PDGF-AB对体外培养的成纤维细胞超微结构的影响

目的：观察PDGF－AB对体外培养的成纤维细胞超微结构的影响，探讨PDGF－AB促进创面愈合的机制．方法：取第3～6代培养的成纤维细胞，用0μg／L，12．5μg／L，50μg／L的PDGF－AB分别作用48h，然后用扫描电镜和透射电镜观察．结果：PDGF－AB明显增加成纤维细胞表面突起和纤维样物质，以及增强成纤维细胞的合成功能．结论：PDGF－AB可能通过激活、趋化成纤维细胞、增强细胞合成功能来促进创面愈合．     

重组人酸性成纤维细胞生长因子对创面愈合的作用

目的：观察重组人酸性成纤维细胞生长目子（rhaFGF）对创面愈合的影响，探讨rhaFGF在组织修复中的作用机制。方法：利用大鼠创伤模型，采用HE染色观察不同时间点创面愈合情况；采用免疫组化方法检测伤后不同时间点创面愈合组织中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（caspase-3）的表达情况；采用羟脯氨酸测试法检测伤口中胶原纤维的含量，并对照观察创面应用rhaFGF后以上各项指标的变化。结果：外用rhaFGF后创面组织中伤后第8天毛细血管胚芽与成纤维数量显著多于单纯创伤组，伤后第14天，经rhaFGF治疗的大鼠创面的再上皮化明显强于单纯创伤组。创面组织中caspase-3的表达量逐渐增加，外用rhaFGF后第14天和第21天的caspase-3表达量显著高于单纯创伤组。伤口中羟脯氨酸的含量逐渐增加，外用rhaFGF后第8天和第14天的羟脯氨酸含量显著高于单纯创伤组。结论：外用thaFGF在创伤愈合的前期可以促进肉芽组织生长使得愈合周期缩短。在创伤愈合的后期可以直接或间接的促进成纤维细胞的凋亡，维持了细胞增殖与凋亡的平衡。     

碱性成纤维细胞生长因子促进小型猪创面修复的剂量与效应关系研究

目的：研究碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）促进小型猪创面修复和对表皮分离细胞培养的量效关系。方法：利用小型猪创伤模型，分别按３个不同浓度的ｂＦＧＦ组（５００Ｕ／ｍｌ、１０００Ｕ／ｍｌ、１５００Ｕ／ｍｌ）处理创面，并用磺胺嘧啶银（ＳＤ－Ａｇ）及生理盐水做对照，观察创面愈合情况；同时取相应部位的表皮细胞进行培养，ＭＴＴ法观察ｂＦＧＦ对猪表皮细胞体外生长的影响。结果：提示１０００Ｕ／ｍｌ及１５００Ｕ／ｍｌ浓度组促创伤修复作用比较明显，体外细胞培养１０～５０μｇ／Ｌ细胞增殖作用最明显。结论：ｂＦＧＦ对促进小型猪创面修复和对表皮分离细胞培养有一定的量效关系。     

保护素对原代肺成纤维细胞炎症及纤维化增殖的影响

目的：探讨保护素（PDX）对脂多糖（LPS）诱导的原代肺成纤维细胞环氧合酶-2（COX-2）表达的影响及对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导其纤维化增殖转化的影响。方法：分离、纯化、鉴定得到小鼠肺成纤维细胞,用LPS诱导建立成纤维细胞体外炎症模型,用TGF-β1诱导建立体外纤维化增殖模型。PDX分别作用于经过LPS或TGF-β1诱导的原代肺成纤维细胞。采用细胞浓度试剂盒测定细胞增殖,采用实时定量PCR测定基因表达,采用ELISA法检测细胞上清液前列腺素E2（PGE2）水平,应用Western blot检测COX-2蛋白的表达。结果：采用10 ng/mL TGF-β1刺激诱导体外培养的原代肺成纤维细胞48 h能建立较为合理的体外纤维化增殖模型。PDX抑制LPS诱导的原代肺成纤维细胞COX-2蛋白的表达及上清液PGE2水平,同时可能通过剂量依赖方式抑制TGF-β1诱导的原代肺成纤维细胞的增殖。PDX抑制TGF-β1诱导的原代肺成纤维细胞collagen 1α1、collagen 1α2的合成以及α-SMA、纤连蛋白的基因表达。结论：PDX能抑制LPS诱导的小鼠原代肺成纤维细胞COX-2表达及PGE2水平,同时能抑制TGF-β1诱导的小鼠原代肺成纤维细胞纤维化增殖、胶原蛋白合成及向肌成纤维细胞转化。     

