慢性髓系白血病初诊患者M-bcr/abl与m-bcr/abl融合基因转录子共表达的临床意义

目的探讨慢性髓系白血病（CML）初诊患者M-bcr／abl与m-ber／abl融合基因转录子共表达的临床意义。方法对111例初诊CML患者抽取骨髓，分离单个核细胞后，使用巢式PCR检测m-ber／abl融合基因转录子的表达。结果111例CML患者M-bcr／abl和m-ber／abl共表达率为51．4％；共表达与单M-ber／abl阳性的初诊CML患者相比在血红蛋白浓度、白细胞数、中性粒细胞碱性磷酸酶（NAP）比例及积分、Ph染色体比例和肝脾肿大均无差异，仅血小板数差异有统计学意义（P〈0．05）。b3a2型共表达患者血小板数比单M-ber／abl阳性患者高（P〈0．05）；b2a2型共表达和单表达患者比较差异均无统计学意义。有2例患者阴茎异常勃起，均为m-ber／abl阴性CML患者。结论共表达m-ber／abl的b3a2型初诊CML患者易有血小板数增高；共表达m-bcr／abl对b2a2型初诊CML患者的临床表现无影响。     

RT-PCR检测慢性粒细胞白血病患者bcr/abl融合基因结果分析

目的探讨逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）体系检测慢性粒细胞白血病（CML）bcr/abl融合基因的临床价值。方法 Trizol试剂提取细胞RNA,用特异引物RT-PCR检测bcr/abl融合基因,并作灵敏度实验。结果本研究灵敏度可达104的稀释水平,46例CML患者bcr/abl融合基因的阳性率为91.3%,其中b3a2有27例,b2a2有15例。结论 RT-PCR检测bcr/abl融合基因检测弥补了细胞形态学诊断的不足,并为CML临床治疗和预后判断提供了指导。     

应用实时定量PCR技术检测慢性粒细胞白血病患者p210~(bcr/abl)转录本的临床意义

目的 :研究 p2 1 0 bcr/abl融合基因转录本在慢性粒细胞白血病 ( CML)不同病程阶段的表达水平及其在病情进展中的意义。方法 :应用实时定量PCR( RQ- PCR)技术检测 68例CML患者骨髓单个核细胞中的 p2 1 0 bcr/abl转录本 ,并将其含量以看家基因 ABL表达量进行标化。结果 :本组中 p2 1 0 bcr/abl转录本绝对含量为 4.0 1× 1 0 2～ 8.90× 1 0 5拷贝 /5 0 ng(中位 1 .0 7× 1 0 5拷贝 /5 0 ng) ,ABL纠正后的相对含量为 0 .0 1～ 48.67(中位 5 .0 3)。加速期和急变期患者的p2 1 0 bcr/abl转录本水平较慢性期患者明显增高 (中位含量分别为 9.0 4、7.36和 3.5 3) ;干扰素治疗无效者较慢性期患者的 p2 1 0 bcr/abl水平则明显增高。结论 :p2 1 0 bcr/abl转录本过度表达可能与 CML病情进展相关 ,RQ- PCR可用于对 CML的病情监测。     

干扰素α-2b治疗慢性粒细胞性白血病的前瞻性随机对照研究

目的比较高、低剂量干扰素(IFN)α2b治疗慢性粒细胞性白血病(CML)的效果。方法建立检测融合基因bcr abl的荧光实时定量逆转录聚合酶链反应(RQ PCR)方法,观察治疗后融合基因表达水平的变化。选择30例临床初诊的CML患者随机分为两组,先服用羟基脲控制外周血白细胞达20×109/L以下,然后分别给予IFNα2b300万IU隔日皮下注射(3MIU组)和500万IU每周6次(5MIU组)皮下注射,治疗3～6个月,每月抽取骨髓标本,检测融合基因bcr abl的表达情况。结果RQ PCR的灵敏度达50拷贝bcr abl;分别取1×103拷贝/μl和1×107拷贝/μlbcr abl质粒,以及1例CML患者的cDNA同时作8管平行扩增bcr abl融合基因,批内变异系数分别为2.35%、1.48%和1.17%,不同批次之间以K562细胞cDNA作重复性分析,批间变异系数为5.13%;CML初诊患者bcr abl/GAPDH水平介于0.010～5.799,中位值为0.098;治疗3个月后3MIU组和5MIU组患者骨髓bcr abl水平平均下降19%和24%,两组比较差异无统计学意义(P=0.398),但是3MIU组副作用相对较小。结论RQ PCR监测融合基因bcr abl表达可以有效观察CML患者使用IFN的治疗效果;不同CML患者白血病细胞的bcr abl表达水平有较大差异;隔日3MIUIFN皮下注射治疗即可有效抑制CML白血病细胞的增殖,且副作用较小。     

