眼镜王蛇(Ophaiophagus hannah Cantor)毒的分离及毒性组分的研究

眼镜王蛇毒用CM-C11柱层析,醋酸铵缓冲液洗脱,分出15个蛋白组分,其中组分Ⅷ、Ⅸ、Ⅻ和ⅩⅢ为毒性较大的致死组分。实验证明眼镜王蛇全毒及四个毒性组分都不具有心脏毒及突触前神经毒活性。它们阻断小鸡颈二腹肌神经肌标本对间接刺激及对外源性乙酰胆碱的反应;神经肌传递阻滞后,标本对直接刺激及对氯化钾的反应不受影响。组分Ⅸ、Ⅻ和ⅩⅢ对神经肌传递的阻滞容易逆转,组分Ⅷ则较难逆转。这四个毒性组分均为突触后神经毒,其毒力依次为Ⅷ>Ⅸ>Ⅻ>ⅩⅢ,眼镜王蛇毒的主要毒性成分是突触后神经毒。     

金环蛇(Bungarus fasciatus)蛇毒的分离及其毒性组分的药理研究

金环蛇毒用羧甲基纤维素柱层析分离出17个蛋白组分,其中5个组分是毒性较大的致死成分。在这5个组分中,Ⅺ、Ⅻ、ⅩⅤ是心脏毒,ⅩⅢ、ⅩⅣ是神经毒。心脏毒组分Ⅺ、ⅫⅩⅤ使离体大鼠心脏挛缩,心跳停止于收缩期;使小鸡离体颈二腹肌挛缩,最后致痉挛性麻痹;对兔眼结合膜有局部刺激作用,使结合膜充血水肿。组分ⅩⅤ还具有直接溶血作用。神经毒组分ⅩⅢ阻断大鼠、小鸡、青蛙神经肌肉标本的突触传递,标本对乙酰胆碱的反应消失,对直接刺激以及对高浓度氯化钾的反应无减少,神经末梢乙酰胆碱的释放最无显著改变;使蛙腹直肌乙酰胆碱量效曲线平行右移,新斯的明可以对抗这个作用。组分ⅩⅣ的作用与组分ⅩⅢ相似。实验提示,组分ⅩⅢ、ⅩⅣ是作用于终板后膜的神经毒。     

福建眼镜王蛇蛇毒柱层析分离及生化药理特性

应用CM—Sephadex C—50离子交换柱层析分离福建眼镜王蛇毒,获得17个蛋白峰。该蛇毒具有磷脂酶A_2、蛋白水解酶、精氨酸酯酶、L-氨基酸氧化酶、胆碱酯酶、磷酸单酯酶和磷酸二酯酶等酶活力。组分Ⅰ,Ⅳ对ADP诱导的兔血小板聚集功能有抑制作用,组分Ⅰ还有降压作用,组分Ⅳ则有心脏毒性作用。Ⅵ,Ⅶ,Ⅷ,Ⅸ,Ⅹ,Ⅺ和Ⅻ等7个组分具突触后神经毒活性,组分ⅩⅫ呈现局部出血效应,粗毒及各组分对家兔血浆的复钙时间和凝血酶时间无影响。     

眼镜王蛇毒组分Ⅶ-2的纯化及其毒性鉴定

眼镜王蛇毒用CM-Sephadex C-25柱层析、醋酸铵缓冲液洗脱,获得20个蛋白组分。Ⅷ峰经CM-C 32重层析后获得组分Ⅷ-1与Ⅷ-2,组分Ⅷ-2经Sephadex G-50滤过后呈单一吸收峰。用三种不同类型的聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定组分Ⅷ-2为电泳纯蛋白。分子量为7,827;等电点约为pH 7.6。小鼠ip LD₅₀为0.155 mg/kg(0.146～0.165 mg/kg)。用离体小鸡颈二腹肌标本表明组分Ⅷ-2是属于突触后神经毒,其阻断作用在反复冲冼6小时内是相当难逆转的。从氨基酸组成测定结果的分析、分子量、双向免疫扩散、LD₅₀的比较以及阻断神经肌肉传递的难逆转性,可推测眼镜王蛇毒组分Ⅷ-2是与α-银环蛇毒素相似的难逆转性长链突触后神经毒素。     

金环蛇毒的分离及组分Ⅸ的初步研究

从金环蛇毒中分离到一个神经毒—组分Ⅸ。该组分阻断小鸡颈二腹肌神经肌肉接头传递;阻断标本对乙酰胆碱的反应,标本对直接电刺激以及对高浓度钾离子的反应性仍然存在;组分Ⅸ使蛙缝匠肌终板电位,微终板电位振幅逐渐减小,最后完全消失;但不影响微终板电位的发放频率,也不影响肌纤维的静息膜电位。实验表明组分Ⅸ是作用于突触后膜的神经毒。     

