~(131)I标记单克隆抗体在裸小鼠肠癌模型中的放射免疫显象研究

应用~(131)I标记抗大肠癌单克隆抗体Hb_3静脉或腹腔注入裸小鼠人肠癌模型体内,进行生物学分布和显象研究。除移植瘤直径小于0.5cm的裸小鼠外,48h即可查见良好的肿瘤显象,72、96h更为清晰。肿瘤与肌肉、肠道的每mg组织的放射性浓度之比均大于2,以96h最高,分别是6.9和14.1。     

抗人胆管癌相关抗原单克隆抗体放射免疫显像的实验研究

目的 检验制备出的抗人胆管癌相关抗原单克隆抗体经同位素标记后用于胆管癌放射免疫显像诊断的特异性。方法 将纯化的抗人胆管癌相关原单克隆抗体经^131I标记后,注射于荷人胆管癌移植瘤的裸鼠体内,研究标记抗体在荷瘤裸鼠体内组织分布,并于不同时相点在SPECT下观察裸鼠移植瘤的放射免疫显像效果。结果 ①裸鼠移植瘤的放射免疫显像效果良好,在各时相点时,以96h时相点显像效果最佳;②注射放射性标记抗体96h后,肿瘤组织有标记抗体特异性浓聚,T/NT比值达到峰值。结论 制备出的抗人胆管癌相关抗原单克隆抗体在人体胆管癌的放射免疫显像诊断中具有良好的应用前景,值得进一步研究。     

抗胃肠粘液骨架蛋白单抗和裸鼠移植人胃癌体内示踪定位分布研究

应用人工合成人胃肠粘液骨架蛋白之序列七肽片段,评价系列抗胃肠癌单抗之抗原决定簇。结果,首次发现一个抗人胃肠粘液的单克隆抗体,其抗原决定簇为富含苏氨酸的粘液分子骨架蛋白的七肽片段ITTTTTV。并进一步采用两株组织类型不同的移植人胃癌组织裸鼠模型,经体外扫描方法,追踪观察了~(131)I标记该单抗GL-013在荷瘤裸鼠体内定位移植瘤能力。经腹腔注入~(131)I标记GL-013后第3天开始,两株移植瘤即能被清晰地显示出来,且在72h取出鼠内脏后的扫描图中仍可见扫描图中的高放射性浓聚区,而注入~(131)I标记正常鼠γ球蛋白,移植瘤则未被显示;第9天时两株荷瘤裸鼠的实验组与对照组的T/NT值均呈明显差异。表明抗胃肠粘液之单抗GL-013在荷瘤裸鼠体内是定位于两株人胃癌移植瘤组织的。提示GL-013单抗可能适于对不同组织类型胃癌的放射免疫显像。     

核素标记混合抗体瘤内注射治疗大肠癌的实验研究

目的:为临床应用混合抗体进行放射免疫治疗提供实验依据。方法:在裸鼠荷人大肠癌Lovo移植瘤生长至1cm时,瘤内分别或同时注射~(131)I标记的抗CL_3单克隆抗体(~(131)I-CL_3)和~(131)I标记抗FERR单克隆抗体T_9(~(131)I-T_9),治疗后行SPECT显像观察标记抗体在肿瘤内的浓聚,并进行疗效观察。结果:我们发现两种抗体混合治疗组疗效明显好于单独治疗组,抗体在肿瘤内的浓聚也大于单独应用。结论:多种抗体混合应用瘤内注射放射免疫治疗可增加标记抗体在肿瘤内的浓聚,并能提高放射免疫治疗的疗效。     

Iodo-beads法~(125)Ⅰ标记抗人肝癌免疫毒素

近年来,放射免疫显像(RII)和放射免疫治疗(RIT)技术的发展,对肿瘤的早期定位诊断及导向治疗起一定的推动作用,为了探讨放射性碘标记肿瘤单克隆抗体~(125)I-TCS-Hepama-1在RII和RIT中的作用机制,选择合适标记条件,提高RII过程的分辨率,我们采用Iodo-beads固相标记法,用~(125)I标记免疫毒素,并将其应用于SPECT仪的定位γ照像以及用γ计数仪测定荷瘤裸鼠中几种主要脏器的放射性分布,效果较满意。     

