缺血早期Genistein对海马CA1区神经元保护作用机制的研究

目的 探讨缺血早期Genistein对脑缺血/再灌注后大鼠海马CA1区神经元的保护作用及其可能的机制.方法 采用四动脉结扎建立大鼠全脑缺血模型.实验动物随机分为假手术组、缺血/再灌注组、溶剂对照组、Genistein处理组.缺血5 min时,溶剂对照组、Genistein处理组分别尾静脉注射二甲基亚砜（l ml/kg）和Genistein（1 mg/kg）.Western blot和免疫荧光法检测大鼠海马CA1区HAX-1蛋白的表达,焦油紫染色法观察海马CA1区神经元的存活情况.结果 与对照组比较,Genistein处理组在再灌注3h时HAX-1蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）,免疫荧光实验结果与此一致.焦油紫染色结果显示,Genistein处理组与对照组相比较,海马CA1区存活的神经元细胞明显增加（P＜0.05）.结论 缺血早期Genistein对脑缺血造成的神经元损伤有明显的保护作用,这一作用可能是通过增加HAX-1蛋白表达水平来实现的.     

AKT及JNK激酶在大鼠脑缺血预处理后线粒体中的表达

目的：观察脑缺血预处理后大鼠海马CA1区神经元线粒体内JNK和AKT的激活,并使用AKT,JNK抑制剂进一步探讨其对线粒体结构功能的影响.方法：制作大鼠四动脉结扎脑缺血模型,Western Blot方法分析海马CA1区线粒体内AKT,JNK的磷酸化水平和蛋白表达,利用透射电子显微镜技术观察海马CA1区超微结构.结果：Western Blot结果显示p-AKT于缺血再灌注30 min达高峰,而预处理后再灌注6 h开始升高,1,3 d达高峰.JNK在缺血后再灌注30 min和3 d呈现两个激活高峰,而预处理后再灌注6 h显著升高,1,3 d明显低于正常组,且与缺血再灌注相同时间点相比显著降低.AKT,JNK的蛋白表达无明显变化.透射电子显微镜观察显示正常组及溶剂对照组神经元超微结构无明显变化,缺血组与AKT抑制剂组可见大量神经元损伤,与缺血组相比预处理组及JNK抑制剂组神经元损伤显著减轻.结论：脑缺血预处理可诱导AKT,JNK在海马CA1区线粒体内的差异激活,并通过增强AKT活性、抑制JNK磷酸化而保护线粒体的结构和功能,从而保护缺血性神经元.     

蛋白激酶B激活对脑缺血再灌注海马CA3区神经元的保护作用

目的 探讨丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶B（Protein kinase B,Akt）对脑缺血再灌注损伤后海马CA3区神经元的保护作用.方法 采用四动脉结扎法建立大鼠全脑缺血模型,再灌注0 min、30 min、3h、6h、12h、1d和3d各时间点,运用免疫印迹技术检测海马CA3区Akt1的磷酸化水平,采用免疫组化和焦油紫染色分别检测LY294002（PI3K/Akt特异性抑制剂）对缺血再灌注后磷酸化Akt1（p-Akt1）的表达及神经元存活的影响.结果 缺血再灌注后30 min,与假手术（sham）组相比,海马CA3区p-Akt1的表达显著升高（P＜0.05）,再灌后3h至峰值,一直持续至3d仍维持在较高水平（P＜0.05）;与相应的再灌注组相比,给予LY294002后,p-Akt1的蛋白表达明显降低[R6 h组和LY294002＋ R6 h组的阳性细胞数（个/mm^2）分别为（134.6±7.8）和（54.8±5.1）],海马CA3区的神经元大量死亡[R5 d组和LY294002 ＋R5 d组神经元数量（个/mm^2）分别为（152.0±17.4）和（62.7±5.1）]（P＜0.05）.结论 脑缺血再灌注后蛋白激酶Akt的持续激活,是海马CA3区神经元存活的重要因素.     

