原癌基因c-myc产物在小鼠早期胚胎中的表达

0　引言　原癌基因 c- myc的表达产物 ,是一种与 DNA结合的磷酸化蛋白 ,具有转录调控因子的作用 .c- Myc蛋白通常和 Max结合 ,二者形成异二聚体后再和 DNA核心序列结合 ,控制 DNA转录 ,从而发挥基因调控的作用 [1 ] .以往研究发现c- Myc蛋白在小鼠卵母细胞、精子细胞及孕中期胚胎中存在 .利用 RT- PCR方法在着床前胚胎发育过程中可以检测到 c-myc原癌基因转录 .最早在小鼠胚胎基因组激活期即 2胚细胞期 [2 ] .早期胚胎能否表达 c- Myc蛋白 ,未见报道 .本研究用免疫组织化学 ABC法探讨了 c- Myc蛋白能否在着床前小鼠胚胎中表达 ,为 …     

层粘连蛋白在小鼠胚胎早期发育期间的表达与分布

目的:研究发育不同阶段早期小鼠胚胎中层粘连蛋白(1aminin,LN)的表达与分布变化,以进一步探讨LN与胚胎细胞分化及着床的关系.方法:取植入前发育不同阶段的单个小鼠胚卵,应用免疫荧光间接法和酶免疫组织化学ABC等方法观察早期胚胎中LN的表达时间、强弱及分布状况.结果:从原核期、Ⅱ细胞期至Ⅷ细胞期胚,卵裂球内均可见LN强免疫荧光或棕色LN阳性反应颗粒,卵裂球外间质中LN则为阴性反应.到桑椹胚期,卵裂球内及间质中同时出现LN阳性反应物质.早期胚泡中LN主要分布在内细胞团,滋养层细胞间质中也有分布.晚期胚泡滋养层细胞内LN表达增强,细胞间质中转为阴性,近内细胞团侧的滋养层与内细胞团处,均表达出LN强阳性反应.结论:早期小鼠胚胎的卵裂球中含有LN;桑椹胚期LN在细胞间质中出现;胚泡侵入子宫内膜期间近内细胞团侧的滋养层细胞及内细胞团中的LN含量增加;小鼠早期胚胎中LN与其发育及粘附着床正相关.     

凋亡调节基因bcl-2及p53在早期胚胎中的表达

目的　探讨两种重要的细胞凋亡调控基因bcl-2及p53在着床前小鼠胚胎中的表达及其其对着床前胚胎发育的作用.方法　建立超排卵小鼠早孕的模型,获取着床前胚胎,采用免疫组化LSAB法,检测bcl-2及p53蛋白.结果　在小鼠2细胞、4细胞、8细胞和桑葚胚中,均检测到bcl-2和p53蛋白.结论　bcl-2和p53凋亡调控基因在小鼠着床前胚胎的表达可能与细胞碎片形成有关,对于维护胚胎正常发育,促进发育异常的胚胎细胞发生凋亡,从而提高胚胎质量有重要意义.体内增殖与凋亡处于一个动态平衡,共同调节胚胎发育凋亡调节基因bcl-2及p53在早期胚胎中的表达@李艳红@姚…     

瘦素在着床前小鼠胚胎中的表达及其对胚胎发育的影响

目的 探讨瘦素(leptin)在围着床期小鼠胚胎中的表达规律和分布情况以及leptin抗体对小鼠胚胎体外发育的影响.方法 雌性NIH小鼠超排后与雄鼠交配,分别在妊~4 d上午从输卵管或子宫角冲取相应时期的胚胎,用于以下实验:①分别提取总RNA,检测胚胎中leptin mRNA表达情况.②采用免疫荧光技术,观察leptin蛋白在囊胚的表达和分布情况.③将8-细胞小鼠胚胎培养于含不同浓度leptin抗体的培养液中,观察囊胚形成及脱透明带的情况.结果 leptin mRNA仅在囊胚期特异性表达,其余各时期胚胎未见表达;leptin蛋白在囊胚的滋养层细胞和内细胞团的细胞质和细胞膜呈阳性表达,而在细胞核无表达.一定浓度的leptin抗体可明显降低囊胚的形成率(1∶400, P<0.05) 和脱带率(1∶1 600, P<0.05),且随着抗体浓度的增加,这种抑制作用更明显.结论 leptin能促进着床前胚胎发育,同时也可能参与了胚胎着床过程.     

