人胚肺二倍体细胞KMB17凋亡的形态学发生

无血清培养是诱导细胞凋亡的常规方法,具有简便、快速的特点。用光学显微镜、荧光显微镜及透射电镜观察了人胚肺二倍体成纤维细胞（ＫＭＢ１７）在无血清培养过程中细胞凋亡的形态学发生过程。结果：无血清诱导后１ｈ,光镜下可见致密单层的成纤维状细胞出现疏松状态;３ｈ后,少数细胞（１％～５％）出现圆缩;６ｈ后,成纤维细胞全部由长梭形收缩为圆形,体积缩小。荧光及电镜下可将细胞凋亡形态上分为两个阶段,第一阶段细胞出现     

周氏克金岩方提取部位抗A549细胞增殖的研究

目的 观察周氏克金岩方提取部位对肺癌A549细胞生长和凋亡的影响.方法 MTT法观察不同浓度的克金岩方提取部位对肺癌A549细胞和正常人胚肺成纤维细胞HFL-I生长增殖的影响.Hoechst33258染色后在荧光显微镜下观察A549细胞凋亡的形态变化,同时用流式细胞仪进行细胞周期检测分析.结果 不同浓度提取部位E对A549细胞有不同程度的生长抑制作用;作用48 h后,荧光显微镜下可见A549细胞核固缩,染色质凝聚等凋亡形态学特征;流式检测显示Go/G1期细胞增多,并有凋亡细胞出现.结论 周氏克金岩方提取部位E能够显著抑制肺癌细胞的生长,并对人体正常细胞(胚肺成纤维细胞)无显著影响.     

丁酸钠选择性诱导子宫颈癌细胞凋亡及其机制

目的 研究丁酸钠诱导子宫颈癌细胞株HeLa和原代培养的人胚肺成纤维细胞凋亡情况,建立丁酸钠选择性诱导子宫颈癌细胞凋亡模型,并探讨其诱导凋亡机制。方法 倒置相差显微镜下观察细胞形态改变;MTT法检测药效动力学特征;流式细胞仪检测药物作用前后细胞凋亡情况;琼脂糖凝胶电泳观察凋亡特征性梯状条带,RT-PCR检测凋亡相关基因Bax和Bcl-2转录水平。结果 丁酸钠抑制细胞生长呈时效和量效关系,其对HeLa细胞的生长抑制作用较对人胚肺成纤维细胞的作用明显;亚G1峰和AnnexinV／PI、DNA Ladder结果显示,丁酸钠作用后HeLa细胞72h后出现的凋亡率显著高于人胚肺成纤维细胞;RT-PCR结果显示丁酸钠作用前后HeLa细胞中凋亡相关基因：Bax和Bcl-2表达水平无明显改变。结论 一定浓度的丁酸钠可以选择性诱导子宫颈癌细胞株HeLa凋亡,而对正常人二倍体细胞毒性较小,并且这种凋亡诱导作用并非通过调控：Bax和Bcl-2的转录水平而实现。     

化痰散结方含药血清诱导人肺癌细胞凋亡的机理研究

为探讨中药化痰散结方诱导人肺癌细胞 (SPC A1)凋亡的作用及其对正常人胚肺细胞的毒性作用 ,通过血清药理学方法 ,选择不同浓度的含药兔血清与人肺癌细胞共同孵育处理 ,并以正常人胚肺细胞 (HEL)作对照。结果 :人肺癌细胞经含中药兔血清作用 ,由贴壁生长而逐渐脱落 ,外形变圆 ,体积缩小 ,折光性增强 ;荧光镜下可见细胞核破碎 ,裂解为大小不等的凋亡小体 ;流式细胞仪检测显现典型的细胞凋亡峰 ,以 5%含药血清作用 4 8h凋亡峰最为明显 ,凋亡率为 4 2 .8% ;出现S期细胞阻滞 ;而该含药血清对人胚肺细胞无诱导凋亡作用。化痰散结方通过血清药理学方法诱导人肺癌细胞的凋亡 ,可能是其抗肿瘤的分子学机制之一。     

