蟾蜍灵抑制人多发性骨髓瘤细胞生长的实验研究

目的研究蟾蜍灵对人多发性骨髓瘤细胞U266的作用。方法台盼蓝拒染法观察蟾蜍灵对细胞增殖的抑制作用。结果 12.5～100nmol/L蟾蜍灵处理U266细胞12～72 h后,蟾蜍灵以时间、剂量依赖方式抑制U266细胞增殖。12.5～100nmol/L/L蟾蜍灵于24h开始明显抑制U266细胞生长(P<0.05)。结论蟾蜍灵以时间、剂量依赖方式抑制U266细胞生长。     

蟾蜍灵诱导人急性淋巴白血病细胞凋亡的实验研究

目的研究蟾蜍灵对人急性淋巴白血病(CEM)细胞的作用。方法台盼蓝拒染法观察蟾蜍灵对细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测蟾蜍灵作用后细胞凋亡情况。结果10~80nmol/L蟾蜍灵于24h开始明显抑制CEM细胞生长(P<0.01)。24,48和72h抑制细胞增殖50%的药物浓度分别为15.13,9.59和6.57nmol/L;20nmol/L,40nmol/L蟾蜍灵作用24h后出现典型的细胞凋亡形态学改变;20nmol/L蟾蜍灵处理12,24和48h凋亡细胞百分率分别为2.46%、17.92%和66.26%;40nmol/L蟾蜍灵处理12,24和48h凋亡细胞百分率分别为5.19%、32.71%和80%以上;凋亡细胞百分率呈剂量和时间依赖性。结论蟾蜍灵以时间、剂量依赖方式抑制CEM细胞生长、诱导凋亡。     

蟾蜍灵对白血病U937细胞生长抑制和凋亡诱导作用

蟾蜍灵是蟾蜍毒素的主要成分之一,蟾蜍毒素具有强心、麻醉、解毒、止痛、开窍、醒神等药理作用,已被广泛应用于临床。近年来发现,含有蟾蜍毒素的中药制剂在体外能抑制多种肿瘤细胞生长,诱导白血病细胞的分化。临床观察提示,含有蟾蜍毒素的中药制剂对肝癌、肺癌、胃癌、食管癌、白血病等具有明显的抑制作用。Numazawa[1]研究表明,蟾蜍毒素的各种成分以剂量依赖的方式抑制K562细胞生长。在所有的蟾蜍毒素中,蟾蜍灵是诱导白血病细胞分化最有效的成分,蟾蜍灵在较低浓度(1×10-8~1×10-9mol/L)能够在较宽的范围内(有较宽的白血病细胞谱)引起人…     

细胞外信号调解激酶对蟾蜍灵诱导白血病细胞凋亡影响的研究

目的:探讨细胞外信号调解激酶(ERK)对蟾蜍灵诱导白血病细胞凋亡的影响.方法:形态学观察和流式细胞仪检测细胞凋亡.结果:0.5μmol/L蟾蜍灵作用K562细胞24h诱导典型的细胞凋亡,预先用ERK抑制剂PD98059处理细胞1 h,明显增加蟾蜍灵诱导的细胞凋亡率(P＜0.05);而用佛波酯预先处理后,明显拮抗蟾蜍灵的作用(P＜0.05).结论:ERK负向调节蟾蜍灵诱导的K562细胞凋亡过程.     

蟾蜍灵对PDGF—BB诱导的系膜细胞纤溶系统的影响

目的观察蟾蜍灵对血小板源性生长因子（plate derived growth factor-BB,PDGF-BB）诱导的系膜细胞（mesangial cell,MC）PAI-1、u—PA、t—PA的表达影响,探讨其对系膜细胞纤溶酶原／纤溶酶系统的作用。方法PDGF（20ng/ml）刺激体外培养的系膜细胞12h后,加入0．08μM蟾蜍灵干预12h,用ELISA法检测细胞上清培养液中PAI-1的表达量;RT-PCR法测定PAI-1、u—PA、t—PA基因表达变化。结果PDGF—BB可诱导MC中PAI-1的mRNA表达上调,并且表达增加,u—PA、t—PAmRNA转录下调;0．08μM蟾蜍灵可下调PDGF诱导的系膜细胞的PAI-1mRNA,上调μ-PA、t-PAmR-NA的转录,并抑制PAI—1的表达。0．08μM蟾蜍灵对正常系膜细胞无明显影响（P〉0．05）。结论蟾蜍灵可通过促进细胞外基质降解来抑制PDGF—BB诱导的肾小球硬化。     

