大鼠全脑缺血再灌注损伤及相关分子表达的时间过程

目的：研究大鼠全脑缺血再灌注损伤的时间过程及相关分子的表达变化。方法：在四血管阻断法（4VO）诱导全脑缺血模型上观察脑组织病理改变；同时应用免疫印迹方法检测脑组织NMDA受体亚单位蛋白及VCAM－1水平。结果：全脑缺血再灌注后3－14d海马CA1区产生迟发性神经元死亡。皮层NR1和NR2A亚单位表达分别于再灌注后1和3d显著增加，NR2B亚单位在1－3d也显示较高水平；海马NR1亚单位表达在1d明显下降，以后呈进行性升高，于14d达高峰；NR2A和NR2B表达有相似的趋向并于7d明显增加。海马和皮层VCAM－1分别于再灌注后3和7d表达明显上调。结论：脑缺血再灌注过程中海马神经元数量减少，皮层和海马的NMDA受体亚单位蛋白（NR1、NR2A和NR2B）及粘附分子VCAM－1有不同变化；干预两者的表达可能减轻脑缺血再灌注损伤。     

大鼠脑缺血再灌注后核因子—kB的表达及纳洛酮的影响

目的：探讨核因子－kB（nuclear factor-kB,NF-kB)在缺血再灌注大鼠海马神经元中的表达及纳洛酮的影响。方法：用插法制作大鼠大脑中动脉闭塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO)局灶性脑缺血再灌注模型，海马区NF-kBP65亚单位的水平通过过免疫组化来测定，苏木精－分染色观察缺血侧脑组织形态学变化，结果：缺血再灌注组大鼠缺血侧海马区P65亚单位的表达较假手术组显著增强（P＜0．01），给予络洛酮处理后，P65的表达减弱（P＜0．01）。缺血再灌注组缺血侧海马区许多神经元有凋亡现象，缺血再灌注纳洛酮组凋亡神经元减少，假手术组未见凋亡神经元，结论：短暂的脑缺血可导致海马区NF-kB的表达增加，凋亡神经元增多，海马区NF-kB的激活与神经元的凋亡相关，纳洛酮可抑制海马区NF-kB的表达，减少神经元的凋亡。     

原肌球蛋白受体激酶在脑缺血大鼠各脑区的表达特性

目的观察大鼠局灶性脑缺血后神经营养因子受体原肌球蛋白受体激酶(Trk)在大脑各区的表达特点,探讨其与缺血损伤的关系.方法制作大鼠局灶性脑缺血模型,采用免疫组化方法观察急性缺血不同时间脑区Trk阳性神经元的动态改变.结果正常脑组织中Trk受体广泛表达,缺血后梗死中心Trk表达急剧下降,1 d后完全消失;而半暗带及海马DG区Trk阳性神经元自缺血6 h开始显著增多(P＜0.05),持续整个缺血期.海马CA1区于缺血1 d后Trk表达开始缓慢升高;缺血侧的其他脑区及对侧非缺血脑区也有Trk表达升高.结论缺血损伤可诱导脑内Trk受体表达广泛增加,与内源性神经保护机制有关.     

原肌球蛋白受体激酶在脑缺血大鼠各脑区的表达特性

目的观察大鼠局灶性脑缺血后神经营养因子受体原肌球蛋白受体激酶(Trk)在大脑各区的表达特点,探讨其与缺血损伤的关系。方法制作大鼠局灶性脑缺血模型,采用免疫组化方法观察急性缺血不同时间脑区Trk阳性神经元的动态改变。结果正常脑组织中Trk受体广泛表达,缺血后梗死中心Trk表达急剧下降,1 d后完全消失;而半暗带及海马DG区Trk阳性神经元自缺血6 h开始显著增多(P<0.05),持续整个缺血期。海马CA1区于缺血1 d后Trk表达开始缓慢升高;缺血侧的其他脑区及对侧非缺血脑区也有Trk表达升高。结论缺血损伤可诱导脑内Trk受体表达广泛增加,与内源性神经保护机制有关。     

