大鼠肾移植后移植肾周淋巴结内树突状细胞的早期观察

[摘要] 目的 明确大鼠左侧RDLN位置；观察大鼠肾移植后早期移植肾RDLN内DC的变化规律。方法 以美蓝示踪法明确SD和Wistar大鼠左RDLN位置。Wistar大鼠60只分两组，以SD大鼠作为供体，30只Wistar大鼠左侧行异体原位肾移植术，按5只一组于开放血流后1，6，12，24，48，72 h切取RDLN；另30只Wistar大鼠行左肾缺血再灌注术作为对照，同样在开放左肾血流后1，6，12，24，48，72 h切取RDLN。标本切片后行抗S-100蛋白免疫组化染色。结果 对照1 h组RDLN皮质区内DC数量最少，随后增多，48 h达到最大值后下降。肾移植1h组RDLN皮质区内DC数量最少，随后持续增多，至72 h达最大值。肾移植和对照组DC数量差异显著（P<0.01）。形态上，1，6 h肾移植组DC形态和对照组类似，为imDC形态。12～72 h组淋巴结皮质区内DC伸出大量树突样突起，为mDC形态。结论 大鼠RDLN具体位置的明确有助于移植免疫机制的研究。肾移植后DC存在移植肾到肾周淋巴结的迁移。DC能否成熟并发挥功能同异体抗原的进入及DC在体内迁移的过程密切相关。     

共刺激阻断剂CTLA-4Ig基因修饰的树突状细胞对移植肾存活的影响

目的探讨共刺激信号阻断剂CTLA-4Ig基因修饰的树突状细胞(dendriticcells,DC)对移植肾存活的影响。方法以BN、Lewis大鼠为肾移植供、受体;用CTLA-4Ig基因重组腺病毒转染供、受体骨髓源性DC使之表达CTLA-4Ig;将供、受体DC于肾移植前24h经股静脉分别注入受体(设为组1、组2),供、受体DC混合后注入受体(组3),未注射DC的受体为对照组;观察各组移植肾存活时间,术后第20天,MTT法检测受体脾细胞对供体及无关抗原刺激的反应。结果与对照组相比,组1移植肾存活时间显著延长[(54.1!11.6)dvs(8.4!0.7)d,P<0.01),组3移植肾存活时间延长更为明显(77.5!15.7)d,P<0.001],组2移植肾存活时间无延长(8.1!0.7)d,P>0.05。术后第20天,组1、组3脾细胞对供体抗原刺激的反应均明显低于正常对照(0.27!0.07)and(0.23!0.06)vs(0.74!0.06),P<0.01,而对无关抗原刺激的反应与正常对照差异无显著性(0.68!0.04)and(0.71!0.05)vs(0.69!0.05),P>0.05。结论CTLA-4Ig基因修饰的供体DC可以明显延长大鼠移植肾存活时间,而受体DC则无此作用,但两种DC联合应用可以使移植肾获得更长的存活时间。     

心脏死亡大鼠双肾移植模型的建立

目的 探讨心脏死亡大鼠双侧供肾左侧原位肾移植模型的手术方法。方法 供、受体均采用雄性近交系Wistar大鼠,分别于心脏死亡后0、20和40min取双侧供肾,行左侧原位肾移植术后摘除受体右肾,观察各组受鼠术后的移植肾的功能恢复情况及生存率。结果 0min和20min组的大鼠移植肾功能良好、存活率高,40min组的大鼠移植肾功能较差且均于14天后死亡。0min组的左右供肾移植后的肾功能及存活率差异无统计学意义(P＞0.05)。结论 建立心脏死亡大鼠双侧供肾左侧原位肾移植模型稳定可靠,可有效减少供肾冷缺血时间及节约供体数量,可应用于心脏死亡供体肾移植实验研究。     

