹(HCQ)对佐剂性关节炎(AA)大鼠滑膜组织学的影响。方法：将88只Wistar大鼠随机分成5组，A组：正常对照组(n＝16)；B组：空白对照组(n＝24)；C组：HCQ组(n＝16)；D组：泼尼松组(n＝16)；E组：萘普生组(n＝16)。给B、C、D、E组大鼠的右足垫皮内注射完全弗氏佐剂(CFA)0.1 mL，建立AA大鼠模型，A组注射0.9%氯化钠溶液0.1 mL。C、D、E组均于接种CFA后第21天开始灌胃给药，均给予萘普生5 mg·kg 1·d 1，共1个月。C组加用HCQ 4 mg·kg 1·d 1，共5个月；D组加用泼尼松2 mg·kg 1·d 1，1个月后减为1 mg·kg 1·d 1，再用4个月。动态观测AA大鼠关节形态变化及关节病理改变，并用透射电镜观察滑膜细胞超微结构的改变。结果：注射CFA第4周，HCQ组及泼尼松组大鼠右后肢踝关节左右横径、右后足体积、全身病变评分均明显低于空白对照组，其中以泼尼松组降低更明显；第8周后泼尼松组及HCQ组各指标均明显低于空白对照组，关节病理积分比空白对照组明显减轻(P＜0.01)，但泼尼松组及HCQ组间差异无显著性(P＞0.05)；20周后HCQ组滑膜细胞细胞质内容物基本正常，细胞增生、分泌及吞噬活动不明显，与泼尼松组表现一致，与空白对照组及萘普生组相比差异有显著性。结论： HCQ可明显改善AA大鼠滑膜细胞的超微结构，减轻关节的炎性反应,比泼尼松起效慢，但不良反应相对较小。因此，HCQ是较理想的长期治疗关节炎的药物。     

PDCD4对DAP5表达及大肠癌细胞凋亡的影响

【摘要】目的 探讨程序性死亡基因4(PDCD4)对死亡相关蛋白5（DAP5) 的表达及对人大肠癌细胞系LOVO凋亡的影响。方法 构建重组真核表达载体pFLAG/PDCD4,转染人大肠癌细胞LOVO,G418（500 mg/L）筛选获得稳定表达PDCD4的细胞系。RT-PCR及Western blotting检测LOVO细胞中PDCD4的mRNA及蛋白表达,流式细胞仪检测LOVO细胞凋亡情况,Western blotting检测LOVO细胞DAP5表达的变化。结果 成功建立稳定表达PDCD4的大肠癌 细胞LOVO-pFLAG/PDCD4。转染PDCD4 的LOVO-pFLAG/PDCD4 组与空白对照LOVO 组、转染空载质粒的LOVO-pFLAG组相比,PDCD4蛋白表达和mRNA水平明显升高（P < 0.01）;细胞凋亡率明显增加（P < 0.01）;同时伴有DAP5蛋白表达明显升高（P < 0.01）。结论PDCD4能够诱导大肠癌细胞LOVO的凋亡,其机制可能与上调DAP5的表达有关。     

