冷冻消融对正常猪各级支气管的影响

目的 通过观察各级支气管的病理变化,探讨氩氦刀冷冻消融对支气管的影响,为临床治疗提供实验依据.方法 6只健康家猪分为2组,进行经皮穿刺正常肺组织氩氦刀冷冻消融.分别于消融后3天(A组)、28天(B组)各宰杀3只,观察冷冻消融后消融区形态及大小和各级支气管的病理表现.结果 (1)A组活检冷冻损伤区最大纵径、最大横径0大于消融后即刻冷冻损伤区最大纵径、最大横径(纵径:t=9.789,P=0.000;横径:t=3.253,P=0.023);B组活检消融损伤区最大纵径、最大横径小于A组活检消融损伤区最大纵径、最大横径(纵径:t=7.227,P=0.000;横径:t=6.006,P=0.000).(2)随着支气管腔的变小,冷冻对支气管的损伤加重;对主支气管、二级支气管的损伤较轻.(3)主支气管、二级支气管消融后28 d恢复较好.结论 CT引导下经皮穿刺氩氦刀冷冻消融对主支气管、二级支气管及大血管影响较小,是一种可以耐受、安全的肺部肿瘤微创治疗方法之一.     

高频彩色多普勒超声在裸鼠前列腺种植肿瘤中的应用

目的探索高频彩色多普勒超声与实际游标卡尺测量肿瘤的相关性。方法将0.10 mL 2×106DU145细胞悬液注射到裸鼠前列腺包膜下。细胞注射后第2周至第5周使用高频彩色多普勒超声测量裸鼠肿瘤横径与纵径。麻醉状态下解剖裸鼠,游离肿瘤,游标卡尺测量肿瘤横径与纵径。肿瘤放入1.3 mol.L-1甲醛中固定,HE染色。结果高频彩色多普勒超声测量的横径与使用游标卡尺测量的横径相比,Pearson与Spearm an相关系数分别是0.996(P<0.001)与0.964(P<0.001);高频彩色多普勒超声测量的横径与使用游标卡尺测量的纵径相比,Pearson与Spearm an相关系数分别是0.988(P<0.001)与0.898(P<0.01)。结论高频彩色多普勒超声可精确地监测裸鼠前列腺原位种植肿瘤的生长。     

人胎肝细胞的低温保存和临床应用

本文介绍了我们1985～1989年间深低温(-196℃)保存102例人胎肝细胞研究和临床应用的结果。选用因母体情况而不宜继续妊娠的水囊引产中龄胎儿,在无菌条件下取出肝脏,制备成单细胞悬液。用10％二甲基亚砜(DMSO)作为冷冻保护剂。以1℃/min的速率降温到-30℃,然后5℃/min冷冻到-80℃,冰好的细胞悬液置入液氮(-196℃)中贮存,需要时在38～40℃恒温水浴以快速解冻的程序进行解冻。     

冷冻对正常和肿瘤细胞杀伤力的研究

为了探索冷冻对正常细胞和肿瘤细胞破坏的临界温度,本实验用三种正常细胞(乳猪肾、乳兔肾、兔睾丸)和宫颈癌细胞(HeLa细胞)作体外单层细胞实验。各种细胞培养成单层,经液氮冷冻后,加入~3H胸腺嘧啶核苷进行细胞DNA合成标记,测定DNA脉冲数作为生活细胞指标。另一组用S_(180)小白鼠肉瘤细胞悬液,经冷冻后注入动物体内,观察长瘤情况。实验结果表明,冷冻灭活正常细胞和肿瘤细胞的临界温度为-40℃维持3分钟,单层细胞仅需冻融一次,细胞悬液则需冻融三次。     

人脑胶质瘤细胞裸鼠原位移植动物模型建立的实验研究

目的:探讨人脑胶质瘤细胞裸鼠原位移植动物模型建立的技术方法。方法:借助动物立体定向仪的引导,采用微注射方法将体外培养人脑胶质瘤细胞U87MG(悬浮于无血清RPMI1640培养液中,细胞数为108/ml)接种于裸鼠(BALB/c)额叶白质区。接种后观察不同实验鼠的生存情况,分别于接种后1h至63d的不同时间进行裸鼠脑肿瘤组织病理学检查和免疫组织化学分析。结果:裸鼠脑内注射体外培养的人脑胶质瘤细胞U87MG的合适速率为0.05μl/min=1μl/20min,细胞悬液体积1ul,细胞数105,注射时间20min。按此方案注射U87MG细胞无沿针道返流,恰好在尾状核区形成近圆球形肿瘤体,成瘤率高(100%),肿瘤颅内生长稳定,组织病理学检查符合人脑胶质瘤形态特征,未见脑外转移。结论:本研究的人脑胶质瘤细胞裸鼠原位移植动物模型建立方法精确可靠,重复性好,该模型可作为研究人脑胶质瘤发生、生物学特性以及治疗研究的可靠动物模型。     