金环蛇毒的分离及组分Ⅸ的初步研究

从金环蛇毒中分离到一个神经毒—组分Ⅸ。该组分阻断小鸡颈二腹肌神经肌肉接头传递;阻断标本对乙酰胆碱的反应,标本对直接电刺激以及对高浓度钾离子的反应性仍然存在;组分Ⅸ使蛙缝匠肌终板电位,微终板电位振幅逐渐减小,最后完全消失;但不影响微终板电位的发放频率,也不影响肌纤维的静息膜电位。实验表明组分Ⅸ是作用于突触后膜的神经毒。     

金环蛇神经毒组分Ⅸ的研究

从金环蛇毒中分离得到一个作用于突触后膜的神经毒——组分Ⅸ。与通常的蛇毒突触后神经毒不同,组分Ⅸ对蛙腹直肌的乙酰胆碱量效曲线呈现非竞争性抑制。在有新斯的明存在时,高浓度乙酰胆碱使腹直肌产生相反的效应。在实验用浓度下,组分Ⅸ对~(125)Ⅱ标记的眼镜蛇神经毒与电鳐电器官膜碎片的结合无显著影响。应用电压固定技术的研究表明,组分Ⅸ能够抑制终板电流,最后使其完全消失,且能缩短终板电流的半衰期。增加衰减速率常数α值;对终板电流的平衡电位无显著影响.实验提示组分Ⅸ是通过乙酰胆碱受体以外的作用方式产生阻断作用的,作用部位可能在终板离子通道。     

金环蛇神经毒组分Ⅸ的研究

从金环蛇毒中分离得到一个作用于突触后膜的神经毒——组分Ⅸ。与通常的蛇毒突触后神经毒不同,组分Ⅸ对蛙腹直肌的乙酰胆碱量效曲线呈现非竞争性抑制。在有新斯的明存在时,高浓度乙酰胆碱使腹直肌产生相反的效应。在实验用浓度下,组分Ⅸ对¹²⁵Ⅱ标记的眼镜蛇神经毒与电鳐电器官膜碎片的结合无显著影响。应用电压固定技术的研究表明,组分Ⅸ能够抑制终板电流,最后使其完全消失,且能缩短终板电流的半衰期。增加衰减速率常数α值;对终板电流的平衡电位无显著影响.实验提示组分Ⅸ是通过乙酰胆碱受体以外的作用方式产生阻断作用的,作用部位可能在终板离子通道。     

舟山眼镜蛇毒神经毒素的分离纯化及镇痛作用研究

目的从舟山眼镜蛇毒中分离纯化神经毒素,并测定其部分理化性质及镇痛活性。方法应用SP-Sephadex C-50离子交换色谱法分离眼镜蛇毒粗毒,用Sephadex G-50凝胶过滤色谱、CM-Sephadex C-25离子交换色谱纯化神经毒素;SDS-PAGE(Tris-Tricine系统)鉴定纯度;用Meier方法测定毒性;用热板法观察神经毒素的镇痛作用。结果应用SP-Sephadex C-50离子交换柱层析,从舟山眼镜蛇毒中分离得到14个蛋白峰,其中6个组分(NNAV-Ⅶ ~Ⅻ)经鉴定为含有神经毒素组分,将神经毒活性最强的组分XI经Sephadex G-50、CM-Sephadex C-25纯化得神经毒素纯品NTⅪ。该纯品分子量12.3kD,小白鼠静脉注射和腹腔注射的LD50分别为1.9875、2.2217 mg·kg-1。NTXI能显著提高小鼠对热板刺激的痛阈。腹腔注射0.2mg·kg-1NTXI可使小鼠的热板痛阈提高84.35%。NTXI的镇痛作用具有时效性,给药后2h起效,4h作用达峰值。结论舟山眼镜蛇毒中分离得到一个神经毒素纯品NTⅪ,具有镇痛作用。     