维生素A酸对小鼠囊胚Fas蛋白表达的影响

目的:探讨全反式维生素A酸(ATRA)对体外培养小鼠囊胚Fas蛋白表达的作用,并了解其对着床前期胚胎发育的作用。方法:获取妊娠3.5 d小鼠囊胚,分别培养在含0、1μmol.L-1和10μmol.L-1的ATRA的M199培养基中24 h,用免疫组织化学SP法,分别检测不同剂量组ATRA对小鼠囊胚Fas蛋白表达的状况。结果:ATRA可增强小鼠囊胚Fas蛋白表达,表达强度呈现剂量依赖型。结论:ATRA对小鼠胚胎的发育具有细胞毒性作用,Fas在小鼠胚胎发育的调节中发挥了重要的作用。     

白细胞介素-8在着床前后小鼠子宫内膜及胚胎的定位研究

目的:研究着床前后小鼠子宫内膜及胚胎白细胞介素-8(Interleukin-8,IL-8)的定位变化.方法:应用免疫组织化学技术,观察IL-8在妊娠4d和妊娠8d小鼠子宫内膜及胚胎的表达部位.结果:妊娠4d(着床前),IL-8主要表达在子宫内膜的腔上皮、腺上皮和基质;胚泡的内细胞团和滋养层细胞亦有阳性表达.妊娠8d(着床后),子宫内膜的腔上皮IL-8表达呈阴性,腺上皮和蜕膜细胞均呈弱阳性;胚胎IL-8表达呈阴性.结论:IL-8可能参与胚泡着床的过程,但与胚胎分化、发育无密切关系.     

激光共聚焦显微镜观察小鼠早期胚胎中蛋白激酶Cα的表达

目的 优化早期胚胎的免疫荧光染色方法并观察蛋白激酶C(PKCα)在小鼠着床前胚胎的表达和定位.方法 用优化的免疫荧光化学法结合激光共聚焦显微术,观察小鼠早期胚胎2-细胞期到囊胚期PKCα的表达情况.结果 小鼠早期胚胎自2-细胞期到囊胚期均有PKCα亚型的表达,且主要集中在早期胚胎卵裂球的核内.结论 经优化后的免疫荧光染色可清晰地检测到胚胎内PKCα集中于细胞核内表达,且分裂间期的表达高于分裂期.     

促血管生成素-1在小鼠着床期子宫内膜的表达

目的检测促血管生成素1(Ang1)蛋白在小鼠胚胎着床期子宫内膜的分布及mRNA的表达,以探讨其在胚胎着床过程中所起的作用和生物学意义。方法取妊娠2、4、6和8d的小鼠子宫内(蜕)膜,分别运用免疫组织化学SP法和原位杂交技术,检查着床期子宫内膜中Ang1蛋白的表达及其mRNA的转录水平。并用计算机图像分析技术检测不同时期子宫内膜中Ang1表达的平均吸光度值。结果Ang1特异性免疫反应产物在基质细胞中表达,随着妊娠天数的增加,表达逐渐增强(P<0.01),且上皮细胞和血管壁亦为Ang1特异性免疫反应阳性结构。Ang1mRNA自妊娠第2天起即表达于基质细胞中,第4天血管壁细胞质中也出现阳性表达,且两者的表达强度在妊娠第6、第8天时逐渐增加,平均吸光度值差异均有显著性意义(均P<0.01)。结论Ang1基因在胚胎着床期血管新生和血管重塑过程中起重要作用,有助于囊胚成功着床。     

