缺氧与缺氧/复氧诱导肥大的心肌细胞凋亡

目的探讨缺氧与缺氧/复氧诱导肥大的心肌细胞凋亡效应。方法应用血管紧张素Ⅱ诱导培养的新生小鼠心肌细胞肥大,并给予缺氧、缺氧/复氧刺激,用Hoechst33258染色法检测细胞凋亡率。结果肥大心肌细胞在缺氧8h时即出现显著的细胞凋亡。缺氧时间延长至12h时其凋亡率较8h时显著增加(P<0.05)。肥大心肌细胞在缺氧后/复氧4h,细胞凋亡率比单纯缺氧时进一步增加(P<0.05)。缺氧或缺氧/复氧时,肥大的心肌细胞组的凋亡率均较正常心肌细胞组显著增高(P<0.05)。结论缺氧可诱导肥大的心肌细胞凋亡,且在缺氧后复氧可加重肥大心肌细胞凋亡的程度;与正常心肌细胞相比,缺氧及缺氧/复氧刺激更易引起肥大的心肌细胞凋亡。     

柿叶黄酮对晚期糖基化终产物诱导的血管外膜成纤维细胞增殖的影响

目的观察柿叶黄酮对晚期糖基化终产物诱导的血管外膜成纤维细胞增殖的影响。方法体外培养成纤维细胞,应用柿叶黄酮与晚期糖基化终产物共同进行作用并设立对照进行比较,采用非放射性的MTS/PES法确定成纤维细胞的增殖状态。结果各组的细胞增殖率分别为对照组(0.840±0.061);细胞增殖率分别为(1.330±0.055)、(1.210±0.119)和(0.792±0.060)、柿叶黄酮50 μg /ml组(0.829±0.056);AGEs 50 μg /ml联用柿叶黄酮50 μg /ml组(0.947±0.072)。统计分析显示低至10 μg/ml 的AGEs仍能明显刺激成纤维细胞的增殖(P<0.05),并呈现剂量依赖性(P<0.05)。柿叶黄酮单独作用对成纤维细胞细胞增殖率无影响(P>0.05);柿叶黄酮对AGEs诱导的成纤维细胞增殖有明显的抑制作用(P<0.05)。结论柿叶黄酮能明显抑制由晚期糖基化终产物刺激的血管外膜成纤维细胞增殖,     

T3对缺氧/复氧致小鼠心肌细胞凋亡的影响

目的 探讨小鼠乳鼠心肌细胞在缺氧和缺氧/复氧下心肌细胞损伤及凋亡情况及T3对心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响。 方法 采用1~2天新生昆明小鼠,分离培养心室肌细胞,分别给予不同时间缺氧及缺氧/复氧处理,观察细胞状态及细胞搏动次数,流式细胞仪分析细胞凋亡;给予T3预处理后进行缺氧/复氧损伤,流式细胞仪检测细胞凋亡,JC-1染色检测细胞线粒体膜电位;应用Western blot法检测心肌细胞凋亡蛋白。结果 缺氧可造成心肌细胞凋亡,缺氧时间越长,心肌细胞损伤越重,缺氧/复氧可进一步加重心肌细胞损伤,增加细胞凋亡率;T3预处理可减少缺氧/复氧所致损伤,减少细胞凋亡率,降低凋亡蛋白caspase-3、Bax的表达,减少细胞线粒体膜电位损伤。结论 缺氧可诱导心肌细胞损伤,缺氧时间越长,心肌细胞损伤越重,且缺氧/复氧损伤对心肌细胞损害更大;T3预处理可以保护心肌细胞并减少细胞凋亡。     

