miR-671-3p靶向调控CKAP4对人脑胶质瘤细胞增殖及迁移的影响

目的探讨miR-671-3p靶向调控细胞骨架相关蛋白4(CKAP4)对人脑胶质瘤细胞增殖及迁移的影响。 方法收集术后脑胶质瘤组织及配对癌旁正常组织标本,检测其miR-671-3p和CKAP4表达水平。将人脑胶质瘤U251细胞株分为miR-671-3p NC组、miR-671-3p mimic组和miR-671-3p inhibitor组,并转染相应质粒。采用实时荧光定量PCR测定miR-671-3p表达,CCK-8实验测定细胞增殖能力,Transwell实验测定细胞迁移能力。Western blotting测定CKAP4表达水平。 结果人脑胶质瘤组织中miR-671-3p、CKAP4表达水平高于癌旁正常组织(P＜0.05)。细胞增殖率、迁移率miR-671-3p mimic组高于miR-671-3p NC组,miR-671-3p inhibitor 组低于miR-671-3p NC组(P＜0.05)。miR-671-3p对CKAP4具有靶向调节作用。miR-671-3p mimic组CKAP4蛋白表达量低于miR-671-3p NC组,miR-671-3p mimic组低于miR-671-3p inhibitor组(P＜0.05)。 结论miR-671-3p可靶向调控CKAP4促进人脑胶质瘤细胞增殖及迁移能力。     

miR-93-3p对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤及炎症因子分泌的影响

目的 微小miRNA-93-3p（miR-93-3p）对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤及炎症因子分泌的影响。方法 体外培养肾小管上皮细胞,分为NC组、HG组、anti miR NC组、anti miR-93-3p组、HG+ miR NC组、HG+miR-93-3p组。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR 93 3p的表达;酶联免疫吸附（ELISA）法检测肿瘤坏死因子 α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）水平;甲基噻唑基四唑（MTT）检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞周期蛋白1（CyclinD1）、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（C caspase-3）、磷酸化 磷脂酰肌醇激酶（p-PI3K）、磷酸化 蛋白激酶 B（p-AKT）表达量。结果 与NC组相比,HG组miR 93 3p的表达水平显著降低（P＜0.05）,细胞存活率显著降低（P＜0.05）,CyclinD1蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）,而细胞凋亡率显著升高（P＜0.05）,C caspase 3、p PI3K、p AKT蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）,TNF α、IL 6水平显著升高（P＜0.05）;与anti miR NC组相比,anti miR-93-3p组细胞存活率显著降低（P＜0.05）,细胞凋亡率显著升高（P＜0.05）,C caspase 3蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）,TNF α、IL 6水平显著升高（P＜0.05）;与HG+ miR NC组相比,HG+miR 93 3p组细胞存活率显著升高（P＜0.05）,细胞凋亡率显著降低（P＜0.05）,CyclinD1蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）,C caspase 3、p PI3K、p AKT蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）,TNF α、IL 6水平显著降低（P＜0.05）。结论 miR 93 3p通过调控PI3K/AKT信号通路抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤及炎症因子分泌。     

miR-218-5p通过靶向LIN28B调控COPD时气道上皮细胞凋亡和炎症反应

【摘要】 目的 探讨miR-218-5p通过靶向LIN28B调控慢性阻塞性肺疾病（COPD）时气道上皮细胞凋亡和炎症反应的作用及其机制。 方法 将人肺支气管上皮细胞BEAS-2B分为正常对照（NC）组、香烟烟雾提取物（CSE）组、miR-NC+CSE组、miR-218-5p+CSE组、si-NC+CSE组、si-LIN28B+CSE组、miR-218-5p+pcDNA-NC+CSE组和miR-218-5p+pcDNA-LIN28B+CSE组。RT-qPCR检测miR-218-5p的表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡;酶联免疫吸附实验（ELISA）检测白细胞介素6（IL-6）和转化生长因子-β1（TGF-β1）的表达水平;蛋白质印记（Western blot）检测LIN28B、裂解的天冬氨酸半胱氨酸蛋白酶（Cleaved-caspase-3）的表达水平;双荧光素酶报告基因实验验证miR-218-5p对LIN28B的靶向作用。 结果 与NC组比较,CSE组BEAS-2B细胞miR-218-5p表达降低,细胞凋亡率、LIN28B、Cleaved-caspase-3、IL-6和TGF-β1表达显著增加（均P＜0.05）。与miR-NC+CSE组比较,miR-218-5p+CSE组BEAS-2B细胞凋亡率、Cleaved-caspase-3、IL-6和TGF-β1表达显著降低（均P＜0.05）。与si-NC+CSE组比较,si-LIN28B+CSE组BEAS-2B细胞凋亡率、Cleaved-caspase-3、IL-6和TGF-β1表达显著降低（均P＜0.05）。与miR-218-5p+pcDNA-NC+CSE组比较,miR-218-5p+pcDNA-LIN28B+CSE组BEAS-2B细胞细胞凋亡率、Cleaved-caspase-3、IL-6和TGF-β1表达显著增加（均P ＜0.05）。 结论 miR-218-5p通过靶向LIN28B可抑制CSE诱导的气道上皮细胞凋亡和炎症反应。因此,miR-218-5p可能是慢性阻塞性肺疾病的潜在治疗靶点。     