七氟醚预先给药对心肌缺血再灌注损伤大鼠海马脑区NMDA受体的影响

 目的 观察七氟醚对心肌缺血再灌注损伤大鼠海马脑区N-甲基-D-天冬氨酸受体（NMDA受体）亚单位NR1和NR2B mRNA表达的影响。方法 32只老年Wistar大鼠随机分为4组：对照组（A组）、假手术组（B组）、急性心肌缺血再灌注组（C组）和七氟醚预先给药组（D组）。用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法定量大鼠海马脑组织NMDA受体亚单位NR1和NR2B的基因表达。结果 与A相比,C、D组NR1亚单位mRNA和NR2B亚单位mRNA基因的表达明显增加,与C相比,D组NR1亚单位 mRAN的表达降低。结论 七氟醚对老年心肌缺血再灌注损伤大鼠的脑保护作用可能与海马脑区NMDA受体NR1基因下调有关。     

大鼠脑缺血再灌注后核因子-кB的表达及纳洛酮的影响

目的:探讨核因子-κB(nuclearfactor-κB,NF-κB)在缺血再灌注大鼠海马神经元中的表达及纳洛酮的影响。方法:用插线法制作大鼠大脑中动脉闭塞(middlecerebralarteryocclusion,MCAO)局灶性脑缺血再灌注模型,海马区NF-κBP65亚单位的水平通过免疫组化来测定,苏木精-伊红染色观察缺血侧脑组织形态学变化。结果:缺血再灌注组大鼠缺血侧海马区P65亚单位的表达较假手术组显著增强(P<0.01),给予纳洛酮处理后,P65的表达减弱(P<0.01)。缺血再灌注组缺血侧海马区许多神经元有凋亡现象,缺血再灌注纳洛酮组凋亡神经元减少,假手术组未见凋亡神经元。结论:短暂的脑缺血可导致海马区NF-κB的表达增加,凋亡神经元增多。海马区NF-κB的激活与神经元的凋亡相关,纳洛酮可抑制海马区NF-κB的表达,减少神经元的凋亡。     

大脑局灶损害后丘脑萎缩的研究

局灶性脑缺血对脑组织的损害与缺血程度及缺血持续时间有关[1 ] 。缺血后 ,缺血区脑组织能量代谢障碍引起组织迅速发生不可逆的死亡。近年来 ,陆续有学者发现局灶性缺血后 ,远离梗死灶的同侧丘脑有神经元慢性缺血后改变[2 ] 。1　丘脑萎缩的病理形态学改变局灶性脑缺血可引起缺血区神经元损伤和形态学改变 ,这种缺血性损害往往在缺血后数小时即发生 ,而一些特殊脑区 ,如海马ＣＡ1区易损神经元则可发生迟发性神经元死亡。Ｗａｋｉ等[3] 在鼠一侧大脑中动脉永久性闭塞模型中计算两侧丘脑比 ,发现正常对照组两侧丘脑比为 1 .0 0± 0 .0 4 4,而…     

N-甲基-D门冬氨酸受体复合物亚单位蛋白的组成及其在发育过程中表达的研究

本研究通过用重组DNA技术制备NMDA受体亚单位融合蛋白并免疫动物获得相应的特异性抗体,采用定量免疫印迹技术系统研究了大鼠、小鼠和人类不同脑区NMDA受体亚单位NR1、NR2A及NR2B在不同发育阶段的表达。并经免疫沉淀和定量免疫印迹分析,获得了有关天然NMDA受体亚单位组成的结果:成年大鼠皮层组织的主要受体亚型     

氯酯醒对小鼠缺血再灌注脑损伤的保护作用研究

目的：采用小鼠双侧颈总动脉缺血再灌注模型，观察氯酯醒对缺血再灌注脑损伤的改善作用。方法：重复缺血10min于再灌后2、24、48h分别取脑组织，密度梯度法检测脑组织含水量的变化，生化测量突触膜Na^＋-K^＋-ATP酶、Ca^2＋-ATP酶活性。HE染色观察组织形态学改变。结果：急性缺血再灌注能引起小鼠脑组织水肿，伴随着Na^＋-K^＋-ATP酶和Ca^2＋-ATP酶活性降低，以及皮层海马神经元损害。术前3d预服氯酯醒（100mg／kg，1次／d），可显著减轻脑组织水肿，提升异常降低的ATP酶活力，改善神经元结构异常。结论：氯酯醒的神经元保护作用可能与抑制脑水肿的发生，改善脑缺血后能量代谢失衡和钙离子超载等作用有关。     

