实时FQ-PCR与时间分辨荧光免疫分析法检测乙型肝炎分析

目的：探讨实时荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）定量检测乙型肝炎病毒（HBV—DNA）与时间分辨荧光免疫分析法对乙型肝炎免疫标志物（HBV—M）检测对乙型肝炎实验室诊断的敏感性。方法：采用两种方法分别对800例本院传染科住院及门诊可疑病人血清标本进行检测。结果：用FQ—PCR检测800例。HBV—DNA阳性例数602，阳性率87．81％，用时间分辨荧光免疫分析法检测800例，HBV—M的阳性例数477，阳性率59．63％，通过χ^2检检，χ^2=2．98，P〈0．05。结论：在乙型肝炎的实验室诊断中，FQ—PCR检测乙型肝炎病毒HBV—DNA更优于时间分辨荧光免疫分析法检测乙型肝炎免疫标志物HBV—M。     

高载量血清乙肝病毒DNA的乙肝携带者精浆和精子感染乙肝病毒的特征

目的探讨高载量血清乙肝病毒核酸(HBV DNA)的乙肝携带者精浆和精子感染HBV的特征.方法选择男性乙肝大三阳携带者61例,根据血清HBV DNA数量级分为108组和107组,采用荧光定量PCR (FQ-PCR)法测定其精浆中的HBV DNA,用PCR法制备地高辛(Dig)标记的HBV DNA探针通过荧光原位杂交(FISH)技术检测精子中的HBV DNA.结果108组和107组精浆HBV DNA的阳性率分别为90.3%和40.0%,差异有统计学意义(P<0.01);与HBV DNA探针杂交后精子细胞可见清晰的绿色荧光信号,108组和107组精子标本HBV DNA的阳性率分别为25.8%和16.7%,差异无统计学意义(P>0.05);两组精浆HBV DNA的阳性率均明显高于精子标本HBV DNA的阳性率(均P<0.05).结论高载量血清HBV DNA的乙肝大三阳携带者的精浆HBV DNA阳性率与其血清HBV DNA载量密切相关,其精子HBV DNA的阳性率不受血清HBV DNA载量影响,但明显低于精浆HBV DNA的阳性率.     

时间分辨荧光免疫法定量检测HBV标志物的临床意义

目的：定量检测乙型肝炎血清标志物(HBVM)，了解其与荧光定量PCR(FQ-PCR)检测HBV DNA的关系及其临床意义。方法：采用时间分辨荧光免疫(TRF)分析法和FQ-PCR技术，分别检测大三阳和小三阳共690份乙型肝炎血清HBV DNA和HBVM含量。结果：在不同浓度HBeAg和HBeAb的标本中有不同比例的不同浓度HBV DNA的检出率，显示出e系统和HBV DNA在定量检测上有较好的一致性。结论：TRF是目前较好的定量检测HBVM的新技术，在乙肝患者传染性大小判断、疗效观察及预后判断等方面同FQ-PCR-样也将具有较大的临床指导价值。     

1 252例乙肝血清标志物与HBV-DNA检测结果分析

目的：乙肝血清标志物（HBV—M）和HBV—DNA检测结果分析。方法：对1252例患者HBV—M用ELISA法检测，HBV—DNA用荧光定量PCR法检测。结果：HBV—M多种模式HBV—DNA都有一定的检出率为3．7％～97．7％，乙肝病毒每毫升拷贝数多少不等。结论：HBV—M检测同时做HBV—DNA检测才能为临床提供准确的乙肝感染、复制和传染性判断以及指导治疗和观察疗效。     

生物素探针分子杂交检测92例血清乙肝病毒DNA的结果分析

血清HBV—DNA的检测是目前诊断乙型肝炎,判断HBV复制和患者肝脏病变和予后的最重要指标之一。1992年6月,我们引进北京医科大学肝病研究所研制推出的生物素探针分子杂交实验(Bio—DNA),对92例不同人群乙肝病毒核酸(HBV—DNA)进行了检测,现将结果报告如下:     

120例HBsAg阳性病毒性肝炎病毒复制状态的观察

HBsAg 是 HBV 感染的标志物,为了解各类型HBsAg 阳性病毒性肝炎的病毒复制状态,我科对120例 HBsAg 阳性病毒性肝炎的血清,采用32P 标记的 HBV—DNA 探针,作斑点法分子杂交试验检测血清 HBV—DNA;同时用 ELISA 法检测血清     