miR-1247-3p激活TGF-β1信号介导肝星状细胞与肝纤维化的关系

目的 探讨miR-1247-3p对肝纤维化的影响,分析其对肝星状细胞增殖与活化的作用及分子机制。方法 四氯化碳（CCl₄）制备肝纤维化大鼠模型,并分离大鼠原代肝星状细胞。慢病毒转染处理细胞,分为空白对照组、miR-1247-3p mimic组和miR-1247-3p inhibitor组。检测miR-1247-3p、转化生长因子-β1（TGF-β1）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）水平及细胞增殖能力,并采用荧光素酶报告实验验证miR-1247-3p靶基因。结果 与对照组比较,CCl₄腹腔注射后大鼠肝组织出现纤维化增生,结构破坏,炎症细胞浸润,且随时间延长肝纤维化程度加重（P<0.05）;与对照组比较,模型组大鼠肝组织miR-1247-3p和TGF-β1表达水平均显著增加（P<0.05）;与空白对照组比较,miR-1247-3p mimic组肝星状细胞增殖能力和肝星状细胞α-SMA蛋白表达水平显著增加,miR-1247-3p inhibitor组显著降低（P<0.05）;与空白对照组比较,miR-1247-3p mimic组...     

miR-15b通过靶向LPAR3抑制子宫内膜癌细胞PI3K/AKT信号通路活化

【摘要】 目的 探讨miR-15b靶向溶血磷脂酸受体3（LPAR3）调控PI3K/AKT信号通路对子宫内膜癌细胞（HEC-1B）增殖的影响。方法 生物信息学分析预测并通过荧光素酶报告基因实验验证miR-15b与LPAR3之间的靶向结合作用;将HEC-1B细胞分为NC组、miR-15b mimic组、miR-15b inhibitor组、siRNA-LPAR3组和miR-15b inhibitor+ siRNA-LPAR3组,实时荧光定量PCR和Western blot检测miR 15b、LPAR3和PI3K/AKT信号通路相关因子磷脂酰肌醇 3 激酶（PI3K）、苏氨酸激酶（AKT）在HEC 1B和人子宫内膜上皮细胞（HEEC）中的表达水平;噻唑蓝（MTT）法检测HEC-1B的细胞活力;流式细胞术检测HEC-1B的细胞周期分布;Transwell测定法检测HEC-1B的细胞迁移和侵袭能力。结果 LPAR3为miR-15b的靶基因;与HEEC组相比,HEC-1B组中LPAR3、PI3K和AKT mRNA和蛋白表达水平均显著升高（P＜0.05）,而miR-15b表达显著降低（P＜0.05）;与NC组相比,siRNA-LPAR3组细胞PI3K/AKT信号通路相关因子mRNA和蛋白表达水平明显降低（P＜0.05）,miR-15b mimic组细胞LPAR3和PI3K/AKT信号通路相关因子mRNA和蛋白表达水平明显降低（P＜0.05）;与NC组相比,siRNA-LPAR3组HEC-1B的细胞活力、S期细胞比例、迁移和侵袭能力均明显降低（P＜0.05）,miR-15b mimic组HEC-1B的细胞活力、S期细胞比例、迁移和侵袭能力均明显降低（P＜0.05）,抑制miR-15b的表达后,上述现象被逆转(P＜0.05)。与miR-15b inhibitor组相比,miR-15b inhibitor+ siRNA-LPAR3组HEC-1B的细胞活力、S期细胞比例、迁移和侵袭能力均显著下降（P＜0.05）。结论 miR-15b可能通过靶向LPAR3抑制HEC-1B的PI3K/AKT信号通路活化,从而抑制HEC-1B细胞的增殖。     

