颅脑损伤后神经递质水平变化与失眠的研究

目的 探讨颅脑损伤后神经递质水平变化与失眠的相关性. 方法 选择原发性失眠患者(原发组)、颅脑损伤(traumatic brain injury,TBI)后失眠患者(损伤组)及正常对照组各40例,采用高效液相色谱检测血浆中DA、5-HT、Ach、NE、Glu、GABA水平. 结果 原发性失眠组及TBI后失眠组患者血浆中DA、5-HT、Ach、NE、Glu、GABA水平显著低于正常对照组,差异具有统计学意义(P＜0.05).与原发性失眠组患者相比,颅脑损伤(TBI)后失眠组患者血浆中DA、5-HT、Ach、NE、Glu、GABA水平明显降低,差异具有统计学意义(P＜0.05). 结论 颅脑损伤后患者的血浆中各项神经递质水平降低,可能与颅脑损伤后失眠有关.     

阿尔茨海默病患者脑神经递质变化及分布特点研究

目的:研究阿尔茨海默病患者(Alzheimer’s Disease,AD)脑内神经递质变化特点,并探讨其与痴呆严重程度的关系。方法:选取齐齐哈尔和哈尔滨城区经简易智能精神状态量表(MMSE)评定,并临床确诊的AD患者30例为病例组,一般情况相匹配的非AD健康者30例为对照组,应用脑电超慢涨落分析技术(encephal of lutuograph technology,ET),对病例组和对照组脑内神经水平进行检测,分析AD患者脑神经递质变化的特点及其与MMSE评分之间的相关性。结果:病例组脑内γ-氨基丁酸(GABA)、谷氨酸(Glu)、5-羟色胺(5-HT)、乙酰胆碱(Ach)四种神经递质较对照组降低,比较差异有统计学意义(P0.01);相关性分析表明:GABA、5-HT和Ach的神经递质水平与MMSE评分呈正相关,GABA与MMSE评分的相关系数为r=0.422,P0.05;5-HT与MMSE评分的相关系数为r=0.417,P0.05;Ach与MMSE评分的相关系数为r=0.450,P0.05。结论:AD患者脑内神经递质存在GABA、Glu、5-HT、Ach降低的变化,GABA、5-HT和Ach的神经递质水平与痴呆严重程度呈正相关。     

不同配比辛芍组方对PC12细胞氧糖剥夺损伤的保护作用

目的：观察不同配比辛芍组方对PC12细胞氧糖剥夺损伤的保护作用,探讨组方的最佳配比.方法：采用连二亚硫酸钠（Na2S2O4）建立PC12细胞氧糖剥夺损伤（oxygen glucose deprivation,OGD）模型,将细胞分为空白组、模型组、阳性组（尼莫地平）、辛芍药物不同配比组（灯盏细辛与赤芍质量比分别为5∶0、4∶1、3∶2、2∶3、1∶4、0∶5）,检测细胞存活率、乳酸脱氢酶（LDH）释放量、超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）和一氧化氮（N0）含量.结果：与正常组比较,模型组的细胞存活率和SOD活性显著降低（P＜0.01）,细胞LDH释放量、MDA和NO水平显著升高（P＜0.01）;与模型组比较,辛芍2∶3配比组显著提升细胞存活率（P＜0.05）,同时辛芍3∶2和2∶3配比组均显著降低细胞LDH释放量以及MDA和NO水平（P＜0.05）,提高SOD活性（P＜0.05）.结论：辛芍2∶3配比对PC12细胞氧糖剥夺损伤的保护作用较好.     

当归红芪超滤膜提取物对过氧化氢致PC12细胞氧化损伤的影响

目的观察当归红芪超滤膜提取物对过氧化氢(H2O2)致PC12细胞氧化损伤的影响。方法 H2O2诱导PC12细胞构建氧化应激损伤模型;不同剂量当归红芪超滤膜提取物(0.38、0.75、1.5 g/L)干预;MTT法测定细胞存活率;生化法检测细胞内MDA、LDH、SOD含量;双氯荧光黄乙酸乙酯(DCF-DA)染色,检测细胞内ROS含量。结果 200μmol/L H2O2作用6 h成功诱导PC12细胞氧化应激损伤;与空白对照组比较,H2O2模型组细胞存活率下降,细胞内LDH、MDA、ROS含量增多,SOD含量下降(P0.05);与H2O2模型组相比,当归红芪超滤膜提取物各剂量组细胞存活率明显上升,细胞内LDH、MDA、ROS含量降低,SOD含量增加(P0.05)。结论当归红芪超滤膜提取物可修复H2O2诱导的PC12细胞氧化损伤。     