用负载供体抗原的致耐受性树突状细胞延长大鼠移植肾存活

目的 研究负载供体抗原的致耐受性受体树突状细胞(Dendritic cells,DC)对移植肾存活的影响。方法 以BN、Lewis大鼠为肾移植供、受体;受体骨髓源性DC负载供体淋巴细胞抗原并与共刺激阻断剂CTLA4Ig共孵育;将上述DC于肾移植前24 h经股静脉注入受体(治疗组),未注射DC的受体为对照组;观察各组移植肾存活时间,术后第20天,MTT法检测受体脾细胞对供体及无关抗原刺激的反应。结果移植肾存活时间:与对照组相比,治疗组移植肾存活时间显著延长[(54.6±9.5)d vs(8.3±0.8)d,P<0.01]。术后第20天,治疗组脾细胞对供体抗原刺激的反应明显低于正常对照[(0.17±0.04)vs(0.74±0.06),P<0.01],而受体对无关抗原刺激的反应与正常对照无显著差异[(0.72±0.04)vs(0.69±0.07),P>0.05]。结论 负载供体抗原的致耐受性受体DC可以特异性抑制受体对供体抗原的免疫反应、明显延长大鼠移植肾存活时间。     

氯沙坦对慢性移植肾肾病大鼠移植肾TGF-β1表达的影响

[目的]观察氯沙坦对慢性移植肾病模型F344-Lewis大鼠移植肾功能、组织学和TGF-β1的表达的影响.[方法]建立大鼠慢性移植肾病模型,随机分成氯沙坦组、单纯肾移植组.以切除单侧肾脏F344大鼠和Lewis大鼠为对照组.术后12周测定各组大鼠体质量、尾动脉血压、24 h尿蛋白定量、血清肌酐.行:HE,Masson染色观察各组肾组织学改变.免疫组织化学染色检测肾组织TGF-β1的表达.[结果]单纯肾移植组在肾移植后12周出现蛋白尿增多,血肌酐、血压升高,移植肾组织单个核细胞浸润及TGF-β1表达上调.氯沙坦组较单纯.肾移植组蛋白尿减轻,血肌酐、血压降低,移植肾组织单个核细胞浸润减少,TGF-β1表达下调.[结论]移植术后早期给予氯沙坦可减轻慢性移植.肾肾病进展,下调TGF-β1表达.     

ICOS胞外区基因修饰的树突状细胞对移植肾存活的影响

目的:探讨诱导共刺激分子(Inducible costimulator,ICOS)胞外区基因修饰的树突状细胞(Dendritic ceUs,DC)对移植肾存活的影响.方法:以BN、Lewis大鼠为肾移植供、受体;用ICOS胞外区基因重组腺病毒转染供体骨髓源性DC使之表达ICOS胞外区;将供体DC于肾移植前24 h经股静脉注入受体为实验组,未注射DC的受体为对照组;观察两组移植肾存活时间.术后第20 d,MTT法检测受体脾细胞对供体及无关抗原刺激的反应.结果:与对照组相比,实验组移植.肾存活时间显著延长[(23.2±3.08)d与(8.5±1.4)d],P<0.01).术后第20 d,实验组脾细胞对供体抗原刺激的反应明显低于正常对照(0.37±0.06)与(0.84±0.12),P<0.01,而对无关抗原刺激的反应与正常对照差异无显著性(0.76±0.11)与(0.69 4-0.09),P>0.05.结论:I-COS胞外区基因修饰的供体DC可以明显延长大鼠移植肾存活时间.     

CD154胞外区基因局部修饰对大鼠移植肾存活的影响

目的观察CD154胞外区基因局部修饰大鼠供肾对延长移植肾存活的效能.方法以CD154基因重组腺病毒为载体,将CD154胞外区基因转入BN大鼠供肾,以Lewis大鼠为受体,行同种肾移植为转染组,并以未转染BN供肾移植给Lewis受体为对照组;观察移植肾存活时间和术后肾功能变化.结果转染组移植肾存活(28±7.3) d,较对照组移植肾存活时间(8.6±1.2)d明显延长;移植组术后血清肌酐较同期对照组明显为低.结论 CD154基因局部转染可明显延长移植肾存活时间.     

