MTT法检测94例胃癌体外药敏

四唑盐比色法(MTT法)是一种测定细胞代谢和增殖活性的技术.其原理是利用活细胞内的线粒体脱氢酶将黄色可溶性的四唑盐[3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5二苯基四氮唑溴盐,简称MTT]还原为蓝紫色不溶性的甲臢(For-mazan),通过测定细胞内脱氢酶活性的改变可客观地反映细胞的变化.     

KAI1基因对宫颈癌细胞增殖和侵袭能力的影响

目的 探讨肿瘤转移抑制基因KAI1对宫颈癌CaSki细胞体外增殖和侵袭能力的影响.方法 通过脂质体转染技术,将真核表达质粒pCMV-KAI1导入低表达的宫颈癌CaSki细胞,免疫组化及实时荧光定量RT-PCR法检测转染前后细胞内KAI1蛋白和mRNA的表达,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法及Transwell侵袭力小室测定KAI1基因对细胞增殖能力及侵袭能力的影响.结果 转染目的基因的CaSki细胞中KAI1 mRNA水平及蛋白表达明显增强(P<0.05),细胞体外增殖能力明显弱于未转染组和转染空载体组(P<0.05),细胞穿膜数量明显少于未转染组和转染空载体组(P<0.05).结论 肿瘤转移抑制基因KAI1对宫颈癌细胞体外增殖及侵袭能力有一定抑制作用.     

心肌细胞培养方法和活细胞噻唑兰法测定

目的:介绍心肌细胞培养方法和研究比色分析法测定活心肌细胞.方法:接种不同数量细胞培养后行噻唑兰(MTT)比色分析;正常培养、含不同浓度维拉帕米培养的细胞行MTT代谢比色分析,并测乳酸脱氢酶(LDH)活性.结果:比色值与接种细胞数量、细胞释放的LDH活性呈高度相关(r=0.996、-0.986,P<0.01).结论:MTT比色分析法可用于测定活心肌细胞.     

肿瘤转移体外实验中细胞计数方法探讨

目的:探讨肿瘤转移体外实验中最佳的细胞计数方法.方法:采用四唑盐(MTT)比色法和结晶紫(CV)比色法计数不同浓度培养细胞数;采用CV比色法和苏木素-伊红(HE)染色法检测体外重组基底膜侵袭实验穿膜细胞数;采用MTT比色法和CV比色法测定肿瘤细胞与细胞外基质黏附实验细胞数.结果:MTT和CV比色法计数不同浓度培养细胞可分别准确计数到2.75×104/mL和4.3×102/mL;CV比色法无法准确计数重组基底膜侵袭实验中的细胞,可以计数黏附实验中的细胞;HE染色法可以计数重组基底膜侵袭实验中的细胞.结论:HE染色法计数细胞适用于体外重组基底膜侵袭实验;CV比色法计数细胞适用于肿瘤细胞与细胞外基质的黏附实验.     

肿瘤中乳酸脱氢酶B作用机制的研究进展

有氧糖酵解增加是肿瘤代谢重编程的主要特征。有氧糖酵解不仅为癌细胞提供能量而且为其生物合成提供必要的前体,这对促进肿瘤生长非常重要。癌细胞通过对糖酵解酶进行调节来满足其自身需求,糖酵解酶在促进肿瘤存活、转移、侵袭等方面发挥着积极作用。乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）作为有氧糖酵解的关键酶,由乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LDHA)和乳酸脱氢酶B(lactate dehydrogenase B,LDHB)两种亚基组成。LDHA被认为在有氧糖酵解过程中起着关键作用,并得到了广泛的研究,然而对于LDHB的研究却较少。但目前LDHB在各种肿瘤进展中的重要作用已被越来越多的报道,大量研究表明,LDHB在多种肿瘤中异常表达,与肿瘤恶性进展相关。本文从LDHB在肿瘤中的调控机制、与肿瘤发生发展的关系以及作为肿瘤诊断的生物标志物等方面综述了其近10年的研究进展,有助于深入了解该蛋白在肿瘤中的作用机制。     