三氧化二砷抗肿瘤的药理研究进展

本文就近年来对三氧化二砷抗肿瘤的药理研究作一概述。1　As2 O3 对动物体内抗肿瘤的药理作用1 1　对小鼠白血病L12 10的治疗作用　As2 O3 对小鼠白血病L12 10具有明显的疗效 0 2 5mg/kg的As2 O3 连续用药 7d可使DBA小鼠的生命延长率到 138 7%。1 2　对小鼠肝癌腹水的治疗作用     

蟾蜍灵调控系膜细胞增殖与细胞周期激酶抑制剂p21的关系

目的: 观察蟾蜍灵对大鼠系膜细胞(mesangial cell,MC) p21表达的影响,探讨其调控系膜细胞增殖的机制?方法:MTT法观察不同浓度蟾蜍灵(0.01?0.04?0.08?0.16 μmol/L)对PDGF-BB(20 ng/ml)诱导的MC 增殖的影响;流式细胞术测定MC细胞周期的变化;RT-PCR法测定p21基因表达的改变;Western blot法测定p21蛋白水平变化?结果:PDGF-BB刺激MC12 h后,加入不同浓度蟾蜍灵干预24 h,蟾蜍灵从0.04 μmol/L至0.16 μmol/L的呈浓度依赖抑制PDGF-BB诱导的MC增殖(P < 0.05)?0.08 μmol/L蟾蜍灵干预24 h后,可使PDGF-BB诱导的MC G0/G1期细胞比例升高,使S期细胞比例下降,且上调P21mRNA和蛋白水平的表达(P < 0.05)?0.08 μmol/L蟾蜍灵对正常系膜细胞无明显影响(P > 0.0.5)?结论:蟾蜍灵可能通过上调细胞周期激酶抑制剂p21的表达来抑制PDGF-BB诱导的MC的增殖?     

蟾蜍灵对K562细胞凋亡诱导作用及bcl-2基因表达的影响

目的探讨中药蟾酥有效成分蟾蜍灵（bufalin）对人白血病细胞系K562细胞增殖和凋亡及bcl-2基因表达的影响。方法MTT实验测定K562细胞对蟾蜍灵的敏感性;原位缺口末端标记法（TUNEL）观察细胞凋亡率;琼脂糖凝胶电泳分析细胞凋亡的DNA断裂情况;半定量RT—PCR技术检测bcl-2mRNA表达。结果蟾蜍灵对K562细胞生长具有明显的抑制作用,MTT实验显示,蟾蜍灵对K562细胞的IC50值为0．013μmol·L^-1,统计学分析表明差异具有显著性（P〈0．01）;蟾蜍灵可明显诱导K562细胞调亡（P〈0．01）,药物作用6h、12h和24hK562细胞的凋亡率分别为20．36％、34．35％和48．16％;经琼脂糖电泳,蟾蜍灵作用细胞可见到DNA梯形条带;bcl-2mRNA表达3h开始下降,6～12h持续下调,与对照组相比具有显著差异（P〈0．01）。结论蟾蜍灵对K562的增殖抑制作用可能是因为它的凋亡诱导作用,而K562细胞凋亡可能是由于bcl-2基因表达改变。     