HBeAg阳性患者血清中Pre-S1抗原与C基因启动子变异的检测

目的 研究HBV C基因启动子(Basic Core Promoter，BCP)与前S1(Pre-S1)抗原基因变异的关系，以及BCP基因变异与HBV DNA含量的关系。方法 分别对94例HBeAg阳性乙肝患者进行酶联免疫吸附法(ELISA)检测Pre—S1抗原，PCR荧光定量技术检测HBV DNA，PCR—微板核酸杂交ELISA技术检测BCP中nt1762A—T和nt 1764G—A的基因突变。结果 在94例HBeAg阳性乙肝患者血清检测中，Pre—S1抗原阳性有65例，其中BCP阳性51例，BCP变异率为78．5％；Pre—S1抗原阴性有29例，其中BCP阳性23例，BCP变异率为79．3％。74例BCP基因突变血清中，55例(74．3％)的HBV DNA拷贝数超过了10^5 CPS／ml；而在20例非BCP基因突变血清中，只有6例(30％)的HBV DNA拷贝数超过了10^5CPS／ml。结论 e抗原阳性乙肝患者中，Pre—S1抗原的存在与BCP的变异并无相关性，但BCP基因变异与HBV DNA拷贝数则成正相关，它们都可反映乙肝病情的严重程度及其愈后、转归。     

HBV携带者血清和白带HBV-DNA FQ-PCR检测分析

目的了解乙型肝炎病毒HBV携带者血清与白带中HBV—DNA含量的关系及其意义。方法选择经血清学检测诊断为女性HBV携带者867例，采用荧光定量聚合酶链反应（FQ—Pen）技术测定其白带中和血清HBV—DVA含量，并对所有检测指标进行相关性分析。结果867例携带HBV女性中，HbsAg、HbeAg、HbcAb三大阳者的血清和白带中HBV—DNA的阳性检出率均为100％；HbsAg、HbeAb、HbcAb三小阳组阳性率分别为85．6％和84．3％；HB．sAg、HBsAb两组的阳性率分别为86．6％和83，7％，白带HBV—DNA含量与血清HBV—DNA含量呈正相关（r=0，896），且白带HBV—DNA含量低于血清含量近10^1。蛄论白带与血清中HBV—DNA含量呈正相关。血清HBV—DVA阳性的育龄女性应作白带HBV—DVA检测，以对其阳性者采取防治措施，降低HBV母婴播率具有重要意义重大。     

荧光定量PCR和ELISA检测乙肝病毒的应用比较

目的　探讨荧光定量PCR检测HBV—DNA的应用价值。　方法　从 2 92 0份用ELISA检测乙肝 5项的体检血清标本中 ,抽取 2 88份HBsAg阳性标本及 10 0份全阴标本 ,进行荧光定量聚合酶链式反应 (FQ—PCR)HBV—DNA定量分析。　结果　经FQ—PCR检测 ,80份HBsAg、HBeAg、HBcAb都阳性的标本 ,HBV—DNA阳性率为 10 0 % ( 80 /80 ) ,平均HBV—DNA拷贝数为 2 2× 10 8cp/ml ;164份HBsAg、HbeAb、HBcAb都阳性的标本 ,HBV—DNA阳性率为79 3 % ( 13 0 /164 ) ,平均HBV—DNA拷贝数为 1 5× 10 6cp/ml;12份HBsAg单项阳性的标本 ,HBV—DNA的阳性率为83 3 % ( 10 /12 ) ,平均HBV—DNA拷贝数为 1 6× 10 5cp/ml;10 0份HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb都阴性的标本 ,HBV—DNA的阳性率为 2 % ( 2 /10 0 ) ,平均HBV—DNA拷贝数为 4 5× 10 5cp/ml。　结论　FQ—PCR可以检测HBV的感染和复制情况 ,对准确报告HBV感染 ,指导其选择治疗方案和观察疗效具有重要的临床意义     

乙肝患者血清中HBV C基因启动子变异与病毒含量及前S1抗原的关系

目的研究HBVc基因启动子(Basic Core Promoter，BCP)基因变异与前S1(Pre—S1)抗原的关系，以及BCP基因变异与HBV DNA含量的关系。方法94例HBeAg阳性乙肝患者，用PCR-微板核酸杂交ELISA技术检测BCP中nt1762A—T和nt 1764G—A的基因突变，酶联免疫吸附分析(ELISA)检测Pre—S1抗原，PCR荧光定量技术检测HBVDNA。结果在94例HBeAg阳性乙肝患者血清检测中，Pre—S1抗原阳性者65例，其中BCP阳性51例，BCP变异率为78．5％；Pre—S1抗原阴性者29例，其中BCP阳性23例，BCP变异率为79．3％。BCP基因突变血清中HBV DNA拷贝数明显高于非BCP基因突变血清中HBV含量。结论在e抗原阳性乙肝患者中，Pre—S1抗原的存在与BCP的变异无相关性，但BCP基因变异与HBV DNA拷贝数明显相关，可反映乙肝病情的严重程度及其愈后、转归。     