依托考昔对低氧缺糖诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的：探讨环氧化酶-2（COX-2）抑制剂依托考昔对PC12细胞低氧缺糖损伤（OGD）的保护作用。方法：以PC12细胞OGD损伤模拟脑缺血损伤模型,依托考昔的给药浓度分别为10、20、40、80、160mmol/L,采用光镜观察细胞形态学变化,以MTT法检测细胞存活率,乳酸脱氢酶（LDH）法检测细胞损伤。结果：依托考昔（40～80mmol/L）能增加OGD损伤后PC12细胞的存活率,并减少LDH释放（P〈0.05）。结论：COX-2抑制剂依托考昔对OGD诱导的PC12细胞损伤具有保护作用。     

齐墩果酸对Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡的影响及机制研究

目的 研究琐琐葡萄提取物齐墩果酸(oleanolic acid,OA)对β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)诱导PC12细胞凋亡的保护作用及其机制.方法 采用20μmol/L Aβ25-35诱导PC12细胞损伤构建阿尔茨海默病(AD)细胞模型,20、40和80μg/mL OA干预,CCK-8法检测各组细胞的存活率,乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞膜通透性及完整性,Annexin V-FITC流式细胞术检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测细胞凋亡相关基因bcl-2和bax表达.结果 与模型组比较,20、40和80μg/mL OA预处理可有效提高PC12细胞存活率,减少乳酸脱氢酶渗漏,降低细胞凋亡率,下调bax mRNA表达(P＜0.05),40、80μg/mL OA预处理上调bcl-2 mRNA表达(P＜0.05).结论 OA对Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡损伤具有明显的保护作用,其机制可能与OA通过调节细胞凋亡相关基因表达,从而抑制凋亡有关.     

银杏内酯B对H_2O_2诱导PC12细胞氧化损伤的影响

目的 :探讨银杏内酯B(ginkgolideB)对过氧化氢 (Hydrogenperoxide ,H2 O2 )引起PC12细胞氧化损伤的保护作用。方法 :用噻唑兰 (MTT)检测PC12细胞的存活率 ;乳酸脱氢酶法检测PC12细胞损伤 ;用硫代巴比妥酸法测定细胞脂质过氧化物 ;同时检测细胞内抗氧化酶的活性。结果 :PC12细胞在 5 0～ 30 0 μmol LH2 O2 作用 3h后 ,细胞的死亡率及乳酸脱氢酶 (LDH)释放明显增加 ,抗氧化酶如超氧化物歧化酶 (superoxidedismutase ,SOD)、谷胱甘肽过氧化酶 (glutathioneperoxidase ,GSH Px)活性显著降低 ,而脂质过氧化物生成增多。银杏内酯B 10～ 10 0 μmol L能显著降低细胞死亡率、LDH释放及丙二醛 (MDA)的生成 ,且能明显提高抗氧化酶的活性。结论 :银杏内酯B可拮抗H2 O2 引起的PC12细胞损伤 ,其机理可能与银杏内酯B减少脂质过氧化物的生成 ,提高抗氧化酶的活性有关     

Phloretin对Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡的影响及其机制

目的:探讨Aβ25-35(β-amyloid)诱导PC12细胞凋亡过程中氯通道阻断剂Phloretin的保护作用及其机制.方法:采用MTT比色,LDH(lactate dehydrogenase)活力检测、Hoechst33258染色和琼脂糖凝胶电泳比较正常对照组、Aβ25-35损伤组和Aβ25-35 PMoretin组的PC12细胞存活与凋亡;Western Blot印迹检测3组的JNK,P-JNK蛋白表达.结果:10 mmol/L Phloretin可明显抑制Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡,提高细胞存活率,减少LDH释放,减少PC12细胞核固缩、碎裂,降低P-JNK蛋白的表达(P<0.01).结论:小剂量氯通道阻断剂Phloretin对Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡具有保护性抑制作用,其机制与下调JNK的磷酸化激活有关.     