电镜和荧光显微技术在细胞凋亡研究中的应用

目的：探讨荧光显微技术在检测细胞凋亡中的作用。方法：应用拓扑异构酶Ⅱ抑制剂VP-16及化学毒物叠氮钠分别诱导HL-60细胞凋亡和死亡，用透射电镜和经Hoechst 33258染色的荧光显微镜对凋亡及死亡动态观察和定量分析。结果：HL-60细胞在VP16处理后，荧光显微镜下可见核浓缩、染色质凝集、核碎裂等凋亡特征；而叠氮钠诱导的细胞死亡则出现核溶解、核染色质弥散，但无上述改变；两者电镜的观察与荧光显微镜的改变一致；凋亡细胞及坏死细胞荧光显微镜下呈不同的形态特征。对处理的不同时间点细胞的荧光显微镜观察发现：处理后4h核形态开始变化，有核浓缩的细胞比例在处理8h达高峰，然后下降，核碎裂细胞的比例在24h达高峰，约占80％，表明核浓缩发生在核碎裂之前。结论：荧光显微镜技术可明确观察判断细胞凋亡及坏死，并可进行动态及定量分析，是良好的凋亡检测方法。     

鹿血清对体外培养二倍体细胞的抗老化实验研究

实验用体外培养人胚肺二倍体成纤维细胞,从35代开始在培养液中加入鹿血清为实验组,不加鹿血清为对照组。我们观察了鹿血清对细胞的生长和增殖的影响,以及一般光镜、荧光显微镜下的细胞形态与组化变化。结果表明实验组的细胞形态、生长和增殖均比同代对照组良好。实验证明5％鹿血清对体外培养的人胚肺二倍体细胞有抗老化作用。     

人成纤维细胞的原代培养及鉴定

目的建立不同组织来源成纤维细胞的培养方法并比较其培养差异。方法用消化法和贴壁法分离人胚胸主动脉成纤维细胞与人胚肺成纤维细胞,利用差速培养法纯化成纤维细胞,并对所培养的细胞进行倒置显微镜观察和苏木素-伊红染色,观察成纤维细胞形态,并对培养的细胞行波形蛋白免疫染色鉴定。结果接种24 h后人胚胸主动脉成纤维细胞全部贴壁,48 h后细胞体积增大并伸出伪足,形状以梭形或不规则形为主;而消化的人胚肺组织中细胞形态不一,经继续培养4～5代后,培养物完全由成纤维细胞构成。结论用胶原酶Ⅰ消化人胚胸主动脉成纤维细胞效果好,而用胰蛋白酶液消化人胚肺成纤维细胞效果较好,用差速生长纯化的成纤维细胞可用于实验研究。     

维生素C对紫外线诱导HLF细胞凋亡的保护作用

目的 探讨紫外线诱导人HLF细胞凋亡对DNA降解特点，以维生素C对紫外线诱导细胞凋亡的保护作用。方法 紫外线（UVB）分别照射体外培养的人肺成纤维细胞3min和5min，同时添加维生素C（50μmol/L）。设立对照组。利用吖啶荧光染料染色鉴定凋亡细胞，利用琼脂糖凝胶电泳检测DNA ladder。结果 紫外线可以诱导人肺成纤维细胞凋亡，作用存在时间效应关系。紫外线诱导人肺成纤维细胞凋亡时，未出现典型的DNA ladder现象。维生素C对于紫外线诱导的细胞凋亡有显著的抑制作用。结论 DNAladder不能作为细胞凋亡的唯一的标志，紫外线诱导的细胞凋亡与DNA ladder的出现并不总是一致的。维生素C具有拮抗紫外线诱导的细胞凋亡作用。     

