兔骨髓基质细胞与聚DL-乳酸/羟基磷灰石生物相容性的实验研究

目的检测聚DL-乳酸/羟基磷灰石（PDLLA/HA）复合材料的特性,探讨骨髓基质细胞（BMSCs）与PDLLA/HA的生物相容性,为筛选骨组织工程的支架材料提供依据.方法将BMSCs与PDLLA/HA复合体外培养,通过形态学的观察、细胞增殖率及ALP活性的测定,观察PDLLA/HA对培养细胞的影响.结果复合培养时BMSCs能在PDLLA/HA上贴附、繁殖,其生长及功能不受影响.结论 PDLLA/HA具有良好的细胞相容性,能作为骨组织工程种子细胞的支架材料.     

雪旺细胞在PLGA多管道新型支架中的黏附及增殖的研究

目的考察大鼠血旺细胞SCs在聚丙交酣/乙交酣共聚物PLGA多管道支架管腔表面黏附、增殖的情况,为利用组织工程学修复神经损伤提供新的生物支架材料。方法接种第三代SCs到7孔多管道PLGA支架中,利用MTT法测量不同时间段雪旺细胞在生物材料中的增值能力并且做电镜扫描观察雪旺细胞在官腔表面的形态和黏附情况。结果雪旺细胞种植在PLGA多管道支架中后增殖旺盛,其增殖状态在3 d后明显优于培养板中的对照组。电镜观察雪旺细胞在官腔表面黏附良好,排列有序。结论 PLGA多管道支架材料和雪旺细胞具有良好的生物相容性,是修复神经损伤可以选择的新的理想支架材料。     

丝素/明胶组织工程支架的生物相容性初探

目的 初步研究丝素/明胶（silk fibroin/gelatin,SFG）支架的生物相容性。方法 利用冷冻干燥法制备SF/G支架,将1×10⁵/ml的第3代人牙周膜干细胞（human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs）接种于SF/G支架上,设置对照组（人牙周膜干细胞悬液）,通过MTT试验测试两组人牙周膜干细胞第1、3、5、7天的吸光度值,利用细胞扫描电镜观察第5天和第7天两组细胞的生长增殖状况。结果 MTT显示接种于SF/G支架上的hPDLSCs的吸光度值在第1、3、5、7天分别为0.053、0.113、0.197、0.399,对照组分别为0.069、0.105、0.176、0.283。细胞扫描电镜显示第5、7天的hPDLSCs在SF/G支架上相互融合,分泌大量细胞外基质,细胞触须几乎铺满整个支架表面,并且有朝向支架空隙内部生长的趋势。结论 冷冻干燥法制备的SF/G支架能够促使细胞在其上增殖生长,具有一定的生物相容性,在牙周组织工程领域具有一定的应用潜力。     

丝素蛋白与丝素蛋白/羟基磷灰石复合材料体外细胞相容性的比较

目的探讨丝素蛋白（SF）与丝素蛋白/羟基磷灰石复合材料（SF/HA）的体外细胞相容性,为组织工程提供理想的生物支架材料。方法将小鼠的骨髓间充质干细胞（C3H10T1/2）接种于上述两种生物材料上,运用四唑盐比色试验（MTT法）检测细胞的增殖能力,利用倒置显微镜和扫描电镜观察细胞在材料上的生长形态。结果 C3H10T1/2在SF与SF/HA上都能很好地黏附、生长和增殖。SF、SF/HA和C3H10T1/2都有良好的细胞相容性。结论 3%SF、6%SF、600%SF/HA3组多孔材料的体外细胞相容性最好。     

纳米羟基磷灰石/羧甲基壳聚糖复合材料作为注射性软组织填充剂的细胞毒性研究

目的 探讨纳米羟基磷灰石/羧甲基壳聚糖(N-HA/CMCTS)复合材料的细胞相容性,评价其作为软组织填充剂的可行性.方法 设计制成复合材料(纳米羟基磷灰石与羧甲基壳聚糖的比例为6∶4),小鼠成纤维细胞L929行体外细胞传代培养.制备材料浸提液,MTT法进行细胞毒性评价,细胞接种于复合材料,通过倒置相差显微镜,应用形态观察法、细胞增值率,定性定量观察复合材料对细胞生长、附着、增值的影响.结果 纳米羟基磷灰石/羧甲基壳聚糖(N-HA/CMCTS)复合生物材料的细胞毒性不大于1级.成纤维细胞在复合材料的环境中生长良好并促进细胞生长.结论 纳米羟基磷灰石/羧甲基壳聚糖(N-HA/CMCTS)复合材料具有良好的生物相容性,作为一种新型的注射性软组织填充材料有望应用于整形美容领域.     