rhEGF对人皮肤成纤维细胞的促增殖作用

目的 研究重组人表皮生长因子(rhEGF)在不同浓度下对人皮肤成纤维细胞增殖的影响,为临床准确定量应用这两种因子修复创面、加速创面愈合提供理论依据. 方法 体外培养人皮肤成纤维细胞,分别用浓度为0,10,30,50,80,100,150 μg/L的rhEGF干预细胞,48 h后四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞的活性.选择最适浓度生长因子干预的细胞,用流式细胞仪检测细胞的DNA倍体情况. 结果 不同浓度的rhEGF分别对成纤维细胞干预48 h后,显示rhEGF在80μg/L浓度时MTT值最大;并检测出在最适浓度生长因子干预24 h后细胞大多处于DNA合成前期和合成期. 结论 rhEGF浓度在30-100μg/L之间对人皮肤成纤维细胞有明显的促增殖作用,其中以80μg/L较显著.     

重组人酸性成纤维细胞生长因子促进创伤愈合的研究

目的：研究重组人酸性成纤维细胞生长因子（rh-aFGF)对兔创伤的促愈合作用。方法：采用兔背部刀割伤模型，将rh-aFGF溶液隔日一次滴注于创面，用创面照像、透明膜描记称量法记录伤后第4、8、12、16天创面面积，用注水法测量伤腔容积，伤后第8、16天取创面组织，观察创面的病理学变化，包括肉芽组织生长与再上皮化情况。结果：rh-aFGF可明显加速兔皮肤创伤的愈合，使创面面积明显缩小（P＜0．05），使伤腔容积明显减少（P＜0．05）。组织学检查：rh-aFGF组创面伤后8天成纤维细胞生长活跃、数量多，其毛细血管胚芽与成纤维细胞数量显著多于对照组；伤后16天，创面收缩与再上皮化明显，新生上皮向创面中心爬行较快。结论：rh-aFGF对兔背部刀伤创面有明显的促修复作用。     

重组人酸性成纤维细胞生长因子对糖尿病大鼠难愈性皮肤溃疡的促愈合作用

目的：研究外用大肠杆菌表达的重组人酸性成纤维细胞生长因子（rhaFGF）对糖尿病大鼠难愈性创面的促愈合作用。方法：雄性Wistar大鼠10只，制备糖尿病大鼠难愈性皮肤溃疡模型；创面局部分别用rhaFGF（90U•cm^-2）及生理盐水喷洒；记录创面面积、伤腔容积及愈合时间，观察创面肉芽组织生长及再上皮化，评价创伤修复情况。 结果：与生理盐水对照组比较，rhaFGF组伤后各时间点的创面面积、伤腔容积均明显缩小﹙P＜0.05﹚，愈合率显著提高﹙P＜0.05﹚，创面愈合时间明显缩短﹙P＜0.05﹚。rhaFGF组的肉 芽组织生长及再上皮化明显加速。 结论：局部应用大肠杆菌表达的rhaFGF对糖尿病大鼠难愈性创面有明显的促愈合作用。     