~(125)I-抗鼻咽癌单克隆抗体在荷瘤裸鼠模型的实验研究

抗低分化的鼻咽癌单克隆抗体(BAS_s),经~125Ⅰ标记后,注入荷瘤裸鼠体内,于不同时间进行放射免疫显象(Rll),并测定实验裸鼠的肝脏等10种脏器组织与肿瘤组织的单位重量放射性比值(T/NT)及各个组织的摄取百分比,即每克组织摄取的放射性占注入总量的百分数(％ID/g)。结果表明,~125Ⅰ-BAC_s在24h后开始在肿瘤部位浓集,2～3 d后,肿瘤部位越来越呈现高度特异性的浓集。γ照相机照相结果和体内分布测定结果完全一致。     

^125I-抗鼻咽癌单克隆抗体在荷瘤裸鼠模型的实验研究

抗低分化的鼻咽癌单克隆抗体(BACs)，经^125I标记后，注入荷癌裸鼠体内，于不同时间进行放射免疫显象(RII)，并测定实验裸鼠的肝脏等10种脏器组织与肿瘤组织的单位重量放射性比值(T／NT)及各个组织的摄取百分比，即每克组织摄取的放射性占注入总量的百分数(％ID／g)。结果表明，^125I-BACs在24h后开始在肿瘤部位浓集，2～3d后，肿瘤部位越来越呈现高度特异性的浓集。Y照相机照相结果和体内分布测定结果完全一致。     

抗MIF单克隆抗体的制备及其放射性碘标记方法

目的  制备抗小鼠巨噬细胞移动抑制因子（mMIF）单克隆抗体（McAb）对其进行放射性碘标记,为进一步研究MIF在炎症、肿瘤核素显像中的意义奠定基础。方法  异丙基硫代-β-D-半乳糖（IPTG）诱导pEQ30-mMIF/M15工程菌表达重组mMIF蛋白;采用杂交瘤技术制备单克隆抗体,蛋白质印迹技术（Western blotting）和酶联免疫吸附试验（ELISA）进行特异性鉴定,巨噬细胞移动抑制试验（MMI）鉴定生物学活性。采用二氯二苯基甘脲（Iodogen） 法,用Na125 I 标记抗mMIF单克隆抗体。结果  成功建立3株稳定高效价分泌抗mMIF单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为5G2D7,5G2C7,5G2E3。经Western blotting、ELISA和MMI鉴定证明抗mMIF单克隆抗体具有良好的抗原特异性和生物学活性;125 I-抗mMIF单克隆抗体的标记率为90.40%,放射化学纯度98.36%,放射性比活度为21.48MBq/μg。结论  成功制备抗mMIF单克隆抗体和放射性碘标记抗mMIF单克隆抗体,为深入研究MIF相关性疾病和利用MIF进行临床肿瘤及炎症放射免疫显像提供了实验基础。     

~(131)Ⅰ标记单抗4C_6在人胰癌裸鼠移植瘤模型中的放免显像研究

应用亲和层析法提纯我室自制的抗胰癌单克隆抗体4C_6,经固相氧化法标记~(131)I,腹腔注入荷人胰癌裸鼠移植瘤模型中。经体外扫描,观察单抗4C_6在不同时间的定位能力及其生物学分布和代谢情况。结果表明:投药后48h～168h,随非瘤组织本底的消减,肿瘤部位有明显的放射性聚集,与对照组全身均匀分布不同;显像最佳时间为投药后120h,此时,T/NT比值除血、甲状腺外,均大于3,与对照组均呈非常显著差异(P<0.01);每g瘤组织的放射性百分比,于投药后120h达6.87%ID/g。结果说明单抗4C_6对胰腺癌具有一定的定位能力,可望用于胰腺癌的临床放免显像定位诊断。     