内皮细胞 miR-27b-3调控YAP信号参与脓毒症中的机制研究

【摘要】目的 探究miR-27b-3p对YAP信号的调控及其在脓毒症发生发展中的作用。方法 将小鼠按照随机数列法均分为4组,分别为对照组, CLP（盲肠结扎穿孔）组,mimic NC组,miR-27b-3p mimic组。利用CLP（盲肠结扎穿孔）法构建小鼠脓毒症模型, miR-27b-3p组小鼠通过尾静脉注射miR-27b-3p mimic,对mimic NC组小鼠尾静脉注射mimic NC阴性对照物。分离小鼠原代肺内皮细胞,qRT-PCR（荧光定量PCR）检测细胞中YAP（是相关蛋白1）、ICAM（细胞间粘附分子）、E-selectin（选择素）miR-27b-3p mRNA水平;数据库PITA预测调控YAP的miRNA;WB检测细胞中YAP、ICAM、E-selectin表达及p65活化水平;ELISA检测细胞上清中TNF-α(肿瘤坏死因子-α)、IL-6(白介素-6)水平。 结果 与对照组相比,CLP组小鼠原代肺内皮细胞中YAP、ICAM、E-selectin mRNA表达明显升高（P＜0.05）,miR-27b-3p表达明显下调（P＜0.05）;数据库PITA预测miR-27b-3p与YAP mRNA 3’ UTR序列存在6个完全互补配对碱基UGUGAA;WB结果显示,与对照组相比,CLP组YAP、ICAM、E-selectin等蛋白水平明显升高,同时p-p65磷酸化活化水平明显升高;与mimic NC组相比,miR-27b-3p mimic组YAP表达量明显下调,ICAM、E-selectin表达水平明显升高,同时p65磷酸化水平升高;ELISA结果显示,与对照组相比,CLP组小鼠内皮上清中TNF-α、IL-6水平升高（P＜0.05） ;与mimic NC组相比,miR-27b-3p mimic组小鼠内皮上清中TNF-α、IL-6的含量明显升高（P＜0.05）。结论 miR-27b-3p在脓毒症血管内皮细胞中低表达,而YAP在内皮中高表达。脓毒症诱导内皮低表达miR-27b-3p,促进YAP在脓毒症内皮细胞中进一步高表达,从而抑制负向反馈调控内皮炎症信号活化。     

miR-425-5p通过靶向HSPB8表达介导心肌缺血再灌注损伤

目的：探讨miR-425-5p及其下游靶点HSPB8对心肌缺血再灌注损伤（MIRI）的影响及相关机制。方法：将AC16细胞随机分为control组,H/R组,H/R+miR-NC组,H/R+miR-425-5p inhibitor组,H/R+miR-425-5p mimic组,H/R+OE-NC组,H/R+OEHSPB8组,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法测定AC16的增殖能力;酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素（IL）-6水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白质免疫印迹法（western blotting）分别检测凋亡相关蛋白Caspase-3、Bax、Bcl-2的mRNA和蛋白表达情况,荧光素酶报告基因检测验证miR-425-5p及HSPB8间的靶向关系。结果：miR-425-5p在MIRI患者中表达显著高于正常人群;HSPB8在MIRI患者中表达低于正常人群;与control组相比,H/R组、H/R+miR-NC组、H/R+miR-425-5p mimic组、H/R+OE-NC组细...     

miRNA-141通过调节TLR4信号通路抑制大鼠血栓形成

【摘要】 目的 研究微小RNA（miR）-141对血栓模型大鼠血栓形成、血小板聚集及血浆中一氧化氮（NO）、环磷酸〖JP2〗鸟苷（cGMP）和前列环素（PGI2）的影响。 方法 90只SD雄性大鼠随机进行分组，10只为正常对照组；模型组使用5 g/L的CMC-Na建立大鼠动静脉旁路血栓模型（20只）；治疗组在CMC-Na基础上分别静脉注射100 mg/kg阿司匹林（Asp）作为阳性对照（10只）、miR-141的拟似物mimic（20只）、mimic阴性对照mimic-NC（10只）、mimic联合Toll样受体4（TLR4）过表达重组质粒pcDNA3.1-TLR4（mimic+pcDNA3.1-TLR4）（20只），连续4周。观察各组血栓形成的影响，比浊法观察ADP诱导的血小板聚集变化，试剂盒法检测各组血浆中NO, cGMP, PGI2的水平；蛋白免疫印迹法检测TLR4、NF-κB、Rac1、IL-1β的蛋白水平。 结果 miR-141-mimic可显著抑制血栓形成和血小板聚集率（P＜0.05），升高血浆中NO（P＜0.05）、cGMP（P＜0.05）、PGI2（P＜0.05）浓度，miR-141-mimic组效果优于阿司匹林组（P＜0.05）。miR-141-mimic可显著抑制NF κB（P＜0.05），Rac1（P＜0.05），IL-1β（P＜0.05）的蛋白水平。mimic+pcDNA3.1-TLR4组的逆转miR-141-mimic组的效果（P＜0.05）。 结论 miR-141通过抑制TLR4信号通路发挥抗血栓作用。     