霉酚酸对致耐受性树突状细胞延长移植肾存活效应的影响

目的探讨霉酚酸(mycophenolic acid,MPA)对致耐受性树突状细胞(dendritic cells,DC)延长移植肾存活效应的影响。方法以BN、Lewis大鼠为肾移植供、受体;在供体DC培养过程中加入3种浓度MPA,以CTLA-4Ig基因转染DC使之成为表达CTLA-4Ig的致耐受DC;观察DC形态变化并检测受体脾细胞对上述DC的刺激反应。将未处理的致耐受DC以及0.05μmol/L MPA处理DC于肾移植前72h分别注入受体(组1、组2),注入供体DC的受体为组3,未注入DC的受体为对照(组4),观察受体血肌酐变化和移植肾存活时间。结果MPA组DC形态老化延缓,脾细胞对3种浓度MPA处理的DC刺激反应均显著低于对未经MPA处理致耐受DC的刺激反应;与对照相比,组1、组2移植肾存活时间显著延长,差异有统计学意义(P<0.01),其中组2延长更为明显〔(81.1±14.6)d vs(8.9±0.8)d,P<0.001〕,组3存活时间显著缩短(5.3±0.6d,P<0.05)。术后45d后组2血肌酐水平明显低于组1。结论MPA预处理可降低致耐受DC的抗原提呈能力,提高其延长移植肾存活的效能。     

实验性雏鸡马立克病外周血淋巴细胞GRmRNA表达

为探讨以肾血管体外结扎取代肾移植受体大鼠原肾切除的可行性,对非移植组大鼠10只,间隔20d分别行左、右肾血管体外结扎,移植组大鼠10只,肾移植术后3－5d体外结扎移植肾对侧原肾肾血管。结果发现非移植组大鼠结扎左侧血管后均存活良好,结扎右侧肾血管后分别在3－4d内死亡。移植组大鼠结扎肾肾血管后,均存活良好,病理学检查显示两组大鼠原肾均呈广泛坏死。结果提示,肾血管体外结扎方法简便、效果可靠、创伤小,可取代肾移植受体大鼠原肾切除。     

大鼠慢性移植肾肾病模型的建立

目的:建立一种简易、实用的大鼠肾移植慢性移植.肾肾病(Chronic allograft nephropathy,CAN)模型,为研究肾移植术后慢性排斥反应的发病机理、治疗和预防提供平台.方法:F344近交系大鼠和Lewis近交系大鼠作为供、受体,取供体的左肾作为供肾,在裸眼直视下行供体的下腔静脉与受体肾静脉的端端吻合.供体腹主动脉与受体腹主动脉行端侧吻合,进行原位异体肾移植.术后10mg/(kg·d)×10d环孢素口服液灌胃,于4周后分别观察各受体移植.肾组织病理变化情况.结果:手术于2.5h内完成,成功率达97.50%.移植术后4周开始出现移植肾CAN的病理改变,12周可见典型慢性排斥反应病变.结论:该方法手术操作简单、直观,简化了显微外科技术的设备要求,建立了大鼠慢性移植肾肾病模型.     

B7特异性RNA干扰对皮肤移植的影响

目的探讨RNA干扰技术阻断B7／CD28共刺激信号对小鼠异体皮肤移植排斥反应的影响。方法设计并合成B7特异性siRNA,在脂质体的介导下转染树突状细胞,转染后72h收集细胞,用蛋白印迹法检测B7-1、B7-2蛋白的表达。在小鼠异体皮肤移植前7d,经静脉将转染B7特异性siRNA的DC输入小鼠体内（DC转染组）,同时设立同种异体移植对照组、同系移植对照组、环孢素A（CsA）治疗组（术后每日皮下注射CsA5mg／kg）和未转染DC组（移植前输注未转染DC）,观察各组移植皮瓣的存活时间和排斥反应情况,并用MTT法检测混合淋巴细胞增殖反应,术后1个月观察迟发性超敏反应情况。结果Western Blot结果显示转染72h后,siRNA1对B7-1蛋白表达的抑制率为（77.2±6.26）％;siRNA2对B7-2蛋白表达的抑制率为（73.3±5.42）％。与同种异体移植对照组和未转染DC组比较,DC转染组移植皮瓣成活时间明显延长（P〈0.01）,组织排斥反应程度较轻,混合淋巴细胞反应和DTH反应显著降低（P〈0.01）。结论聊特异性siRNA可明显抑制树突细胞B7基因的表达,以阻断B7／CD28共刺激通路,抑制小鼠皮肤移植排斥反应,为进一步研究siRNA诱导免疫耐受提供了新方法。     