HBV-DNA与HBVM结果分析及临床应用评价

本研究采用荧光定量PCR方法，检测了342例不同HBV感染状况的患者血清HBV—DNA含量，旨在探讨HBV—DNA含量及其与乙肝病毒标志物(HBVM)在反映体内乙肝病毒(HBV)复制方面存在的差异，进一步评价HBVM的临床意义。     

两种HBV-DNA定量测定方法的比较

目的考察实时荧光PCR定量法(FQ-PCR)检测乙型肝炎病毒DNA的准确性。方法通过对 56份血清进行HBV—DNA检测,其中包括一个10倍倍比稀释系列6份、阴性血清12份和阳性血清38份。比较两种方法的准确性及临床标本符合情况。结果微板核酸杂交定量法和实时荧光定量法的线性回归系统分别为0．977 和0．999。实时荧光定量法所检测的不同含量的样本批内变异系数均低于微板核酸杂交定量法。结论实时荧光定量法具有较好的灵敏度、特异性、重复性和线性,与微板核酸杂交定量法有良好的相关性。     

乙型肝炎病毒（HBV）荧光定量检测与免疫学标志物检测的比较与分析

目的了解马鞍山地区HBV-DNA荧光定量检测与HBV血清标志物检测结果之间的关系。方法运用荧光定量PCR（FQ-PCR）检测患者血清中的HBV—DNA,同时运用ELISA法检测HBV血清标志物,并对结果进行对比研究。结果HBsAg（＋）HBeAg（＋）HBcAb（＋）组患者血清HBV-DNA检出率最高为95.16％,HBsAg（＋）HBeAg（-）HBcAg（＋）组患者血清HBV-DNA检出率为41.46％,HBsAg（＋）HBeAb（＋）HBcAb（＋）组患者血清HBV—DNA检出率为24.52％,HBsAg（＋）HBeAg（＋）HBcAb（＋）组HBV—DNA检出率显著高于其它各组（P〈0.05）。结论HBV—DNA检测水平与血清学标志物HBeAg高度相关,两种方法联合检测对临床诊断与抗病毒药物治疗具有重要指导意义。     

HBV感染者血清LHBs水平与HBV-DNA含量的关系

目的通过对HBV感染者血清中LHBs水平与HBV—DNA拷贝数的相关分析，探讨LHBs作为HBV复制指标的临床意义。方法340份HBV感染血清LHBs和HBV—M分别采用酶联免疫吸附试验（ELISA）和时间分辨免疫荧光分析法检测，HBV—DNA定量检测采用荧光定量PCR法。结果340份HBV感染血清中，在HBV—DNA拷贝数为〈10^3、10^3-4、10^5-6和〉10^7拷贝／ml组别中，LHBs水平分别为（110．88&#177;6．74）、（18．72&#177;10．03）、（34．99&#177;20．05）和（127．57&#177;33．81）ng／ml，两者具有相关性，相关系数r=0．903（P=0．000）；LHBs的吸光度（OD值）和DNA拷贝数随着拉米夫定治疗时间延长而下降；148份HBeAg阳性血清中，HBV—DNA、LHBs阳性率分别为99．32％、93．24％：192份HBeAg阴性血清中，HBV—DNA、LHBs阳性率分别为68．75％、65．10％，两者差异均无统计学意义（均P〉0．05）。结论血清中LHBs水平能反映HBV感染者体内HBV复制程度，可作为判断HBV复制的血清学指标之一。     

在HBsAg携带者外周血白细胞中检测HBV-DNA(摘要)

利用斑点杂交法检测了HBsAg携带者(携带史6～12个月以上)的血清31份。血清中HBV—DNA阳性12例,其中白细胞中HBV—DNA阳性2例,均为游离型,EcoRI酶切或不酶切的都在3.2kb出现清晰杂交显影带。血清HBsAg阴性的白细胞DNA中均未检出HBV—DNA。用Sou—thern转移法重复2次,自制电转移器重复1次,结果都相同。     