CircRNA_000809通过miR-200c-3p对子宫内膜异位症间质细胞的增殖、迁移及上皮间质转化的影响

目的：探讨circRNA_000809通过靶向miR-200c-3p调控子宫内膜异位症间质细胞增殖、迁移及上皮-间质转化（EMT）的作用。方法：收集2020年1月至2022年1月于温州医科大学附属第二医院育英儿童医院行卵巢囊肿剥除术患者的卵巢巧克力囊肿组织25例,设为子宫内膜异位症组;收集25例正常子宫内膜组织,标本来自于因早期宫颈癌行子宫切除术或者行宫腔镜检查术的育龄期非子宫内膜异位症患者,设为正常子宫内膜组。采用qRT-PCR法检测正常子宫内膜、异位内膜组织中circRNA_000809、miR-200c-3p的表达量;分别采用EdU实验和Transwell实验检测异位子宫内膜间质细胞的增殖及迁移;采用蛋白质印迹法（Western blot）检测相关蛋白表达水平。结果：与正常子宫内膜组织比,异位子宫内膜中circRNA_000809表达上调（P＜0.05）,而miR-200c-3p的表达下调（P＜0.05）;且Pearson相关性分析显示在异位子宫内膜组织中circRNA_000809与miR-200c-3p的表达量呈负相关（P＜0.05）;分别用siNC+inhibitor NC、si-circRNA_000809+inhibitor NC和si-circRNA_000809+miR-200c-3p inhibitor共转染异位子宫内膜间质细胞,结果显示与siNC+inhibitor NC组比,si-circRNA_000809+inhibitor NC组异位子宫内膜间质细胞增殖和迁移能力减弱,ZEB1/ZEB2的蛋白水平也降低（P＜0.05）;而si-circRNA_000809+miR-200c-3p inhibitor组异位子宫内膜间质细胞增殖、迁移能力及ZEB1/ZEB2蛋白的表达较si-circRNA_000809+inhibitor NC组均有上升,但较siNC+inhibitor NC组下降（P＜0.05）。结论：抑制circRNA_000809表达可通过上调miR-200c-3p的表达从而抑制子宫内膜异位症间质细胞的迁移及EMT。     

MicroRNA-182-5p对高糖诱导内皮细胞损伤的影响

目的 探讨microRNA-182-5p（miR-182-5p）对高糖诱导的内皮细胞损伤的作用和机制。方法 培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs）并随机分为对照组、高糖+mimic对照组、高糖+mimic组、高糖+inhibitor对照组和高糖+inhibitor组。试剂盒检测超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（AT）、谷胱甘肽过氧化物酶（Gpx）、胱天蛋白酶-3（Caspase-3）和乳酸脱氢酶（LDH）活性,3-硝基酪氨酸（3-NT）和丙二醛（MDA）含量;实时荧光定量PCR和免疫印迹检测mRNA和蛋白水平;CCK-8法检测细胞存活率;2′, 7′-二氯荧光黄双乙酸盐（DCFH-DA）染色检测细胞反应活性氧（ROS）水平;TargetScan软件预测结合荧光素酶报告基因检测验证miR-182-5p对SIRT1的3′-非编码区（UTR）调控作用。〖HTH〗结果 ①与对照组相比,高糖组内皮细胞miR-182-5p表达明显上调。②高糖条件下,使用miR-182-5p的mimic加重内皮细胞氧化应激和死亡水平,而inhibitor处理则改善高糖诱导的内皮细胞损伤。③高糖条件下,mimic处理降低而inhibitor增加内皮SIRT1蛋白表达,使用SIRT1小干扰RNA阻断inhibitor介导的内皮保护作用。 ④miR-182-5p直接结合SIRT1的3′-UTR并降低SIRT1表达。结论 miR-182-5p降低SIRT1表达从而加重高糖诱导的内皮细胞氧化应激和死亡,抑制miR-182-5p具有显著的内皮细胞保护作用。     