CD86在大鼠角膜移植排斥反应中的表达及意义

目的 观察大鼠角膜组织中共刺激分子CD86(B7-2)的原位表达,以了解共刺激分子在大鼠角膜移植排斥反应中的作用和意义。方法 制作大鼠角膜移植模型,观察角膜透明度、新生血管。采用免疫组化法检测CD86在角膜、脾脏组织中的表达。结果 术后角膜植片均出现不同程度的新生血管,角膜水肿、混浊,基质增厚。CD86在正常的角膜组织中无阳性表达;在移植后出现急性排斥反应的角膜上皮层中有大量阳性细胞表达。在脾脏的阳性细胞表达与文献报道的一致。结论 共刺激分子CD86在移植后发生排斥的角膜组织中的阳性表达,可能与免疫排斥反应有关。     

EXPRESSION OF ICAM-1 AND LFA-1 MOLECULES IN RELATION TO RENAL ALLOGRAFT REJECTION IN RATSA

ＩＮＴＲＯＤＵＣＴＩＯＮＩｎｒｅｃｅｎｔｙｅａｒｓ，ｓｏｍｅｒｅｓｅａｒｃｈｅｒｓｈａｖｅｓｔｕｄｉｅｄｔｈｅｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｎｔｈｅｅｘｐｒｅｓｉｏｎｏｆＩＣＡＭ１ｍｏｌｅｃｕｌｅａｎｄｒｅｎａｌｇｒａｆｔｒｅｊｅｃｔｉｏｎｂｏ...     

EXPRESSION OF ICAM-1 AND LFA-1 MOLECULES IN RELATION TO RENAL ALLOGRAFT REJECTION IN RATS

Objective.The purpose of this study was to assess the renal graft expression of ICAM-1(intercellular adhesion molecule-1) nd LFA-1(lymphocyte function-associated antigen-1)molecule with relation to graft rejection.Methods.Rat kiney transplantation was performed according to the procedure of Kamada with some modification.Experimental rats were divided into 5 groups.The survival time of recipient rats and function of grafts after renal transplantation were observed.The sections of renal graft were stained for monoclonal antibody ICAM-1 and LFA-1, and then quantification of ICAM-1 and LFA-1 expression was accomplished by computer image analysis.Results.ICAM-1 and LFA-1 increased significantly in the renal allograft rejection group as compared with the non-rejection groups(P＜0.05).Conluson.Both biopsy of renal graft and monitoring of ICAM-1 and LFA-1 are useful tools in diagnosing and treating acute rejection.     

建立肝肠联合移植大鼠模型及移植肝对小肠的免疫保护作用

目的：建立新型肝肠联合移植大鼠模型，并研究移植肝是否对移植肠具有免疫保护作用。方法：肝肠联合移植切取移植物时，保留门静脉完整性，利用供体胸段下腔静脉在门静脉侧壁上建立～袖套，并安置套管。受体手术时，将此袖套与受体门静脉残端套管法吻合。动脉重建通过供体肠系膜上动脉与受体右肾动脉端端吻合。免疫保护作用通过术后病理学检查评估。结果：用此法建立肝肠联合移植大鼠模型手术无肝期显著缩短，与Kamada双套管法肝移植无肝期相同，血流动力学影响小，手术成功率高。术后7、14天异基因小肠移植组出现重度排斥反应，而肝肠联合移植组仅表现为中度排斥。结论：用该方法建立一期大鼠肝肠联合移植模型方便可行，且成功率高。肝肠联合移植时移植肝对移植小肠具有免疫保护作用。     

Changes in dendritic cells and dendritic cell subpopulations in peripheral blood of recipients during acute rejection after kidney transplantation

Background Advances in transplantation immunology show that the balance between dendritic cells （DCs） and their subsets can maintain stable immune status in the induction of tolerance after transplantation. The aim of this study was to investigate if DCs and DC subpopulations in recipient peripheral blood are effective diagnostic indicators of acute rejection following kidney transplantation. Methods Immunofluorescent flow cytometry was used to classify white blood cells （WBCs）, the levels of mononuclear cells and DCs （including the dominant subpopulations, plasmacytoid DC （pDC） and myeloid DC （mDC）） in peripheral blood at 0, 1, 7, and 28 days and 1 year after kidney transplantation in 33 patients. In addition, the blood levels of interleukin-10 （IL-10） and IL-12 were monitored before and after surgery. Fifteen healthy volunteers served as normal controls. Patients were undertaking hemodialysis owing to uremia before surgery. Results The total number of DCs, pDC, and mDC in peripheral blood and the pDC/mDC ratio were significantly lower in patients than controls （P 〈0.05）. Peripheral DCs suddenly decreased at the end of day 1, then gradually increased through day 28 but remained below normal levels. After 1 year, levels were higher than before surgery but lower than normal. The mDC levels were higher in patients with acute rejection before and 1 day after surgery （P 〈0.005）. There was no significant difference in IL-10 and IL-12 levels between patients with and without acute rejection. Conclusion The changes in DCs and DC subpopulations during the acute rejection period may serve as effective markers and referral indices for monitoring the immune state, and predicting rejection and reasonably adjusting immunosuppressants.     