冷冻消融治疗对肺腺癌细胞凋亡的影响

目的 探究冷冻消融治疗对肺腺癌细胞凋亡的影响。方法 根据冷冻消融术后肿瘤组织局部变化,在细胞水平上建立肺癌冷冻消融模型。传代培养人肺癌H1299细胞株,将细胞分为4组：A组,未处理细胞,为对照组;B组,未处理细胞培养液中加入坏死液(将细胞悬液放入液氮罐中冷冻5 min, 37℃复温后离心取上清液,得到坏死液);C组,亚致死细胞(细胞在-80℃环境中冷冻7 min,模拟亚致死状态);D组,亚致死细胞培养液中加入坏死液。24 h后用流式细胞术检查冷冻消融对肺癌细胞凋亡的影响,qRT-PCR和Western blot检测冷冻消融对凋亡相关分子B细胞淋巴瘤基因-2(Bcl-2)及Bcl-2相关x蛋白(Bax)表达的影响。采用Lewis肺腺癌细胞株建立C57BL/6小鼠皮下移植瘤模型,造模成功的小鼠随机分成2组,假手术组和冷冻消融组,每组4只,氩氦刀冷冻14 d后,取肿瘤组织,通过qRT-PCR和Western blot检测冷冻消融对凋亡相关分子Bax及Bcl-2表达的影响。结果 细胞冷冻模型中与对照组A组相比,B、C、D组均能促进细胞凋亡(P<0.05),且D组细胞凋亡率最高,高于其他组...     

冻化疗对G422胶质瘤细胞凋亡及调控机制的影响

目的:观察冷冻联合5-Fu对G422胶质瘤化疗敏感性的影响,并探讨其内在的分子机制。方法:建立G422胶质瘤动物模型,随机分组,分别施以化疗、冷冻、冻化疗;TUNEL法用于观察各组在不同时间点细胞凋亡的变化;免疫组化方法检测冷冻后p27kip1蛋白的表达。结果:冷冻与化疗均能引起肿瘤细胞凋亡,冻化疗的联合应用使凋亡率明显增加。冷冻中心区少有p27kip1的阳性表达,冻后周边区表达大为增加。冻后凋亡细胞与p27kip1的表达呈显著正相关(P<0.01)。结论:冷冻能够提高G422胶质瘤对5-Fu的化疗敏感性,其发生机制可能与冻后p27kip1诱发肿瘤细胞凋亡有关;冻化疗的联合应用较单纯冷冻或化疗治疗恶性胶质瘤效果更为明显。     

液氮在冷冻切片中的应用

目的 :为探讨液氮冷冻在冷冻切片中的应用特点。方法 :对我院 5 6例冷冻切片组织同时进行液氮冷冻 ,直接恒温切片机冷冻对比观察。结果 :液氮冷冻时间 9s～ 15 s,恒温切片机冷冻时间 3m in～ 7min;液氮冷冻冰晶每 10 0倍视野 (2 .2 7± 1.0 2 )个 ,冰晶最大径 10 .11μm,恒温冷冻切片机冷冻冰晶每 10 0倍视野 (5 .38± 3.34)个 ,冰晶最大径 18.92 μm。结论 :液氮冷冻较恒温切片机冷冻时间短 ,冰晶数量少 ,且直径小 ,有利于冷冻切片质量的提高 ,提高了冷冻切片的诊断准确率。     

痔疮冷冻治疗小结

我院痔科1974年4月19日～1975年9月底,冷冻治疗痔疮297例,取得一定疗效,现将近期疗效分析如下: 一、冷冻治疗的机制极度冷冻对正常细胞和肿瘤细胞都足以造成不可逆性损害,其温度至少要低于-20℃以下,并持续一定时间,才能使组织细胞冰晶化而形成冰球。同时迅速而反复的冷冻和复温融解交互转换,逐步造成细胞的破裂,以致细胞坏死。冷冻在生化和细胞形态学上所引起的变化和破坏,主要表现在细胞内脂蛋白成份的变性     