~(131)I标记抗Peroxiredoxin I肺腺癌噬菌体抗体在荷瘤裸鼠体内的分布及其对肿瘤生长的抑制作用

目的研究抗Peroxiredoxin I(PrxI)肺腺癌相关单链抗体体外对肺腺癌细胞的增殖抑制;观察131I标记抗体在肺腺癌裸鼠模型体内分布、靶向显像及体内抑瘤作用。方法放射性核素计数法测定单链抗体细胞内摄水平;MTT法及流式细胞仪检测单链抗体抑制肺腺癌A549细胞生长情况;免疫印迹法检测单链抗体作用于A549细胞后对细胞内PrxI表达水平的影响。放射性核素131I标记纯化抗体,进行荷瘤裸鼠体内分布、SPECT放免显像及病理切片观察抑瘤作用。结果单链抗体干预后细胞PrxI蛋白表达水平较对照组下降(P<0.05)。体内分布研究表明单链抗体与肺腺癌组织有效结合。荷瘤裸鼠尾静脉注射131I标记抗体48h后,瘤/血和瘤/肌肉放射性比值均达到最大值4.06±0.13和5.17±0.97。SPECT示抗体注射后48hT/NT值明显高于12h、24h和72h(F均>86,P均<0.01)。治疗4周后,131I标记抗体治疗组肿瘤体积为(0.68±0.17)cm3,质量为(1.58±0.21)g,抑瘤率56.8%,与对照组比较有统计学差异。结论抗PrxI肺腺癌单链抗体能有效抑制肺腺癌细胞生长,131I标记单链抗体在体内能抑制...     

放射性碘标记的抗肺癌单克隆抗体在载瘤裸...

Nude mice bearing humor lung cancer xenografts were injected intravenously or intraperitoneally with a mixture of radioiodinated anti-lung-cancer monoclonal antibodies, 2E3 and 6D1. The blood radioactivity versus time curve was fitted to a two-compartment open model with a 3.4 day blood radioactivity clearance half-life and a 636 ml/kg apparent distribution volume. Radioiodinated 2E3 and 6D1 given intraperitoneally were rapidly absorbed, with a 2.08 absorption half-life and 89% bioavailability. The highest radioactivity levels were found in the tumor, blood, liver and spleen 1-3 days after injection; next came the lung, kidney, stomach and intestine. The relative radioactivity increased in the tumor as levels in blood and normal tissues decreased. The in vivo deiodination of radioiodinated 2E3 and 6D1 was about 18.6% and free radioiodine was excreted in the urine.     

~（99）Tc~m-REG的制备及其在正常小鼠体内分布和药代动力学研究

目的研究99Tc^m-精氨酸-符氨酸-片氨酸（99Tc^m-REG）与肺癌细胞结合及其在正常小鼠体内分布和约代动力学。方法采用99Tc^m直接法标记REG,行99Tc^m-REG与非小细胞肺癌细胞A549和H1299的结合实验。正常小鼠尾静脉注射99Tc^m-REG后不同时间处死,取主要脏器或组织,测定其每克组织百分注射剂照牢（％ID／g）。另取尾静脉注射99Tc^m-REG后不同时间小鼠血液,测量放射性计数并计算药代动力学参数。尾静脉注射99Tc^m-REG后,测定不同时间荷H1299细胞肿瘤裸鼠肿瘤％ID／g及肿瘤／肌肉比值。结果 99Tc^m直接标记REG的标记率为（92．90±2．86）％。99Tc^m-REG与非小细胞肺癌细胞A549和H1299的最高结合率分别为（1．29±0．16）％和（2．324-0．31）％。体内分布提示99Tc^m-REG在小鼠血液中清除迅速,2h时放射性仪为注射5min时的20．26％,肝脏内放射性浓聚较多,且旱缓慢下降．肾脏、心、肺放射性摄取随时间逐渐下降,其余组织放射性警低水平。2h肿瘤％ID／g为2．02±0．67,肿瘤／肌肉比值为3．50±1．27。结论99Tc^m-REG具有亲肺癌细胞的特性,有可能成为一种亲肺癌肿瘤显像剂。     

Localization of human lung cancer xenografts in nude mice using monoclonal antibody