类风湿关节炎患者外周血Th0/Th1/Th2细胞亚群失衡的研究

目的研究类风湿关节炎(RA)患者外周血辅助性T细胞(T-helpercell,Th)亚群的状态,以探讨Th细胞亚群(Th0/Th1/Th2)在RA发病机制中的作用。方法利用流式细胞仪检测技术,采用三色标记法,在外周血单个细胞水平上同时进行细胞膜表面(CD4)和细胞内细胞因子[白细胞介素(IL)-4、干扰素(IFN)-γ]的测定,检测33例活动期RA患者和16名正常对照者外周血中T细胞亚群(CD3+/CD4+/CD8+T细胞)及Th细胞亚群的比例;并分析早期RA组(病程≤2年,17例)与非早期RA组(病程>2年,16例),骨侵蚀组(19例)与无骨侵蚀组(14例),类风湿因子(RF)阳性组(23例)与RF阴性组(10例)Th细胞亚群的比例。结果①与正常对照组相比,RA组外周血CD3+CD4+T淋巴细胞升高(P<0.05);Th0、Th1细胞的比例降低(P<0.05);T细胞亚群、Th细胞亚群变化与RA疾病活动相关;②与非早期RA组相比,早期RATh1细胞、Th1/Th2比值升高,Th2降低(P<0.05),早期RA患者Th1细胞比例与血沉、C-反应蛋白、晨僵时间呈正相关;非早期RA患者Th2细胞比例与血沉、晨僵时间呈正相关;③与无骨侵蚀组比较,有骨侵蚀组Th1细胞、Th1/Th2明显降低,Th2细胞升高(P<0.05);④RF阳性组与阴性组间Th细胞亚群及Th1/Th2比值差异均无统计学意义。结论CD4+T细胞在RA的发病机制中起着重要的作用,RA外周血中存在着Th细胞亚群的不平衡,Th细胞失衡的模式在RA的病程中并不是固定的,早期RA外周血以Th1细胞为主,慢性RA则以Th2细胞相对占优势,并与疾病的活动性、骨侵蚀有密切关系。     

3,4-二氨基吡啶对蛙缝匠肌纤维肌浆钙离子和肌醇磷脂水解的影响(英文)

3,4-二氨基吡啶(DAP)可以浓度依赖性地增加[Ca~(2 )i DAP 1 mmol·L~(-1)使[Ca~(2 )]i由对照的166±41 nmol·L~_(-1)升高到416±69nmol·L~(-1)(n=10)。在胞外无钙时,DAP仍使[Ca~(2 )i升高。DAP还促进肌醇磷脂水解。在有钙溶液中,DAP引起的肌醇磷脂水解更多。结果提示,DAP可能通过促进蛙骨骼肌纤维的肌醇磷脂水解,使细胞内钙库释放钙。     

白花蛇舌草对高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞增殖、凋亡、活性氧水平的影响研究

目的探讨白花蛇舌草注射液( HDI)对高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞( HRCECs)增殖、凋亡、氧化应激的影响及机制。方法 2019年 10月至 2020年 6月,体外培养 HRCECs。将 HRCECs分为对照组( 5.5 mmol/L葡萄糖处理细胞)、高渗对照组( 19.5 mmol/L甘露醇及 5.5 mmol/L葡萄糖处理细胞)、高糖对照组( 25 mmol/L葡萄糖处理细胞)、白花蛇舌草组( HDI组)(6.25 mL/L、12.5 mL/L、25 mL/L、50 mL/L HDI和 25 mmol/L的葡萄糖处理细胞)。处理细胞 48 h,通过 CCK8法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞周期及凋亡率;激光扫描共聚焦显微镜检测活性氧水平。蛋白质印迹法检测增殖细胞核抗原( PCNA)、细胞周期蛋白 A1(CyclinA1)和活化胱天蛋白酶 -3(cleaved caspase-3)蛋白表达。结果与对照组比较,高糖组细胞活性明显升高［(1.116±0.105)比( 0.684±0.072)］(P<0.05)。与高糖组比较, 12.5 mL/L、25 mL/L和 50 mL/L的白花蛇舌草组细胞活性明显降低［( 0.847±0.076)、(0.639±0.058)、(0.421±0.042)比( 1.116±0.105)］(P<0.05)。选择 50 mL/L的白花蛇舌草作为研究对象。与对照组比较,高糖组 G0/G期细胞百分比［( 60.02±5.01)%比( 54.72±4.31)%］、细胞凋亡率［( 17.11±1.01)%比( 3.32±0.47)%］、活性氧水平［( 96.18±5.22)比( 42.14±3.56)］及 PCNA、CyclinA1和 cleaved caspase-3表达均明显升高, G2/M期和 S期细胞百分比明显降低( P<0.05)。与高糖组比较, HDI组 G0/G期细胞百分比［( 32.31±3.42)%比( 60.02±5.01)%］、细胞凋亡率［( 9.72±0.73)%比     