冷冻治疗对G422胶质瘤细胞凋亡的影响

目的 研究局部冷冻对G422胶质瘤细胞凋亡及其调控机制的影响。方法 建立小鼠脑胶质瘤动物模型,于冷冻治疗后6、12、24、48、72 h留取标本,用光镜、末端标记法(TUNEL)、DNA凝胶电泳检测细胞凋亡,用免疫组化技术检测凋亡相关基因bcl-2、bax的表达产物。结果G422胶质瘤经冷冻治疗后,冷冻灶中心区呈坏死改变,冷冻周边区出现凋亡的形态学改变,DNA呈“梯状”降解,冷冻后各时间点凋亡细胞数目均明显多于对照组(P<0.01)。bax表达阳性细胞数也多于对照组(P<0.05),而冷冻对bcl-2表达无明显影响。结论 除坏死外,诱导细胞凋亡可能是冷冻杀伤胶质瘤细胞的另一重要机制;这种细胞凋亡可能是通过上调bax基因的表达来实现。     

氩氦刀冷冻兔肝后局部组织变化及超微病理研究

目的 探讨氩氦刀冷冻时间与肝组织效应,为临床上肝脏肿瘤氩氦刀治疗提供实验依据.方法 用直径2mm氩氦刀置于兔肝一叶表面,分别以5、10min冷冻肝组织后,在1、2、4、8、16天取肝组织,在光、电镜下观察肝脏的组织与超微病理变化.结果 冷冻后第1天,肝组织明显地分为中央区、非炎性渗出带、出血带、交界线.第2天,非炎性渗出带呈断续状.第4天,非炎性渗出带消失,交界线上出现纤维细胞增生带.第8天,交界处纤维组织增生带增宽.第16天,该带进一步增宽,带中出现了多核巨细胞.冷冻的肝组织区均呈坏死状,在全部实验动物中未见肝组织复活的现象.结论 氩氦刀冷冻5min、10min均破坏了冷冻区内的肝组织,在出现非炎性反应后,损伤周围出现纤维组织增生,形成结缔组织增生带包裹损伤区.     

CPvYOSXJRGEIRY IN GIANT CELL rXUByIOR OF BONE

Since 1973 we have used the cryoprobe in the treatment of giant cell turnors of bone with good results, particularly those deeply seated iri the spine and peWis. The operations ulere carried out by alternating freezing with chisel- ling, the formcr lasting 2-3 minutes each timc. The mechanism of the treatmcnt and 3 cases are discussed.     

-80℃冰冻保存对血小板CD62P表达的影响

目的 初步探讨-80℃冰冻保存血小板1个月对血小板CD62P表达的影响.方法 采用流式细胞仪检测12例健康献血者-80℃冰冻1个月前后血小板CD62P的表达率.结果 血小板CD62p表达率冰冻前后对比差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 血小板加终浓度为5%DMSO,在-80℃条件下冰冻保存1个月,对血小板的活化功...     

贴壁培养细胞直接用培养瓶置-80℃冻存

目的：探讨贴壁培养细胞直接用培养瓶置4℃、-20℃,最后置-80℃低温冰箱冻存的可行性.方法：采用培养瓶常规培养贴壁细胞L929,去上清后,加冻存液覆盖细胞.-80℃低温冰箱冻存,然后,每2个月复苏1次,计数活细胞,观察细胞传代效果.结果：L929细胞置-80℃低温冰箱冻存1年,复苏良好,随着冻存时间延长,存活细胞逐渐减少,复苏耗时延长.结论：贴壁培养细胞直接用培养瓶置-80℃低温冰箱冻存1年,复苏良好.     

头孢拉定与替硝唑注射液的配伍观察

目的：测定头孢拉定在替硝唑葡萄糖注射液中的配伍稳定性。方法：采用紫外分光光度法建立两者的标准曲线和测定回收率,并观察不同温度下、不同时间的配伍稳定性。结果：两者配伍在4℃,6h内;25℃,2h内;37℃,1h内稳定。结论：两药配伍在室温(25℃)下须在2h内输注。     

Survival in subzero temperatures: two field experiments on temperature estimation and "snowhole" (survival hole) temperatures.

Two field experiments in a subarctic environment are described. Individuals consistently underestimated the degree of cold, because visual cues dominated sensory skin receptors in the subjective estimation of temperature. In snowholes (survival holes) temperatures rose 20 degrees C within 30 minutes of occupancy, but stabilized at freezing point. Implications for travel and survival in a subzero environment are described.     