硒对紫外线诱导HLF细胞凋亡的保护作用

目的：探讨紫外线诱导人HLF细胞凋亡时DNA降解特点，以及硒对紫外线诱导细胞凋亡的保护作用。方法：紫外线分别照射体外培养的人肺成纤维细胞3min和5min，同时添加亚硒酸钠（8ng/ml），设立对照组。利用吖啶橙荧光染料染色鉴定凋亡细胞，利用琼脂糖凝胶电泳检测DNA ladder。结果：紫外线可以诱导人肺成纤维细胞（28代）凋亡，作用存在时间效应关系。紫外线诱导人肺成纤维细胞凋亡时，未出现典型的DNA ladder现象。硒对于紫外线诱导的细胞凋亡有显著的抑制作用。结论：DNA ladder不能作为细胞凋亡的唯一的标志，紫外线诱导的细胞凋亡与DNA ladder的出现并不总是一致的。硒具有拮抗紫外线诱导的细胞凋亡作用。     

尿激酶对大鼠胸膜成纤维细胞增殖与细胞凋亡的影响

目的:研究尿激酶(UK)对大鼠胸膜成纤维细胞(FB)增殖与细胞凋亡的影响. 方法:将大鼠胸膜FB原代培养,4～12代用于实验,FB与不同浓度UK共培养24～96 h;用光学显微镜观察其形态学改变;荧光染色查找凋亡小体;流式细胞技术观察有无凋亡细胞出现. 结果:UK以时间和浓度依赖的方式抑制细胞生长,但未发现凋亡小体,流式细胞技术没有检测到凋亡细胞. 结论:UK能够抑制FB增殖,其机制与细胞凋亡无关.     

糖尿病大鼠视网膜毛细血管细胞凋亡——TUNEL法研究

目的： 确定早期糖尿病视网膜病变 （糖网病） 大鼠视网膜毛细血管细胞凋亡并观察凋亡特征。方法： 选成年ｗ ｉｓｔａｒ大鼠４０ 只, 随机分成正常对照（ Ｃ Ｏ Ｎ）、糖尿病１ 月 （ Ｄ Ｍ１）、３ 月 （ Ｄ Ｍ３） 及６ 月 （ Ｄ Ｍ ６） 组。采用链脲佐菌素腹腔内注射诱发大鼠糖尿病。取各组大鼠视网膜制备血管铺片, Ｔ Ｕ Ｎ Ｅ Ｌ法标记, 光镜观察。结果： Ｔ Ｕ Ｎ Ｅ Ｌ法标记的阳性周细胞核出现于 Ｄ Ｍ３ 和 Ｄ Ｍ６ 组,而内皮细胞见于 Ｄ Ｍ ６ 组。 Ｃ Ｏ Ｎ 和 Ｄ Ｍ１ 组未见阳性反应细胞。被标记的周细胞核小而圆, 位于毛细血管侧面, 稍突出于血管壁。而内皮细胞核大而呈现椭圆形, 位于毛细血管中央, 与血管平行, 阳性反应细胞染色质分布不均, 表现为环形核、新月形核等典型的凋亡细胞特征。结论： 早期糖网病大鼠视网膜毛细血管周细胞丧失的性质为细胞凋亡, 内皮细胞亦存在凋亡。     

帕金森病细胞模型的建立及鱼藤酮对多巴胺能神经元的毒性作用

目的：建立帕金森病细胞模型,研究鱼藤酮对多巴胺能神经元的毒性作用及机制。方法：PC12细胞诱导分化成多巴胺能神经元,加入不同浓度鱼藤酮（0、10、25、50、75和100 nmol•L^-1）,观察细胞形态改变;鱼藤酮处理PC12细胞24、48和72 h,MTT法检测细胞活性;免疫组化和免疫荧光法观察α-synuclein 在胞内聚集情况;AO/EB双染检测细胞凋亡。结果：神经生长因子（NGF）诱导后PC12细胞形状不规则,突起增多变长,细胞间连接增多;染毒后细胞突起结构逐渐消失,细胞体积变小、形态变圆。50 nmol•L^-1鱼藤酮作用24 h后PC12细胞活力开始低于对照组（P<0.05）,随着浓度增大,细胞活力进一步下降,呈浓度依赖性（P<0.01）;随着作用时间延长,细胞活力亦逐渐下降,不同时间组间比较差异有显著性(P<0.01)。免疫组化结果显示,胞浆中出现棕色的类圆形α-synuclein染色阳性颗粒;免疫荧光显示,胞浆中有α-synuclein标记的强绿色荧光的蛋白聚集。染毒细胞逐渐呈现出早期凋亡细胞、晚期凋亡细胞和坏死细胞状态。结论：鱼藤酮对多巴胺能神经元有毒性作用,可形成类包涵体样蛋白聚集并诱导细胞凋亡。α-synuclein 代谢异常及细胞凋亡可能在鱼藤酮所致的帕金森病发病机制中发挥重要作用。     