艾叶乙酸乙酯提取物通过LINC01606/微小RNA-26b对结直肠癌细胞增殖、凋亡的影响

目的研究艾叶乙酸乙酯提取物对结直肠癌SW1116细胞增殖和凋亡的影响及其潜在的分子机制。方法2018年6月至2019年11月,用12.5 mg/L、25 mg/L、50 mg/L的艾叶乙酸乙酯提取物处理结直肠癌细胞SW1116,分别称为实验1、2、3组,人胆囊收缩素/缩胆囊素八肽(CCK-8)法、流式细胞术和克隆形成实验检测SW1116细胞存活率、凋亡率、细胞周期和克隆形成能力,蛋白质印迹法检测周期素依赖激酶抑制剂p21(P21)和胱天蛋白酶-3(caspase-3)蛋白表达水平,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞中LINC01606和微小RNA(miR)-26b的转录水平,双荧光素酶报告系统验证LINC01606和miR-26b 的关系。结果实验1、2、3 组的SW1116 细胞克隆形成数(101±9、79±8、56±6)、存活率［(81.57±8.02)%、(68.17±6.69)%、(48.26±4.91)%］、S期细胞百分比［(31.98±2.39)%、(26.10±2.21)%、(23.21±2.04)%］及细胞中LINC01606含量(0.76±0.05、0.51±0.05、0.34±0.04)逐渐降低(P<0.05),P21(0.34±0.03、0.47±0.04、0.67±0.05)、caspase-3(0.26±0.02、0.38±0.03、0.59±0.04)蛋白表达量、miR-26b 含量(1.26±0.09、1.41±0.10、1.69±0.12)、细胞凋亡率［(13.37±1.21)%、(17.94±1.47)%、(24.36±1.69)%］和G1期细胞百分比［(32.17±2.41)%、(37.04±2.75)%、(41.20±3.24)%］均逐渐升高(P<0.05),呈显著剂量依赖趋势,剂量越高效果越显著;过表达LINC01606和抑制miR-26b均可提高细胞克隆形成数、存活率和S期细胞百分比,降低P21、caspase-3蛋白表达量、细胞凋亡率及G1期细胞百分比;LINC01606靶向调控miR-26b。结论艾叶乙酸乙酯提取物通过LINC01606/miR-26b途径抑制SW1116细胞的增殖,促进细胞凋亡。艾叶乙酸乙酯提取物对结直肠癌具有潜在治疗作用。     

人类表皮生长因子受体 2对胃癌细胞增殖、迁移侵袭和凋亡的影响

目的 研究人类表皮生长因子受体2(HER2)对胃癌细胞增殖、迁移侵袭和凋亡的影响,并探讨其机制.方法 2018年11月至2019年6月,运用实时定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测永生化的正常胃上皮细胞GES-1、胃癌细胞SGC-7901、MGC-803、BGC-823中HER2的表达;将空载体(pcDNA 3.1)、HER2过表达载体(pcDNA 3.1-HER2)、小干扰RNA阴性对照(si-NC)、HER2小干扰RNA(si-HER2)用脂质体法转染至SGC-7901细胞.噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;Tran-swell小室检测细胞迁移和侵袭;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测细胞中p16、p21、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、裂解的聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(cleaved-PARP)、裂解的半胱氨酸蛋白酶3(cleaved caspase-3)蛋白表达.结果 与正常胃上皮细胞GES-1相比,胃癌细胞SGC-7901、MGC-803、BGC-823中HER2的表达[(3.02±0.28),(2.51±0.21),(2.36±0.19)比(1.00±0.08)]明显升高,其中SGC-7901细胞中的表达最高(P<0.05);过表达HER2后,SGC-7901细胞的增殖[(1.12±0.09)比(0.61±0.06)]、迁移[(170±15)比(100±9)]和侵袭[(130±12)比(75±6)]能力均明显上调,细胞的凋亡力[(8.03±0.69)％比(19.46±1.44)％]明显下调(P<0.05);敲减HER2则可下调SGC-7901细胞的增殖[(0.59±0.05)比(0.89±0.08)]、迁移[(55±5)比(100±8)]和侵袭[(36±4)比(75±6)]能力,上调细胞的凋亡[(16.82±1.15)％比(8.01±0.65)％]能力(P<0.05).重要的是,过表达HER2可明显抑制SGC-7901细胞中增殖抑制蛋白p16、p21,迁移侵袭相关蛋白MMP-2、MMP-9,凋亡促进相关蛋白cleaved-PARP、cleaved caspase-3的表达,敲减HER2具有相反的作用.结论 HER2可促进胃癌细胞的增殖、迁移侵袭,抑制凋亡,其可能与调控功能增殖、迁移侵袭及凋亡相关蛋白表达有关.     