bcr/abl基因在慢性粒细胞性白血病中的发病作用及bcr/abl反义基因治疗

慢性粒细胞性白血病(CML)最有效治疗手段为骨髓移植(BMT)。但异体BMT供髓者缺乏，且有发生移植物抗宿主病的危险。自体BMT常因骨髓净化不彻底导致复发。所以探讨CML细胞生物学行为改变的原因，是探索CML病因进而力争治愈CML的关键。 　　1　bcr/abl表达产物及功能 　　90%以上CML患者骨髓全部造血细胞内出现Ph1染色体，由位于9号染色体q34.11的c-abl基因与位于22号染色体q11.21的c-sis基因相互易位，形成t(9;22)(q34.11;q11.21)所致。22号染色体上断裂点集中在约5 800 bp的区域内，称M-bcr。CML中bcr/abl融合方式有2种：bcr第3及第2外显子分别与abl第2外显子融合成b3a2及b2a2型，二者差75 bp，均表达210 000的蛋白，即p210bcr/abl (p210)。此外还有bla2型(p185)，主要见于ALL。     

bcr/abl融合基因在慢性粒细胞白血病中的表达及临床意义

目的 探讨bcr/abl融合基因的表达在慢性粒细胞白血病(CML)中的诊断、疗效及预后观察中的意义.方法 采用荧光定量逆转录多聚酶链反应(FQ -PCR)技术,对8例复治CML患者和作为对照组的2例急性非淋巴细胞性白血病患者的骨髓或外周血进行bcr/abl融合基因检测;同时比较患者的血象、骨髓象等相关实验室指标.结果 CML中7例慢性期(CP)和1例急变期(BC)患者,均不同程度地表达了bcr/abl融合基因,而对照组该融合基因的表达为阴性.结论 bcr/abl基因是CML发病的分子基础,定量检测bcr/abl融合基因对于CML的诊断、临床分型、疗效观察及预后判断有重要意义.     

血小板显著增多为首发表现的慢性髓细胞白血病2例并文献复习

目的探讨以血小板显著增多为首发表现的慢性粒细胞白血病（CML）的临床及分子生物学特点。方法应用细胞涂片观察形态学;RT-PCR检测bcr/abl融合基因;常规染色体检测细胞遗传学变化。结果血小板显著增多为首发表现的CML是一组具有独特临床和生物学特点的疾病,表达bcr/abl融合基因,可进一步向CML加速期、急变期演变,应早期进行积极干预。结论对血小板显著增多的患者应及时进行Ph染色体及bcr/abl融合基因表达水平的检测,及早鉴别原发性血小板增多症（ET）及慢性粒细胞性白血病（CML）,避免误诊、误治。     

Ph染色体阳性bcr／abl融合基因阴性的结果分析

目的探讨慢性粒细胞白血病患者骨髓细胞Ph染色体阳性her／abl融合基因阴性的原因。方法对6例CML患者同时进行骨髓常规、外周血检查,染色体核型分析及bcr／abl融合基因RT—PCR检测。结果6例标本骨髓象血象均符合CML慢性期,PIl染色体阳性,bcr／abl融合基因阴性。结论Ph染色体阳性bcr／abl融合基因阴性的结果原因复杂,除实验因素如RNA总量不足或降解,RNA酶的存在或逆转录合成eDNA量的不足外,还可能存在未知因素或少见类型的ber/abl融合基因。     

BCR/ABL融合基因及细胞免疫表型检测在慢性粒细胞白血病病期演变中的意义

[目的]通过检测BCR/ABL融合基因及表面抗原在31例CML患者外周血单个核细胞中的表达,以寻找其与CML病程进展的相关性.[方法]收集31例CML患者外周血:①逆转录聚合酶链反应:检测BCR/ABL融合基因;②应用流式细胞仪检测外周血单个核细胞CD33、CD34、CD117及HLA-DR的表达.[结果]①CML患者31例,BCR/ABL融合基因检出总阳性率为83.9%;其转录本有两种:b3a2(165 bp)和b2a2(90bp).BCR/ABL融合基因的检出率在慢性期、加速期与急变期患者间差异无显著性意义,但缓解期检出阳性率与其他各期比较明显降低(P＜0.05).②CD33阳性检出率在各期之间比较无统计学意义(P＞0.05);CD34、CD117及HLA-DR阳性检出率在加速期及急变期明显高于慢性期(P＜0.05).[结论]①CML患者外周血单个核细胞BCR/ABL融合基因转录本有两种,即b3a2(165 bp)和b2a2(90bp).②b2a2转录本单独出现及b3a2和b2a2两种转录本同时出现的病例多发生在加速期和急变期,提示出现b2a2型转录本或两种转录本同时存在可能成为CML患者预后较差的标志.③CD34、CD117及HLA-DR的过度表达可提示CML患者病情不稳定及可能出现恶化.     