转化生长因子在小鼠胚卵及孕鼠子宫的表达

目的：研究转化生长因子α（TransformingGrowthFactorα，TGFα）在小鼠胚卵及着床前孕鼠子宫的表达。方法：免疫组织化学和地高辛标记cDNA探针原位杂交。结果：2-细胞胚至胚泡的整个发育过程中，均有TGFα的蛋白质及基因表达。着床前孕鼠子宫组织多种细胞呈现TGFα的蛋白质及核酸反应阳性。结论：小鼠胚卵和着床前子宫各自合成TGFα，可能参与胚胎发育和蜕膜反应，影响子宫内膜对着床的接受性。     

全反式维生素A酸对小鼠囊胚转化生长因子β_1蛋白表达的影响

目的:探讨全反式维生素A酸(ATRA)对体外培养小鼠囊胚转化生长因子β1 (TGF β1 )蛋白表达的作用,并了解其对着床前期胚胎发育的影响作用。方法:获取妊娠3.5 d小鼠囊胚,分别培养在含0,0.1,1,10μmol·L-1的ATRA的M199培养基中24 h,用免疫组织化学SP法,分别检测不同剂量组 ATRA对小鼠囊胚 TGF β1蛋白表达的状况。结果:ATRA可增强小鼠囊胚TGF β1 蛋白表达,表达强度呈现剂量依赖型。结论:ATRA对小鼠胚胎的发育具有细胞毒性作用,TGF β1 在小鼠胚胎发育的调节中发挥了重要的作用。     

胰岛素样生长因子在植入前胚胎细胞中的表达

目的 :研究胰岛素样生长因子 1,2 (IGF 1,IGF 2 )在植入前胚胎的表达及其生物学意义。方法 :采用原位杂交法 ,检测人植入前胚胎细胞IGF 1,IGF 2mRNA的表达情况。结果 :IGF 1及IGF 2mRNA于不同阶段的植入前胚胎细胞中表达不同 ,各表达量有差异。结论 :不同阶段的植入前胚胎细胞分泌IGF 1、IGF 2 ,参与早期人类胚胎的生长、发育。     

印迹基因生长因子-受体结合蛋白10在人类卵子及种植前胚胎的表达

目的检测Silver-Russell syndrome(SRS)候选印迹基因-生长因子受体结合蛋白10(Grb10)在人类卵子和种植前胚胎的正常表达,探讨Grb 10与胚胎发育以及辅助生殖的关系.方法应用巢式RT-PCR技术检测印迹基因Grb10在人类卵子及种植前胚胎的表达.结果4细胞、8细胞胚胎、囊胚及卵子中均可测到Grb10基因的表达,2细胞胚胎中未见表达.结论印迹基因Grb10表达于种植前胚胎,与胚胎发育密切相关.     

印迹基因生长因子-受体结合蛋白10在人类卵子及种植前胚胎的表达

目的 检测Silver-Russell syndrome(SRS)候选印迹基因—生长因子受体结合蛋白10(Grb10)在人类卵子和种植前胚胎的正常表达,探讨Grb10与胚胎发育以及辅助生殖的关系。方法 应用巢式RT-PCR技术检测印迹基因Grb10在人类卵子及种植前胚胎的表达。结果 4细胞、8细胞胚胎、囊胚及卵子中均可测到Grb10基因的表达,2细胞胚胎中未见表达。结论 印迹基因Grb10表达于种植前胚胎,与胚胎发育密切相关。     

胰岛素样生长因子-1受体在植入前胚胎细胞中的表达

目的 :研究胰岛素样生长因子 1受体 (IGF 1R)在植入前胚胎的表达及其生物学意义。方法 :采用免疫组化ABC法 ,检测人植入前胚胎细胞IGF 1R的表达情况。结果 :不同阶段的植入前胚胎细胞均有IGF 1R表达 ,各表达程度无明显差异。结论 :IGF 1R在植入前胚胎中均有表达 ,提示IGF 1R可结合IGF 2、IGF 1,参与人植入前胚胎的生长、发育和着床。     