牡蛎酶解液对2型糖尿病小鼠皮肤软组织创伤愈合修复的作用及其机制研究

目的 探究牡蛎酶解液对2型糖尿病小鼠皮肤软组织创伤愈合修复的作用，并分析相关机制。方法 将50只成功复制的2型糖尿病皮肤软组织创伤小鼠随机分为模型对照组、阳性对照组，以及牡蛎酶解液低、中、高剂量组，每组10只，其中牡蛎酶解液低、中、高剂量组小鼠于模型复制成功后次日分别给予0.25 g/10（g·d）、0.50 g/10（g·d）、1.00 g/10（g·d）牡蛎酶解液灌胃处理；模型对照组、阳性对照组同时间分别给予等量生理盐水、初元Ⅰ型产品0.1 mL/10（g·d）灌胃处理。分别于术后第3天、7天、14天观察小鼠创面并计算创面愈合率；苏木精-伊红（HE）染色观察模型复制后第14天小鼠创面组织病理变化；酶联免疫吸附试验（ELISA）检测创面组织白细胞介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平；Western blotting检测创面组织基质细胞衍生因子-1（SDF-1）、趋化因子受体4（CXCR4）蛋白的表达。结果 牡蛎酶解液低、中、高剂量组、阳性对照组和模型对照组小鼠术后3 d、7 d、14 d的创面愈合率比较，采用重复测量设计的方差分析，结果 ①不同时间点小鼠创面愈合率有差异（F =12.978，P =0.000）；②5组小鼠创面愈合率有差异（F =16.836，P =0.000）；③5组小鼠创面愈合率变化趋势有差异（F =22.128，P =0.000）。HE染色结果显示，与模型对照组比较，术后第3天、7天、14天，牡蛎酶解液低、中、高剂量组小鼠新生肉芽组织，毛囊、汗腺细胞和导管增生均较多。与模型对照组比较，牡蛎酶解液低、中、高剂量组小鼠创面愈合率、创面组织SDF-1、CXCR-4蛋白相对表达量升高（P <0.05），炎症因子IL-6、TNF-α水平降低（P <0.05），呈剂量依赖性。结论 牡蛎酶解液能促进2型糖尿病小鼠皮肤软组织创伤愈合修复，可能是通过激活SDF-1/CXCR-4通路进而抑制创面组织炎症反应来实现的。     

碱性成纤维细胞生长因子促进小型猪创面修复的剂量与效应 …

目的：研究碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）促进小型猪创面修复和对表皮分离细胞培养的量效关系。方法：利用小型猪创伤模型,分别按３个不同深度的ｂＦＧＦ组（５００Ｕ／ｍｌ,１０００Ｕ／ｍｌ、１５００Ｕ／ｍｌ）处理创面,并用胺嘧啶银（ＳＤ－Ａｇ）及生理盐水做对照,观察创面愈合情况,同时取相应部位的表皮细胞进行培养,ＭＴＴ法观察ｂＦＧＦ对猪表皮细胞体外生长的影响。结果：提示１０００Ｕ／ｍｌ及１５００Ｕ／ｍ     

转染人GL50基因细胞株的建立及其对T细胞体外增殖与活化的促进作用

目的：建立稳定表达人协同刺激分子GL50的转基因细胞,探讨其体外对T细胞活化与增殖的协同刺激效应。方法：RT-PCR法从人B淋巴瘤Daudi细胞中克隆人GL50编码区全长基因,经EcoR I和BamH I双酶切后插入pIRES2-EGFP真核表达载体,构建pIRES2-EGFP-GL50重组子。用脂质体法转染小鼠成纤维L929细胞株,经G418长期加压筛选,免疫荧光标记和流式细胞术分析GL50分子在L929/GL50细胞膜上的表达,CCK-8法和酶联免疫吸附测定法（ELISA）分析L929/GL50转基因细胞对T淋巴细胞体外增殖与活化的影响。结果：成功建立稳定表达GL50分子的L929/GL50转基因细胞。该转基因细胞在体外能显著地促进T细胞增殖;促进T细胞的活化及其对IL-4、IL-10和IL-17等细胞因子的分泌。结论：ICOS/GL50信号在机体免疫应答过程中发挥了重要作用,GL50转基因细胞的成功构建为进一步研究ICOS/GL50分子的生物学功能奠定了物质基础。     