Radiolabeled monoclonal antibodies to human lung cancer were injected into nude mice bearing xenografts; and the biodistribution and tumor localization were studied. Xenografts were able to concentrate radioiodinated McAb. Radioactivities of tumor which were 5.09, 5.79 and 7.57% dose/g respectively 3-5 days after injection were higher than those of blood or organ. Tumor/blood ratios were 1.82-2.36 whereas tumor/organ ratios were more than 2. The localization indices of two McAbs were 3.4-5.6 and less than 1.5 in normal organs. The xenografts were visualized after injection of radiolabeled McAbs. These results have shown that anti-human lung cancer McAbs can specifically localize on xenografts in nude mice and it is possible to use them clinically for imaging of lung cancer.     

^3H—镰刀菌素C在大鼠体内的分布及与DNA的结合

镰刀菌素C(Fusarin C,FC)是Wiebe和Bjeldanes(1971)首先从玉米中分离得到的一种霉菌毒素,本实验室于1984年也从串珠镰刀菌的玉米培养基中分离出该毒素,FC对细菌和哺乳类动物细胞均有明显的致突变作用.为探讨FC的致癌作用及其与林县食管癌高发的关系,本实验初步研究~3H-镰刀菌素C(~3H-FC)在大鼠体内的分布、代谢及在体外与大鼠食管的DNA结合.     

达肝素钠抑制人肺腺癌细胞增殖作用的实验观察

目的：探讨达肝素钠抑制人肺腺癌细胞增殖的作用机制。方珐：采用流式细胞术检测达肝素钠处理后A549细胞的细胞周期变化。建立肺腺癌鼠模型后,将12只荷瘤鼠随机分为达肝素钠组和对照组,分别给予达肝素钠15001U／kg（0．2m1）皮下注射和0．9％氯化钠注射液0．2ml腹腔注射,1天1次,连续用药35d。定期测量瘤体最大及最小直径,计算瘤体积、绘制肿瘤生长曲线。第35天用戊苯巴比妥钠全身麻醉处死裸鼠,剥取瘤体称重、计算抑瘤率,并用免疫组织化学方法测瘤组织中细胞周期蛋白E（CyclinE）的表达。结果：肺腺癌细胞株A549处理48h后,与对照组比较,达肝素钠组G。／G,期细胞比例升高,S期细胞比例降低（P〈0．01）;与对照组比较,达肝素钠组瘤重明显减小（P〈0．05）;达肝素钠组抑瘤率为0．000％和64．081％;对照组及达肝素钠组瘤组织中CyclinE的表达阳性率为6／6、3／6,差异无统计学意义（P=0．182）;达肝素钠组主表现为低表达（5／6）,对照组为高表达（5／6）,差异无统计学意义（P=0．081）。结论：达肝素钠可阻滞人肺腺癌A549细胞于G。／G,期,使进入S期和M期的细胞减少,减少DNA的合成,抑制细胞增殖,此作用可能与其抑制细胞周期调控因子CyclinE的表达有关。     

贝伐单抗结合紫杉醇对肺癌小鼠的治疗效果及对癌组织S100A4和MMP-9的影响

目的：探讨贝伐单抗结合紫杉醇对C57BL/6肺癌小鼠的治疗效果及对癌组织S100A4与MMP-9的影响。方法：应用鼠源性Leweis肺癌瘤株制备瘤液,对SPF级健康C57BL/6小鼠进行分组,将实验小鼠分为正常组（未接种瘤液）、模型组（接种瘤液）、贝伐单抗组（接种瘤液）、紫杉醇组（接种瘤液）、联合组（接种瘤液）,每组8只。正常组和模型组腹腔注射0.9%氯化钠溶液;贝伐单抗组腹腔注射15 mg/kg贝伐单抗;紫杉醇组腹腔注射10 mg/kg紫杉醇;联合组分别腹腔注射15 mg/kg贝伐单抗和10 mg/kg紫杉醇。所有小鼠2周后处死,摘眼球取血和取瘤称重。比较各组小鼠的抑瘤率,酶联免疫吸附法检测IL-2、IL-6、TNF-α、VEGF、S100A4与MMP-9含量,流式细胞技术检测T淋巴细胞亚群,Western blot法测定VEGF水平。结果：治疗后,贝伐单抗组、紫杉醇组、联合组瘤重,IL-2、IL-6及TNF-α含量、VEGF水平、S100A4与MMP-9含量显著低于模型组,联合组抑瘤率明显高于贝伐单抗组和紫杉醇组,差异均有统计学意义（P＜0.05）;联合组IL-2、IL-6及TNF-α含量、VEGF水平、S100A4与MMP-9含量显著低于贝伐单抗组,差异均有统计学意义（P＜0.05）。贝伐单抗组、紫杉醇组以及联合组的CD3+、CD4+、CD8+、CD4/CD8的含量与模型组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：贝伐单抗结合紫杉醇能抑制C57BL/6肺癌小鼠肿瘤的生长,能改善其免疫功能,降低VEGF、S100A4与MMP-9的含量。     