7-二氟甲基金雀异黄素对H_2O_2诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的:探讨7-二氟甲基金雀异黄素对PC12细胞氧化应激损伤的保护作用。方法:采用过氧化氢(H2O2)诱导PC12细胞氧化应激损伤的模型,MTT法检测细胞增殖活性,碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡,多功能生化分析仪测定培养液上清中的乳酸脱氢酶(LDH)活性。结果:7-二氟甲基金雀异黄素能有效拮抗40.0μmol/L的H2O2孵育24h对PC12细胞增殖活性的抑制作用和对PC12细胞凋亡的诱导作用,并能减少40.0μmol/L的H2O2诱导的PC12细胞的LDH释放。结论:7-二氟甲基金雀异黄素对过氧化氢诱导PC12细胞的氧化应激损伤具有保护作用。     

茶多酚对 H2O2 诱导 PC12 细胞损伤的保护作用

目的 研究茶多酚 (tea polyphenols, TP) 对H2O2 所致大鼠嗜铬细胞 PC12 细胞损伤的保护作用。 方法PC12细胞用 TP 及H2O2 处理,MTT 法观察细胞活力,乳酸脱氢酶 (LDH) 法检测细胞膜通透性及完整性,流式细胞术测定细胞周期分布,BrdU 免疫荧光法检测细胞周期相S期 DNA 合成。 结果 500 μmol/L H2O2作用 PC12 细胞 2 h,细胞出现明显损伤,细胞活力下降,培养上清液中 LDH 量增加,DNA 合成减少;5、10、20 μmol/L TP 预处理可有效提高细胞存活率,减少 LDH 渗漏,提高S期 DNA 合成。 结论 TP 对H2O2所致的 PC12 细胞损伤有保护作用。     

阿尔茨海默病患者脑神经递质的无创性研究

目的 用脑涨落图仪在无创条件下检测阿尔茨海默病(AD)患者脑神经递质改变情况.方法 采集经过简易精神状况检查(MMSE)及Cohen-mensfield激越问卷(CMAI)评定的30例AD患者的脑电功率信号,与36例体检的正常老年人的脑电功率进行比较,分析AD患者脑神经递质改变情况.结果 与正常组相比,AD组脑内如GABA、Glu、5-HT、Ach、NE、DA等神经递质均明显降低(P＜0.05);相对功率比较,AD组Glu相对功率明显高于对照组,其他神经递质相对功率未见有明显的差异(P＞0.05);全脑功率及左右脑功率均显著降低(P＜0.01),而相对熵值之间未见明显差异;5-HT及兴奋性递质3与激越问卷评分显著正相关(P＜0.01),GABA、Ach、兴奋性递质6、DA及抑制性递质13与激越分值均明显正相关(P＜0.05);GABA与MMSE评分明显正相关(P＜0.05).结论 AD患者脑神经递质功能全面减退,Glu则相对增强,这种改变是全脑广泛性的;5-HT的改变与AD患者的激越表现关系密切.     

黄豆苷元对H2O2诱导的PC12细胞损伤的保护作用

目的探讨黄豆苷元(daidizein)对H2O2诱导的PC12细胞损伤的保护作用.方法用H2O2处理体外培养的PC12细胞建立细胞损伤模型,并加入daidizein预处理作为保护,显微镜下观察PC12细胞形态改变,MTT法检测活细胞数,LDH法检测细胞膜的损伤情况.结果 H2O2处理细胞24 h后,细胞形态发生明显改变,胞体变小、突起缩回,MTT吸光值减小,活细胞数减少,LDH释放量明显增加,与正常对组组比较差异有显著性(P<0.01).daidizein处理组细胞形态明显改善,MTT吸光值显著增加,LDH释放量明显降低,与H2O2处理组相比差异有显著性(P<0.01).结论 daidizein能显著抑制H2O2对PC12细胞的毒性,具有较强的神经保护作用.     

通塞脉制剂对过氧化氢致PC12细胞损伤的保护作用

目的观察通塞脉制剂对过氧化氢(H2O2)作用下PC12细胞的保护作用。方法体外培养PC12细胞,将细胞分为正常对照组,过氧化氢组,通塞脉高剂量组(5mg/mL),通塞脉中剂量组(0.5mg/mL),通塞脉低剂量组(0.05mg/mL)。200μmol/L过氧化氢被加入作为刺激物孵化4h后,再加入终浓度5、0.5、0.05mg/mL的药物,继续培养24h,用MTT法测定并计算药物对H2O2致PC12细胞损伤的保护率;取各组细胞上清液,按照试剂盒的操作方式,测定超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA),一氧化氮(NO),乳酸脱氢酶(LDH)及钙离子含量(Ca2+)。结果通塞脉制剂(5、0.5、0.05mg/mL)对过氧化氢致PC12细胞损伤均有保护作用。过氧化氢组细胞上清液中SOD活性,SOD抑制率降低(P0.05~0.01),MDA,LDH,NO含量与Ca2+含量增加(P0.05~0.01)。而各给药组能提高SOD活性及抑制率,降低LDH,MDA,NO以及Ca2+含量,与过氧化氢组比较有显著性差异(P0.05~0.01)。结论通塞脉制剂对PC12细胞损伤有显著性保护作用,其机制与钙超载,氧化应激等因素有关。     