糖尿病足溃疡渗出液中IL-1β动态变化及黄芪提取液外敷治疗

目的：观测糖尿病足部溃疡渗出液中白介素1β（IL-1β）动态变化,探讨用黄芪提取液外敷促进溃疡愈合的可能机理。方法：收集急慢性糖尿病伤口渗出液,用ELISA法检测IL-1β的变化,用酶标仪测定不同剂量IL-1β的变化对成纤维细胞（Fb）增殖能力的影响,观测外敷黄芪提取液治疗过程中IL-1β量的改变,同时观测足部溃疡肉芽开始出现时间（GT）、溃疡愈合时间（HT）、截肢率、病死率的差异。结果：糖尿病足溃疡病人创面渗出液中IL-1β含量为（89.16±38.14）ng/mL,糖尿病急性损伤病人创面渗出液中IL-1β含量为（8.84±7.06）ng/mL,其差异有统计学意义（P〈0.01）;IL-1β在0.5~5 ng/mL浓度范围可明显促进Fb增殖,随着其浓度增加,这种作用逐渐减弱,当IL-1β为50 ng/mL对Fb增殖没有影响,IL-1β再继续增加时对Fb增殖表现为抑制作用;黄芪外敷组与生理盐水外敷组在治疗前伤口渗出液中IL-1β的浓度在两组间无显著性差异（P〉0.05）,第1周末黄芪组IL-1β量低于生理盐水组,但两组间仍无显著性差异（P〉0.05）,自第2周末开始黄芪治疗组伤口渗出液中的IL-1β量均显著低于生理盐水治疗组（P〈0.05）,并且黄芪治疗组GT和HT亦显著短于生理盐水组（P均〈0.01）。黄芪治疗组患者溃疡愈合过程中的GT、HT均与伤口渗出液中IL-1β浓度有显著正相关（P分别为0.7123,0.6866,P均〈0.01）。结论：糖尿病足部溃疡难以治愈的原因与伤口渗出液中IL-1β量过高,成纤维细胞增殖能力明显受抑有关,黄芪多糖外敷可以降低伤口渗出液中IL-1β浓度,显著缩短溃疡GT和HT,降低截肢率。     

血竭提取物对人成纤维细胞增殖的影响

目的: 观察血竭提取物对体外培养成纤维细胞增殖的影响,探讨血竭促进创面愈合的机制. 方法: 将血竭经过氯仿、乙酸乙酯、乙醇回流提取得到的3种提取液,分别加入培养液并进行成纤维细胞的培养,MTT法检测不同血竭提取物在不同浓度以及不同时间点对体外培养成纤维细胞增殖的影响, 并绘制最适浓度条件下细胞生长曲线. 利用流式细胞仪分析最适浓度培养条件下成纤维细胞的细胞周期变化. 结果: 血竭乙酸乙酯提取物在0.5～2.0 g/L浓度范围内,促进成纤维细胞增殖,且呈剂量依赖性,在浓度为2.0 g/L时促进作用最为显著,此条件下处于S期的细胞较对照组增加18.3% (P＜0.01). 结论: 血竭乙酸乙酯提取物能显著促进成纤维细胞增殖,可能与血竭促进创面愈合的机制有关.     