水飞蓟宾对人肝癌细胞株HepG2增殖的影响及其机制研究

目的研究水飞蓟宾(Silibinin,Slybin)在体外对人肝癌细胞株HepG2的抗增殖作用及其机制.方法 MTT法观察水飞蓟宾对细胞增殖的抑制作用,免疫细胞化学检测增殖细胞核抗原(PCNA)及Ki-67蛋白的表达,流式细胞仪分析细胞周期分布及凋亡率,光镜及透射电镜观察细胞形态和超微结构的变化.结果水飞蓟宾可明显抑制HepG2的增殖,经水飞蓟宾作用后PCNA及Ki-67的表达显著减弱(P<0.01);水飞蓟宾可使实验组细胞阻滞于G2/M期,并产生明显凋亡(P<0.05);光镜发现细胞体积缩小,变圆,胞浆浓缩,核固缩深染,电镜可见凋亡及凋亡小体.结论水飞蓟宾可通过下调HepG2中PCNA及Ki-67蛋白的表达,改变细胞周期进程,诱导细胞凋亡来发挥其增殖作用.     

丁酸钠对食管癌Eca-109细胞增殖和凋亡的作用

目的: 观察丁酸钠对食管癌Eca-109细胞增殖和凋亡的作用。方法: 以1、2.5、5mmol/L丁酸钠处理Eca-109细胞,倒置显微镜观察细胞形态变化,透射电镜观察细胞凋亡的形态,四甲基噻唑氮蓝法检测抑制细胞增殖率,TUNEL法检测细胞凋亡率。结果: Eca-109细胞经丁酸钠处理后:光镜下观察细胞变小、变圆,部分从培养瓶壁上脱落下来;电镜下细胞核体积缩小,染色质浓缩聚集于核膜处;细胞增殖受到明显抑制,1、2.5、5mmol/L丁酸钠处理24h、48h和72h后,细胞生长抑制率分别是13.38%、34.15%、39.02%,14.04%、33.33%、46.49%和31.11%、40.74%、48.15%,与低浓度组比较差异有统计学意义(P<0.05~P<0.01);2.5mmon/L丁酸钠处理24h组与阴性对照组细胞凋亡率分别是5.5%和1.6%,差异有统计学意义(P<0.01)。结论: 丁酸钠可抑制食管癌Eca-109细胞增殖、促进凋亡,且呈浓度和时间依赖性。     

X线照射对大肠癌细胞株Lovo细胞膜TNFR—p75表达的研究

目的研究X线照射在体外培养人大肠癌细胞株Lovo后，其膜TNFR-p75表达情况。方法免疫细胞化学检测TNFR-p75蛋白的表达，流式细胞仪分析细胞凋亡率，光镜及透射电镜观察细胞形态变化。结果X线照射后的TNFR—p75蛋白表达显著增强（P〈0．01）；光镜及电镜发现细胞体积缩小，变圆，核缩小，染色质凝集，染色质呈颗粒、块状均质无结构样物质，细胞间散在膜包裹的凋亡小体；流式细胞仪分析细胞凋亡率显著增高（P〈0．05）。结论X线可通过上调TNFR—p75蛋白的表达抑制其脱落，诱导细胞凋亡增强照射肿瘤的杀伤作用。     