Oct4基因在猪孤雌激活和体外受精早期胚胎中的表达特征

摘 要：[目的]研究植入前胚胎发育重要基因Oct4在猪孤雌和体外受精胚胎中的表达特征。[方法]收集成熟卵母细胞、孤雌和体外受精2细胞、4细胞、8细胞和囊胚，做荧光定量PCR，以成熟卵母细胞做对照分析相对表达量。[结果]孤雌组和体外受精组在8细胞期Oct4表达量均最高（p<0.05），在孤雌和体外受精组囊胚相对于其他时期Oct4表达量最低（p<0.05）。在同一时期孤雌和体外受精Oct4表达并没有差异。[结论]多能性基因Oct4在卵裂发育时期表达量动态变化，孤雌胚胎在一定程度上可作为体外胚胎基因表达的模型，且不同的胚胎培养条件可能导致基因表达的不同。     

miRNA在小鼠着床前胚胎的表达

目的:研究小鼠发育过程中miRNA表达水平的变化,探讨miRNA对着床前胚胎发育过程的作用。方法:建立小鼠超排、交配系统,收集着床前胚胎提取低分子量RNA;采用miRNA特异RT引物进行反转录,采用SYBR Green实时定量PCR技术,研究miR-125a、miR-295和miR-181b在小鼠着床前胚胎发育过程中表达水平的变化。结果:着床前胚胎发育的各阶段均表达miR-125a、miR-295和miR-181b;随着胚胎发育进程,miR-295的表达呈逐渐上升的趋势;miR-125a在卵母细胞到2细胞发育阶段呈下降趋势,以后随发育进程呈逐渐上升趋势。结论:小鼠着床前胚胎中表达miRNA,着床前胚胎的发育和分化过程可能受到miRNA的调控。     

瘦素对小鼠着床前胚胎发育影响的体外研究

目的　探讨瘦素在体外对小鼠着床前胚胎发育的影响。方法　 1收集小鼠 2 -细胞胚胎 ,在不同剂量瘦素的 CZB培养液中进行体外培养 ,观察胚胎发育情况 ,并进行胚胎移植 ,观察着床率 ;2收集小鼠 2 -细胞胚胎在空白 CZB培养液中体外培养至桑葚胚期 ,再分别置入不同剂量瘦素的 CZB培养液中进行体外培养 ,观察胚胎进一步发育情况。结果　瘦素能提高 2 -细胞胚胎体外发育的质量、发育率和胚胎着床率。当瘦素剂量为 10 ng/ ml时平均胚胎形态学评分 (AES)为 16 .0 8± 0 .37,剂量为 5 0 ng/ ml时 AES为 17.5 7± 0 .4 2 ,两者间差别有统计学意义(P<0 .0 5 )。但剂量进一步增加 ,促进作用不再递增。瘦素对桑葚胚体外进一步发育无显著影响。结论　瘦素参与了小鼠着床前胚胎的发育 ,能提高胚胎发育质量、发育率 ,有利于胚胎的进一步着床。     

氨基酸浓度对昆明小鼠胚胎体外发育的影响

目的探讨培养液中氨基酸成分对植入前昆明小白鼠胚胎发育的影响,摸索植入前胚胎体外培养氨基酸的最佳浓度.方法从超排昆明小鼠输卵管中取出的630枚受精卵均分为7组,分别在经添加不同浓度Eagle‘s氨基酸的去牛血清白蛋白KSOM培养液(mKSOM、mKSOM 1/16AA、mKSOM 1/8AA、mKSOM 1/4AA、mKSOM 1/2AA、mKSOM AA、mKSOM 2AA)中培养,对比观察各组胚胎体外发育的过程.用卡方检验分析添加各浓度氨基酸的培养液培养效率的差别,并将8细胞发育率和囊胚发育率分别与相应的氨基酸浓度进行曲线拟合分析.结果与未添加氨基酸组对比,添加氨基酸组胚胎发育率高,8细胞胚和囊胚的形成率与培养液中氨基酸的浓度关系均符合三次模型,在氨基酸为 1/2浓度时8细胞胚和囊胚的形成率均达到最高.结论氨基酸对胚胎的体外发育有促进作用,但含有高浓度氨基酸的培养液培养效果反而有所下降,可能是由于高浓度的氨基酸影响胚胎的代谢和渗透压的改变,且氨基酸分解及胚胎代谢所产生的铵对胚胎有毒性作用.