骨髓间充质干细胞对氧诱导心肌细胞凋亡的保护作用

目的 探讨骨髓间充质干细胞（MSC）对缺氧诱导心肌细胞凋亡的保护作用及可能机制。方法 分离培养成年大鼠MSC和乳鼠心肌细胞,将培养的乳鼠心肌细胞进行缺氧处理后,加入MSC或其条件培养液继续在无氧（95％N2＋5％CO2,持续缺氧组）或正常氧（缺氧／复氧组）条件下共培养72h,采用Hoechst细胞核染色,计算凋亡细胞百分率;采用蛋白质免疫印迹法检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的变化。结果持续缺氧可以诱导心肌细胞凋亡,凋亡率为51．6％±2．4％,与MSC或其条件培养液共培养,心肌细胞凋亡率显著减低,分别为15．1％±5．4％和24．0％±4．2％（均P〈0．01）;缺氧／复氧损伤可以引起心肌细胞凋亡,凋亡率为20．9％±2．7％,心肌细胞与MSC共培养,凋亡率显著减低（11．5％±3．7％,P〈0．05）;心肌细胞与MSC条件培养液共培养,凋亡率略有减低（20．1％±4．2％,P〉0．05）。蛋白质免疫印迹显示凋亡时心肌表达Bax水平较高,与MSC或其条件培养液共培养时,Bax表达水平呈不同程度降低,与心肌细胞凋亡发生率减低一致,Bcl-2无明显变化。结论 MSC对体外缺氧诱导的心肌细胞的凋亡有保护作用,其作用机制可能是通过细胞间直接接触和旁分泌细胞因子,影响了Bcl-2家族部分蛋白分子在心肌细胞的表达。     

促红细胞生成素对乳鼠心肌细胞缺氧／复氧损伤的保护作用

目的:观察促红细胞生成素(eryrthropoietin,EP)对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤的影响及其相关机制探讨.方法:分离培养SD乳鼠心肌细胞,建立H/R模型.心肌细胞随机分为4组:①H/R组缺氧2 h,复氧4 h;②EP组在缺氧前1 h予EP(10 U/ml),随即缺氧2 h,复氧4 h;③Wortmannin EP组(W EP) 在EP预处理前30 min予3-磷脂酰肌醇激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3-K)特异性阻断剂Wortmannin(100 nmol/L);④正常对照组流式细胞仪检测细胞凋亡率.Western blot法检测心肌细胞EP受体表达和p-AKt/AKt比值.结果:EP可明显降低缺氧/复氧引起的心肌细胞凋亡,并明显增强SD乳鼠心肌细胞p-AKt/AKt比值;而Wortmannin减弱了EP的抗细胞凋亡作用,显著降低了p-AKt/AKt比值.结论:细胞凋亡参与了心肌缺氧/复氧损伤;EP可减少缺氧/复氧引起的SD乳鼠心肌细胞凋亡,其机制可能与EP激活PI-3K/AKt信号通路有关.     

sRAGE对缺氧/复氧心肌细胞氧化应激的影响

目的观察可溶性晚期糖基化终产物(soluble form of receptor for advanced glycation end products,sRAGE)对缺氧/复氧心肌细胞氧化应激的影响。方法乳鼠心肌细胞原代培养48 h,以低氧3 h、复氧2 h复制缺氧/复氧损伤模型,采用抽签法将乳鼠心肌细胞随机分为4组:常氧对照组(Control,Con)、常氧+sRAGE组(Con-sRAGE)、缺氧/复氧组(Hypoxia/reoxygenation,H/R))、缺氧/复氧+sRAGE组(H/R-sRAGE)。采用四甲基偶氮唑蓝〔3(4,5-dimethyl-thiazol)-2,5-diphenyl-tetrazolium,MTT〕比色法检测心肌细胞活力和培养液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)浓度,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力,硫代巴比妥酸显色法测定丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)荧光探针联合流式细胞仪检测细胞荧光强度-反应活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,硝酸还原酶法测定一氧化氮(nitric oxide,NO)含量。结果与H/R组相比,H/R-sRAGE组可以提高心肌细胞活力,减少LDH漏出量,增加SOD活力,降低MDA、ROS、NO含量(P<0.05)。结论 sRAGE可以直接作用于心肌细胞拮抗缺氧/复氧损伤,其保护性作用与抑制氧化应激有关。     