丙泊酚通过调控miR-574-5p/SOX2表达抑制胃癌AGS细胞增殖、侵袭和迁移

【摘要】 目的 探讨丙泊酚通过调控微小RNA-574-5P(miRNA-574-5P）/性别决定区Y框蛋白（SOX2）对胃癌AGS细胞增殖、侵袭和迁移的影响和分子机制。 方法 以0、5、10和20 μg/mL丙泊酚处理AGS细胞48 h。筛选丙泊酚最佳使用浓度。将转染后的AGS细胞分为对照组、丙泊酚组、丙泊酚+miR-NC组、丙泊酚+miR-574-5p组、丙泊酚+si-con组、丙泊酚+si-SOX2组、丙泊酚+miR-574-5p+pcDNA组、丙泊酚+miR-574-5p+ pcDNA-SOX2组。采用细胞计数（CCK-8）法检测细胞增殖;克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;Transwell实验检测细胞侵袭和迁移;实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）法检测细胞中微小RNA（miR）-574-5p的表达水平;免疫印迹法检测细胞中SOX2蛋白的表达水平。采用上述方法检测AGS细胞增殖、侵袭、迁移能力。双荧光素酶报告基因实验检测miR-574-5p与SOX2的靶向关系。 结果 选择20 μg/mL丙泊酚浓度进行实验。与0μg/mL比较,5、10、20 μg/mL丙泊酚处理组细胞存活率、克隆形成率、侵袭细胞数和迁移细胞数均明显降低（P＜0.05）,且呈浓度依赖性,miR-574-5P表达水平呈浓度依赖性降低,SOX2呈浓度依赖性升高（P＜0.05）。与对照组比较,丙泊酚组AGS细胞存活率、克隆形成率、迁移和侵袭细胞数以及miR-574-5p表达显著降低（均P＜0.05）,SOX2蛋白表达显著升高（P＜0.05）。与丙泊酚+miR-NC组比较,丙泊酚+miR-574-5p组AGS细胞存活率、克隆形成率、迁移和侵袭细胞数以及miR-574-5p表达显著升高（均P＜0.05）,SOX2蛋白表达显著降低（P＜0.05）。与丙泊酚+si-con组比较,丙泊酚+si-SOX2组AGS细胞存活率、克隆形成率、迁移和侵袭细胞数以及miR-574-5p表达显著升高（均P＜0.05）,SOX2蛋白表达显著降低（P＜0.05）。与丙泊酚+miR-574-5p+pcDNA组比较,丙泊酚+miR-574-5p+ pcDNA-SOX2组AGS细胞存活率、克隆形成率、迁移和侵袭细胞数以及miR-574-5p表达显著降低（均P＜0.05）,SOX2蛋白表达显著升高（P＜0.05）。miR-574-5p直接与SOX2结合。 结论 丙泊酚通过调控miR-574-5p/SOX2表达抑制胃癌AGS细胞增殖、侵袭和迁移。     

抑制miR-93-5p表达对人卵巢癌细胞增殖和迁移的影响

目的探讨miR-93-5p对人卵巢癌细胞增殖和迁移的影响,并初步探究其作用机制。方法qRT-PCR检测人正常卵巢上皮细胞（IOSE80）与卵巢癌细胞（SKOV3、A2780、ES2）中miR-93-5p的相对表达量;将SKOV3细胞分成抑制物组（inhibitor组）和阴性对照组（NC组）;MTT法检测inhibitor组和NC组细胞的相对存活率;细胞划痕实验检测inhibitor组和NC组细胞的相对迁移率;Westernblot法检测inhibitor组和NC组细胞中RBM24蛋白的相对表达量;生物信息学方法对miR-93-5p进行靶基因预测,并通过荧光素酶报告基因检测验证。结果miR-93-5p在卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2中的表达水平均明显高于正常卵巢上皮细胞IOSE80（均P＜0.05）。Inhibitor组细胞在48和72h的相对存活率较NC组均显著降低（均P＜0.05）。Inhibitor组细胞在12h时的相对迁移率为（40.67±4.21）%,在24h时的相对迁移率为（33.76±3.42）%,与NC组比较差异均有统计学意义（均P＜0.01）。与NC组比较,inhibitor组细胞中RBM24蛋白相对表达量明显升高（P＜0.05）。荧光素酶报告基因实验结果显示,与对照组（miR-NC组）比较,过表达组（miR-93-5pmimics组）中RBM24-MUT表达差异无统计学意义（P＞0.05）,而RBM24-WT表达则显著下调（P＜0.05）。结论miR-93-5p在卵巢癌细胞中呈现高表达,可以通过靶向调控RBM24的表达量进而促进卵巢癌细胞的增殖和迁移。     

银杏黄酮对哮喘大鼠缺氧诱导因子 1α表达水平和气道重塑的影响

【摘要】目的 探讨银杏黄酮对哮喘大鼠缺氧诱导因子 1α表达水平和气道重塑的影响。方法 选择SD大鼠40只,随机分为对照组、模型组、高剂量治疗组（2mg/d）和低剂量治疗组（05mg/d）四组,每组10只。除对照组外其余三组采用卵蛋白（OVA）等致敏物构建大鼠哮喘模型。哮喘模型构建后对照组用生理盐水激发,其余三组采用吸入卵蛋白等激发,银杏黄酮治疗组在激发前30min腹腔注射相应剂量的银杏黄酮溶液。哮喘激发3周后,HE染色观察肺组织的病理学改变,测量支气管壁厚度、平滑肌厚度。免疫组化染色,检测肺组织切片HIF 1α和VEGF的组织含量;western blot检测大鼠肺部组织HIF 1α和VEGF蛋白水平。结果 对照组气道上皮完整,无明显改变,模型组和治疗组气道壁及平滑肌明显增厚,上皮中见黏膜脱落,且高剂量治疗组病理改善程度明显优于低剂量治疗组和模型组;与对照组相比,其余三组的支气管壁和平滑肌显著增厚（P＜005）,但高剂量治疗组增厚程度显著小于低剂量治疗组和模型组（P＜005）;模型组和治疗组中HIF 1α和VEGF的蛋白水平明显增加（P＜005）,高剂量治疗组蛋白水平增加量显著低于低剂量治疗组和模型组（P＜005）。 结论 高剂量的银杏黄酮能够抑制哮喘大鼠肺组织的HIF 1α和VEGF的表达,影响组织平滑肌的增殖及支气管壁的增厚,干预气道重塑。     