MTS/PMS比色分析方法测定LA795细胞活性的实验条件

细胞活性检测是生物学评价体系中的重要指标之一.MTS为Buttke等[1]设计的一种新型的MTT类似物,在偶联剂PMS存在的条件下,可被活细胞线粒体中的多种脱氢酶还原形成水溶性的产物,并与活细胞数有着高度的相关性.由于MTS比色法存在着无放射性、快速安全、方便灵敏、结果可靠、特异性强等其它方法无法相比的优点,适用于抗癌药物体外筛选和临床肿瘤药敏等实验[2].本文采用LA795小鼠肺腺癌细胞,对MTS/PMS比色分析测定细胞活性的实验条件进行了探讨.     

乳酸杆菌在树突状细胞诱导抗肿瘤免疫杀伤中的作用

目的 探讨乳酸杆菌在树突状细胞(DC)诱导抗肿瘤免疫杀伤中的作用及其意义.方法 采用混合淋巴细胞反应(MLR)、ELISA法分别测定经乳酸杆菌作用后的冻融宫颈癌抗原负载DC体外刺激T细胞的增殖情况以及上清液中白细胞介素12(IL-12)与γ干扰素(IFN-γ)的含量;噻唑蓝法(MTT法)测定乳酸杆菌冻融抗原致敏DC激活的细胞毒T淋巴细胞(CTL)对宫颈癌HeLa细胞的杀伤作用.结果 与单纯冻融抗原、单纯乳酸杆菌致敏DC比较,经乳酸杆菌作用后的冻融宫颈癌抗原负载DC在体外明显增强T细胞的增殖能力(P<0.05)、增加上清液中IL-12与IFN-γ的含量(P<0.05);与单纯冻融抗原、单纯乳酸杆菌致敏DC比较,乳酸杆菌明显增强冻融抗原致敏DC激活的CTL对宫颈癌Helm细胞的杀伤力(P<0.05),结论乳酸杆菌可以增强树突状细胞诱导的对宫颈癌细胞的肿瘤免疫杀伤作用.     

BrdU-ELISA法测定四逆汤及组方药提取物对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 观察四逆汤(SNT)及组方药提取物对大鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响。方法 采用MTT比色法和Brdu—ELISA法观察药物对离体大鼠VSMC增殖的影响。结果 BrdU—ELISA法结果表明四逆汤总提取物(EST)对VSMC的BrdU掺入DNA没有显著影响，而MTT测定表明：EST可以提高VSMC的脱氢酶活性。甘草(LE)、附子(AE)、干姜(GE)、甘草加附子(LAE)、干姜加附子(AGE)提取物显著提高VSMC的脱氢酶活性，同时提高VSMC的BrdU掺入DNA的水平。结论 EST可以增加VSMC的脱氢酶活性，但对VSMC的BrdU掺入DNA的水平无影响。而其他组方药提取物可以增加VSMC的脱氢酶活性，同时提高VSMC的BrdU掺入DNA的水平。     

RNA转染树突状细胞诱导特异性抗前列腺癌免疫反应的实验研究

目的 研究前列腺癌细胞RNA转染树突状细胞(DCs)诱导的细胞毒T淋巴细胞(CTL)对前列腺癌细胞的特异性杀伤作用.方法 联合应用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-4 (IL-4) 诱导培养小鼠骨髓单个核细胞向DCs分化,脂质体法转染RNA,流式细胞术测定转染后树突状细胞共刺激分子表达的变化,MTT法测定DCs对T淋巴细胞的刺激能力.ELISA法检测IFN-γ的分泌水平.LDH法测定DCs诱导的CTL对前列腺癌细胞的杀伤效果.结果 用GM-CSF和IL-4诱导培养小鼠骨髓来源的单核细胞,体外诱导培养6 d后获得大量DCs;RNA转染后,DCs表面共刺激分子CD40、CD80、CD86和MHC-Ⅱ分子表达提高(P<0.05),刺激T淋巴细胞增殖能力明显提高(P<0.01);前列腺癌RNA转染的DCs诱导CTL对前列腺癌细胞和肝癌细胞的杀伤作用有明显差异(P<0.01).结论 前列腺癌细胞RNA转染DCs后诱导的CTL对前列腺癌有特异性杀伤作用,为进一步抗肿瘤疫苗的实验研究奠定了基础.     