腺病毒表达谷氨酸受体羧基肽段对大鼠脑缺血再灌注后海马CA1区神经细胞的保护作用

目的 探讨脑缺血再灌注后腺病毒表达谷氨酸受体羧基肽段对大鼠海马CAl区神经元的保护作用及其分子机制.方法 将SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注对照组、表达病毒处理组、非表达病毒处理组及溶剂组.采用焦油紫染色、免疫印迹检测大鼠缺血再灌注后海马神经元损伤和脑组织Akt的磷酸化情况.结果 表达病毒处理组与缺血再灌注对照组、非表达病毒处理组及溶剂组相比海马CA1区神经元损伤明显减轻,脑组织Akt磷酸化升高(P<0.05).结论 腺病毒表达谷氨酸受体羧基肽段可能通过升高脑组织中Akt的磷酸化程度对海马CA1区神经元起保护作用.     

预缺血再灌注通过NMDA受体介导海马CA1区ERK5激活的研究

目的 研究脑缺血及预缺血再灌注后大鼠海马脑区细胞外信号调节激酶5（ERK5）的磷酸化（激活）规律以及NMDA受体抑制剂盐酸氯胺酮（开他敏）对其激活的影响.方法 采用SD大鼠四动脉结扎缺血及预缺血模型,给药组大鼠在缺血前20 min腹腔给予盐酸氯胺酮30 mg/kg.用免疫印迹法分析不同条件下大鼠海马ERK5的蛋白表达量和激活情况;焦油紫染色观察缺血及预缺血对大鼠海马神经元的作用.结果 盐酸氯胺酮显著抑制了预缺血再灌注后ERK5的激活,而ERK5的蛋白表达量在以上相同处理条件下无明显变化;焦油紫染色观察示预缺血对大鼠海马神经元具有保护作用.结论 预缺血再灌注具有神经元保护作用,这种保护作用与NMDA受体有关,为临床治疗脑中风提供理论依据.     

NMDA受体在培养神经元突触内和突触外发育中的变化

目的 观察培养大鼠海马神经元NMDA受体在突触内和突触外发育中的变化.方法 采用膜片钳的全细胞模式和外面向外模式分别记录突触内和突触外NMDA受体通道电流.结果 培养2周海马神经元突触内NMDA受体通道介导的微小兴奋性突触后电流(mEPSCNMDA)幅度比培养1周神经元小,对NMDA受体亚单位NR2B的特异拮抗剂ifnprodil的敏感性远低于培养1周神经元;培养2周神经元突触外NMDA受体的单通道电流幅度和开放概率比培养1周神经元增大,但两者的电导和翻转电位无显著差异.ifenprodil降低培养1周和2周神经元突触外NNDA受体单通道电流的电导和开放概率,且对培养2周神经元开放概率的抑制作用更显著.结论 NMDA受体通道电流在培养海马神经元突触内和突触外有发育变化,提示NMDA受体NR2亚单位在培养1周的神经元突触内和突触外均主要为NR2B亚单位;而神经元培养到2周时,突触内NR2B亚单位逐渐被NR2A亚单位取代,突触外仍主要为NR2B亚单位.     

川芎、当归、红花和人参萃取液对缺氧海马神经元NMDA受体的抑制

目的：研究川芎、当归、红花和人参萃取液对缺氧海马神经元NMDA（N－甲基－D－天冬氨酸）受体功能的影响，探讨川芎、当归、红花和人参萃取液保护神经元损伤的机制。方法：采用全细胞膜片钳记录模式记录正常培养10d左右的海马神经元和经缺氧处理的海马神经元NMDA诱发电流；观察0．1％和0．5％的川芎、当归、红花和人参萃取液对NMDA电流的影响。结果：与正常培养10d左右的海马神经元相比，经缺氧处理的海马神经元NMDA诱发电流明显增大，而川芎、当归、红花和人参萃取液可快速，可逆地抑制经缺氧处理的海马神经元NMDA诱发电流。结论：川芎、当归、红花和人参萃取液对缺血缺氧引起的海马神经元NMDA受体活性过度增强有抑制作用，提示川芎、当归、红花和人参萃取液具有保护因NMDA受体过渡激活引起的神经元损伤的作用。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后Bcl-2和Bax的表达