糖基化终产物对心肌细胞GLP-1受体表达及凋亡影响的研究

目的探讨糖基化终产物(AGEs)对乳鼠心肌细胞胰高血糖素样肽1受体(GLP-1R)、caspase-3表达及凋亡的影响。方法原代培养乳鼠心肌细胞,以不同浓度葡萄糖孵育的糖化清蛋白(AGE-BSA)干预24h和同一浓度葡萄糖孵育的AGE-BSA干预24～72h,检测其对心肌细胞GLP-1RmRNA、活化的caspase-3表达及凋亡的影响。结果 AGE-BSA可抑制心肌细胞GLP-1RmRNA表达,并诱导细胞caspase-3表达,凋亡增加。各AGE-BSA组间及与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 AGE-BSA能抑制心肌细胞GLP-1RmRNA表达,并诱导细胞caspase-3表达,增加细胞凋亡,提示糖基化终产物在糖尿病心肌病的发生中可能具有重要的作用。     

液体石蜡封闭法建立大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤模型

目的:探讨液体石蜡封闭法建立大鼠心肌细胞H9C2缺氧/复氧损伤模型的可行性与稳定性。方法:将体外培养在六孔板中的大鼠心肌细胞H9C2随机分为对照组和实验组,对照组常规培养不做处理,实验组每孔细胞用高温灭菌的液体石蜡2mL封闭,造成缺氧环境,缺氧时间段分别为2、4、8、12h,处理结束后吸除石蜡,加入新鲜DMEM培养基,置二氧化碳培养箱中继续培养2h。超氧阴离子探针Dihydroethidium检测活性氧自由基含量变化;AnexinV/PI染色行流式细胞术检测不同时间缺氧/复氧处理后细胞凋亡率。结果:对照组细胞产生少量氧自由基;实验组随缺氧/复氧时间延长,氧自由基含量逐渐增加,缺氧2、4、8、12h细胞凋亡率分别为(0.76±0.15)%,(5.22±0.74)%,(10.36±2.07)%,(31.00±4.32)%,与对照组相比除缺氧2h组外其余三组均有显著性差异(P<0.05)。结论:液体石蜡封闭法建立H9C2缺氧/复氧损伤模型简单易行、重复性好。     

Fas系统参与介导缺氧诱导的心肌细胞凋亡

目的　观察缺氧不同时间新生大鼠心肌细胞凋亡率及心肌细胞 Fas抗原表达的变化 ,以明确 Fas系统是否介导了缺氧诱导的心肌细胞凋亡 .方法　取体外培养的新生大鼠心肌细胞于 95 0 m L· L- 1 N2 ,5 0 m L· L- 1 CO2 孵箱中培养16 h,32 h和 4 8h,造成缺氧损伤的细胞模型 ,分别检测心肌细胞凋亡及 Fas抗原表达的情况 .结果　在缺氧条件下培养16 h,32 h和 4 8h后 ,流式细胞仪检测到心肌细胞的凋亡率分别为 :(2 .9± 0 .5 ) % ,(6 .2± 0 .8) %和 (2 6 .6± 3.0 ) % ;Fas抗原表达率分别为 :(13.6± 5 .1) % ,(2 5 .9± 4 .7) %和 (5 1.0±4 .9) % .结论　心肌细胞凋亡是缺氧时心肌细胞死亡的重要形式 ;心肌细胞凋亡率及心肌细胞 Fas抗原的表达率随着缺氧时间的延长而增高 ;Fas系统参与介导缺氧诱导的心肌细胞凋亡 .     

缺氧复氧对乳鼠心肌细胞的损伤的研究

目的 观察乳鼠心肌细胞的缺氧损伤以及缺氧复氧条件下不同复氧时间对乳鼠心肌细胞损伤的变化.方法 用MTT法检测缺氧损伤及不同复氧时间对乳鼠心肌细胞存活率的影响;LDH、T-SOD/GSH/GSSG试剂盒检测缺氧损伤及不同复氧时间下细胞损伤程度.结果 MTT及LDH、T-SOD、GSH/GSSG可检测到缺氧损伤及复氧损伤,且损伤于复氧1h后趋于稳定.结论 乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤于复氧1h后趋于稳定.     