脑心通胶囊对Ⅱ型糖尿病小鼠伤口愈合的作用

[目的]研究脑心通胶囊(NaoXinTong,NXT)对Ⅱ型糖尿病小鼠伤口愈合的作用和作用机制。[方法]将8-12周db/+小鼠db/db小鼠适应性喂养1周后,按体质量随机分组db/+Saline组、db/db Saline、db/db NXT(0.7 g/kg)组,建立切除伤口夹板模型,每天灌胃给药并记录小鼠体质量,每两天监测空腹血糖并对伤口拍照测量伤口面积,分别在术后7、16 d取小鼠伤口处皮肤组织,小鼠伤口处皮肤组织进行切片或立即冷冻保存。HE染色观察伤口边缘肉芽组织的面积和上皮化,Lectin免疫荧光检测伤口周围毛细血管的密度,新鲜组织用来提取蛋白并用Western Blotting检测VEGF、PI3K/p-PI3K、AKT/p-AKT、eNOS/p-eNOS在伤口边缘的表达。[结果]与db/db Saline组相比,db/db NXT组小鼠伤口愈合率增加,肉芽组织面积和上皮化增加,伤口周围的血管密度和VEGF的表达增加,PI3K/AKT/eNOS的磷酸化增加,但在伤口愈合过程中糖尿病小鼠的体质量和空腹血糖没有变化。[结论]脑心通胶囊通过激活PI3K/AKT/eNOS信号通路增加VEGF表达促进血管新生,增加肉芽组织的形成和上皮化,加速Ⅱ型糖尿病小鼠伤口愈合。     

IL-23促进食管鳞状细胞癌细胞上皮间质转化和迁移

［摘要］目的: 探讨外源性IL-23通过PI3K/AKT/c-Myc通路对TE-1细胞上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)和迁移的影响。方法: 采用免疫组织化学和免疫荧光检测12例食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)患者癌组织与配对癌旁组织中IL 23及其受体(IL 23R)的表达和胞内定位;蛋白质印迹检测TE 1细胞与阴性对照NIH3T3细胞中IL-23p19表达,流式细胞术检测IL-23R的表达;PCR和蛋白质印迹法检测空白对照组,50 ng/mL IL-23组,1 μmol/L Wortmannin +50 ng/mL IL-23组细胞中c-Myc mRNA及其蛋白与E 钙黏蛋白、波形蛋白、p-AKT、Snail 1、Slug蛋白的表达;划痕和Transwell实验检测各组TE-1细胞侵袭和迁移能力。结果： 与癌旁组织比较,ESCC组织及其细胞质中IL-23呈高表达,细胞膜上IL-23R高表达;与阴性对照比较,TE 1细胞中IL-23p19及IL-23R呈过表达（P均<0.01）;与对照组比较,IL-23组细胞中c-Myc mRNA及其蛋白、p-AKT、波形蛋白、Snail 1、Slug蛋白明显升高,E 钙黏蛋白表达明显降低,TE-1细胞划痕愈合率和迁移数明显升高(P均<0.05)。与IL-23组比较,IL-23+Wortmannin组细胞中c Myc mRNA及其蛋白、p-AKT、波形蛋白、Snail 1、Slug蛋白明显降低,E-钙黏蛋白明显升高,TE-1细胞划痕愈合率和迁移数明显降低(P均<0.05)。结论： IL-23通过PI3K/AKT/c-Myc通路促进食管鳞癌细胞上皮间质转化和迁移。     

苦参碱对小鼠成纤维细胞L929的作用及其机制

目的探讨苦参碱对小鼠成纤维细胞L929的作用及其机制。方法分别应用0.25、0.50、0.75、1.00 g/L苦参碱处理小鼠成纤维细胞L929为24、487、2 h,采用MTT法检测成纤维细胞L929生长抑制率;West-ern blot分析法检测小鼠成纤维细胞L929中磷酸化的eIF4E、eIF4E-BP1和Caspase-3表达。结果在同一作用时间,随着苦参碱浓度的增加,小鼠成纤维细胞L929生长抑制率增加,差异有显著性(F=31.41~41.55,P<0.01);同一浓度的苦参碱随着作用时间延长,细胞生长抑制率无明显变化。苦参碱作用24 h后,小鼠成纤维细胞L929磷酸化的eIF4E和eIF4E-BP1表达降低,Caspase-3表达增加,差异有显著性(t=9.79~13.32,P<0.01)。结论苦参碱能诱导小鼠成纤维细胞L929的凋亡,其作用是通过eIF4E、eIF4E-BP1和Caspase-3途径实现的。     