PDLLA/HA/DBM复合生物材料对成骨细胞增殖活性的影响

目的研究人成骨细胞在一种新型骨替代材料消旋聚乳酸/羟基磷灰石/脱钙骨基质(PDLLA/HA/DBM)上的生长情况,并与消旋聚乳酸PDLLA和脱钙骨基质(DBM)相比较,从细胞水平评价材料的生物相容性.方法将培养的人成骨细胞第3代,密度为3.5×105/ml悬液,分别种植于PDLLA/HA/DBM、PDLLA及DBM上,利用细胞计数法检测种植后1、2、3、5、7 d的细胞增殖率.结果成骨细胞在PDLLA/HA/DBM表面的增殖速度较PDLLA和DBM快.结论 PDLLA/HA/DBM更有利于成骨细胞种植.     

雪旺细胞及神经干细胞与Chitosan-PLGA导管的细胞相容性

目的研究雪旺细胞(SCs)、神经干细胞(NSCs)与内置纵行排列纳米纤维丝的静电纺丝壳聚糖-聚羟基乙酸(Chitosan-PLGA)纳米导管材料的细胞相容性,探讨细胞在导管材料上的黏附及定向生长情况。方法实验分为SCs组、NSCs组、SCs-NSCs共培养组,3组细胞分别与Chitosan-PLGA纳米导管材料复合培养,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察各组细胞存活率,扫描电镜下观察SCs、NSCs在Chitosan-PLGA上的生长。结果细胞存活率排序由高至低依次为共培养细胞组、SCs组、NSCs组。SCs及NSCs能贴附在Chitosan-PLGA内置纳米纤维丝上生长并沿纤维丝定向生长。结论雪旺细胞及神经干细胞共培养可促进细胞与Chitosan-PLGA材料的相容性。内置纵行排列的纳米纤维丝有引导细胞定向生长与迁移的作用。     

兔脂肪干细胞(ADSCs)与聚羟基乙酸/壳聚糖(PLGA/CS)支架材料生物相容性研究

 目的  探讨兔脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)作为种子细胞复合新型聚羟基乙酸(polylactic-co-glycolic acid,PLGA)/壳聚糖(chitosan,CS)支架材料的生物相容性,为进一步构建组织工程化脂肪组织提供实验依据。方法  取雄性新西兰大白兔腹股沟脂肪组织,Ⅰ型胶原酶消化分离出ADSCs进行培养,贴壁细胞至3~5代,评价其多向分化能力。将干细胞收集重悬后,以l×107/mL的密度接种于多孔PLGA/CS支架,形成细胞 支架材料复合物。培养7天后,扫描电子显微镜观察细胞在支架材料上的黏附生长和基质分泌情况,评价细胞与支架材料的生物相容性;Dil荧光标记检测细胞在支架材料上的分布;Hochest 33258检测细胞在支架上的生长情况。接种1和7天后,分别对细胞 材料复合物行Annexin V/PI双染色法检测材料对细胞的毒性作用。用成脂诱导条件培养基诱导分化ADSCs及ADSCs支架材料复合物,7天后,尼罗红荧光染色液检测ADSCs在不同环境下的成脂分化能力。结果  原代培养的ADSCs呈成纤维细胞样外观,在相应诱导条件下能够分化为脂肪细胞和骨细胞。细胞接种于PLGA/CS支架材料上第8天分裂增殖达到高峰,扫描电子显微镜下提示ADSCs在支架表面贴附生长良好,并向孔隙内壁充分延伸,细胞周围形成丰富的基质成分。活死双染结合共聚焦显微镜显示材料对细胞活性无影响,尼罗红染色可见成脂诱导后的ADSCs细胞质内有红色脂滴颗粒形成。结论  多孔PLGA/CS支架与兔ADSCs具有良好的生物相容性,可作为构建组织工程脂肪组织的支架材料。     