人胎十二指肠EC细胞的体视学研究

用免疫组化法显示人胎十二指肠 EC 细胞,用单网格测试系统进行体视学测量,分别测算出以上皮组织为包容空间的体积密度(Vv C,E)和以肠组织为包容空间的体积密度(Vv C,T)并与以往的计数方法进行比较分析。结果表明,Vv C,E 值随胎龄而增加,而 Vv C,T 值呈峰形变化。结果还显示,计算单位长度上皮内的阳性细胞数的普通计数法可以反映肠内分泌细胞与上皮组织的对应关系,Vv C,T 值能够综合而准确地反映 EC 细胞与肠组织的对应关系。     

93例Ⅲ期非小细胞肺癌同步放化疗加巩固化疗与序贯放化疗的对比研究

目的分析Ⅲ期不能手术非小细胞肺癌同步放化疗加巩固化疗与序贯放化疗的近、远期疗效及毒副反应。方法回顾分析2007年2月-2010年6月收治的Ⅲ期不能手术的非小细胞肺癌患者93例,序贯组50例,同步加巩固组43例。序贯组:先行2-6周期(中位2周期)化疗后开始放疗,放疗后再行0-4周期(中位2周期)化疗。同步组:放疗同步2周期化疗(每隔3周),放疗后行2-4周期(中位2周期)同方案巩固化疗,均为第3代TP/NP/GP方案。放疗采用二维前后对穿野照射DT36-40 Gy/18-20f后三维适形放疗推量至DT56-70 Gy/28-35(f中位DT64 Gy)或三维适形放疗DT50-74 Gy/25-37(f中位DT62 Gy)。结果同步加巩固与序贯组客观有效率分别为76.7%、54.0%(P<0.05);中位无进展时间、中位生存时间分别为16.0个月、18.0个月及10.0个月、12.5个月;1、2、3年生存率分别为83.7%、48.8%、20.9%及52.0%、20.0%、2.0%(P<0.05)。同步加巩固组远地转移率明显低于序贯组(P<0.05),局部复发率两组无统计学差异。毒副反应主要为放射性肺炎、放射性食管炎、消化道反应及血液毒性,其中Ⅲ-Ⅳ级消化道反应及血液毒性同步加巩固组高于序贯组,有统计学差异。结论对于Ⅲ期非手术NSCLC同步放化疗加巩固化疗与序贯放化疗相比,可以提高客观有效率、延长无进展生存及总生存时间、降低远地转移率,虽然消化道及血液学毒性增加,但患者可以耐受。     

无血清培养条件下抗肿瘤药物对HL-60细胞凋亡的诱导作用

研究了在有血清和无血清培养条件下,放线菌素 D、阿霉素、秋水仙碱、阿糖胞苷等诱导 HL-60细胞凋亡的作用。结果表明,在两种培养条件下,所测试的抗肿瘤药物均可诱导 HL-60细胞凋亡,其证据是 DNA 凝胶电泳呈现特有的"梯形",典型的凋亡细胞(核结构浓集、核分块、胞膜出芽、细胞体     

鳞状上皮细胞癌抗原联合液基薄层细胞检测在宫颈病变筛查中的价值

目的：探讨鳞状上皮细胞癌抗原（SCC-Ag）联合液基薄层细胞检测（TCT）在宫颈病变筛查中的应用价值。方法TCT检测提示异常的58例患者,行病理活检,同时进行血清SCC-Ag检测,以病理活检为诊断标准,计算TCT与SCC-Ag联合检测筛查宫颈病变的敏感度、特异度,评价两者联合检测的诊断价值。结果 TCT检测的敏感度和特异度分别为75％和65.8％;SCC-Ag检测的敏感度和特异度分别为60％和86.9％;两者联合检测的敏感度和特异度分别为55％和89.4％。 TCT检测与SCC-Ag检测差异有统计学意义（ P ＜0.05）,两者联合检测与单一TCT检测差异有统计学意义（ P ＜0.05）。结论TCT与SCC-Ag联合检测可提高宫颈检测的特异度,在宫颈病变筛查中具有一定的临床应用价值。     