干扰素-α治疗慢性粒细胞白血病疗效的观察

目的 探讨干扰素-α（IFN-α）治疗慢性粒细胞白血病（CML）的临床效果。方法 用RT-PCR检测116例CML bcr／abl基因。结果 116例CML病人有103例bcr／abl基因为阳性。阳性率为88．8％，ph（-）／bcr（-）CML病人经IFN-α治疗后效果较ph（-）／bcr（＋）差，两组相比，有显著统计学意义（P〈0．05）。结论 IFN-α治疗CML，尤其是初发的慢性病人有一定疗效，可延长患者的慢性期。     

筑巢式PCR检测慢性粒细胞白血病bcr/ablm RNA

目的：观察慢性粒细胞性白血病（CML）患者bcr／ablmRNA的表达情况。方法：应用逆转录筑巢式聚合酶链反应（NestedPCR）检测了32例CML患者的bcr／ablmRNA。结果：30例检测到bcr／ablmRNA;其中19例检测到bcrexon3／ablexon2mRNA,7M表达bcrexon2／abl。exon2mRNA．4例同时表达这两种mRNA。结论：NestedPCR是检测CML患者bcr／ablmRNA有效而敏感的方法。     

慢性粒细胞性白血病bcr/abl融合基因的表达

目的：研究慢性粒细胞性白血病患者bcr／abl融合基因阳性率及其临床意义。方法：取慢性粒细胞性白血病(CML)患者骨髓或外周血，提取单核细胞的总RNA，用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)，观察其ber／abl基因的表达。结果：9例CML患者中，8例ber／abl基因阳性，占88.9％。结论：bcr／abl基因检测可以用来辅助CML的临床诊断。     

Bcr/abl融合基因的小干扰RNA对K562细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察特异性bcr/abl融合基因的siRNA对慢性粒细胞白血病K562细胞增殖和凋亡的影响。方法　设计并化学合成bcr/abl融合基因融合位点b3:a2 21个核苷酸 siRNA作用于K562细胞，用WST-8法检测细胞增殖抑制率；RT-PCR 检测 bcr/abl mRNA表达水平；PI单染流式细胞仪检测细胞周期；Annexin V-PI双染测定细胞凋亡比例；Hochest33258 染色荧光显微镜观察细胞凋亡的形态学变化。结果 ①Bcr/abl siRNA作用K562细胞24h,48h,72h后，明显抑制K562细胞增殖，各浓度组间的增殖抑制率无明显差异(p>0.05)；②Bcr/abl siRNA能显着下调bcr/abl mRNA水平，各浓度组间差异无显著性(p>0.05)；③Bcr/abl siRNA作用组细胞周期阻滞于G1期；④Bcr/abl siRNA作用后细胞出现明显的早期凋亡群，各浓度组间的早期凋亡率差异无统计学意义(p>0.05)，细胞出现核固缩、核边集、凋亡小体等改变。结论 　特异性bcr/abl siRNA可显着抑制K562细胞bcr/abl融合基因的表达，抑制细胞的增殖，诱导凋亡，但其作用未显示明显的剂量依赖性。     

双色ES探针检测慢性粒细胞白血病bcr/abl融合基因的应用研究

目的:探讨使用bcr/abl双色ES探针的荧光原位杂交(fluorescence in-situ hybridization,FISH)应用于慢性粒细胞白血病bcr/abl融合基因检测的意义.方法:使用荧光原位杂交方法对2005年1月至2006年2月本院收治的12例慢性粒细胞白血病患者之骨髓细胞进行检测分析.结果:12例CML均检出bcr/abl基因的存在,其中2例伴ASS基因缺失.结论:使用bcr/abl双色ES探针进行荧光原位杂交能为bcr/abl融合基因的检测提供准确直观的依据.     