目的：研究大鼠脑缺血再灌注后凋亡相关基因Bcl-2和Bax在缺血皮层表达的变化。方法：线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，免疫组化法观察Bcl-2和Bax的表达变化。结果：再灌注2h后皮层神经元Bcl-2表达开始明显上调，为高峰，之后开始下降。缺血再灌注后早期Bax在皮层神经元的表达明显增强，随着再灌注时间的延长，其表达不断增加，24－48h达高峰。Bcl-2／Bax的比率在再灌注开始时升高，再灌注6h达高峰，随后开始下降。结论：Bcl-2和Bax的比率改变与缺血再灌注后的神经元存亡相关。     

NMDA受体2B亚单位反义寡核苷酸对缺血性脑损伤影响的实验研究

目的：观察短暂性全脑缺血大鼠海马NMDA受体2B亚单位(NR2B)蛋白质及其mRNA的表达，以及CAl区NR2B在NR2B反义寡核苷酸(ANR2B)作用下的表达情况。方法：成年SD大鼠立体定位注射在体给药，改良四动脉(4AO)全脑缺血动物模型，观察NR2B的表达变化，以及CAl区NR2B的表达在NR2B反义寡核苷酸(ANR2B)作用下的变化。结果：NR2B蛋白质以CAl区免疫组织化学染色最强。短暂性全脑缺血再灌注后早期即出现海马CAl区NR2B蛋白质及其mRNA的急剧升高现象。在体给药，注射点周围NR2B蛋白质及其mRNA表达下降。结论：NR2B及其mRNA在正常大鼠海马CAl区的基础性高表达和缺血复灌后的过表达可能与海马CAl区缺血易损性相关。ANR2B能够降低海马CAl区的基础性高表达和缺血复灌后的过表达，减轻缺血性脑损伤程度。     

遗传性癫Jian易感大鼠惊厥后脑内N—甲基—D—天冬氨酸受体亚基NR1、NR2A、NR2B蛋白的表达

目的：探讨惊厥后大脑皮质N－甲基－D－天冬氨酸（N-methyl-D-aspartate,NMDA)受体亚基蛋白表达与癫Jian发病机制的关系。方法：利用免疫组化技术,观察听源性癫Jian易感大鼠P77PMC惊厥后不同时间大脑皮质、海马等脑区NMDA受体亚基NR1、NR2A,NR2B蛋白表达状况。结果：惊厥后大脑皮质,海马齿状回,CA1、CA3等脑区NR1蛋白表达呈时间依赖性增高。大脑皮质在惊厥后4hNR1蛋白表了开始增加,24－48h达高峰,海马齿状回、CA1和CA3等脑区4h达高峰,8h开始下降,24h恢复正常。惊厥后4－8h,在海马CA1区NR2A亚基蛋白表达短暂性降低。而在大脑皮质、海马齿状回和CA3等脑区,惊厥后时间点NR2A,NR2B蛋白表达均无明显改变。结论：听源性惊厥后NMDA受体亚基蛋白表达的变化提示NMDA受体亚基组成的改变,这种改变可能与神经网络兴奋性增高及癫Jian感性的保持有关。     

缺氧对大鼠皮层、海马NMDA受体NR1亚单位磷酸化的影响

目的 观察缺氧模型大鼠皮层、海马NMDA受体NR1亚单位酪氨酸磷酸化的变化.方法 成年大鼠置于模拟海拔5 500 m高度的低压氧舱内,每天缺氧8 h,分别缺氧3、7、14 d和21 d.采用免疫组化、Western blot 免疫共沉淀方法检测皮层、海马NR1及其酪氨酸磷酸化的变化.结果 免疫组化显示缺氧皮层、海马NR1表达都明显高于对照组(P《0.01).Western blot检测进一步证明NR1的表达显著高于对照组(P《0.01),且随着缺氧时间的延长而增加.缺氧各组酪氨酸磷酸化水平亦显著高于对照组(P《0.01),缺氧14 d后酪氨酸磷酸化达到最高峰,而后开始下降,21 d时仍显著高于对照组(P《0.01).结论 高原缺氧条件下大鼠皮层、海马NMDA受体NR1亚单位表达及酪氨酸磷酸化水平显著增加,酪氨酸磷酸化的变化可能是影响NMDA受体功能的主要原因.     