华蟾素油剂对肝癌细胞的体内外抑制活性及肿瘤微环境中对免疫细胞的影响

目的考察玉米油及水对华蟾素片灌胃给药后其活性成分在大鼠体内被吸收情况和小鼠体内抑瘤效果及对肿瘤微环境免疫细胞亚群的影响;验证华蟾素以口服油剂给药更有利于其活性成分的吸收利用,提高抑瘤效果。方法以液相串联质谱(LC-MS/MS)分析结合对照品比对,鉴定华蟾素片剂中的活性成分,并对其进行含量测定;选用人源肝癌Hep G2细胞株,评价从华蟾素片中鉴定出的9个化合物对Hep G2细胞的体外增殖抑制活性;药代动力学实验以华蟾素片的油剂和水剂给药剂量为200 mg/kg和600 mg/kg(临床折算剂量)的情况下,测定沙蟾毒精、蟾毒灵、和蟾蜍他灵、蟾毒他灵4个在体外对Hep G2肝癌细胞增殖有强烈抑制作用的蟾毒配基成分以及华蟾素注射液中的主要成分蟾蜍噻咛在SD大鼠血浆中的药时浓度和药代动力学参数;药效学研究以C57BL/6J小鼠的Hepa1-6细胞皮下肿瘤为模型,分别以玉米油、华蟾素片油剂和华蟾素片水剂,给药剂量为320 mg/kg,灌胃2次/d,共21 d,测量3个实验组小鼠肿瘤体积;并收集不同给药组小鼠的脾脏和肿瘤组织,应用流式细胞技术分析华蟾素片油剂和水剂对脾脏和肿瘤组织中CD8+T细胞、调节性T细胞(Treg)、骨髓来源的抑制性细胞(MDSCs)、PD1+CD8+T细胞分布的影响。结果从华蟾素片剂中鉴定出9个活性成分,分别为蟾蜍噻咛、沙蟾毒精、和蟾蜍他灵、远华蟾蜍精、蟾毒他灵、华蟾毒他灵、蟾毒灵、华蟾酥毒基和酯蟾毒配基,并对其进行了定量研究;体外Hep G2细胞增殖抑制实验表明,8个蟾毒配基类成分及蟾蜍噻咛均对Hep G2肝癌细胞增殖有抑制作用;在大鼠中,华蟾素片油剂可明显提高蟾蜍噻咛的生物利用度,对蟾毒配基类成分的吸收也有一定促进作用;小鼠接种Hepa1-6细胞成瘤后,给药21 d后测量不同给药组小鼠的肿瘤体积发现,华蟾素片油剂的抑瘤效果显著高于其水剂,并且无毒副作用。华蟾素片油剂的抑瘤率可达40. 2%,而水剂抑瘤率仅为17. 6%;流式细胞技术检测小鼠脾脏和肿瘤组织中免疫细胞亚群变化情况发现,华蟾素片油剂或水剂均可提高小鼠脾脏中CD8+T细胞比重,差异无统计学意义。但在肿瘤组织中华蟾素片油剂较水剂更加显著地提高了CD8+T细胞的比重(P 0. 05),说明以油剂给药可将杀伤肿瘤细胞的CD8+T细胞更多的聚集到肿瘤组织中,增强华蟾素口服制剂免疫抗肿瘤作用。与此同时,华蟾素片油剂可降低脾脏中的Treg细胞数量,从而解除免疫抑制,增强T细胞的抗肿瘤作用。结论华蟾素片油剂可以提高其有效成分的生物利用度,并能显著提高药物的肿瘤抑制作用,为华蟾素的油溶型新制剂开发研制提供了重要的实验依据。     

狼毒浸出液抗白血病作用的实验研究

用小鼠T淋巴细胞白血病(L_(615))为实验动物模型,对狼毒浸出液(YF-1)的抗白血病作用进行了初步研究.结果表明,实验组和对照组的平均存活时间分别为16.3d和9.5d,实验组明显长于对照组(P<0.01);中和试验实验组和对照组的平均存活时间分别为19.3d和9.9d,对照组中没有长期存活的小鼠,实验组则有40%的小鼠长期存活,两组比较有显著性差异(P<0.01).提示YF-1对L(615)细胞有较强的抑制或(和)杀伤作用,能够对抗和抑制白血病的发生与发展.     

Effect of herbal tonic on the membrane fluidity of the mice suffered from lymphatic leukemia

By using fluorescence polarization technology, the authors have studied variations in the membrane fluidity of red blood cell and spleen lymphocytes of the mice with lymphatic leukemia (L7212) untreated or treated by the compound tonic of traditional Chinese medicine decoction of reinforcing Qi and nourishing Yin and decoction of reinforcing Qi and nourishing blood. It was not only confirmed that the membrane fluidity of malignant lymphocytes increased more greatly, but also discovered that the variations could appear in early period of leukemia. The membrane fluidity of lymphocytes of the mice with leukemia treated by the herbal tonic could drop to normal level. But the membrane fluidity of the red blood cell between the normal mice (615) and the leukemia mice (L7212), untreated or treated by the herbal tonic, had no significant difference. Result: the above mentioned suggests the herbal tonic could resist leukemia by reducing the membrane fluidity of the lymphocytes and improving structure and function of the membrane.     