高浓度花生四烯酸诱导小鼠成纤维细胞L929凋亡的研究

目的　探讨花生四烯酸是否能诱导小鼠成纤维细胞L92 9凋亡及其可能机制。方法　用四甲基偶氮唑盐(MTT)法和乳酸脱氢酶 (LDH)释放率测定细胞存活率及损伤程度 ,比色法测定细胞脂质过氧化产物丙二醛 (MDA)含量 ,Hoechst 3 3 2 58染色观察凋亡细胞核形态变化 ,DNA琼脂糖凝胶电泳检测DNA降解情况。结果　L92 9细胞在低浓度花生四烯酸 (40～ 160 μmol·L- 1)作用 2 4h后 ,细胞存活率明显下降 ,LDH释放率和细胞MDA含量显著增加 (P <0 .0 1)。经 160 μmol·L- 1花生四烯酸处理后的L92 9细胞呈现典型的凋亡核固缩表现。琼脂糖凝胶电泳显示DNA凋亡梯带。结论　高浓度花生四烯酸 (80～ 160 μmol·L- 1)能诱导小鼠成纤维细胞L92 9凋亡 ,其中促脂质过氧化作用可能是一个关键因素     

特异性溶瘤重组腺病毒KH901的体外特异性抗肿瘤作用研究

目的 研究特异性溶瘤重组腺病毒KH901在体外培养的人肿瘤细胞中的选择性复制和杀伤作用.方法 以感染复数(MOI)=2 PPC的KH901和野生型腺病毒(Ad5)感染人肿瘤和正常细胞,72 h后采用病毒滴定法测定病毒滴度;以MOI＝10 PPC和1 PPC的KH901感染人肿瘤和正常细胞,24 h后通过ELISA法和TF-1依赖细胞株/MTT比色法测定粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的免疫活性和生物活性;以MOI分别为0、0.1、1、10、100、1000 PPC的KH901和野生型Ad5感染人肿瘤和正常细胞,采用MTT法测定各细胞活力,计算半数药物有效浓度(EC50).结果 野生型Ad5在正常细胞和肿瘤细胞中均大量复制,均表现出明显的杀伤作用;KH901在肿瘤细胞中大量复制[(2526.4±136.8)～(2796.6±104.6) TCID50/cell],表达大量的人GM-CSF[(1177.793±6.62)～(3924.497±17.79) IU/(106细胞·24 h)],并显示出明显的杀伤作用[EC50为(0.31±0.06)～(0.19±0.01) pfu/cell],在正常细胞中KH901复制较差[(56.8±9.2)～(90.1±14.4) TCID50/cell],只有少量的GM-CSF产生[(13.397±0.82) IU/(106细胞·24 h)],杀伤作用轻微[EC50为(92.33±9.12)～(121.20±19.94) pfu/cell],两者间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 KH901具有肿瘤选择性复制和杀伤作用,并能表达具有生物活性的GM-CSF,显示出治疗实质性肿瘤的潜力.     

