组蛋白脱乙酰酶2-核转录因子-κB/激活蛋白-1介导的重度哮喘对糖皮质激素不敏感的分子机制

 目的 探讨重度哮喘患者对糖皮质激素不敏感的分子机制,尤其从糖皮质激素/糖皮质激素受体（glucocorticoid/glucocorticoid receptor,GC/GR）及组蛋白脱乙酰酶2（histone deacetylase 2,HDAC2）及其下游的炎性转录因子途径进行研究。方法 临床招募健康对照者12例,轻中度哮喘患者12例,重度哮喘患者10例,收集其外周血,进行地塞米松（dexamethasone,Dex）抑制IL-8释放试验,检测重度哮喘患者外周血单个核细胞（peripheral blood molecule cells,PBMCs）是否存在激素敏感性下降。通过Western blot和细胞免疫荧光染色法检测PBMCs的GRα蛋白质水平及跨膜转运情况。HDAC2活性试剂盒检测PBMCs核蛋白的HDAC2活性,Western blot检测磷酸化NF-κB、激活蛋白1（activating protein-1,AP-1）的亚基磷酸化c-Jun及磷酸化c-Fos的水平。结果 重度哮喘患者PBMCs在TNFα诱导IL-8释放实验中表现出对Dex敏感性下降;GR总蛋白质水平虽然代偿性升高,但GRα水平下降且向核内转移减弱;HDAC2活性降低,炎性转录因子NF-κB、AP-1亚基被激活。结论 重度哮喘患者的PBMCs中存在激素不敏感,可能是通过HDAC2-NF-κB/Ap-1介导的炎症通路引起了GRα表达量下降和转运能力降低。     

糖皮质激素对COPD与支气管哮喘患者气道炎症影响的探讨

慢性阻塞性肺疾病（COPD）和支气管哮喘是呼吸道最常见的两大疾患,二者的发病率在近年呈上升趋势,大量的研究表明,COPD与哮喘患者血清中的细胞因子IL-4、IL-8、IL-10均参与了二者的气道炎症反应,糖皮质激素对COPD和哮喘患者血清中IL-4、IL-8、IL-10是有影响的,本文就给予糖皮质激素治疗后,COPD和哮喘患者血清中IL-4、IL-8、IL-10的变化在国内外研究进展作一简要综述。     

原发性肾病综合征患者激素敏感性与糖皮质激素受体亚型的关系研究

目的 探讨原发性肾病综合征(PNS)患者对糖皮质激素(以下简称激素)敏感性与其外周血单个核细胞(PBMC)内激素受体(GR)亚型表达的关系.方法 应用流式细胞术(FCM)检测正常对照组(10例)和PNS组(28例,其中激素敏感组10例、激素依赖组10例、激素抵抗组8例)外周血PBMC内α与β亚型表达水平的变化.结果 与正常对照组相比,PNS患者3组中GRα的表达水平均降低,差异有显著性(P< 0 .05 );GRβ在激素抵抗组中表达明显增高,差异有显著性(P<0.01),而在激素敏感组、激素依赖组中表达无明显差异(P>0.05).结论 PNS患者糖皮质激素受体GRα、GRβ表达水平的变化,导致GRα与GRβ比例失调,使组织细胞对激素的敏感性降低,因此,导致PNS患者对糖皮质激素治疗反应不同,PNS出现激素抵抗可能与GRβ表达水平增高有关.     

紫癜性肾炎患儿外周血单个核细胞内GRα和GRβ表达

目的 :探讨过敏性紫癜肾炎 (HSPN )患儿外周血单个核细胞 (PBMC)内糖皮质激素受体 (GR )两种亚型GRα和GRβmRNA表达与糖皮质激素 (GC)治疗效应之间的关系。方法 :应用逆转录聚合酶链反应 (RT -PCR ) ,检测不同激素效应的HSPN患儿 (激素敏感组 10例 ,激素不敏感组 8例 )和正常对照组儿童 ( 8例 )GRα和GRβmRNA表达水平。结果激素不敏感组HSPN患儿PBMC内GRβmRNA表达显著高于激素敏感组 ( P <0 .0 5 。结论 :HSPN患儿PBMC内GRβmRNA的表达增多 ,可能与GC治疗不敏感有关。     