脑电超慢涨落图检查对预测癫痫药物控制敏感性的价值

目的:探讨脑电超慢涨落图检查对预测癫痫药物控制敏感性的临床价值.方法:选择患者80例,根据治疗效果分为两组,各40例,对所有患者均进行脑电超慢涨落图检查,比较两组5-羟色胺(5-HT)、乙酰胆碱(Ach)、去甲肾上腺素(NE)、γ-氨基丁酸(GABA)、谷氨酸(Glu)水平.并了解脑功能指数中的运动指数、兴奋抑制指数、血管舒缩指数变化情况.结果:敏感组运动指数、兴奋抑制指数及血管舒缩指数均显著低于不敏感组(P＜0.05),敏感组兴奋性神经递质中的5-HT、Glu和Ach水平均显著低于不敏感组(P＜0.05),抑制性神经递质NE及GABA显著高于不敏感组(P＜0.05).结论:采用脑电超慢涨落图分析,如果测定到中枢神经系统中兴奋性递质水平升高而抑制性神经递质水平降低,则预示患者对该药物治疗不敏感,而治疗后,兴奋性递质水平降低而抑制性神经递质水平升高,则提示患者对该治疗方案敏感,可以考虑继续应用.     

新型抗精神失常药万拉法辛和奥氮平对无血清条件下PC12细胞的保护作用

目的:研究抗精神失常药万拉法辛和奥氮平对撤掉血清诱发PC12细胞损伤的神经保护作用。方法:将培养的PC12细胞分为正常对照组、无血清损伤组和药物保护组。无血清损伤组撤掉血清,药物保护组在撤掉血清同时加入万拉法辛和奥氮平。采用细胞形态学方法、LDH法、MTT法观察万拉法辛和奥氮平的神经保护作用。结果:万拉法辛和奥氮平能抵抗无血清条件下PC12细胞的损伤,增加PC12细胞存活率,提高PC12细胞活性,减少LDH的释放,维持细胞膜的完整性。上述发挥最有效保护作用的是100μmol.L-1奥氮平和20μmol.L-1万拉法辛(P<0.01)。不同时间点细胞活性检测结果表明48 h细胞活性最大。结论:万拉法辛和奥氮平对撤掉血清诱发PC12细胞损伤有保护作用,在48 h时能较有效发挥保护作用。     

丙泊酚对百草枯引起的PC12细胞氧化损伤的保护作用

目的：探讨不同浓度丙泊酚对百草枯（Paraquat, PQ）导致的PC12细胞损伤的保护作用。方法以PQ损伤PC12细胞作为自由基损伤细胞的模型,将培养的PC12细胞分成4组：正常对照组、DMSO对照组、PQ组、PQ＋丙泊酚组;PQ＋丙泊酚组再分为丙泊酚12.5、25、50μmol/L 3个亚组组。采用CCK-8法分析细胞存活率,测定乳酸脱氢酶（LDH）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）的变化。结果与对照组比较,PQ组细胞存活率明显降低,丙泊酚可使损伤细胞的存活率增加,差异有统计学意义（P〈0.01）,其提高程度呈剂量效应关系。与对照组比较,PQ组LDH的释放量明显增加、SOD活性显著降低、MDA含量显著增加（P〈0.05）;丙泊酚可显著降低损伤细胞LDH的释放、增加损伤细胞SOD的活性、降低MDA含量,且呈剂量效应关系（P〈0.05）。结论丙泊酚通过降低氧化损伤来减轻PQ诱导的PC12细胞毒性。     

葛根素对过氧化氢诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的:研究葛根素对过氧化氢(H2O2)诱导PC12细胞损伤的影响。方法:建立H2O2致PC12细胞损伤模型,倒置相差显微镜下进行一般形态学观察,化学比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)释放量及细胞培养液和细胞内丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果:100μmol/L H2O2诱导PC12细胞4 h,细胞呈现明显损伤形态,LDH释放量升高(P<0.001),细胞培养液和细胞内MDA含量增加(P<0.001),SOD活性下降(P<0.001)。葛根素可明显改善形态学损伤,显著降低LDH释放量和细胞培养液及细胞内MDA含量,提高SOD活性。结论:葛根素对H2O2诱导PC12细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与提高PC12细胞的抗氧化能力有关。     