miR-409-3p和Rab10在弥漫大B细胞淋巴瘤中的表达和临床意义

目的 探讨miR-409-3p和Rab10对弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的影响。方法 qRT-PCR检测转染miR-409-3p模拟物(miR-409-3p mimic)、无关序列模拟物(mimic NC)、miR-409-3p抑制物(miR-409-3p inhibitor)、无关序列抑制物(inhibitor NC)和空白对照组(control组)后miR-409-3p的表达水平，使用Targetscan 7.2和miRNA靶基因预测数据库(miRDB)预测miR-409-3p的下游靶基因，Western blot检测Rab GTP酶10(Rab10)的表达，细胞计数试剂盒-8(CCK-8)和流式细胞仪用来检测细胞增殖和凋亡，然后使用免疫组化(IHC)检测石蜡包埋组织中Rab10的表达水平并进一步分析Rab10与DLBCL患者临床特征的关系。结果 miR-409-3p可以促进细胞凋亡，抑制细胞增殖；过表达miR-409-3p后Rab10的表达增加；Rab10在DLBCL组织中的表达水平高于淋巴结反应性增生（RHL）组织，高水平乳酸脱氢酶(LDH)、高水平β2微球蛋白(β2-MG...     

miR-188-5p对胰岛素抵抗Hep G2细胞的改善作用研究

目的 探讨miR-188-5p对Hep G2细胞胰岛素抵抗的影响。 方法 采用高浓度葡萄糖（30 mmol/L）诱导处理人肝癌Hep G2细胞24 h构建胰岛素抵抗细胞模型,实验分为6组：对照组、模型组、miR-188-5p mimic组、mimic-NC组、miR-188-5p inhibitor组及inhibitor-NC组。实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,qPCR)检测Hep G2细胞中miR-188-5p表达水平;MTT法检测细胞增殖率;生化实验检测细胞内葡萄糖及糖原含量;免疫荧光染色观察细胞中葡萄糖转运蛋白4（glucose transporter type 4 protein,GLUT4）的表达。 结果 与对照组比较,模型组miR-188-5p表达、细胞增殖率、葡萄糖摄取及糖原含量均明显降低（P＜0.05）,GLUT4蛋白表达减少。与模型组比较,miR-188-5p mimic组miR-188-5p表达、细胞增殖率、葡萄糖摄取及糖原含量均明显升高（P＜0.05）,GLUT4蛋白表达也增加,而miR-188-5p inhibitor组趋势与miR-188-5p mimic组相反。 结论 胰岛素抵抗Hep G2细胞中miR-188-5p表达降低,上调miR-188-5p表达可促进细胞增殖,缓解葡萄糖代谢障碍。     

miR-155-5p mimic靶向HIF-1α对非小细胞肺癌A549细胞生长和运动能力的调节作用和机制

【摘要】 目的 探讨miR-155-5p mimic靶向缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）对非小细胞肺癌A549细胞生长和运动能力的调节作用和机制。 方法 取对数期生长的A549细胞,将未经转染的细胞设为Control组,miR-155 mimic及HIF-1α分别转染至A549细胞,设为miR 155 mimic组和HIF-1α组;再将两者共同转染于A549细胞,设为mimic+HIF-1α组。采用荧光素酶报告基因检测miR 375与SLC7A11的靶向关系,利用RT PCR检测各组细胞miR 155-5p及HIF-1α mRNA表达水平,Edu染色检测细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移,Transwell小室实验检测细胞侵袭,Western blot检测细胞中各蛋白表达。结果 HIF-1α是miR 155-5p-mimic的靶向基因。与Control组相比,miR-155-mimic组HIF-1α-mRNA水平、HIF-1α和Ki67蛋白表达量及增殖细胞数、侵袭细胞数及划痕愈合率均降低（P＜0.05）,HIF-1α组HIF-1α mRNA水平、HIF-1α和Ki67蛋白表达量及增殖细胞数、侵袭细胞数及划痕愈合率均升高（P＜0.05）。与HIF-1α组相比,mimic+HIF-1α组HIF-1α mRNA水平、HIF-1α和Ki67蛋白表达量及增殖细胞数、侵袭细胞数及划痕愈合率均降低（P＜0.05）。与Control组相比,miR-155-mimic组N cadherin、VEGF、VEGFR2、P38蛋白表达量降低,E cadherin蛋白表达量升高（P＜0.05）,HIF-1α组N cadherin、VEGF、VEGFR2、P38蛋白表达量升高,E cadherin蛋白表达量降低（P＜0.05）。与HIF-1α组相比,mimic+HIF-1α组N cadherin、VEGF、VEGFR2、P38蛋白表达量降低,E cadherin蛋白表达量升高（P＜0.05）。结论 miR-155-5p可通过靶向抑制HIF-1α表达抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖、侵袭及迁移,其作用机制可能与抑制上皮间质转化及VEGF/P38通路相关。     