骨髓基质细胞与壳聚糖-聚磷酸三钙复合材料的生物相容性

目的：研究壳聚糖-聚磷酸三钙复合材料对离体培养的骨髓基质细胞黏附及增殖的影响,探讨二者的生物相容性,为骨组织工程中生物材料的选择提供实验依据。 方法：采用冻干法制备壳聚糖-聚磷酸三钙复合材料,培养兔骨髓基质细胞,传代扩增后接种到材料表面,体外继续培养,用倒置光学显微镜、扫描电镜观察细胞的黏附和生长情况,用MTT方法检测种植后2、4、6及8 d细胞的增殖情况。 结果：种植2 d后细胞呈梭形纤维细胞样,平均每100倍视野下,有生物材料的实验组与无材料的对照组胞数分别为(360±20)个和(76±18)个,二者比较差异有显著性（P＜0.01）。MTT法检测结果显示,两组细胞均保持持续增殖。且实验组增殖最快,接种后2、4 、6及8 d光吸收值与对照组比较,差异均有显著性（P＜0.01）。扫描电镜下可见材料呈多孔网状结构,兔骨髓基质细胞紧密贴附在材料表面,细胞可沿材料的孔隙活跃生长。 结论：壳聚糖-聚磷酸三钙复合材料能促进骨髓基质细胞的增殖;兔骨髓基质细胞与复合材料具有良好的生物相容性,可作为骨髓基质细胞的载体应用于组织工程。     

羧甲基壳聚糖钙与骨髓基质细胞生物相容性的初步实验

目的  通过体外小鼠骨髓基质细胞培养,从细胞形态和细胞增殖方面评价新型生物材料羧甲基壳聚糖钙的细胞生物相容性。方法  合成羧甲基壳聚糖钙,进行红外光谱分析,并用DMEM制备浸提液。分别用含羧甲基壳聚糖钙浸提成分的培养液 (实验组)、DMEM 培养液(阴性对照组)和含6.4g／L苯酚培养液 (阳性对照组)培养骨髓基质细胞,通过倒置相差显微镜观察和MTT比色法评价细胞生长及增殖情况。结果  红外光谱分析提示,羧甲基壳聚糖与钙离子发生了络合反应。镜下观察,细胞培养1、2、3d,实验组与阴性对照组细胞数量明显增加,细胞形态正常;阳性对照组细胞数量明显减少,细胞固缩甚至崩解。MTT比色法,实验组与阴性对照组吸光度(A)值间无统计学差异(P>0.05),实验组各时间点的毒性分级为0级;阳性对照组A值明显低于其他组(P<0.01),毒性分级为4级。结论  羧甲基壳聚糖钙复合材料对小鼠骨髓基质细胞有良好细胞生物相容性,是一种可用于组织工程的新型生物材料。     

消旋聚乳酸/羟基磷灰石/脱钙骨基质人工骨修复兔桡骨大段骨缺损的实验研究

目的研制理想的,能够修复大段骨缺损的人工骨材料。方法采用乳液共混法将消旋聚乳酸(PDLLA)、羟基磷灰石(HA)、脱钙骨基质(DBM)结合,制成PDLLA/HA/DBM人工骨,并将PDLLA/HA/DBM和PDLLA进行兔桡骨大段骨缺损修复的对比研究。术后2、4、8和12周时摄X片及病理形态学观察及新骨形成定量分析。结果PDLLA/HA/DBM人工骨内新骨形成量明显多于PDLLA及空白对照组(P<0.01),且能够有效修复骨缺损。结论PDLLA/HA/DBM人工骨能促进长骨大段骨缺损的修复,是一种较理想的骨修复材料。     

消旋聚乳酸/羟基磷灰石/脱钙骨基质材料支架的体外细胞相容性实验研究

目的研究一种新的骨替代材料——消旋聚乳酸／羟基磷灰石／脱钙骨基质(PDLLA/HA／DBM)骨细胞界面形态，评价其生物相容性。方法采用体外细胞培养技术，选用培养的人成骨细胞，通过光镜和扫描电镜等观察，了解细胞在材料中的生长情况和相互关系，并与消旋聚乳酸(PDLLA)及脱钙骨(DBM)相比较。结果随着培养时间的延长，细胞在PDLLA／DBM材料表面的密度增加，未见细胞死亡。细胞以锚状结构牢固地附着于材料表面，并分泌细胞外基质，覆盖并完全包裹材料颗粒。结论PDLLA／HA／DBM与人成骨细胞能早期形成骨性结合界面，具有良好的牛物相容性，可望成为一种新的具有前景的骨替代材料。     