50℃热疗对肿瘤细胞热休克蛋白70表达作用的实验研究

目的观察50℃时不同热疗时间对体外培养各种肿瘤细胞热休克蛋白(heat shock protein,HSP)表达的影响。方法①选择4种不同的肿瘤细胞株:慢性髓系白血病敏感型细胞株(K562/S细胞)、人胃癌AGS细胞株(AGS细胞)、BALB/c小鼠来源的结肠癌细胞CT-26株(CT-26细胞)、乳腺癌药物敏感细胞株MCF(MCF细胞)。②选取对数生长期的各肿瘤细胞制成细胞爬片,将细胞爬片分为实验组和对照组。③实验组:将爬片水浴加热各时间段(5分钟、10分钟、20分钟、30分钟、50分钟),后置于37℃、5%CO2的培养箱中继续培养24小时。对照组:将各细胞爬片37℃水浴放置各时间段。免疫组织化学法(immuno-histochemistry,IH)检测热疗后各肿瘤细胞HSP70的表达情况。结果 IH发现,热疗后HSP70的表达量明显提高,在加热到20分钟时各肿瘤细胞中HSP-70强阳性表达,但在加热30分钟后随着细胞大量坏死,HSP-70阳性表达逐渐减弱,在50分钟时HSP-70阳性表达基本消失。结论 HSP70的阳性表达率随时间的延长而提高,直至细胞死亡而停止表达。     

延长创伤环境暴露时间对条件性恐惧表达的影响

目的 明确延长创伤后创伤环境的暴露时间对单一线索条件性恐惧表达的影响.方法 灯光线索条件性恐惧训练后延长动物在训练环境中的停留时间.结果 创伤后延长环境暴露时间能够消除动物对环境的恐惧,使之不能自发恢复.并因此抑制了对单一线索的条件性恐惧反应,主要表现为在创伤环境中,延长暴露组动物对灯光线索的条件性恐惧反应低于非延长暴露组[恐惧水平分别为(19.531±6.073)%,(46.094±10.427)%],达到边缘显著水平(P=0.085),且这种恐惧下调可以持续至少35d[延长暴露组与非延长暴露组的恐惧水平分别为(21.094±4.897)%,(74.219±9.481)%,P<0.01].结论 延长创伤环境暴露时间改变了对创伤环境的"恐惧"表征,从而使创伤环境作为"安全场景设置者"降低了对单一线索条件性恐惧的表达,提示在创伤后延长创伤环境的停留时间,使受害者对环境的恐惧消失,可能有助于预防创伤后应激障碍的形成.     

旋毛虫的低温耐受性和感染性的实验研究

目的观察旋毛虫的低温耐受性和感染性。方法 20只雌性昆明小鼠被随机分为对照组和实验组,实验组根据温度不同分3组,共4组,每组5只。对照组每鼠经口感染150条肌幼虫。实验组①组(低温1h组):肉样置于-18℃、1h;②组(低温4h组):肉样置于-18℃、4h;③组(低温24h组):肉样置于-18℃、24h;经低温处理的3组鼠肉取出后,室温下(16℃)彻底融化,磁力搅拌法(消化2h)收集幼虫。然后分别人工灌胃小鼠,每鼠经口感染150条肌幼虫。所有小鼠感染后28d剖杀,取膈肌压片镜检,并用磁力搅拌法收集肌幼虫、计数。结果对照组、低温1h组、低温4h组和低温24h组的肌幼虫均数分别为:5 490.40、2 397.60、319.60、0;低温1h组和低温4h组2组的肌幼虫均数显著低于对照组(P<0.01);低温4h组的肌幼虫均数低于低温1h组(P<0.05)。结论低温(18℃)对旋毛虫具有杀伤作用,旋毛虫囊内幼虫的活力和感染性与冷冻时间和肉样厚度均有直接关系。     

MPEG-PLGA纳米胶囊在真核质粒转染细胞中的应用

目的验证MPEG-PLGA纳米胶囊在真核质粒转染细胞中应用的可行性。方法利用直接溶解法将MPEG-PLGA溶解于4℃双蒸水中,加入绿色荧光载体混匀后静置于37℃恒温箱中30 min制成MPEG-PLGA/pEGFP-C3纳米胶囊复合物,检测复合物粒径大小并转染机体细胞,通过对机体细胞绿色荧光的表达判断复合物的转染效率。结果 MPEG-PLGA/pEGFP-C3粒径为28.3 nm,细胞绿色荧光显示复合物组转染率远大于裸质粒对照组。结论 MPEG-PLGA/pEGFP-C3纳米胶囊复合物可有效提高质粒的转染率,可作为一种新型跨膜载体在临床与研究中应用。