六神丸及其加味抗急性白血病的实验研究

本研究从血象、骨髓、病理、骨髓细胞增殖动力学的角度证明:六神丸具有明显的抑制和杀伤实验白血病小鼠(L7212)白血病细胞的作用(主要机理类似细胞毒剂),具有缓解、减轻白血病细胞对肝脾浸润,明显延长白血病小鼠生存期的作用;六神丸加味(加用清热解毒方、活血化淤方、益气养阴方、补气养血方、补肾方)和六神丸具有明显的协同作用。     

清毒饮和养正片对L7212白血病小鼠Fas基因及其可溶性受体的影响

[目的]探讨复方中药清毒饮和养正片抗急性白血病的疗效机理。[方法]采用L7212白血病小鼠模型,用原位末端标记法(TUNEL)观察清毒饮(由七叶一枝花、白花蛇舌草、大青叶、山慈菇等组成)、养正片(由黄芪、人参、补骨脂、赤灵芝、三七片等组成)和足叶乙甙(VP16)化疗对L7212的白血病细胞凋亡的影响;用免疫组化法检测L7212白血病小鼠骨髓有核细胞的Fas基因表达;用酶联免疫吸附法(ELISA)检测可溶性Fas(sFas)。[结果]清毒饮组、养正片组、化疗组都可见较多凋亡阳性白血病细胞,清毒饮组优于养正片组,与化疗合用则更明显,凋亡指数均大于模型组(P<0.01);L7212白血病细胞Fas表达减低,给予清毒饮、养正片、化疗处理后Fas升高,清毒饮组亦较养正片组明显,清毒饮加化疗组则尤其明显(P<0.01);清毒饮组sFas较模型组明显降低(P<0.05),并接近正常空白组水平(P>0.05),养正片组则无明显变化。[结论]清毒饮、养正片能诱导L7212小鼠白血病细胞凋亡,并可促进化疗的诱导凋亡作用,以清毒饮尤为明显;清毒饮、养正片均能提高Fas的表达水平,清毒饮还可使L7212小鼠增高了的sFas水平降低。提示在急性白血病早期,采用祛邪攻毒中药可诱导其细胞凋亡并与化疗有协同作用;而此期采用扶正补虚中药则作用较差。     

益气养阴方等对L7212白血病小鼠粒单系祖细胞的影响

通过测定L7212白血病小鼠粒单系祖细胞(CFU—GM)集落形成率,发现本院血液病科常用抗白血病中药—益气养阴方、清热解毒方、补气养血方能提高CFU—CM,且益气养阴方优于其他二方。提示中药有促进白血病小鼠恢复正常造血功能的作用。     

低剂量辐射对白血病模型小鼠治疗作用研究

目的:探讨低剂量辐射对白血病模型小鼠的治疗作用.方法:使用615小鼠和L615K淋巴细胞白血病细胞株建立T淋巴细胞白血病小鼠模型,给予75 mGy的低剂量辐射后,检测外周血白细胞数、小鼠的生存时间及脾脏指数.结果:接受75 mGy的低剂量辐射后,荷瘤小鼠白血病细胞生长受抑,生存期延长.结论:低剂量辐射具有抗淋巴细胞白血病的作用.     

蟾蜍灵对高糖诱导大鼠系膜细胞过表达纤维连接蛋白和结缔组织生长因子的影响

目的:观察不同浓度蟾蜍灵对高糖诱导的大鼠系膜细胞(MC)过表达FN及CTGF的影响,拟探讨其防治糖尿病肾病的可能作用?方法:体外培养MC,将细胞分为5组:正常对照组?高糖组?高糖 + 低浓度蟾蜍灵(5 × 10-9 mol/L)组?高糖 + 中浓度蟾蜍灵(5 × 10-8 mol/L)?高糖+高浓度蟾蜍灵组(5 × 10-7 mol/L)?以台盘兰拒染法检测蟾蜍灵对MC的毒性作用,48 h后,采用RT-PCR法和Western-blot法检测各组MC中FN?CTGF mRNA和CTGF蛋白的表达及其变化?结果:蟾蜍灵在5 × 10-9 ~5 × 10-7 mol/L浓度间对MC无明显细胞毒作用?48 h后,与对照组相比,高糖组CTGF mRNA和蛋白以及FN mRNA表达均显著增加(P < 0.05);高?中?低浓度蟾蜍灵干预能显著降低高糖诱导的上述指标表达,且呈浓度依赖效应(P < 0.05)?结论:蟾蜍灵能部分抑制高糖诱导的MC过表达FN,呈浓度依赖效应,其作用可能部分是通过降低促纤维化因子CTGF合成而实现,提示蟾蜍灵在DN纤维化防治领域具有进一步研究的价值?     