用DNA-PCR方法于基因组水平检测K562细胞及慢性粒细胞白血病患者bcr/abl融合基因

目的：在慢性粒细胞白血病（慢粒）细胞系K562及慢粒患者中尝试基于DNA水平的bcr／abl融合基因检测方法。方法：以Waller的“L—T DNA PCR”方法为基础，并针对其引物位置设计的缺陷，改进设计了一套DNA—PCR引物，分别提取K562细胞及慢粒患者外周血单个核细胞DNA，进行bcr／abl融合基因扩增，并对扩增片段进行序列测定。结果：运用DNA—PCR方法成功地扩增出了K562细胞及2名CML患者外周血基因组的bcr／abl融合基因片段，随后进行的片段测序进一步明确了融合基因的断裂位点。结论：DNA—PCR提供了一种基于基因组DNA水平的新检测手段，结合测序能鉴定融合基因的断裂位点，若结合定量PCR的方法则能监测患者的治疗效果与预后，还能检测患者经化疗后的残留微小病灶。     

bcr／ab1融合基因在慢性粒细胞白血病中的表达及临床意义

目的探讨bcr／ab1融合基因的表达在慢性粒细胞白血病（CML）中的诊断、疗效及预后观察中的意义。方法采用荧光定量逆转录多聚酶链反应（FQ-PCR）技术，对8例复治CML患者和作为对照组的2例急性非淋巴细胞性白血病患者的骨髓或外周血进行bcr／ab1融合基因检测；同时比较患者的血象、骨髓象等相关实验室指标。结果CML中7例慢性期（CP）和1例急变期（BC）患者，均不同程度地表达了bcr／ab1融合基因，而对照组该融合基因的表达为阴性。结论bcr／ab1基因是CML发病的分子基础，定量检测bcr／ab1融合基因对于CML的诊断、临床分型、疗效观察及预后判断有重要意义。     

筑巢式PCR检测白血病bcr—ablmRNA

应用筑巢式逆转录酶聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）方法检测了２６例慢性粒细胞性白血病及１０例急性淋巴细胞白血病患者的ｂｃｒａｂｌｍＲＮＡ，在２１例ｐｈ阳性的慢粒和２例ｐｈ阳性的急淋患者中，检出两种ｂｃｒａｂｌ融合基因ｍＲＮＡ（１６５ｂｐ或９０ｂｐ），５例ｐｈ阴性的慢粒中，４例阳性，１例阴性，经治疗后ｐｈ染色体消失，ＲＴＰＣＲ仍能检出ｂｃｒａｂｌ融合基因。本方法具有高度敏感性，可从１０６个正常细胞ＲＮＡ中检出１个白血病细胞。是对慢粒和部分急淋的诊断及监测的一种快速、灵敏、特异的方法     

双色双融合荧光原位杂交检测慢性粒细胞白血病的bcr/abl融合基因研究

目的：探讨双标双融合荧光原住杂交技术(dual-color and dual-fusion fluorescence in—situ hybridization，D—FISH)在慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia，CML)中检测bcr／abl融合基因的灵敏度及特异性。方法：应用细胞遗传学G显带(CCG)核型分析、双色荧光原住杂交(D—FISH)和染色体涂染技术，检测了29例CML患者骨髓中期分裂相和间期细胞。结果：CCG检出Ph( )24例，D—FISH检测均为bcr／abl( )；Ph(-)5例，其中4例核型为46，XY，经D—FISH检测2例bcr／abl( )，2例ber／abl(-)，另1例核型为46，XYt(20；22)，D—F1SH检测ber／abl( )，以9号，20号和22号全染色体探针涂染，确定该例核型为46，XYt(9；20；22)，D—FISH检测总阳性率为93．10％(27／29)，高于CCG检查时阳性率82．76％(24／29)(P=0．025)。结论：与CCG方法相比，D—FISH检测CML的ber／abl融合基因具有简便、快速、灵敏、特异性强等优点，可以作为CML临床诊断和微小残留病监测的一种重要检测方法。．     

RT-PCR方法检测慢性粒细胞白血病bcr/abl融合基因类型

目的：提高RT-PCR检测慢性粒细胞白血病（CML）残留白血病细胞的敏感性,探讨最适逆转录酶用量、最适退火及延伸温度以及PCR周期数,确定bcr/abl的融合类型,并研究其与预后的关系。方法：通过改变PCR条件,将常规用量的逆转录酶减少到常规的1/4（5 U）,退火温度由原来的50℃增加至60℃,反应周期数由原来的30周期增加到45周期,检测临床164例CML患者标本。结果：可使残留白血病细胞的检出率由原来的10^-4提高至10^-5～10^-6。155例Ph染色体阳性的患者中发现bcr/abl融合基因类型,其中b₃/a₂型78例,b₂/a₂型54例,b₃/a₂和b₂/a₂两型均有者为23例;9例Ph染色体阴性病例中,b₃/a₂型1例,b₂/a₂型3例,两型均有1例,阴性4例(即Ph^-bcr^-CML)。 结论： 几乎所有CML患者都有bcr/abl融合基因,并存在不同类型,有少部分患者体内同时存在两类不同嵌合体的白血病细胞,即两种不同的突变细胞株,预示着患者预后差。