99mTc-MIBI检测肺癌耐药性的作用研究

目的拟探讨99mTc-MIBI能否检测肺腺癌A549DDP细胞的耐药性及人参单体Rh2作用后A549DDP细胞对顺铂耐药性的变化.方法用MTT法检测顺铂对敏感A549细胞和耐药A549DDP细胞的IC50、对A549DDP细胞的低效浓度(≤IC20),Rh2对A549DDP细胞的无毒浓度(≤IC5).以无毒浓度Rh2和低效浓度的顺铂联合作用于A549DDP细胞,检测Rh2对顺铂抑制A549DDP细胞的影响.以无毒浓度的Rh2单独作用于A549DDP细胞作为Rh2组,以低效浓度的顺铂单独作用于A549DDP细胞作为DDP组,以无毒浓度的Rh2和低效浓度的顺铂联合作用于A549DDP细胞作为Rh2+DDP组,以不加药物干预作为对照组,Hoechst33258染色荧光显微镜下观察细胞形态的变化,流式细胞仪检测细胞凋亡峰.γ计数器检测以上4组细胞及A549细胞的放射性活性.将以上细胞注入裸鼠皮下建模后,用99mTc-MIBI进行SPECT显像.结果順铂对A549细胞、A549DDP细胞的IC50分别为24、325 μmol/L,耐药指数为13.54.Rh2≤10 μmol/L时,对A549DDP细胞无明显毒性作用;100 μmol/L顺铂对A549DDP细胞的抑制率为12%.10 μmol/L Rh2与100 μmol/L顺铂联合作用,顺铂对A549DDP细胞的IC50降为94 μmol/L,与100 μmol/L顺铂单独作用于A549DDP细胞的IC50比,逆转3.5倍.荧光显微镜下,Rh2组和DDP组的大部分细胞核和对照组的一样,荧光分布均匀;Rh2+DDP组的荧光成团块分布,有凋亡小体形成.对照组、Rh2组和DDP组的细胞无明显凋亡峰,而Rh2+DDP组则出现了显著的凋亡峰.各组A549DDP细胞和A549细胞均能摄取99mTc-MIBI,Rh2组和DDP组与对照组之间细胞的放射性活性差异无统计学意义,而Rh2+DDP组则较对照组细胞的放射性活性显著性降低,P<0.05.A549细胞的放射性活性显著性高于A549DDP细胞的对照组,P<0.01.99mTc-MIBI 显像,A549组裸鼠可见瘤块的放射性浓聚影.A549DDP对照组和DDP组裸鼠亦可见瘤块的放射性浓聚影,其放射性浓度较A549组淡,这两组间的R或R′差异无统计学意义,但与A549组比较,P<0.05.DDP+Rh2组裸鼠无肿瘤生长,局部未见明显放射性浓聚影.结论 99mTc-MIBI能检测肺腺癌耐药的A549DDP细胞的耐药性;无毒浓度的Rh2能有效逆转A549DDP细胞对顺铂的耐药性,这种耐药性的变化亦能被99mTc-MIBI有效检测.     

