透明质酸寡糖逆转白血病细胞系K562/ADR多药耐药的研究

目的研究透明质酸寡糖(o-HAs)的体外逆转白血病多药耐药细胞(K562/A02)的耐药性,并对其逆转机制进行探讨。方法以四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测o-HAs对K562/A02细胞的多药耐药逆转活性;以流式细胞术检测o-HAs对K562/A02细胞内抗癌药物盐酸多柔比星(ADR)累积的影响。结果在100μg.mL-1浓度时o-HA4、o-HA6、o-HA8、o-HA10使ADR对K562/A02的半数抑制浓度(IC50)由61.6μg.mL-1分别降低至30.17、30.04、32.29、33.33μg.mL-1。细胞中ADR的累积量增加至原来的3.90、3.92、3.76、3.39倍。结论 o-HAs在体外具有较强的逆转K562/A02细胞多药耐药的活性。     

环孢菌素A联合干扰素对白血病细胞株的多药耐药逆转的实验研究

目的：观察联合逆转剂对白血病细胞株多药耐药（MDR）的逆转作用，提高化疗的敏感性，方法：用环孢菌素A（CsA)和干扰素－α（INF-α）单独或联合逆转多药耐药细胞株K562／A02对柔红霉素（DNR）的耐药，药敏试验采用MTT法，同时用流式细胞仪检测逆转前后P糖蛋白（PgP)表达的变化及细胞内DNR浓度分布情况。结果：DNR对K562／A02及K562／S细胞的半数细胞抑制剂量（IC50）分别为7．3μg/ml和0．2μg/ml，CsA联合INF－α后明显增强DNR对K562／A02的细胞毒作用，IC60由7．3μg/ml降低到0．7μg/ml，而对K562／S细胞无影响，且逆转后细胞内DNR浓度明显增加，PgP表达无明显变化，结论：CsA和IFN－α联合能使白血病细胞株K562／A02对DNA的敏感性增加，具有逆转多药耐药的作用。     

川芎嗪脂质体对人白血病细胞株K562多药耐药逆转作用的研究

目的:研究川芎嗪脂质体在体外对肿瘤细胞的细胞毒作用和对多药耐药的逆转作用,并研究脂质体剂型对上述作用的影响.方法:MTT法检测川芎嗪脂质体以及川芎嗪原料对照组、空白脂质体对照组对耐阿霉素的人白血病细胞株(K562/ADM)的细胞毒性和多药耐药逆转作用.结果:川芎嗪脂质体对K562/ADM有明显的细胞毒作用.非细胞毒性剂量(生长率≥95%)为2.0μg·ml-1,该浓度下可显著降低ADM对K562/ADM细胞的IC50(P＜0.01),抗药性逆转为11.2倍.低毒剂量(生长率85～90%)为2.6μg·ml-1,抗药性逆转为178倍.2.0μg·ml-1的川芎嗪原料对照组可显著降低ADM对K562/ADM细胞的IC50(P＜0.01),抗药性逆转为7.9倍;同比稀释的空白脂质体对照组可显著降低ADM对K562/ADM细胞的IC50(P＜0.01),抗药性逆转为4.9倍.结论:川芎嗪脂质体体外对人白血病细胞K562/ADM有明显的细胞毒作用和MDR逆转作用;在一定浓度范围内川芎嗪脂质体的细胞毒性与逆转作用有剂量依赖性;脂质体本身对逆转有增效作用.     

小白菊内酯诱导耐药白血病细胞K562/ADR凋亡的研究

目的初步探讨小白菊内酯(PTL)对耐药白血病细胞K562/ADR细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法MTT法及LDH释放法检测小白菊内酯对K562和K562/ADR细胞增殖抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞内活性氧(ROS)的变化,Western blot法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、caspase-3、caspase-9的表达变化。结果 PTL抑制K562/ADR细胞的增殖,呈剂量依赖,半数抑制浓度(IC50)值分别为(4.36±0.37)μmol.L-1、(10.6±2.81)μmol.L-1。10μmol.L-1PTL作用24 h诱导K562/ADR细胞的凋亡率为(31.21±0.40)%,其IC50值与凋亡率与K562细胞相比差异无显著性(P>0.05)。经10μmol.L-1PTL处理1 h,K562/ADR细胞内ROS增加;处理24 h,Bcl-2与Bax的比值降低、caspase-3、caspase-9酶源蛋白表达降低。用N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理细胞,能抑制细胞ROS水平升高和细胞凋亡。结论 PTL能诱导耐药白血病细胞凋亡,作用机制与其刺激细胞内ROS升高相关。     