MicroRNA-27b在高血压脑出血大鼠脑组织中的表达及对星形胶质细胞生物学功能的影响

目的 探讨microRNA-27b（miR-27b）在高血压脑出血（HICH）大鼠脑组织中的表达及对星形胶质细胞生物学功能的影响。方法 选取15只健康WKY大鼠作为对照组,15只自发性高血压大鼠作为HICH组。HICH组通过自体血脑内注射法复制HICH大鼠模型,对照组进行假手术但不注射自体血。HE染色和TUNEL染色检测大鼠脑组织损伤和凋亡情况,实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR-27b mRNA相对表达量。将星形胶质细胞分为NC组、miR-27b mimic组及miR-27b inhibitor组,分别转染miR-27b mimic和miR-27b inhibitor质粒,过表达和抑制miR-27b水平。qRT-PCR检测各组细胞miR-27b mRNA相对表达量,CCK-8法检测各组细胞增殖及凋亡情况。结果 HICH组大鼠出血脑组织出现显著损伤,凋亡指数（35.91±3.24）高于对照组（2.75±0.36）（P <0.05）;HICH组miR-27b mRNA相对表达量（3.45±0.48）高于对照组（1.00±0.12）（P <0.05）;miR-27b mimic组的miR-27b mRNA相对表达量高于NC组,增殖活力低于NC组,凋亡率高于NC组（P <0.05）。miR-27b inhibitor组的miR-27b mRNA相对表达量低于NC组,增殖活力高于NC组,凋亡率低于NC组（P <0.05）。结论 miR-27b mRNA相对表达量在HICH大鼠脑组织中显著升高,并抑制星形胶质细胞的增殖,促进星形胶质细胞凋亡。     

miR-485-5 p介导SOX5基因表达对肝细胞肝癌细胞活力及迁移侵袭的影响

目的 研究微小RNA(miR)-485-5 p靶向性别决定区Y框蛋白5(SOX5)对肝细胞肝癌(HCC)细胞活力和迁移侵袭能力的影响及作用机制.方法 采用Targetscan 7.1预测软件及双荧光素酶报告基因试验检测miR-485-5 p对SOX5基因的靶向调控作用.qRT-PCR检测HCC组织中miR-485-5 p和SOX5 mRNA的表达水平,并分析两者的相关性.常规培养HCC细胞Huh7,将其分为NC、miR-485-5p mimic和miR-485-5 p mimic+oe-SOX5组,采用lip2000进行各组质粒的转染.CCK-8实验检测各组细胞的活力,Transwell实验检测各组细胞的迁移侵袭能力.Western blot检测各组细胞中pAkt和pGSK3β蛋白的表达.结果 Targetscan 7.1预测软件、双荧光素酶报告基因试验表明miR-485-5 p靶向调控SOX5.与HCC癌旁组织相比,miR-485-5 p在HCC组织中低表达,SOX5 mRNA在HCC组织中高表达,两者的表达呈负相关性.与NC组相比,miR-485-5 p mimic组和miR-485-5 p mimic+oe-SOX5组HCC细胞活力和迁移侵袭能力降低.而与miR-485-5 p mimic组相比,miR-485-5 p mimic+oe-SOX5组HCC细胞活力和迁移侵袭能力增加,过表达SOX5减弱了miR-485-5 p mimic对HCC细胞活力和迁移侵袭能力的抑制作用.与NC组相比,miR-485-5 p mimic和miR-485-5 p mimic+oe-SOX5组细胞中pAkt和pGSK3β蛋白表达降低.而与miR-485-5 p mimic组相比,miR-485-5 p mimic+oe-SOX5组pAkt和pGSK3β蛋白表达增加,过表达SOX5减弱了miR-485-5 p mimic对Akt/GSK3β信号通路活性的抑制作用.结论 miR-485-5 p靶向调控SOX5表达抑制HCC细胞活力及迁移侵袭能力.     