rhEPO对光损伤诱导的RPE细胞凋亡的抑制

目的研究重组人促红细胞生成素(rhEPO)在人视网膜色素上皮(RPE)细胞光化学损伤中的保护作用及其作用机制,为年龄相关性黄斑变性等的药物治疗和预防提供理论依据。方法取成人ARPE-19细胞株传代培养的2~5代细胞建立光损伤模型,光照12h后再培养24h终止培养,采用AnnexinV-FITC/PI流式双染法检测不同浓度的rhEPO干预治疗前后RPE细胞凋亡的变化;采用酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbant assay,ELISA)及免疫组织化学法检测不同浓度的rhEPO干预治疗前后RPE细胞caspase-3及Bcl-2表达的变化;并添加AG490(Jak2激酶抑制剂),探讨人rhEPO对人RPE细胞光化学损伤的保护性作用机制。结果各rhEPO组均可明显减少光化学损伤诱导的人RPE细胞的凋亡,呈浓度依赖性,以40IU·ml-1EPO组结果最明显,为(4.93±1.45)·ml-1;在40IU·ml-1EPO组caspase-3浓度最低,为(0.125±0.029)μg·L-1;在40IU·ml-1EPO组Bcl-2表达最高(168.21±3.87);在加入AG490组,人RPE细胞凋亡增高为(11.29±2.11)·ml-1;caspase-3浓度增高为(0.362±0.042)μg.L-1;Bcl-2表达降低。rhEPO抑制凋亡作用均被阻止。结论rhEPO可抑制光化学损伤诱导的人RPE细胞的凋亡,抑制caspase-3的浓度,上调Bcl-2的表达,对人RPE细胞的光化学损伤有保护治疗作用;其保护作用机制主要通过EPO与受体结合后激活Jak2激酶途径完成的。     

丹酚酸 A对脂多糖诱导人肾小球系膜细胞凋亡的作用机制研究

目的探究丹酚酸 A对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导人肾小球系膜细胞凋亡的作用机制。方法该研究起止时间为 2018年 5月至 2019年 5月。购买华拓生物生产的 HGMC人肾小球系膜细胞,分为 A组、 B组、 C组、 D组、 E组五组, A组细胞不添加任何药物, B组、 C组、 D组、 E组细胞均加入 10 mg/L LPS培养, 1h后 C组、 D组、 E组分别加入低剂量丹酚酸 A(10 mg/L)、中剂量丹酚酸 A(20 mg/L)、高剂量丹酚酸 A(40 mg/L)处理 24 h后做后续试验。检测细胞增殖、凋亡、细胞周期分布以及磷脂酰肌醇 3激酶(PI3K)/蛋白激酶 B(protein kinase,AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路指标表达量。结果与 A组相比, B组细胞凋亡率、 G0/G1期细胞分布率降低, S期、 G2/M期细胞分布率升高;与 B组相比, C组、 D组、 E组 G0/G1期细胞分布率、细胞凋亡率升高, S期、 G2/M期细胞分布率降低;与 C组相比, D组、 E组细胞凋亡率、 G0/G1期细胞分布率升高, S期、 G2/M期细胞分布率降低(均 P<0.05);与 D组相比, E组细胞凋亡率(37.59±4.62)%、G0/G1期细胞分布率(86.95±11.62)%升高, S期、 G2/M期细胞分布率分别为     