一氧化氮对人的甲状腺细胞生存率及细胞损伤的实验研究

目的 研究一氧化氮(NO)供体硝普钠(SNP)在人的甲状腺细胞生长调节及细胞损伤中的作用。方法 采用甲状腺腺瘤旁正常甲状腺组织，以细胞单层培养、噻唑蓝(MTT)法及乳酸脱氢酶(LDH)的活性测定，检测不同浓度的SNP(10^-6-10^-3mol／L)对甲状腺细胞存活率及损伤的影响。结果 SNP呈剂量依赖性抑制甲状腺细胞的生长，亦呈剂量依赖性损伤细胞。结论 一定浓度的NO对甲状腺细胞具有一定的细胞毒作用。     

神经生长因子对HaCaT细胞增殖及表达趋化因子RANTES的影响

目的:研究神经生长因子(NGF)对HaCaT细胞增殖及表达趋化因子RANTES的影响,探讨NGF与银屑病表皮过度增殖及皮损局部大量T细胞浸润的关系.方法:利用HaCaT细胞体外培养,采用NGF为增殖诱导剂,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测不同浓度的NGF对HaCaT细胞增殖率的影响,并用酶联免疫吸附法(ELISA)测定培养上清液中表达的趋化因子RANTES.结果:MTT实验表明,NGF可刺激HaCaT细胞增殖,刺激作用呈浓度依赖性(r=0.962,P＜0.05);NGF能够诱导HaCaT细胞表达高水平的趋化因子RANTES(P＜0.001,Student's t-test),且呈浓度依赖性.结论:NGF具有显著的促进HaCaT细胞增殖及表达趋化因子RANTES的作用,银屑病皮损区域NGF表达增加可能是引起表皮过度增殖及皮损局部大量T细胞浸润的重要因素.     

atRA对原代培养的猪甲状腺细胞生存率及细胞损伤的实验研究

目的研究全反式维甲酸(atRA)对猪甲状腺细胞生长调节及细胞损伤的作用。方法采用正常猪甲状腺组织，以细胞单层培养、噻唑蓝(MTT)法及乳酸脱氢酶(LDH)的活性测定，检测不同浓度的atRA(10—8～10—5mol/L)对甲状腺细胞存活率及损伤的影响。结果atRA呈剂量依赖性抑制甲状腺细胞的生长。亦呈剂量依赖性损伤细胞。结论一定浓度的atRh对甲状腺细胞具有一定的细胞毒作用。     

人卵巢肿瘤细胞系3AO中肿瘤干细胞的分离鉴定

目的利用CD133抗体偶联的免疫磁珠分选法从人卵巢肿瘤3AO细胞系中分离CD133+细胞,并且通过检测其抗凋亡能力和耐药性进一步鉴定其特征。方法通过免疫磁珠分选方法分离人卵巢肿瘤细胞系中CD133+肿瘤干细胞,流式细胞仪检测肿瘤干细胞自我更新能力和抗凋亡能力,裸鼠移植实验反映成瘤性,MTT法检测其耐药性。结果通过免疫磁珠手段可成功分离得到CD133+卵巢肿瘤肿瘤干细胞,细胞增殖活力好,自我更新能力强,随着培养时间的延长可产生大量的CD133-细胞。裸鼠移植成瘤实验表明CD133+细胞成瘤率是10/10,成瘤平均时间是(58±6)d;而CD133-成瘤率是4/10,平均成瘤时间是(145±8)d,CD133+细胞成瘤能力明显强于CD133-细胞。MTT检测结果表明CD133+细胞的IC50值为CD133-细胞的2.5倍左右,提示对顺铂药物不敏感。对使用顺铂的细胞进行吖啶橙染色后发现,大量CD133-细胞呈现细胞凋亡状态,而CD133+细胞形态基本正常。进一步的AnnexinⅤ-FITC和PI双染结果表明,药物处理后的CD133+细胞比CD133-细胞具有更强的抗凋亡能力。结论免疫磁珠分选得到的CD133+细胞具有自我更新、增殖和分化为CD133-细胞等肿瘤干细胞的特征。CD133+细胞比CD133-细胞具有较强的成瘤能力、耐药性及抗凋亡能力。     

用酶偶联法测定乳酸脱氢酶总活力

乳酸脱氢酶(LDH)总活力测定主要有速率法和比色法两大类。速率法又有:LDH-L法,用乳酸作基质;LDH-P法,用丙铜酸作基质。除需要恒温、自动记录仪,还需进口酶试剂。本文选用国产试剂代替进口试剂,选用黄递酶(diaphorase)偶联法(由上海化学试剂研究所供应试剂盒)测定LDH总活力,     