亚低温对大鼠短暂性脑缺血后APE／Ref-1表达、神经元凋亡的影响

目的　 (1 )探讨短暂性脑缺血后无嘌呤 /无嘧啶核酸内切酶 /氧化还原因子 - 1 (APE/ Ref- 1 )在海马 CA1区的变化过程。 (2 )探讨短暂性脑缺血后海马 CA1区发生的神经元凋亡情况。 (3)探讨 APE/ Ref- 1在海马 CA1区的变化及其与该区神经元凋亡的内在联系。 (4 )探讨采取亚低温干预措施后APE/ Ref- 1与神经元凋亡在短暂性脑缺血后海马 CA1区的变化。 (5 )探讨亚低温干预后 APE/ Ref- 1的变化在亚低温脑保护中的作用。　方法　采用大鼠短暂性脑缺血模型及亚低温方法 ,通过神经元尼氏体染色、TU NEL 染色、APE/ Ref- 1蛋白免疫组织化学染色、APE/ Ref- 1蛋白免疫组织化学与TU NEL双重染色等方法 ,观察短暂性脑缺血后海马 CA1区神经元存活、凋亡、APE/ Ref- 1蛋白表达情况及亚低温的影响。　结果　 (1 )与假手术组相比 ,常温缺血组脑海马CA1区神经元缺失远较亚低温缺血组多 (P<0 .0 1 )。 (2 )常温缺血组及亚低温缺血组脑海马 CA1区均存在神经元凋亡。亚低温缺血组神经元凋亡出现的时间比常温缺血组迟 ,且凋亡数较常温组少 (P<0 .0 1 )。 (3)假手术组海马 CA1区神经元广泛表达 APE/ Ref- 1蛋白 ,常温缺血组及亚低温缺血组缺血后 APE/ Ref- 1蛋白表达均有下降 ,亚低温缺血组APE/ Ref- 1蛋白表达下降程度较常     

全脑缺血再灌模型大鼠皮层神经元GluR2表达的变化

目的:采用免疫组化技术,研究全脑缺血后再灌不同时点大鼠皮层神经元AMPA受体亚单位GluR2表达的变化,探讨GluR2在缺血性神经元损伤中的作用。方法:将36只SD大鼠随机分为6组,即正常组、缺血再灌注后2h、12h、24h、48h、72h 5个时间点组。参照改良的Pulsinelli四血管闭塞法制备全脑缺血大鼠模型,缺血再灌后的大鼠分别在存活2h、12h、24h、48h及72h后采用免疫组化法测定皮层神经元GluR2的表达量。结果:模型再灌5个时点之间SD大鼠皮层神经元GluR2表达量没有统计学差异(P>0.05),但与正常组相比,各组的的表达量明显降低(P<0.05)。结论:脑缺血再灌后皮层神经元AMPA受体亚单位GluR2表达减少,介导胞外Ca2+内流,引起神经细胞死亡。     

bFGF对局部性脑缺血再灌注大鼠海马及皮质神经元CREB表达的影响

目的：研究大鼠脑缺血再灌注后cAMP反应元件结合蛋白（CREB）表达的变化,探讨碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对脑组织缺血再灌注神经元CREB的调节作用及机制．方法：应用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,大脑中动脉阻塞2h再灌注损伤24h,采用TUNEL法、免疫组化检测海马及皮质内神经元凋亡和CREB的表达．结果：大鼠缺血再灌注海马及顶叶皮质内神经元凋亡数增加而CREB表达较假手术组减少,注射bFGF后神经元凋亡数减少,CREB表达明显高于缺血再灌注组．结论：bFGF抑制缺血神经元凋亡,参与CREB的调节,对缺血神经元有保护作用．