Effect of bone marrow mesenchymal stem cells transfected with rAAV2-bFGF on early angiogenesis of calvarial defects in rats

The purpose of this study was to evaluate the effect of bone marrow mesenchymal stem cells (MSCs) transfected with the basic fibroblast growth factor (bFGF)-expressing recombinant adeno-associated virus vector (rAAV2-bFGF), on early angiogenesis of calvarial defects in rats. The MSCs were cultured and transfected with rAAV2-bFGF after differential adherence isolation. The transfection efficiency was detected by RT-PCR and Western blotting. The transfected MSCs were compounded with poly-DL-lactide/hydroxyapa...     

Study on biocompatibility of PDLLA／HA／DBM with co-cultured human osteoblasts in vitro

Objective: To evaluate the osteocompatibility of D, L-polylactic/hydroxyapatite/decalcifying bone matrix (PDIZA/HA/DBM), and compare with PDLLA and DBM. Methods: Human primary osteoblasts isolated from the femoral head of patients were inoculated onto PDLLA/HA/DBM, PLA and DBM respectively. The proliferation rate and collagen I expression were detected. The interface between biomaterial and osteoblasts was investigated with phase contrast microscopy and electron scanning microscopy. Results: Best proliferation rate was observed with the PDLLA/HA/DBM and followed by DBM and PLA, suggesting that PDLLA/HA/DBM satisfying most requirements for the cultivation of human osteoblasts. Scanning electron microscopy showed the morphology of osteoblasts was correlated with the proliferation data. The cells, well spread and flattened, were attached closely on the surface of biomaterial with an arched structure and had normal morphology. The extracellular collagenous matrixs covered the surface of bio-material and packed the granules of biomaterial. Conclusion: PDLLA/HA/DBM can form osteointerface early and have a good biocompability.     

牡蛎壳／消旋聚乳酸复合人工骨修复兔桡骨缺损的实验研究

目的观察牡蛎壳／消旋聚乳酸复合人工骨（OPCB）修复兔桡骨节段性骨缺损的成骨能力,同时观察其在体内的生物相容性、降解情况,并评价其性能。方法应用热致相分离法（TIPS）分别制得OPCB及纯消旋聚乳酸（PDLLA）多孔材料;将27只成年新西兰白兔随机分成3组。制作1．2cm的双侧桡骨干缺损并植入上述两种材料。设立不植入任何材料的空白对照组。观察材料植入后动物的局部及全身反应。于术后6、12、侣周分别取材。作X线、大体标本及组织形态学观察,同时观察术后不同时期的组织反应、材料的降解、骨缺损的修复情况。结果OPCB及纯PDLLA植入动物体内无明显的局部不良反应,且OPCB材料修复骨缺损的能力明显强于纯PDLLA及空白对照组（P〈0．05）。术后18周时,植入OPCB材料的骨缺损基本修复,OPCB与宿主骨结合紧密;植入纯PDLLA材料的骨缺损部分修复;空白对照组则骨缺损断端只有少量骨生成。形成骨不连。同时OPCB材料植入后在6、12周分别可见吞噬有材料的巨噬细胞和多核巨细胞．18周时仍有部分复合材料未降解吸收。结论OPCB材料具备良好的生物相容性及骨缺损修复能力,是一种良好的骨组织工程修复材料。     

三维多孔聚DL-乳酸／碱性成纤维细胞生长因子修复长骨缺损

OBJECTIVE: To investigate the osteoinductive ability of the composites consisting of basic fibroblast growth factor (bFGF) and porous poly-DL-lactide (PDLLA) for the development of a new absorbable osteosynthesis material. METHODS: Highly porous foams of PDLLA with the pore size ranging from 150 to 300 microm were prepared by a solvent-casting, particulate-leaching technique with NaCl as the leachable component. Animal models of radial diaphyseal defects of 1.0 cm with complete removal of the periosteum were induced in 45 rabbits, which were randomly divided into 3 groups to receive the defect repair with PDLLA and PDLLA/bFGF respectively, leaving one group untreated to serve as the control group. The implant specimens were harvested at 2, 4, 8, and 12 weeks respectively after the surgery and X-ray, histological and scanning electron microscopic (SEM) examinations were performed to evaluate the effectiveness of defect repair. At 8 and 12 weeks after implantation, biomechanical test (for three-point bending strength) was employed to study the quality of bone formation. RESULTS: PDLLA/bFGF composite stimulated more bone formation and had higher bending strength than PDLLA (P<0.05), and the bone formation induced by both materials was significantly more than that observed in the control group in every postoperative stage (P<0.05). CONCLUSION: PDLLA possesses good biocompatibility and absorbability, and when prepared into a porous material, it exhibits good osteoconductibility. As a good bFGF carrier, the foam of PDLLA with three- dimensional structure shows good osteoinductive ability with regard to the rapidity, quantity and quality of the bone formation.     