卵黄抗体用于蛇毒抗原检测的初步研究

目的在常规ELISA检测中,以卵黄抗体取代哺乳动物来源的IgG类抗体,以探讨卵黄抗体应用于蛇毒检测的可行性。方法以甲醛减毒的眼镜王蛇毒抗原免疫莱航母鸡,制备抗眼镜王蛇毒抗体;采用过碘酸钠法对特异卵黄抗体进行酶标;将卵黄抗体及相应酶标抗体应用于常规ELISA中,对国内常见蛇毒样品抗原(包括眼镜王蛇毒、眼镜蛇毒、金环蛇毒、银环蛇毒、五步蛇毒及广东园斑蝰蛇毒)进行检测,并进行灵敏度、精确度、特异性及交叉反应等分析。结果检测的灵敏度可达32μg.L-1,并且眼镜王蛇毒抗原浓度在32~750μg.L-1的范围内,线性关系较好(r=0.963);初步应用表明卵黄抗体对眼镜王蛇毒具有较高的特异性,与蝰蛇科的五步蛇毒、园斑蝰蛇毒无交叉反应,与眼镜蛇科的金环及银环蛇毒仅在高剂量(剂量大于500μg.L-1)时存在轻度交叉反应,不干扰实验检测,但与眼镜蛇毒之间交叉反应明显,干扰实验检测;应用本方法对低(100μg.L-1)、中(300μg.L-1)、高(1 000μg.L-1)不同浓度的眼镜王蛇毒样品检测,结果平均板内变异系数均在1%~3%之内,板间变异系数在8%以内。结论特异的卵黄抗体应用于微量蛇毒检测研究是可行的,具有灵敏度高、特异性较强等优点。该研究将为蛇伤诊断试剂盒的研制提供相应的理论依据。     

穆坪马兜铃化学成分的研究

自穆坪马兜铃(Aristolochia moupinensis Franch)根、茎中分得十三个化合物,其中化合物Ⅰ～Ⅻ经鉴定分別为马兜铃酸Ⅰ(aristolochic acid Ⅰ)(Ⅰ),尿囊素(allantoin)(Ⅱ),紫丁香酸(syringic acid)(Ⅲ),香豆酸(P-coumaric acid)(Ⅳ),马兜铃酸Ⅳ(aristolochic acid Ⅳ)(Ⅴ),β-谷甾醇(Ⅵ),木兰碱(magnoflorine)(Ⅶ),马兜铃酸Ⅳ甲醚aristolochic acid Ⅳmethyl ether(Ⅵ),棕榈酸(Ⅸ),马兜铃酸Ⅱ(aristolochic acid Ⅱ)(Ⅹ),N(Phydroxyphenethy1)P-coumaramide(Ⅺ),马兜铃酸Ⅳ甲醚甲酯(aristolochic acid Ⅳmethyl ether methyl ester)(Ⅻ),化合物ⅩⅢ为新化合物,经光谱分析和化学合成等方法证明其结构为N(P-hydroxyphenethyl)-ferulamide,命名为穆坪马兜铃酰胺(moupinamide)。初步药理试验表明穆坪马兜铃酰胺体外有抑制血小板聚集和影响血小板内前列腺素合成的作用。     

东阳元胡块茎中的生物碱的化学研究

从浙江省东阳元胡(Corydalis turtschaninovii Bess.f.yanhusuo Y.H.Chou et C.C.Hsü)的块茎中分离了15个生物碱。通过理化常数测定,光谱分析及衍生物制备等方法鉴定了结构,其中9个生物碱文献已报道。(+)-紫堇碱(Ⅰ),(±)-四氢巴马亭(Ⅱ),(—)-四氢黄连碱(Ⅲ),(—)-四氢非洲防己胺(Ⅳ),(+)-紫堇球碱(Ⅴ),去氢紫茧碱(Ⅵ),(+)-海罂粟碱(Ⅶ)普鲁托品(Ⅷ),α-别隐品碱(Ⅸ),5个为首次从该植物中得到的已知化合物(—)-四氢小檗碱(Ⅹ)巴马亭(Ⅺ),非洲防己胺(Ⅻ),(+)-N-甲基樟苍碱(ⅩⅢ)去氢海罂粟碱(ⅩⅣ),1个为新生物碱,暂命名为元胡宁(XV yuanhunine).     

知母化学成分的研究

从知母根茎乙醇提取物中分离得到20个化合物，采用光谱法和化学方法鉴定其中15个化合物的结构；分别为二十九烷醇（Ⅰ）、二十八烷酸混合物（Ⅱ）、β-谷甾醇（Ⅲ）、胡萝卜甙（Ⅳ）、菝葜皂甙元（Ⅴ）、马尔可皂甙元（Ⅵ）、知母皂甙AⅢ（Ⅶ）、知母皂甙BⅠ（Ⅷ）、知母皂甙BⅢ（Ⅸ）、2，6，4＇-三羟基-4-甲氧基苯酰酮（Ⅹ）、宝藿甙Ⅰ（Ⅺ）、淫羊藿甙-Ⅰ（Ⅻ）、芒果甙（ⅩⅢ）、7-O-萄葡糖基芒果甙（ⅩⅣ）、知母双糖（ⅩⅤ）．其中化合物Ⅷ为新的天然产物，化合物Ⅰ，Ⅺ，Ⅻ，ⅩⅣ为首次从知母中分得的已知化合物．     