鹿茸多肽联合GDNF基因修饰的雪旺细胞对Aβ25-35诱导脊髓神经元凋亡的保护作用

目的：探讨鹿茸多肽（VAP）联合胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）基因修饰的雪旺细胞（SCs）对β淀粉样蛋白25-35（Aβ_25-35）诱导的脊髓神经元凋亡的保护作用,阐明其作用机制。方法：制备胎鼠脊髓细胞,取对数生长期的脊髓神经元,采用Aβ_25-35诱导脊髓神经元凋亡,将脊髓神经元分为正常细胞组（正常脊髓神经元）、诱导凋亡组（Aβ_25-35诱导凋亡后的脊髓神经元）、SCs组（Aβ_25-35诱导凋亡后的脊髓神经元+SCs）、GDNF组（Aβ_25-35诱导凋亡后的脊髓神经元+GDNF）、SCs+GDNF组（Aβ_25-35诱导凋亡后的脊髓神经元+GDNF转染的SCs）和VAP联合组（Aβ_25-35诱导凋亡后的脊髓神经元+VAP联合GDNF转染的SCs）。流式细胞术检测各组脊髓神经元凋亡率,免疫组织化学染色检测各组脊髓神经元中caspase-3阳性细胞数。结果：胎鼠脊髓神经元悬液接种后初始脊髓神经元大多为圆形。流式细胞术检测,与诱导凋亡组比较,SCs组、GDNF组、SCs+GDNF组和VAP联合组脊髓神经元凋亡率降低（P<0.05）;与SCs+GDNF组比较,VAP联合组脊髓神经元凋亡率明显降低（P<0.05）。免疫组织化学检测,各组脊髓神经元中均有caspase-3表达,SCs组、GDNF组和SCs+GDNF组细胞着色差异不明显,脊髓神经元中caspase-3阳性细胞数差异不大,但与诱导凋亡组比较明显减少（P<0.05）。结论：VAP联合GDNF转染的SCs对脊髓神经元凋亡有保护作用,该作用通过下调脊髓神经元中caspase-3表达来实现。     

骨髓间充质干细胞移植对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用

目的研究骨髓间充质干细胞（BMSCs）移植对新生SD大鼠缺血缺氧性脑损伤（HIBD）的治疗作用。方法新生SD大鼠随机分为假手术组、模型组、BMSCs移植组;结扎左侧颈总动脉制备大鼠缺氧缺血性脑损伤模型,3 d后BMSCs组左侧脑室接种1×105个BMSCs;分别于移植后第2周和第4周处死各组大鼠,取脑组织行HE染色及免疫荧光染色观察病理变化。结果 HE染色假手术组脑组织结构正常核仁大而圆,胞质丰富;模型组大鼠脑神经元大量坏死,出现空洞;BMSCs移植组与模型组相比较,损伤细胞较少,但是多于假手术组,无空泡,可见新生毛细血管生成。移植4周后BMSCs移植组神经元凋亡指数（0.170±0.0002）与假手术组（0.094±0.0003）相比,无统计学意义（P〉0.05）,但明显小于模型组（0.342±0.0002）,有统计学意义（P〈0.05）。结论 BMSCs移植可降低缺氧缺血性脑损伤新生大鼠神经元凋亡指数,能够促进神经功能恢复,对新生SD大鼠缺血缺氧性脑损伤有治疗作用。     