HBeAg阳性与HBV DNA关系探讨

目的:了解乙肝血清学标志物HBeAg与HBV DNA水平的临床关系。方法:对100例用时间分辨免疫荧光法筛选出的100例HBeAg阳性的乙肝患者的血清样本,用荧光定量PCR(FQ-PCR)法进行检测,并对结果进行分析。结果:100例HBeAg阳性的血清样本中有97例HBV DNA检测阳性,阳性率为97.0%。100例中有57例(占57.0%)HBV DNA为(1~9)×10~7copies/ml,38例(38.0%)为(1~9)×10~4copies/ml,2例(2.0%)为(1~9)×10~3copies/ml,3例(3.0%)未检测到。结论:HBeAg与HBV DNA的检测都能反映乙肝病毒在人体内复制活跃的程度。     

血清乙肝病毒外膜大蛋白检测在乙肝诊断治疗中的应用

目的通过检测乙肝病毒患者血清中乙肝病毒外膜大蛋白（HBV—LP）、HBV—DNA、乙肝前Sl蛋白（PreSlAg）以及乙肝两对半（HBVM）,探讨HBV—LP与HBV—DNA、HBeAg、PreSlAg的关系及其在临床诊断、治疗中的应用价值。方法共检测174例乙肝病毒患者血清标本,HBV—LP、PreSlAg以及HBVM采用ELISA法进行检测,采用实时荧光定量PCR方法检测HRV—DNA。结果在乙肝病毒感染者血清中,HBV—LP、HBV—DNA和PreSlAg的阳性率分别为83．3％、78．2％和65．5％,前两者与后者比较有统计学意义（P〈0．05）;随HBV—DNA拷贝数的增加,HBV—LP与PreSlAg的阳性率随着增加,同时HBV—LP吸光度OD值也随着增加。对HBeAg阴性的血清,HBV—LP的阳性率（79．1％）明显高于IreSlAg的阳性率（65．6％）（P〈0．05）。结论HBV—LP与HBV—DNA有良好的正相关性,HBV—LP与HBV—DNA的符合率高于PreSlAg,HBV—LP检测可以作为反映乙肝患者病毒复制的血清免疫学指标,也可作为判断HBV感染者体内病毒复制程度的可靠指标。     

检测慢乙肝病人外周血HBV DNA含量的临床意义

目的研究荧光定量PCR法检测慢性乙型肝炎病人血清HBV DNA含量的临床意义。方法血清HBV DNA定量检测采用荧光PCR法（FQ—PCR）；采用免疫组化ABC法标记相应肝组织中aBcAg，研究二者之间的关系。结果血清HBV DNA含量较低组（A、B组），肝组织中aacAg的表达呈阴性或少数阳性；而血清HBV DNA含量较高组（C、D组），肝组织HBcAg表达多数呈阳性或强阳性，随着血清HBV DNA含量的升高肝组织HBcAg表达强度和范围也随之增加。结论血清HBV DNA定量检测能较好地反映乙肝病毒在体内的复制状况。     

乙肝患者血清HBV外膜大蛋白与HBV DNA检测的关系及意义

目的：通过对乙型肝炎（简称乙肝）患者血清乙型肝炎病毒外膜大蛋白（HBV—LP）和HBV DNA的检测,探讨二者在判断乙肝病情和HBV复制情况时的相关性及其在临床上的意义。方法：采用荧光定量PCR方法对238份乙肝患者血清HBV DNA进行检测,采用酶联免疫吸附（ELISA）试验,对上述标本进行HBV—LP和HBV血清免疫学标志物（HBV—M）模式的检测。结果：HBV—LP检出度与HBV DNA的检出度差异有统计学意义（P〈0．05）,不同HBV—M模式的HBV DNA与HBV—LP的检出结果差异有统计学意义（P〈0．05）,但HBV DNA拷贝数与HBV—LP的表达相关性差异有统计学意义（r=0．677,P〈0．05）。结论：血清中HBV—LP的含量与HBV DNA的拷贝数具有较好的相关性,但HBV—LP尚不能完全代替HBV DNA的检测来反映HBV复制情况。     

乙型肝炎病毒DNA定性检测与血清五项指标的相关性研究

目的：了解乙型肝炎病毒感染者HBV—DNA定性检测与血清五项指标的关系。方法：运用荧光定量PCR基因检测方法检测2315例乙型肝炎病毒感染者的HBV—DNA;运用ELISA法检测血清乙型肝炎五项指标。结果：在2315例乙型肝炎病毒感染者中男性多于女性;汉族多于其他少数民族：小于18岁较大于18岁人群eAg＋分布较多,且HBV—DNA阳性比例高：相反大于18岁人群HBeAg-分布较多,且HBV—DNA阴性比例高P=0．005,有统计学意义。结论：血清HBeAg与HBV—DNA的复制及机体的免疫功能可能存在相关性。