转人B7-H3基因鳞癌细胞株的建立及其检测

目的探讨转入B7-H3基因鳞癌细胞株的建立及其检测。方法采用脂质体介导法将已建好的真核表达质粒pEGFP-C1-B7-H3导入人鳞癌细胞Tca8113中（Tca8113/B7-H3）,RT-PCR检测B7-H3在该细胞中的表达,Western blot检测其蛋白的表达。经G418筛选后,用有限稀释法建立稳定高表达的带有B7-H3基因的Tca8113鳞癌细胞株。结果RT-PCR方法检测到目的基因B7-H3的一个215bp大小的cDNA扩增产物;DAB显色,裂解的Tca8113/B7-H3基因转染细胞膜蛋白中相对分子质量约65～86ku大小的特异性条带。转染B7-H3的Tca8113细胞,经过细胞传代培养后仍然能够检测到高表达的B7-H3基因,经过有限稀释法建立了Tca8113/B7-H3细胞株。结论成功建立了Tca8113/B7-H3细胞株,为以后的体内外试验提供了很好的平台,为近一步研究其抗肿瘤作用奠定了基础。     

PFT-α对隐睾所致生精细胞凋亡的影响

目的：通过研究PFT-α对隐睾生精细胞中p53和bcl-2/bax表达的影响,探讨生精细胞凋亡的分子机制。方
法：将雄性SD大鼠随机分为假手术组、隐睾组、隐睾+p53抑制剂(p-fifty three inhibitor-alpha,PFT-α)组、隐睾+ PFT-α溶
媒(DMSO)组。后三组建立单侧隐睾模型,后两组分别于大鼠腹腔内注射PFT-α和PFT-α溶媒,每天1次,定时定量。
7 d后处死所有大鼠,取双侧睾丸称湿重。观察手术侧睾丸生精细胞组织形态,采用TUNEL法结合流式细胞术(flow
cytometry,FCM)检测生精细胞凋亡程度,免疫组织化学和Western 印迹分别检测p53和bcl-2/bax的表达。结果：隐睾+PFT-α组
与隐睾组和隐睾+PFT-α溶媒组比较,生精上皮排列有序,细胞层数厚,凋亡指数较低,p53和bax表达弱,bcl-2表达强。结
论：PFT-α可能通过上调bcl-2,下调p53和bax的表达,抑制隐睾生精细胞的过度凋亡。     