依达拉奉联合黄芪对大鼠脑缺血再灌注神经元损伤的保护作用及其机制

目的探讨依达拉奉与黄芪合用对大鼠脑缺血再灌注后海马神经元损伤和脑组织中c—Jun磷酸化的影响。方法sD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌组、黄芪组、依达拉奉组、依达拉奉与黄芪合用组及溶剂对照组。采用焦油紫染色、免疫印迹检测大鼠缺血再灌注后海马神经元损伤和脑组织c—Jun磷酸化的情况。结果①与假手术组比较，缺血再灌组海马神经元损伤非常严重，脑组织中c—Jun磷酸化增高（P〈0．05）。②各给药组与缺血再灌组相比海马神经元损伤减轻，脑组织中C—Jun磷酸化有所降低（P〈0．05），其中依达拉奉与黄芪合用组效果最显著（P〈0．05）。结论依达拉奉、黄芪两药合用比单用依达拉奉或黄芪更能减少海马神经元损伤及脑组织c—Jun磷酸化程度。     

美金胺对缺血性脑损伤保护作用的研究

目的 观察美金胺对SD雄性大鼠全脑缺血/再灌注后海马CA1区锥体细胞的保护作用,并研究其可能的机制.方法 采用四动脉结扎法建立大鼠全脑缺血模型,缺血15 min后分别灌注6 h或5天.大鼠随机分为假手术组、缺血/再灌注组、缺血/再灌注给药组和缺血/再灌注溶剂对照组.缺血/再灌注给药组腹腔注射20mg/kg美金胺.使用免疫印迹、免疫沉淀和焦油紫染色法等技术检测相关信号蛋白的表达、活化水平及神经元细胞的死亡.结果 大鼠缺血/再灌注5天后,缺血/再灌注给药组海马CA1区细胞的存活数量较缺血/再灌注组和缺血/再灌注溶剂对照组明显增加;缺血/再灌注6 h,缺血/再灌注给药组N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体亚基2A(NR2A)、突触后密集区蛋白95(PSD-95)、非受体型蛋白酪氨酸激酶(Src)三者间免疫沉淀的蛋白量及NR2A的酪氨酸磷酸化水平较缺血/再灌注组和缺血/再灌注溶剂对照组明显降低,而三者的表达量没有明显变化.结论 美金胺通过抑制NR2A、PSD-95、Src三者结合及Src介导的NR2A的酪氨酸磷酸化抑制了缺血后NMDA受体功能的增强,从而对大鼠缺血性脑损伤有保护作用.     

的士宁与MK801共同作用改善大鼠脑缺血再灌注后学习记忆能力缺陷

①目的 探讨NMDA 受体甘氨酸位点拮抗剂的士宁(strychnine)及其与MK801共同作用在大鼠海马CA1区缺血性神经元损伤中的作用.②方法 健康成年雄性SD大鼠制作4动脉闭塞全脑缺血模型,实验动物随机分为Sham、溶剂对照(Vehicle)组(I/R + Saline)、MK801组(I/R +MK801)及strychnine和MK801共同作用组(I/R +Glycine+ strychnine+MK801).观察海马CA1区生存神经元.利用Morris水迷宫观察脑缺血再灌注后大鼠的空间学习记忆功能的变化情况.③结果 与缺血再灌注组相比,strychnine和MK801共同作用组海马CA1区神经元生存数量明显增加;大鼠缺血后的空间学习记忆缺陷明显得到改善.④结论 NMDA 受体甘氨酸位点拮抗剂strychnine和MK801共同作用可有效减轻大鼠缺血再灌注后神经元损伤,为临床治疗缺血性脑中风提供理论依据.     

糖尿病大鼠脑缺血再灌注海马CA4区神经元中磷酸化ERK1/2的表达上调

目的 探讨细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase 1/2,ERK1/2)在糖尿病脑缺血再灌注大鼠海马CA4区神经元表达的意义.方法 在链脲佐菌素性糖尿病大鼠脑缺血再灌注模型基础中,应用TUNEL、免疫组化方法 观察糖尿病脑缺血组与正常血糖脑缺血组在全脑缺血15 min、再灌注1 h海马CA4区神经元凋亡和磷酸化ERK1/2(P-ERK1/2)的表达变化.结果 糖尿病脑缺血组在缺血15 min、再灌注1 h海马CA4区神经元凋亡发生率均明显高于正常血糖脑缺血组(P<0.05);糖尿病脑缺血组各时间点磷酸化ERK1/2明显增高,于再灌注1 h明显高于正常血糖组(P<0.01).结论 糖尿病加重脑缺血再灌注神经元的损伤,其机制可能与ERK1/2的激活有关.     