创面修复中PDGFβ受体拮抗剂对周细胞血管生成的影响

目的研究PDGFRβ受体拮抗剂-甲磺酸伊马替尼（imatinib mesylate,75mg/kg）阻断PDGFβ受体通路对周细胞的调控在创面修复特别是肉芽组织血管生成中的作用。方法采用大体观测、组织学及免疫组化结合形态定量分析方法,研究PDGFβ受体阻断后创面愈合情况,并着重观测早期1～10d肉芽组织血管生成过程中微血管形态、密度,周细胞标记指数状况,分析周细胞变化与血管生成、创面愈合之间的关系以及与创面修复改变的联系与规律。结果对照组创面10d左右愈合,12d完全愈合,而甲磺酸伊马替尼组愈合时间延长多至14d,17d完全愈合,与对照相比延迟4～5d;创面残留面积伤后1d起与对照组比较存在差异（P〈0.05）并见于主要观测点。致伤后创面修复组织病理变化呈现炎症、肉芽组织增生和瘢痕形成改变,其中的血管生成及周细胞主要见于肉芽组织增生期（3～10d）,以5、7d为明显;周细胞标记指数与微血管密度呈正相关,但甲磺酸伊马替尼组较对照组微血管密度、周细胞标记指数则明显降低（P〈0.05）,且微血管管腔较大,以肉芽组织较丰富的5、7d时为明显,并与周细胞标记指数相关。此外甲磺酸伊马替尼组肉芽组织内还呈现细胞（主要是成纤维细胞为主的梭形细胞）数目、形成的胶原纤维较对照组减少等变化。结论 PDGFβ及其受体通路在创面修复中具有重要作用,其中对周细胞的作用可能影响血管生成及胶原形成等过程延迟创面修复,提示周细胞是血管生成中的重要组分之一,而PDGFβ受体通路对周细胞具有特异的调控作用。     

湿润烧伤膏配合邮票状植皮治疗眼镜蛇咬伤坏死 11 例应用体会

目的：观察湿润烧伤膏配合邮票状植皮在眼镜蛇咬伤坏死中的临床疗效。方法：回顾分析本院2010年5月-2013年7月期间,采用湿润烧伤膏配合邮票状植皮治疗眼镜蛇咬伤坏死11例。结果：湿润烧伤膏能控制蛇伤创面感染,改善创面血液及淋巴循环,促进创面肉芽组织和上皮再生,配合邮票状植皮治疗眼镜蛇咬伤坏死,可促进愈合,改善患肢功能,缩短痊愈时间等。结论：湿润烧伤膏配合邮票状植皮在眼镜蛇咬伤坏死中有显著疗效,应用方便。     

用条件培养液代替重组因子培养小鼠高增殖潜能集落形成细胞

利用富含ＩＬ－３的ＷＥＨＩ－３细胞条件培养液（ＷＥＨＩ３－ＣＭ）和富含Ｍ－ＣＳＦ的Ｌ９２９细胞条件培养液（Ｌ９２９－ＣＭ）代替重组因子在体外用单层琼脂法培养小鼠ＨＰＰ－ＣＦＣ获得成功。在合用ＷＥＨＩ３－ＣＭ和Ｌ９２９－ＣＭ的基础上，联合ｒｈＩＬ－１，ｒｈＩＬ－６和ｒｍＧＭ－ＣＳＦ，ＨＰＰ－ＣＦＣ的产率有所提高。用５－ＦＵ处理小鼠２天后，骨髓细胞中ＨＰＰ－ＣＦＣ得以浓集。产生的ＨＰＰ－ＣＦＣ集落直径