蟾蜍灵对脂多糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞凋亡的影响

目的:探讨蟾蜍灵(bufalin)对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导的大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)凋亡的影响.方法:体外培养大鼠肾小球系膜细胞.分为对照组、LPS刺激组和蟾蜍灵干预组,应用台盼蓝拒染法检测蟾蜍灵对GMC的细胞毒性作用,应用透射电镜观察系膜细胞超微结构的变化,采用逆转录PCR检测Bax和Bcl-2基因mRNA的表达.Western blot法检测Bax和Bcl-2的蛋白表达.结果:透射电镜观察蟾蜍灵干预组可见凋亡早期形态学改变.逆转录PCR和Western blot结果显示蟾蜍灵组较脂多糖组Bax表达增多,Bcl-2表达减少,差异均具有统计学意义(P＜0.01),蟾蜍灵干预后,Bax较Bcl-2表达过量.结论:蟾蜍灵可能通过调节Bax和Bcl-2的相对表达量而诱导脂多糖作用后肾小球系膜细胞发生凋亡.     

Reversal effect of bufalin on multidrug resistance in K562/VCR vincristine-resistant leukemia cell line

ObjectiveTo probe insights into the reversal effect of bufalin on vincristine-acquired multidrug resistance (MDR) in human leukemia cell line K562/VCR.MethodsProliferative inhibition rate and the reversal index (RI) of bufalin were determined by Methyl thiazolyl tetrazolium assay. The uptake of Adriamycin (ADM) in K562/VCR cells, cell cycle and apoptosis rate were determined by flow cytometry (FCM). Cell morphologic changes were observed with Wright-Giemsa staining. The expression of P-glycoprotein (P-gp), multidrug-associated protein-1 (MRP1), Bcl-xL and Bax protein were measured by immunocytochemistry.ResultsThe human leukemia multidrug resistant K562/VCR cells showed no cross-resistance to bufalin. The RIs of bufalin at concentrations of 0.0002, 0.001 and 0.005 μmol/L were 4.85, 6.94 and 14.77, respectively. Preincubation of 0.001 μmol/L bufalin for 2 h could increase intracellular ADM fluorescence intensity to 28.07% (P<0.05) and down-regulate MRP1 expression simultaneously, but no remarkable effect was found on P-gp protein. Cell cycle analysis indicated increased apoptosis rate and apparent decreased G2/M phase proportion after treatment with bufalin. When exposed to 0.01 μmol/L bufalin, typical morphological changes of apoptosis could be observed. Down-regulation of Bcl-xL and up-regulation of Bax expression in K562/VCR cells could be detected by immunocytochemistry.ConclusionBufalin could partly reverse the MDR of K562/VCR cells, with a possible mechanism of down-regulating MRP1 expression and activating apoptosis pathway by altering Bcl-xL/Bax ratio.     

Experimental study on anti-acute leukemia with Chinese traditional drugs

This paper deals with the experimental study on L7212 leukemic model of mice with Chinese medicine Liushenwan, Zhijinding and Xihuangwan for the treatment. This study proved that these drugs possessed the effect of inhibiting and killing L7212 leukemic cells of the experimental leukemic mice (P less than 0.05-0.001). They affected the S stage of the cell multiplication cycle time mainly (P less than 0.01). They could relieve the infiltration of leukemic cells in the liver and spleen of L7212 mice (P less than 0.001) and obviously prolong the survival time of the mice (P less than 0.01-0.001).     

CPPs-BDI-1-载蟾酥白蛋白纳米微球三联体杀伤 EJ人膀胱癌细胞实验研究

目的：探讨CPPs-BDI-1-载蟾酥白蛋白纳米微球三联体杀伤 EJ人膀胱癌细胞的实验研究。方法采用异型双功能连接剂SPDP耦联穿膜肽增强型绿色荧光蛋白（ TAT-EGFP）、抗人膀胱癌单克隆抗体（BDI-1）、载蟾酥白蛋白纳米微球（Bufalin-NS）,构建载蟾酥白蛋白纳米微球三联体（CPPs-BDI-1-Bufa-lin-NS）。取CPPs-BDI-1-Bufalin-NS三联体实验组和蟾酥对照组,终浓度分别为1×10-8mol/L、1×10-6mol/L,通过MTT法检测培养12小时、24小时、36小时、48小时的EJ人膀胱癌细胞存活率,检测CPPs-BDI-1-Bufalin-NS三联体对EJ人膀胱癌细胞的抑制作用。结果 CPPs-BDI-1-Bufalin-NS三联体实验组杀伤人膀胱癌细胞作用明显强于蟾酥对照组。结论 CPPs-BDI-1-Bufalin-NS三联对人膀胱癌细胞有明显的杀伤效果,为后续动物实验奠定基础。