一氧化氮与地塞米松对内毒素肺损伤治疗作用的比较

目的比较一氧化氮(NO)与地塞米松(Dex)对内毒素所致大鼠肺损伤的治疗作用及机制。方法将30只大鼠随机分成对照组、内毒素(LPS)组、Dex组、NO组、Dex NO组,每组6只。通过LPS静脉注射制备大鼠肺损伤模型,观察不同干预方式(Dex腹腔注射和/或NO吸入)对肺损伤的治疗作用。结果LPS组大鼠肺组织出现水肿、出血,大量炎症细胞浸润及弥漫性肺泡塌陷,支气管肺泡灌洗液(BALF)中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)及IL-8水平显著升高,肺组织中核因子κB(NF-κB)核阳性表达细胞增多,糖皮质激素受体(GR)核阳性细胞表达下降,与对照组比较有显著差异(P均<0.05)。予以Dex腹腔注射或/和NO吸入干预后,大鼠肺组织肺泡水肿、炎症细胞浸润及出血均不同程度减轻;BALF中TNF-α、IL-1β及IL-8水平较LPS组降低(P均<0.05);肺组织中NF-κB核阳性表达细胞减少,与LPS组比较有显著差异(P<0.05);干预组肺组织GR核阳性细胞较LPS组明显增多(P<0.01),其中NO组肺组织GR阳性表达高于Dex组(P<0.05)。结论NO及Dex能有效减轻LPS所致的肺部炎症反应,NO还能提高肺损伤时肺组织内GR的表达,增强糖皮质激素的抗炎效果。     

无症状过敏者外周血单个核细胞存在过敏原刺激后的高水平IL-10反应

目的:测定无症状的过敏者外周血单个核细胞(PBMC)经特异性过敏原刺激后CD4+ IL-10+调节性T细胞数量和IL-10水平,并比较其与过敏性哮喘患者和不过敏健康人的差异。方法:选取无症状的尘螨过敏者24例,急性发作期的尘螨过敏性哮喘患者20例,不过敏的健康人22例,均分离PBMC并CFSE染色,分别在不刺激和1 m...     

糖皮质激素对COPD患者血清IL-6、IL-8水平及肺功能的影响

目的观察糖皮质激素对COPD急性加重期患者血清IL-6、IL-8水平及肺功能的影响。方法观察60例60～75岁COPD急性加重期患者,随机分为治疗组和对照组,另选30例健康查体老年人为健康对照组,对照组30例仅采用常规治疗,包括抗生素治疗、氧疗、祛痰、支气管扩张剂等,治疗组30例在常规治疗的基础上加用糖皮质激素,治疗时间1周,于治疗前后测定血清IL-6、IL-8水平及肺功能。结果激素组患者血清IL-6、IL-8及FEV1/FVC在治疗前后有显著性差异(P<0.01),与常规组比较存在显著性差异(P<0.01)。结论糖皮质激素能够有效地抑制COPD急性加重期患者的炎症反应,降低患者血清IL-6、IL-8水平,早期使用,可以有效地改善患者肺功能。     

哮喘患者单核细胞功能学变化与糖皮质激素受体的表达

目的探讨细胞因子及其相互作用对哮喘患者单核细胞(PBMCs)功能的影响,及其与糖皮质激素治疗作用的关系.方法分离受试者PBMCs培养24、48 h,给予TNF-α、IL-2、DXM、IFN-α等因素干预,用免疫细胞化学和放免分析检测细胞中糖皮质激素受体(hGR)亚单位和培养液中IL-6表达.结果哮喘组PBMCs在基础水平和单一细胞因子刺激时均较正常组生成更多IL-6;随细胞因子刺激时间延长,哮喘组生成IL-6增多;IFN-α对TNF-α介导的炎性反应有体外拮抗作用;IL-6水平与细胞的hGRα表达负相关;在该实验条件下,未发现hGRβ表达.结论多种细胞因子以其复杂的交互作用参与哮喘发病过程;糖皮质激素受体亚单位表达的不同直接参与和影响哮喘治疗效果.     

The glucocorticoid resistance in burn and shock

The changes of glucocorticoid receptor (GR) and the reactivity of target cells toglucocorticoids (GC) were studied experimentally.The results showed that GC resistance,which wascaused mainly by the decrease of GR,developed in burned and shocked rats and dogs.Thesechanges may exacerbate the shock state,and even lead to the development of multiple organfailuue.The protection of GC against intestinal ischemic shock of dogs was demonstrated after theconcentration of dexamethasone (Dex) in plasma was elevated to 10~(-6) mol/L by iv injection of 5mgDex/kg body weight.     