姜黄素对VEGF作用下的HaCat细胞的影响及KLF6/P21表达的调控研究

目的 通过观察姜黄素和VEGF对HaCat细胞增殖、凋亡及KLF6/P21蛋白表达的影响,探讨姜黄素治疗银屑病的可能机制,为姜黄素在银屑病治疗中进一步开发应用提供理论和实验基础。方法1.不同浓度的姜黄素(0,5,10,15,20,30,40μmol/L)作用于HaCat细胞,CCK8法检测其对细胞增殖的影响;20μmol/L姜黄素及25ng/ml VEGF分别及联合作用于HaCaT细胞,CCK8法检测20μmol/L姜黄素对25ng/L VEGF干预下HaCaT细胞的增殖作用。2.20μmol/L姜黄素及25ng/ml VEGF分别及联合作用于HaCat细胞,免疫蛋白印迹法检测KLF6/P21蛋白表达的改变。3.20μmol/L姜黄素及25ng/ml VEGF分别及联合作用于HaCat细胞,流式细胞仪检测其对HaCat细胞凋亡的影响。结果 1.姜黄素在0μmol/L-40μmol/L浓度范围内呈浓度依赖性抑制HaCat细胞增殖,20umol/L姜黄素明显抑制HaCat细胞增殖(P<0.01),在0μmol/L-40μmol/L范围内姜黄素浓度与HaCat细胞增殖呈线性相关(r=-0.92,P＜0.01);与空白对照组相比,25ng/mL VEGF对HaCat细胞有明显的促增殖作用(P<0.05)。与25ng/L VEGF组相比20μmol/L姜黄素明显抑制25ng/L VEGF对HaCat细胞的促增殖作用(P<0.01)。2.25ng/mL VEGF提高HaCat细胞KLF6/P21蛋白的表达;20μmol/L姜黄素抑制HaCat细胞KLF6/P21蛋白的表达;20μmol/L姜黄素能降低25ng/mL VEGF对HaCat细胞KLF6/P21蛋白表达的增强作用。3.与空白对照组相比,20μmol/L姜黄素可促进HaCat细胞凋亡;与25ng/mL VEGF比较,20μmol/L姜黄素能明显抑制25ng/mL VEGF细胞的促增殖作用,促进细胞凋亡。结论 姜黄素可以抑制VEGF对HaCat细胞的促增殖作用,促进HaCat细胞凋亡,其机制可能与姜黄素可降低HaCat细胞KLF6/P21蛋白的表达有关。     

XK469和阿霉素对H460细胞生长的影响及其机制

目的 探讨XK469和阿霉素对H460细胞的抑制作用及其机制。方法 采用MTT比色法观察不同浓度XK469、XN472和阿霉素对H460细胞生长的影响,采用流式细胞术观察药物作用下细胞周期的变化。采用Western blotting检测药物作用后H460细胞内cdc2和phos-cdc2的表达水平。结果 不同浓度XK469、阿霉素可明显抑制H460细胞的生长,导致H460细胞发生G2/M期阻滞,胞内phos-cdc2表达明显增高。20μg/ml以上浓度XN472作用24 h可抑制H460细胞生长,但是到120 h时抑制作用消失。结论 XK469和阿霉素通过使H460细胞内phos-cdc2水平增高导致其G2/M期阻滞从而抑制其增殖生长,7-氯结构对XK469的抗肿瘤效应有重要的意义。     

盖诺加顺铂适形放疗治疗Ⅲa期非小细胞肺癌疗效观察

目的 观察盖诺加顺铂联合三维适形放射治疗（3DCRT）局部晚期非小细胞肺癌的耐受性及近期疗效。方法 36例局部晚期非小细胞肺癌（Ⅲa）患者进入化疗加三维适形放射治疗组，全部患者均行盖诺加顺铂方案（盖诺25mg／m。第1，8天给予；顺铂25mg／m。第1～3天给予；21d为1个周期）化疗加3DCRT同步治疗。结果 36例均完成治疗患者，肺原发灶CR占16．7％，PR占75．0％，NR＋PD占8．3％，总有效率为91．7％；纵隔转移淋巴结CR占36．4％，PR占63．6％，NR＋PD占0％，总有效率为100％；白细胞下降发生率为95．8％，其中3，4级白细胞下降为36．1％；放射性食管炎和放射性肺炎的发生率分别为54．2％和12．5％，均为1，2级。结论 盖诺加顺铂联合适行放疗治疗局部晚期非小细胞肺癌能为绝大多数患者耐受。有较好的近期疗效。     

K562细胞DNA聚合酶α—DNA引物酶复合物的纯化

用磷酸纤维素、DEAE纤维素、单链DNA纤维素和AMP-Sepharcse的顺序柱层析法从人慢性骨髓细胞性白血病K562细胞中纯化了DNA聚酶α与DNA引物酶的复合物。纯化过程经多次重复,结果稳定。DNA聚合酶纯化了117倍,DNA引物酶纯化了4583倍。共纯度足以满足研究化疗药物对这两种酶的抑制作用的需要。