计划生育药物的合成——Ⅲ.dl-前列腺素F2α的定向合成

本文报告dl-PGF_2α的定向合成。从环戊二烯出发,经四步反应先合成得环戊烯二醇(Ⅸ),然后用40%过醋酸立体选择性地引入一个环氧而得双羟环氧物(Ⅹ),此物用辛炔-1-叔丁醚-3的二乙基铝(Ⅺ_c)开裂氧环,即可一步引入前列腺素分子中所需的一个C₁₂-八碳醇侧链,得开环物(Ⅻ),侧链在五元环上的位置通过与Corey合成路线中的中问体(ⅩⅩⅤ)相联系得到证明。开环物(Ⅻ)用MnO₂氧化时,主要得内酯(ⅩⅢ),然后经(i-Bu)₂AlH还原、Wittig反应引入羧酸侧链、再用三氟乙酸水解15-叔丁醚基,即得13-去氢PGF_2α,后者用Na-NH₃-t-BuOH进行炔键的选择性还原,用硅胶柱进行分离,可得dl-PGF_2α和dl-15-epi-PGF_2α。     

莲子心生物碱的研究——Ⅳ.莲心碱的全合成

本文报导了莲心碱(Ⅰ)全合成的研究。(1)合成了1-(3′-溴-4′-苄氧基)苄基-2-甲基-6,7-二甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉(Ⅷ)和1-(4′-苄氧基)苄基-2-甲基-6-甲氧基7-羟基-1,2,3,4-四氢异喹啉(XV).(2)1-(3′-溴-4′-苄氧基)苄基-6,7-二甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉(Ⅵ)和1-(4′-苄氧基)苄基-6-甲氧基-7-乙酰氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉(ⅩⅢ)借d-和1-DPT-酒石酸各自拆分为其对映体。D-(-)-Ⅵ和L-(+)-Ⅵ以甲酸和甲醛甲基化分别生成D-(-)-Ⅷ和L-(+)-Ⅷ。D-(+)-;ⅩⅢ和L-(-)-ⅩⅢ经N-甲基化后再进行水解卽得D-(-)-ⅩⅤ和L-(+)+ⅩⅤ。(3)D-(-)-Ⅷ和D-(-)-ⅩⅤ在吡啶中有铜粉和碳酸钾存在下进行Ullmann反应,反应物经氧化鋁柱层析可分得一油状物,此油状物经盐酸水解得黄色无定形固体,后者与过氯酸生成过氯酸盐结晶,其理化性质均与天然莲心碱过氯酸盐相同。(±)-Ⅷ和(±)-ⅩⅤ在相似的条件下缩合则生成(±)-莲心碱。     

大丁草中抗菌活性成分的研究

从菊科植物大丁草Gerbera anandvia(L.)Sch Bip.(Leibnitzia anandria(L.)Nakai)全草中分离出十二种化合物。经化学反应及光谱分析鉴定、确定了其中九个化合物的结构。共中晶Ⅷ(大丁纤维二糖甙,5-methyl-coumarin-4-cellobioside)和晶Ⅸ(大丁龙胆二糖甙,5-methyl-coumarin-4-gentiobioside)为二个新的天然产物。其它七种化合物为大丁双香豆特(Ⅰ)、大丁甙元(Ⅱ)、琥珀酸(Ⅲ)、大丁甙(Ⅴ)、木犀草素7-β-D-葡葡糖甙(Ⅵ)、蒲公英赛醇(Ⅺ)和β-谷甾醇(Ⅻ)。其中晶Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅷ和Ⅸ显示了不同程度的抗菌活性。     

肿瘤的化学治療 ⅩⅥ.γ-{对-[双-(2-氯乙基)-氨甲基)-苯基}-丁酸和4-{对-[双-(2-氯乙基)-氨甲基]-苯基}-丁醇的合成

自γ-(对氯甲基-苯基)-丁酸(Ⅵ)开始,经过四步反应合成了γ-{对-[双-(2-氯乙基)-氨甲基]-苯基}-丁酸盐酸盐(Ⅳ),此外还合成了化合物(Ⅳ)的甲酯(Ⅺ)和乙酯(Ⅻ)。后者以氢化锂铝还原,生成4-对(-[双-(2-氯乙基)-氨甲基]-苯基)-丁醇盐酸盐(Ⅴ)。上述化合物对肉瘤180无明显的抑制作用。