孤啡肽逆转人白血病K562/ADM细胞耐药性的研究

目的 探讨孤啡肽对人白血病K562/ADM细胞对阿霉素耐药性的逆转作用.方法 测定孤啡肽的细胞毒性及其对K562/ADM细胞药物敏感性的影响,计算耐药逆转倍数.瑞士染色观察药物作用后K562/ADM细胞形态的改变;流式细胞仪检测阿霉素单用或与孤啡肽联用K562/ADM细胞凋亡百分率;DNA琼脂糖凝胶电泳观察孤啡肽与阿霉素联用后K562/ADM细胞内DNA的损伤程度.结果 非细胞毒性剂量的孤啡肽(10-7mol/L)作用于K562/ADM细胞时,对阿霉素耐药起到了部分逆转作用,使K562/ADM细胞的IC50由原来的(46.99±0.25)μg/ml降低至(23.11±0.29)μg/ml,其逆转倍数为2.03倍;孤啡肽(10-7mol/L)和阿霉素(20μg/ml)联合处理K562/ADM细胞48h,K562/ADM细胞呈典型的凋亡形态改变;细胞的凋亡率达到(18.73±3.90)%,明显高于两种药物在相同条件下单独作用的效果,P＜0.01;结论 孤啡肽能诱导K562/ADM细胞凋亡,从而能逆转K562/ADM细胞的耐药性,提高阿霉素的敏感性.     

青蒿素基于PI3K/AKT信号通路对人急性髓系白血病细胞凋亡的作用机制

目的分析青蒿素基于磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路对人急性髓系白血病(AML)细胞凋亡的作用机制。方法以44例AML患儿原代细胞及K562细胞株4株为研究样本,平均分为对照组、实验组(分别加入12.5、25.0、50.0μg/ml青蒿琥酯),细胞计数法观察72 h内细胞生长趋势,采用流式细胞术检测不同浓度青蒿琥酯对细胞凋亡的影响,免疫印迹法检测细胞凋亡相关蛋白(PI3K、AKT、P-AKT、Bcl-2、Bax、caspase-3、PTEN)的表达。结果 AML原代细胞、细胞株K562 24 h内细胞存活率≥80%,对照组AML原代细胞、细胞株K562 48～72 h细胞存活率仍≥70%,而实验组AML原代细胞、细胞株K562培养48 h细胞存活率均降至50%以下,且明显低于对照组(P<0.05);青蒿琥酯呈浓度依赖性诱导人AML原代细胞及K562细胞株凋亡,且25.0μg/ml组、50.0μg/ml组的细胞存活率低于12.5μg/ml组及对照组(P<0.05),25.0μg/ml组、50.0μg/ml组的细胞存活率比较差异无统计学意义(P>0.05)。培养48 h后,实验组原代细胞及K562细胞株的PI3K、P-AKT、Bcl-2均明显下调(P<0.05),而Bax、caspase-3、PTEN表达上调(P<0.05),且青蒿琥酯浓度为25.0μg/ml组各项指标变化最明显,AKT无明显变化(P>0.05)。结论青蒿素类衍生物青蒿琥酯可经PI3K/AKT信号通路调节其Bcl-2、Bax、caspase-3、PTEN等凋亡相关蛋白表达,促进人AML细胞凋亡,25μg/ml浓度时效果较佳。     

噻替派(Thiotepa)滴眼液对人癌细胞和正常细胞的细胞毒作用

目的 了解0.05%Thiotepa滴眼液对各种不同的人癌细胞和正常细胞生长的影响.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法进行体外细胞毒试验,测定Thiotepa滴眼液对人癌细胞和正常细胞的生长抑制作用,以半数抑制浓度(IC50值)进行评价.结果 Thiotepa滴眼液在50μg/ml～0.78μg/ml浓度下对人癌细胞Glc-82、K-562、Bel-7402、Hela和CNE2的IC50值依次为:22.7μg/ml、10.6μg/ml、15.3μg/ml、11.2μg/ml和9.6μg/ml.对人正常细胞Hk-293、ECV-304、HRPE、Fibro和小鼠3T3细胞的IC50值分别为:1.4μg/ml、12.5μg/ml、17.8μg/ml、36.6μg/ml和14.4μg/ml.结论 Thiotepa滴眼液对各种细胞有明显的生长抑制作用;0.05%Thiotepa滴眼液对各种人癌细胞和正常细胞均有强的细胞毒作用,且对人癌细胞无明显的选择性抑制作用.     