雪旺细胞移植改善心肌梗死后副交感/交感神经重塑

目的： 对心肌梗死后的心脏进行雪旺细胞（Schwann cells）移植,从而改善心肌梗死的心脏神经的重塑,降低心肌梗死后室性心律失常易感性,以达到雪旺细胞移植治疗心肌梗死后心率失常的目的。方法： 利用结扎Lewis大鼠冠状动脉前降支的方法建立急性大鼠心肌梗死模型,并将心肌梗死的大鼠随机分为细胞移植组（ n=31）和对照组（ n=30）。雪旺细胞取自大鼠坐骨神经,经爬片S100染色鉴定雪旺细胞表面标记物。并将经体外培养扩增后的雪旺细胞（5×106）通过注射的方式移植于心肌梗死周边区,并在细胞移植后的2 周用免疫荧光及免疫组织化学方法检测心肌梗死边缘区副交感、交感神经,动态心电图和程序性电刺激（PES）检测室性心律失常的易感性。 结果： 通过S100染色发现,培养获得的雪旺细胞纯度达到95%以上,在雪旺细胞移植后的2 周,免疫组织化学和免疫荧光结果显示,雪旺细胞移植能够显著改善心肌梗死边缘区副交感/交感神经的比例,并且能够显著降低动态心电图频域检测中低频/高频的比值,同时显著降低了室性心律失常的易感性。结论： 雪旺细胞移植能够有效改善心肌梗死部位副交感/交感神经的比例,从而降低心肌梗死后室性心律失常的发生率。     

MMT法评价多孔纳米羟基磷灰石/壳聚糖支架材料的细胞毒性

目的制备多孔纳米羟基磷灰石/壳聚糖（nHA/CS）,对其进行细胞毒性检测。方法采用共沉淀法和粒子沥滤法制备多孔nHA/CS。分离培养大鼠成骨细胞,碱性磷酸酶（ALP）染色进行成骨细胞进行鉴定,倒置显微镜下观察培养过程中细胞的形态和增殖情况。MTT检测多孔nHA/CS支架材料对成骨细胞增殖的影响,评价细胞毒性。结果细胞可在多孔nHA/CS周围贴壁生长,并且附着、增殖,其生长及功能不受抑制。结论多孔nHA/CS无细胞毒性,有利于细胞的黏附和增殖,可以用于骨组织工程支架材料。     

储存式多孔聚乳酸/β-磷酸三钙复合材料载体的制备及生物学评价

目的:对储存式多孔聚乳酸/β-磷酸三钙(PDLLA/β-TCP)复合材料载体进行生物学评价。方法:采用热致相分离/冷冻干燥法制备储存式多孔PDLLA/β-TCP复合材料载体,通过对载体的结构表征和体外细胞毒性试验、急性全身毒性试验、溶血试验、皮肤刺激试验、微核实验以及动物体内植入试验进行生物学评价,为其临床应用提供生物学依据。结果:①储存式多孔PDLLA/β-TCP复合载体材料具有多孔结构,孔径约60!m,孔率71.9%;②材料浸提液对3T3细胞的相对增殖率(RGR)大于81.3%,无细胞毒性(Ⅰ级);急性全身毒性试验阴性;受试材料溶血率小于2.20%,体外试验不引起溶血反应;皮肤刺激性无红斑、无水肿出现;微核率(1.4±0.8)%,与阴性对照组比较,P>0.05;肌肉植入8周后,纤维包膜完整地包绕PDLLA/β-TCP多孔微管。结论:采用热致相分离/冷冻干燥法制备的此种新颖的储存式多孔PDLLA/β-TCP复合载体材料具有良好的生物相容性。