抗RSV脱氧核酶经鼻内给药后在小鼠体内脏器生物分布研究

目的探讨抗RSV脱氧核酶(DZ)经鼻内给药后在小鼠体内脏器的生物学分布。方法合成互补于RSV N基因的基因组转录起始序列的DZ1133:5’TGG GGC AAA GGC TAG CTA CAA CGA ACA AAG ATG 3,’5’端和3’端的2-3个碱基进行硫代修饰,3’端连接一个胆固醇,再进行125I标记。小鼠麻醉后鼻内给药,分别于不同时间点处死小鼠并取各脏器及血液,γ计数仪测放射性计数。结果滴鼻给药后,DZ很快进入肺部和胃肠道并有少量药物吸收入血并进入其他脏器,肺部放射性浓度仅次于胃肠道,于6小时达最高峰,为总药物放射量的15.59%,24小时仍有4.9%的药物存留肺部,其浓度远远高于其他脏器。在其他脏器中,6小时脏器放射性大小依次为肝脏〉肾脏〉心脏〉脾脏〉脑部。结论肺作为DZ治疗RSV感染的靶器官,经麻醉后鼻内给药后能够达到有效浓度,且持续较长时间,建议用药间隔为24小时。     

E1B缺陷腺病毒dl1520预感染CNE-2细胞对其致瘤性的影响

目的探讨E1B-55KDa缺陷腺病毒dl1520预感染鼻咽癌细胞CNE-2对其致瘤性的影响。方法10MOI(感染复数)的dl1520感染CNE-2细胞后,按5%、20%的比例将感染细胞和未感染细胞混合后做裸鼠皮下注射,观察肿瘤生长情况并采用免疫组化检测腺病毒六邻体抗原,分析dl1520在肿瘤内的复制及分布情况。结果5%、20%组均可见肿瘤生长明显抑制,抑瘤率分别为30.59%、76.60%,P<0.01。免疫组化证实瘤内有大量病毒复制且20%组比5%组分布更广泛。结论dl1520预感染CNE-2细胞后对其裸鼠移植瘤的生长有明显抑制作用,进一步证实dl1520具有一定的抗肿瘤作用且病毒在瘤内的分布情况可影响抗肿瘤的效果。     

99m Tc-HL91 "hot spot" imaging of mice bearing human carcinoma by gamma camera and the effects of tumor necrosis on imaging

Objective To evaluate the hypoxia-avid agent ^99m Tc-HL91 (^99m Tc labeled 4, 9-diaza-3, 3, 10, 10-tetramethyldodecan-2, 11-dione dioxime) as the tracer of tumor "hot spot" imaging and the influence of tumor necrosis on the image.
Methods After injection of ^99m Tc-HL91, 6 nude mice bearing human breast cancer MCF-7 and 18 nude mice bearing human pancreatic adenocarcinoma were subjected to gamma camera imaging, postmortem analysis, and autoradiography and imaging of tumor sections.
Results The image of tumor was identified 1 hour after injection of ^99m Tc-HL91.Images demonstrated gradually increased ^99m Tc-HL91 uptake in the tumor 1-12 hours after injection (P<0.05-0.001).Six hours after injection, the radioactivity ratios of tumor to thorax and tumor to head were higher than 2.1.Six hours after injection, the radioactivity ratios of tumor to brain, muscle, blood, heart, lung and kidney in pancreatic adenocarcinoma bearing nude mice were 101.0±114.7, 30.0±30.3, 19.9±21.9, 14.4±15.1, 3.71±2.41 and 0.46±0.26, respectively, and the radioactivity ratios in breast cancer MCF-7 bearing nude mice were close to these figures.The radioactivity of non-necrotic tumor was 3.77 times that of necrotic tumor.However, the radioactivity ratios of tumor to liver, intestine and stomach were lower than 1.3. Autoradiographs and images of tumor sections showed that the radioactivity was higher in the region of solid tumor than in the necrotic region.
Conclusion ^99m Tc-HL91 via gamma camera positively identifies regional tumor in nude mice bearing human cancer.^99m Tc-HL91 retention is lower in necrotic tumor than in non-necrotic tumor.The low radioactivity ratio of tumor to abdominal organs limits the application of ^99m Tc-HL 91 in detecting abdominal tumors.