γ-氨基丁酸对人末梢血γδT细胞作用的实验研究

目的 研究γ-氨基丁酸(GABA)对人外周血γδT细胞的增殖、细胞周期、凋亡的变化、杀伤活性的影响及其可能的作用机制.方法 在体外用不同浓度的GABA与人γδT细胞作用后,用MTT比色法和流式细胞仪(FCM)以及乳酸脱氢酶(LDH)法分别检测人γδT细胞的增殖能力、T细胞周期、凋亡和杀伤活性的变化.结果 GABA能显著抑制γδT细胞的生长(P＜0.01),并具有浓度依赖性; GABA显著影响细胞周期比例的分布,促进细胞凋亡;GABA抑制γδT细胞对人胰腺癌细胞株SW-1990的杀伤活性.结论 GABA能显著抑制γδT细胞的增殖,抑制γδT细胞的杀伤活性.提示GABA可能是通过影响细胞周期及凋亡对γδT细胞发挥作用,进而影响其杀伤活性.     

应用MTT比色法评价新生小牛血清对培养细胞生长的影响

体外培养细胞成功与否常取决于所选用血清质量，不同批号的血清往往有个体差异，质量不尽一样，细胞长势差别很大，所以在培养细胞之前必须对使用的血清进行质量鉴定。血清质量鉴定方法有定性法、定量法、放射性核苷酸掺入法和MTT比色法，而细胞计数法、克隆形成率测定法和H-TdR掺人法存在操作复杂和放射性污染等缺点。自1983年Mosmann建立MTT比色法以来，经不断改良完善，已成为细胞生物学及相关研究领域一种分析细胞活性、生长增殖等常用方法。基于MTT比色法能定量检测细胞的增殖与生长，本室在细胞培养中应用MTT比色法检测300头新生小牛血清(未饮过初乳)支持细胞生长能力。     

四氯化碳对非洲绿猴肾细胞损伤机理的研究

目的　实验研究四氯化碳染毒 2 4h对非洲绿猴肾细胞的损伤及其机理。方法　运用显微荧光术测定非洲绿猴肾细胞 (Vero细胞 )内活性氧 (ROS)含量及游离Ca2 + 浓度 ,同时 ,测定Vero细胞培养上清液乳酸脱氢酶(LDH)活力用于检查Vero细胞受损情况。结果　接触浓度为 1 0mmol L四氯化碳的Vero细胞内ROS含量及游离Ca2 + 浓度与对照组比较差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,同时 ,表示Vero细胞受损指标 (LDH活力 )差异也无显著性 (P >0 .0 5 ) ;而接触浓度为 4 0、8.0mmol L四氯化碳的Vero细胞内ROS含量及游离Ca2 + 浓度均显著性高于对照组 (P <0 .0 1) ,其Vero细胞受损也均显著性增加 (P <0 .0 1)。结论　较高浓度的四氯化碳能损伤Vero细胞 ,其损伤的可能途径是通过提高Vero细胞内ROS含量及游离Ca2 + 浓度。     

丙酮酸脱氢酶激酶4在肝细胞癌中的作用研究进展

肝细胞癌(HCC)是全球癌症相关死亡的第三大原因，其发病率继续上升。近年来，癌症代谢在癌症研究中备受关注。细胞代谢的改变是癌症的特征之一。它们不仅是肿瘤进展的结果，也是癌症发生的原因。丙酮酸脱氢酶激酶4(PDK4)是一种关键的代谢酶，通过抑制丙酮酸脱氢酶(PDH)来调节细胞代谢。但PDK4在各种癌症包括HCC的肿瘤发生和进展中的功能和潜在分子机制仍然在很大程度上未知。现就近年来PDK4在HCC中的作用作一综述。