长链非编码 RNA LINC00346调控微小 RNA-138-5p对宫颈癌细胞增殖、凋亡的影响

目的研究长链非编码 RNA(lncRNA)LINC00346影响宫颈癌细胞增殖和凋亡的分子机制。方法选取 2018年 1—12月于南阳市中心医院手术治疗的 28例宫颈癌病人的宫颈癌组织(实验组)及癌旁正常组织(对照组)为研究对象。根据细胞转染情况分为 si-NC组、 si-LINC00346组、 miR-NC组、 miR-138-5p组、 si-LINC00346+anti-miR-NC及 si-LINC00346+anti-miR-138-5p组;利用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应( qRT-PCR)检测宫颈癌组织和宫颈癌海拉细胞中 LINC00346和微小 RNA(miR)138-5p的表达水平,蛋白质印迹法检测海拉细胞中周期素依赖激酶抑制剂 p21(P21)和胱天蛋白酶 -3(caspase-3)的蛋白含量, MTT法和流式细胞术测定细胞存活率和凋亡率,双荧光素酶报告系统验证 LINC00346和 miR-138-5p的靶向关系。结果与正常癌旁组织相比,宫颈癌组织中 LINC00346含量显著升高［( 2.51±0.08)比( 0.99±0.05)］(P<0.001);转染 si-LINC00346(LINC00346干扰物)后,与 si-NC(阴性对照组)相比, si-LINC00346组宫颈癌海拉细胞中的 LINC00346含量显著下降［( 0.33± 0.03)比( 1.00±0.05)］P21和 caspase-3蛋白含量升高［(0.63±0.04)比( 0.22±0.02);(0.79±0.05)比( 0.30±0.03)］,海拉细胞存活率降低［(52.84±4.39)比(,100.00±6.13)］,凋亡率升高［( 23.39±1.64)比( 8.19±1.00)］,均差异有统计学意义( P<0.001),敲除 LINC00346可降低细胞存活率,提高细胞凋亡率及 P21和 caspase-3蛋白含量;转染野生型 WT-LINC00346的海拉细胞,与 miR-NC对照组相比, miR-138-5p组野生型 WT-LINC00346的萤火虫荧光素酶相对活性显著下降［( 0.24±0.03)比( 0.97±0.05)］。敲除 LINC00346可显著上调 miR-138-5p含量［(2.43±0.07)比( 1.01±0.05)］(P<0.001)。结论 LINC00346通过靶向 miR-138-5p调控宫颈癌海拉细胞增殖和凋亡。     