UPLC-MS/MS同时测定大鼠血浆12种神经递质和激素的方法学研究及对寒性中药的应用分析

目的:建立超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)方法同时检测大鼠血浆中12种神经递质和激素的含量,包括去甲肾上腺素(NE)、肾上腺素(Epi)、L-甲状腺素(L-T4)、β-雌二醇(β-E2)、乙酰胆碱(Ach)、5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)、组胺(HA)、γ-氨基丁酸(GABA)、睾酮(T)、孕酮(P)、皮质醇(Cor),并应用该方法研究寒性中药对神经递质和激素的影响。方法:(1)正常大鼠血浆样品经甲醇-乙腈(1∶1)沉淀蛋白后,取上清液挥干,流动相复溶,2μl进样分析;采用BEH amide(2.1 mm×100 mm,1.7μm)色谱柱,以含0.2%甲酸的水溶液-乙腈作为流动相进行梯度洗脱,流速0.2 ml/min、柱温35℃,并进行方法学考察。(2)正常大鼠灌胃给予寒性中药后,于0.5、1.5、2.5和4.5 h分别采血,分离血浆,测定12种神经递质和激素的含量。结果:12种神经递质和激素检测的线性关系良好,低、中、高浓度的提取回收率RSD范围为1.31%~10.96%,基质效应RSD范围为1.68%~10.70%,批内、批间精密度RSD均小于10.99%。寒性药物可以显著降低大鼠血浆Epi、DA、T、5-HT、Cor水平,升高GABA、P、β-E2、Ach的含量。结论:该方法灵敏、快捷、准确、简便,适用于血浆中12种神经递质和激素含量的同时测定;寒性中药可诱导机体副交感神经功能亢进,但对交感神经-肾上腺髓质、皮质功能显示抑制效应。     

老年性痴呆患者脑功能和脑内神经递质变化的脑电超慢波涨落图分析

目的:探讨老年性痴呆患者(Alzheimer’s disease,AD)脑功能和脑内神经递质变化特点及意义。方法:在齐齐哈尔城区选取经过临床确诊的老年痴呆患者(AD)19例作为病例组,按同社区、同性别、同年龄段(±3岁)、同文化程度作为匹配条件,选择健康对照19例,利用脑电超慢涨落图(Encephal of Lutuograph Technology,ET)技术检测病例组和对照组脑功能和脑内神经递质水平并进行比较,分析AD患者脑功能和脑内神经递质变化的特点。结果:与对照组相比,病例组的脑功能优势涨落平均功率空间的前后功率梯度逆转数明显高于对照组(P0.01);病例组脑内γ-氨基丁酸(GABA)、谷氨酸(Glu)和乙酰胆碱(Ach)3种神经递质显著降低(P0.05);5-羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)3种神经递质与对照组比较,差异无统计学意义。结论:AD患者脑功率的逆转率高于对照组,AD患者脑内神经递质存在GABA、Glu、Ach降低的变化。脑电超慢涨落图(ET)可检测脑功能和脑内神经递质水平,为AD的诊断提供参考。     

铁皮石斛多糖对MPP+诱导的PC12

目的 观察铁皮石斛多糖对1-甲基-4-苯基吡啶离子（MPP⁺）所致PC12细胞损伤的抑制作用及可能机制。 方法 实验分为对照组、MPP⁺损伤模型组、铁皮石斛多糖组（50、100、200和400 μg/mL）。MPP⁺损伤模型组细胞用含10 μmol/L MPP⁺的培养基处理细胞24 h;铁皮石斛多糖组细胞用含50、100、200和400 μg/mL铁皮石斛多糖的培养基预处理2 h后,再加入MPP⁺（10 μmol/L）处理细胞24 h;对照组细胞给予等量生理盐水处理。MTT比色法检测细胞存活率,检测细胞内丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）的活性。 结果 与对照组比较,MPP⁺处理显著降低了PC12细胞的存活率,显著升高了细胞培养液中LDH的水平和细胞中MDA的含量,显著降低了细胞中SOD的活性（均P<0.05）;与损伤模型组比较,200和400 μg/mL铁皮石斛多糖组PC12细胞的存活率显著升高,细胞培养液中LDH的活性和细胞中MDA的含量显著升高,细胞中SOD的活性显著降低（均P<0.05）。 结论 铁皮石斛多糖抑制了MPP⁺诱导的PC12细胞损伤,其机制可能与铁皮石斛多糖抑制氧化应激有关。