miR-122-5p靶向ADAM10调控Notch信号通路对人卵巢癌细胞SKOV-3的上皮-间质转化的抑制作用

目的 研究miR-122-5p对人卵巢癌细胞SKOV-3上皮-间质转化(EMT)的影响,阐明其可能机制.方法 常规体外培养人卵巢癌细胞SKOV-3,将miR-122-5p模拟物(miR-122-5p mimic)及其阴性对照(mimic NC)转染至SK-OV-3细胞,分为空白对照组(Blank组)、mimic NC组和miR-122-5p mimic组,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞miR-122-5p和ADAM10 mRNA的表达水平;Western blot检测各组细胞ADAM10蛋白的表达水平;生物信息学预测miR-122-5p与ADAM10靶向匹配,采用双荧光素酶报告系统验证两者在SKOV-3细胞中的靶向关系.再将miR-122-5p mimic和ADAM10过表达质粒(pcDNA-ADAM10)分别或同时转染至SKOV-3细胞中,分为空白对照组(Blank组)、miR-122-5p mimic组、ADAM10过表达组(pc-ADAM10组)和miR-122-5p mimic+pc-ADAM10组,采用Transwell检测SKOV-3细胞的迁移和侵袭能力;Western blot检测细胞Notch信号通路相关蛋白Notch1、HES1和HEY1,EMT相关蛋白Snail、E-cadherin和N-cadherin的表达水平.结果 miR-122-5p mimic组SKOV-3细胞中miR-122-5p的表达水平较mimic NC组的升高(P<0.01),表明miR-122-5p mimic稳定转染至SKOV-3细胞.miR-122-5p mimic组SKOV-3细胞中ADAM10 mRNA和蛋白的表达水平较mimic NC组的降低(P<0.01),双荧光素酶报告系统证实ADAM10是miR-122-5p靶基因.与Blank组比较,miR-122-5p mimic组SKOV-3细胞发生迁移和侵袭的数量降低(t=6.004,P<0.05;t=7.289,P<0.01),而pc-ADAM10组的升高(t=13.181,P<0.001;t=11.504,P<0.01);miR-122-5p mimic组细胞的Notch、HES1、HEY1、Snail和N-cadherin蛋白表达水平下降(P<0.05,P<0.01),而pc-ADAM10组的上升(P<0.01);miR-122-5p mimic组细胞的E-cadheirn蛋白表达水平上升(P<0.01),而pc-ADAM10组的下降(P<0.01).与pc-AD-AM10组比较,miR-122-5p mimic+pc-ADAM10能减弱pc-ADAM10的促EMT作用,且下调Notch信号通路活性.结论 miR-122-5p通过阻断Notch信号通路抑制人卵巢癌细胞SKOV-3的EMT,其机制可能与miR-122-5p靶向抑制AD-AM10的表达有关.     

长链非编码RNA Linc00658在结直肠癌中的表达及其与西妥昔单抗抵抗的关系

目的：探究长链非编码RNA（LncRNA）Linc00658 在结直肠癌（CRC）中的表达及其与西妥昔单抗抵抗的关系。方法：采用生物信息学方法预测与miR-19a-3p及PTEN表达密切相关的LncRNA，分别用西妥昔单抗和DMSO诱导处理人CRC细胞CaCo2 作为抵抗组和对照组，并利用细胞转染过表达抵抗组细胞的Linc00658作为过表达组，分别转染miR-19a-3p mimic及NC于CaCo2细胞中，作为mimic组及NC组。qRT-PCR检测Linc00658、miR-19a-3p及PTEN mRNA在对照组、抵抗组和过表达组细胞中的表达水平，Western blot检测PTEN及其下游基因磷酸化AKT（p-AKT）及磷酸化mTOR（p-mTOR）的表达，CCK-8 实验检测各组细胞西妥昔单抗的半数抑制浓度（IC50），荧光素酶报告基因实验验证Linc00658与miR-19a-3p的结合及其对miR-19a-3p与PTEN结合作用的影响。结果：相比对照组，抵抗组细胞Linc00658、PTEN mRNA及蛋白表达显著降低，miR-19a-3p、p-AKT及p-mTOR表达显著升高，西妥昔单抗IC50 显著增高（均P ＜0.01）；相比抵抗组，过表达组细胞Linc00658、PTEN mRNA及蛋白表达显著升高，miR-19a-3p、p-AKT及p-mTOR表达显著降低，西妥昔单抗IC50 显著降低（P ＜0.05）；相比NC组，mimic组西妥昔单抗IC50显著升高（P ＜0.01）；miR-19a-3p mimic可显著抑制pGL3-basic-Linc00658荧光素酶活性，提示miR-19a-3p与Linc00658存在结合作用，过表达Linc00658可使miR-19a-3p mimic对pGL3-basic-PTEN的荧光抑制作用恢复。结论：Linc00658通过吸附miR-19a-3p促进PTEN的重新表达及CRC细胞对西妥昔单抗的敏感性。