长链非编码 RNA人类白细胞抗原复合体 18通过微 RNA-497-5p/细胞周期蛋白 E1轴调节弥漫性大 B细胞淋巴瘤的增殖、凋亡和侵袭

目的探讨长链非编码 RNA人类白细胞抗原复合体 18(lncRNA HCG18)调控微 RNA-497-5p(miR-497-5p)/细胞周期蛋白 E1(CCNE1)轴对弥漫性大 B细胞淋巴瘤( DLBCL)细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法实时荧光定量 PCR(qRT-PCR)、蛋白质印迹法分别检测 2018年 5月至 2021年 5月收集的恩施土家族苗族自治州中心医院 DLBCL病人淋巴组织、良性淋巴结增生病人的淋巴组织、人正常 B细胞永生化细胞 HMy2.CIR、DLBCL细胞系 SU-DHL-1、OCI-LY8、U2932中 HCG18、miR-497-5p表达及 CCNE1蛋白表达,将 OCI-LY8细胞分为 Ct组(正常培养的 OCI-LY8细胞)、 pcDNA组(细胞转染过表达物阴性对照)、 pcD? NA-HCG18组(细胞转染 HCG18过表达物)、 si-NC组(细胞转染小干扰 RNA阴性对照)、 si-HCG18组(细胞转染 HCG18小干扰 RNA)、 si-HCG18+inhibitorNC组(细胞转染 HCG18小干扰 RNA和抑制物阴性对照)、 si-HCG18+miR-497-5p inhibitor组(细胞转染 HCG18小干扰 RNA和 miR-497-5p抑制物),CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡, Transwell检测细胞侵袭,蛋白质印迹法检测 CCNE1、增殖细胞核抗原( PCNA)、 Bcl-2相关 X蛋白( Bax)、基质金属蛋白酶 9(MMP-9)蛋白表达,双萤光素酶验证 HCG18与 miR-497-5p、miR-497-5p与 CCNE1的关系。结果在 DLBCL淋巴组织和细胞中, HCG18、CCNE1蛋白高表达, miR-497-5p低表达,且在 OCI-LY8细胞中 HCG18、CCNE1蛋白表达上调最高, miR-497-5p表达下调最多( P<0.05)因此,以 OCI-LY8细胞进行后续研究,与 si-NC组比较, si-HCG18组 HCG18(0.26±0.03比 1.01±0.01)、 CCNE1蛋白( 0.45±0.03比,1.44±0.19)表达降低, miR-497-5p(1.95±0.14比 1.03±0.02)表达升高( P<0.05)与 pcDNA组比较, pcDNA-HCG18组 HCG18(1.96±0.23比 1.02±0.01)、 CCNE1蛋白( 2.33±0.21比 1.42±0.18)表达升高, miR-497-5,p(0.28±0.02比 1.02±0.02)表达降低( P<0.05),与 siHCG18组、 si-HCG18+inhibitor NC组比较, miR-497-5p表达降低( 1.21±0.09比 1.95±0.14、1.94±0.13)CCNE1蛋白( 0.87±0.08比0.45±0.03、0.44±0.04)表达上调( P<0.05)沉默 HCG18可抑制 OCI-LY8细胞增殖、侵袭行为及 PCNAMP-9蛋白表达,诱导细胞凋亡及 Bax蛋白表达,而上调 HCG18相反趋势,下调 miR-497-5p逆转了沉默 HCG18对 OCI-LY8细胞增殖、侵袭、凋亡的影响, HCG18靶向调控 miR-497-5p/CCNE1。结论沉默 HCG18可能通过调控 miR-497-5p/CCNE1抑制 OCI-LY8细胞增殖、侵袭,诱导细胞凋亡。     

Magnolol induces apoptosis via activation of both mitochondrial and death receptor pathways in A375-S2 cells

Magnolol inhibited proliferation of human malignant melanoma A375-S2 cells. The drug induced oligonucleosomal fragmentation of DNA in A375-S2 cells and increased caspase-3, 8, 9 activities followed by the degradation of caspase-3 substrates, inhibitor of caspase dependent DNase (ICAD) and poly-(ADP-ribose) polymerase (PARP). Pan-caspase inhibitor (z-VADfmk), caspase-3 inhibitor (z-DEVD-fmk), capase-8 inhibitor (z-IETD-fmk), caspase-9 inhibitor (z-LEHD-fmk) and caspase-10 inhibitor (z-AEVD-fmk) inhibited magnolol-induced A375-S2 cell apoptosis. The level of anti-apoptotic mitochondrial protein Bcl-2 was up-regulated while the level of pro-apoptotic protein Bax was down-regulated. Taken together, our results indicate that magnolol induces apoptosis by activation of both mitochondrial and death receptor pathways in A375-S2 cells.     

穿心莲内酯诱导人食管癌Ec9706细胞凋亡机制研究

目的在前期工作基础上进一步研究穿心莲内酯(an-drographolide,AD)抑制人食营癌Ec9706细胞增殖和诱导凋亡的机制。方法分光光度法分别检测AD处理Ec9706细胞6、12、18h对caspase-3活性的影响以及AD处理Ec9706细胞6h对caspase-8和caspase-9活性的影响,并用MTT法比较研究在有或无caspase广谱抑制剂Z-VAD-FMK时AD对Ec9706细胞增殖的影响;免疫组化法分析AD处理Ec9706细胞6h对bcl-2基因表达的影响。结果AD(30、60mg.L-1)下调bcl-2基因的表达(P<0.01),提高Ec9706细胞caspase-3和caspase-9活性,对caspase-8活性无明显影响,caspase广谱抑制剂Z-VAD-FMK减弱AD对Ec9706的细胞毒作用。结论AD通过下调bcl-2,激活caspase-9、caspase-3诱导Ec9706细胞凋亡。