CD86在大鼠角膜移植排斥反应中的表达及意义

目的 观察大鼠角膜组织中共刺激分子CD86(B7-2)的原位表达，以了解共刺激分子在大鼠角膜移植排斥反应中的作用和意义。方法 制作大鼠角膜移植模型，观察角膜透明度、新生血管。采用免疫组化法检测CD86在角膜、脾脏组织中的表达。结果 术后角膜植片均出现不同程度的新生血管，角膜水肿、混浊，基质增厚。CD86在正常的角膜组织中无阳性表达；在移植后出现急性排斥反应的角膜上皮层中有大量阳性细胞表达。在脾脏的阳性细胞表达与文献报道的一致。结论 共刺激分子CD86在移植后发生排斥的角膜组织中的阳性表达，可能与免疫排斥反应有关。     

Endothelial cell chimerism by fluorescence in situ hybridization in gender mismatched renal allograft biopsies

Background  The blood vessels of a transplanted organ are the interface between donor and recipient. The endothelium in the blood vessels is thought to be the major target for graft rejection. Endothelial cells of a transplanted organ can be of recipient origin after transplantation. In this study, we tested whether endothelial chimerism correlated with the graft rejection and cold ischemia.
Methods  We studied the biopsy samples from 34 renal transplants of female recipients who received the kidney from a male donor for the presence of endothelial cells of recipient origin. We examined the tissue sections of renal biopsy samples by fluorescence in situ hybridization (FISH) for the presence of endothelial cells containing two X chromosomes using a biotinylated Y chromosome probe and digoxigenin labelled X chromosome probe, and then analyzed the relationship between the endothelial cell chimerism and the rejection and cold ischemia.
Results  Endothelial chimerism was common and irrespective of rejections (P>0.05). The cold ischemic time of chimerism group was longer than no chimerism group ((14.83±4.03) hours vs (11.27±3.87) hours, P<0.05).
Conclusions  There is no correlation between the percentage of recipient endothelial cells in vascular endothelial cells and the type of graft rejection. The endothelium damaged by ischemic injury might be repaired by the endothelial cells from the recipient.

     

移植部位对移植胰岛长期存活的影响

目的 观察移植部位对糖尿病小鼠移植胰岛长期存活的影响.方法 采用胶原酶P溶液胰管灌注和Ficoll-400不连续密度梯度纯化法获取供体小鼠胰岛.受体糖尿病小鼠分别接受同基因和异基因肾被膜下、小网膜囊和腋窝胰岛移植,监测受体移植后的血糖变化;根据血糖情况取移植胰岛排斥标本,观察不同部位移植胰岛的组织学变化.结果 成功分离、纯化供体小鼠胰岛,纯度为( 94±5)％或(90±5)％,存活率为(92±3)％.胰岛移植后均能使受体小鼠高血糖逆转至正常.同基因或异基因胰岛移植短期存活状态:肾被膜组与小网膜囊组的血糖降低值比较差异无统计学意义(P＞0.05),移植后肾被膜组血糖值显著低于小网膜囊组(P＜0.05);腋窝组血糖降低值和血糖值与肾被膜组和小网膜囊组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).同基因或异基因胰岛移植长期存活状态:肾被膜组与小网膜囊组血糖降低值比较差异有统计学意义(P＜0.05),且肾被膜组血糖值较低,移植胰岛存活率较高;腋窝组移植胰岛不能达到长期存活;在同一部位,同基因与异基因胰岛移植受体的血糖降低值比较,差异有统计学意义(P＜0.05).组织学检查发现:肾被膜组和小网膜组胰岛完整,有少量炎症细胞浸润;腋窝组胰岛细胞被破坏,大量炎症细胞浸润.结论 肾被膜下胰岛移植降血糖效果迅速、稳定,能达到长期存活的目的,可视为胰岛移植的理想部位.