IL-24基因联合电离辐射对前列腺癌PC-3细胞凋亡的影响

目的：探讨人白细胞介素24（IL-24）基因联合X射线对人前列腺癌PC-3细胞凋亡的影响，为IL-24基因联合电离辐射治疗肿瘤奠定实验基础。方法：检测电离辐射对PC-3细胞凋亡的影响分为假照射组及2、4、6、8、12和18 Gy X射线照射组；检测IL-24目的基因的表达分为对照组（0.01 mol•L^-1PBS）、空载体组［pcDNA3.1(+)载体］和IL-24基因组；检测IL-24基因联合电离辐射对PC-3细胞凋亡的影响分为对照组、空载体组、IL-24基因组、单纯照射组（6 Gy）、空载体联合照射组以及IL-24基因联合照射组。碱裂解法提取纯化质粒DNA，用PEI转染质粒DNA至PC-3细胞中，目的基因表达的检测采用RT-PCR法。Annexin V-FITC和PI双染后，采用流式细胞术（FCM）检测肿瘤细胞凋亡的变化。结果：与假照组比较，2和4 Gy X射线照射48 h后PC-3细胞凋亡百分率无明显变化，6 Gy X射线照射后细胞凋亡百分率开始明显升高（P<0.01），且细胞凋亡百分率随剂量增大而增加，约是假照组的1.6～3.0 倍。PC-3细胞中对照组和空载体组均未观察到IL-24基因的表达，而IL-24基因组则可见IL-24基因的表达；以上3组均有GAPDH基因的表达。IL-24基因联合照射组与对照组、空载体组、IL-24基因组、单纯照射组和空载体联合照射组比较，早期凋亡细胞数均有上升趋势，除单纯照射组外，与其他组比较差异均有显著性（P<0.05）；晚期凋亡和坏死细胞数也均有上升趋势，其中与对照组、单纯照射组和空载体联合照射组比较显著升高（P<0.05或P<0.001）；凋亡和坏死的总细胞数均有上升趋势，除IL-24基因组外，与其他组比较差异有显著性（P<0.05或P<0.01）。结论：IL-24基因联合电离辐射能够有效诱导人前列腺癌PC-3细胞凋亡。      

顺铂诱导体外儿童睾丸卵黄囊瘤细胞凋亡及p53的表达

目的:探讨p53在顺铂诱导儿童睾丸卵黄囊瘤细胞凋亡发生过程中的作用机制.方法:通过原代培养儿童睾丸卵黄囊瘤细胞获取实验对象,再用顺铂进行凋亡的诱导,TUNEL法检测凋亡细胞,免疫细胞化学方法检测p53表达的变化.结果:在顺铂作用下,细胞发生圆缩脱壁,凋亡小体形成.凋亡指数随着作用时间延长而增加(P＜0.01),p53的表达在早期(12 h)即达到高峰,此后未见持续增强情况.结论:顺铂能够诱导儿童睾丸卵黄囊瘤细胞的凋亡,而p53表达的增强可能是其重要的环节.     

赖氨匹林对宫颈癌Hela细胞增殖及凋亡的影响

目的研究赖氨匹林(aspisol)对人宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡和周期的影响。方法取处于对数生长期的Hela细胞,实验分为4组:阴性对照组只加等体积的低糖DMEM培养液Hela细胞;实验组加入不同浓度的aspisol,使其终浓度分别为1 mmol/L、5 mmol/L、10 mmol/L。采用描计细胞生长曲线法检测细胞增殖状态;HE染色、AO/EB方法进行凋亡细胞形态学的观察。Annexin V-FITC/PI双染检测赖氨匹林对Hela细胞作用24 h后细胞凋亡情况;流式细胞术分析赖氨匹林对Hela细胞作用24 h后细胞周期的变化。结果与对照组比较,aspisol(1,5,10 mmol/L)可呈时间、浓度依赖性抑制Hela细胞的增殖;HE染色光镜下见Aspisol组细胞密度减小,细胞变圆,胞核染色变浅。赖氨匹林(1,5,10mmol/L)作用24 h后诱导Hela细胞的早期凋亡率分别为(5.73±0.87)%、(19.11±2.86)%、(33.72±5.06)%,与对照组(0.46±0.69)%比较,差异有统计学意义(P<0.01),并呈浓度依赖性。细胞周期检测显示赖氨匹林对Hela细胞有G0/G1期阻滞作用。结论 aspisol对宫颈癌Hela细胞有抑制增殖、诱导其凋亡和改变其细胞周期分布,阻滞Hela细胞于G0/G1期。