新生鼠脑缺血预处理后海马CA1区GAP-43的表达

目的:观察新生Wistar鼠脑缺血再灌注后海马CA1区生长相关蛋白43(GAP-43)的表达和意义. 方法:通过阻断7日龄新生Wistar大鼠右侧颈总动脉45 min制备脑缺血模型,设置假手术组、缺血再灌注组和预缺血-缺血再灌注组. 采用免疫组化方法和计算机图像分析技术检测三组新生鼠不同时点海马CA1区脑组织GAP-43的动态变化及三组光镜下脑组织病理改变. 结果: ①脑组织病理改变:假手术组大鼠无异常病理改变,缺血再灌注组神经细胞变性、坏死,预缺血组-病理损伤较缺血再灌注组轻. ②GAP-43表达:缺血再灌注组海马GAP-43表达在再灌注后24 h时开始增高,7 d达高峰,至14 d与假手术组比较差异有统计学意义(P＜0.05);预缺血-缺血再灌注组GAP-43表达较缺血再灌注组增加更明显,与假手术组和缺血再灌注组比较均差异有统计学意义(P＜0.05). 结论: 新生鼠脑缺血预处理可减轻再次严重脑缺血对神经细胞的损伤,脑缺血预处理后海马CA1区GAP-43表达和合成增加,GAP-43表达增加可能与神经元再生和轴突重塑有关,是脑缺血后神经细胞内源性代偿机制之一.     

Keap1-tat小肽降低缺血后大鼠海马CA1区神经元氧化应激损伤和空间学习记忆缺陷

目的：设计Keap1-tat小肽,并探讨其对全脑缺血后大鼠海马CA1区神经元的保护作用及空间学习记忆功能的影响。方法：制作大鼠四动脉结扎全脑缺血模型,随机分为假手术sham组、sham+Keap1-tat组、缺血再灌注组(ischemia/reperfusion, I/R)、Keap1-tat处理组和溶剂对照组(vehicle)。Keap1-tat处理组大鼠于缺血前30 min于侧脑室微量注射30、50、100 μg Keap1-tat,溶剂对照组侧脑室注射等体积 (5 μL)0.9%(质量分数)NaCl溶液（生理盐水）,焦油紫染色观察海马CA1区神经元的损伤;4-羟基壬烯醛 (4-hydroxy-2-noneal, 4-HNE)、8-羟基脱氧鸟苷(8-hydroxy-2′-deoxyguanosine, 8-OHdG) 共聚焦技术观察海马CA1区神经元氧化应激损伤;Morris水迷宫观察大鼠的空间学习和记忆功能。结果：与sham组相比,vehicle和I/R组大鼠海马CA1区存活神经元数量显著减少,而Keap1-tat处理组可显著降低海马CA1区神经元损伤,且50 μg剂量组存活的神经元最多;Keap1-tat处理组与vehicle组相比,4-HNE和8-OHdG阳性反应显著降低,且找到水下平台需要的时间显著减少,移走水下平台后,该组大鼠在原平台所在象限探索的时间较vehicle组显著延长。结论：Keap1-tat小肽可能通过降低缺血再灌注诱导的氧化应激而降低CA1区神经元损伤,并改善缺血后大鼠的学习记忆功能。     

电针对脑缺血再灌注损伤的治疗作用

目的探讨电针对脑缺血再灌注损伤的治疗作用。方法用改良的血管内栓线技术制造大鼠局灶性脑缺血与再灌注模型,应用免疫组织化学技术检测脑组织中的nNOS阳性神经元的表达。电针穴位选择“水沟”“承浆”穴。结果①脑缺血再灌注组nNOS阳性神经元在大脑皮层和海马CA1区、CA3区大量表达,与正常对照组相同脑区比较有显著性差异(P<0.05);②电针能显著减少脑缺血再灌注损伤中nNOS阳性神经元在大脑皮层和海马CA1区、CA3区的表达,与缺血再灌注组相同脑区比较有显著性差异(P<0.05)。结论电针能显著减少脑缺血再灌注损伤中神经元的丢失。