COX-2特异性抑制剂依托考昔对白血病化疗增效作用的体外研究

目的 研究COX-2抑制剂与化疗药物合用对白血病细胞株杀伤作用的影响.方法 改良MTT法检测Jurkat、K562、K562/A02白血病细胞株分别用化疗药物多柔比星、柔红霉素、长春新碱、阿糖胞苷、门冬酰胺酶、地塞米松诱导凋亡及联用COX-2特异性抑制剂依托考昔后IC50及药物抑制曲线的改变,金氏方程计算药物联用的增效作用.结果 Jurkat、K562及K562/AO2细胞株单独加依托考昔时,均未出现生长抑制,Jurkat联用依托考昔及多个浓度的多柔比星、柔红霉素、长春新碱或门冬酰胺时,均比化疗药单独使用时抑制率提高(Q≥1.15);联用依托考昔及地塞米松时抑制率降低,表现出拮抗作用(Q＜0.85);K562联用多个浓度的阿糖胞苷、多柔比星或柔红霉素时,表现出协同作用(Q≥1.15);K562/AO2联用依托考昔及多柔比星时,表现出协同作用(Q≥1.15).结论 COX-2特异性抑制剂依托考昔不能直接抑制白血病细胞,在体外化疗药物作用于白血病细胞株时,加依托考昔表现出增效作用.     

4-[4″-(2″,2″,6″,6″-四甲基-1″-哌啶氮氧自由基)氨基]-4′-去甲表鬼臼毒素对K562/ADM细胞的抑制作用

目的比较4-[4″-(2″,2″,6″,6″-四甲基-1″-哌啶氮氧自由基)氨基]-4′-去甲表鬼臼毒素(GP-7)对多药耐药人慢性粒细胞白血病K562的多柔比星耐药株细胞(K562/ADM细胞)的抑制作用是否优于依托泊苷。方法以依托泊苷和K562细胞为对照,用不同浓度GP-7处理K562/ADM细胞不同时间,MTT比色法测定细胞增殖,流式细胞仪测定细胞周期和细胞凋亡率,普通光学显微镜观察细胞凋亡形态,琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA凋亡性降解。结果8~128mol.L-1GP-7处理48h或64μmol.L-1GP-7处理24~72h,GP-7对K562/ADM细胞的增殖抑制呈剂量依赖性(r=0.947,P<0.05)和时间依赖性(r=0.999,P<0.01)。GP-7及依托泊苷对K562/ADM的IC50分别为(45.9±1.8)及(68.7±4.6)μmol.L-1;64μmol.L-1GP-7作用48h可使G2/M期细胞明显增多,相同情况下依托泊苷则使S期细胞明显增多;GP-7可引起K562/ADM和K562细胞凋亡,但其引起的K562/ADM和K562细胞凋亡率与依托泊苷无明显差异;GP-7可引起K562/ADM和K562细胞典型的凋亡形态学变化和DNA凋亡性降解,但GP-7引起的K562/ADM细胞DNA凋亡性降解弱于K562细胞;128及256μmol.L-1GP-7或依托泊苷处理K562/ADM和K562细胞48h,GP-7诱导DNA凋亡性降解的作用强于依托泊苷,但32和64μmol.L-1时作用则相反。结论GP-7可抑制多药耐药白血病细胞株K562/ADM的增殖,诱导细胞凋亡。GP-7抑制多药耐药白血病细胞株K562/ADM的作用优于依托泊苷。     

R-dl-型维拉帕米调低KBv200肿瘤细胞对长春新碱和多柔比星的多药抗药性

目的:研究R-型维拉帕米对多药耐药的降低作用及其急性动物毒性,并与消旋维拉帕米的相应结果作比较。方法:细胞毒性的测定用MTT法;细胞内多柔比星积累的测定用萤光分光光度计法。急性毒性试验用BALB/c小鼠腹腔注射法。结果:R-型维拉帕米部分调低KBv200细胞对长春新碱和多柔比星的耐药性,其调低效应与作用浓度和作用时间有关。1.25μmol·L~(-1)的R-型维拉帕米与长春新碱对细胞作用24h,能够显著增加KBv200细胞对长春新碱的敏感性。在增敏和增加细胞内多柔比星累积方面,R-型维拉帕米与消旋维拉帕米效果一样,但R-型维拉帕米的急性动物毒性明显低于消旋维拉帕米。结论:R-型维拉帕米1.25μmol·L~(-1)提高耐药肿瘤细胞对长春新碱和多柔比星的敏感性,增加对长春新碱敏感性所需的药物作用时间可缩短至24h。