糖皮质激素对兔脑、肺和肝组织糖皮质激素受体的调节

采用放射配基结合分析法，研究地塞米松（Ｄｅｘ）对兔脑、肺、肝的糖皮质激素受体（ＧＲ）的调节作用。结果发现，静脉注射Ｄｅｘ５ｍｇ／ｋｇ后兔肺、肝胞液ＧＲ的结合量明显下降，与对照组比较Ｐ＜０．００１，脑胞液ＧＲ与对照组比较无显著差异。提示糖皮质激素（ＧＣ）对兔不同靶器官ＧＲ的调节存在不同特点。     

地塞米松给药及撤药后糖皮质激素受体的表达

目的 观察地塞米松对体外培养人皮肤角质形成细胞--HaCaT细胞糖皮质激素受体(glucocorticoid recep-tor,GR)α仅和β表达的调节以及撤药后GRα、GRβ基因表达的后续变化,并探讨其临床意义.方法 以含10-6mol/L地塞米松的DMEM(高糖)培养基孵育细胞,48 h后换不含地塞米松的培养摹继续孵育.在地塞米松给药后24、48 h以及撤药后24、48、72 h的不同时相点,采用RT-PCR和Western blot检测GRα、GRβ的表达变化,采用免疫荧光化学法观察GRα、GRβ的细胞内定位.结果 地塞米松给药后24、48 h,GRα的mRNA和蛋白质水平逐渐下降(P<0.05),呈时间依赖性,GRβ的mRNA和蛋白质水平均逐渐上升(P<0.05);撤药后24、48、72 h,GRα和GRβ的上述变化不同程度地向原有水平回复.结论 地塞米松下调GRα并上调GRβ,可部分解释持续外用糖皮质激素制剂后出现的激素耐受现象;下调的GRα和上调的GRβ在地塞米松撤药后呈现向其原有水平恢复的趋势,提示临床上外用激素治疗应避免长期使用.     

Effects of Dexamethasone on glucocorticoid receptor expression in a human ovarian carcinoma cell line 3AO

Ourpreviousworkhasshownthatdexamethasone (Dex) ,asyntheticglucocorticoid ,inhibitshumancarcinomacell(3AO)proliferationandinducesdifferentiationinatime andconcentration dependentmanner 1　Butthemolecularmechanismbehindtheseobservationswasunclear Thepresentstudyinvestigatestheexpressionofglucocorticoidreceptor (GR)in 3AOcellsbyDexaswellastheDex inducedcellulareffectsthatweremediatedbyGR METHODSMaterialsRPMI 16 40mediumwasobtainedfromNissuiPharmaceuticalCo ,Ltd (Tokyo ,Japan) 1,2 ,4 …     

Glucocorticoid receptor and heat shock protein 90 in peripheral blood mononuclear cells from asthmatics

目的探讨糖皮质激素受体(GR)和热休克蛋白90(HSP90)mRNA在糖皮质激素敏感型(SS)、依赖型(SD) 和抵抗型(SR)哮喘中的表达及其在SR哮喘发病中的作用。 方法采用反转录-聚合酶链(RT-PCR)的方法分别测定正常人(10例)、SS哮喘(10例)、SD哮喘(5例)和 SR哮喘(6例)的外周血单个核细胞(PBMC)中GR mRNA和HSP90 mRNA的表达,并在体外用IL-2、IL-4分 别、联合刺激上述细胞观察其受刺激后GR mRNA和HSP90 mRNA表达的改变情况。 结果 SR哮喘的GR和HSP90 mRNA表达水平最高(分别为0.730±0.171和1.122±0.165),SS哮喘次之 (分别为0.359±0.350和0.885±0.250),SD哮喘最低(分别为0.017±0.008和0.078±0.039)。正常人有 一定表达(分别为0.052±0.013和0.362±0.101)。GR和HSP90 mRNA的表达各组间相比P＜0.05。正 常人、SS、SD和SR哮喘HSP90/GR的比值分别为7.15±1.84、8.39±7.95、5.51±3.30、1.57±0.18,SR哮喘 HSP90/GR比值明显低于前三组(P＜0.05)。IL-2和IL-4单独刺激对SS、SD和SR哮喘的GR、HSP90 mRNA表达无明显影响,二者联合刺激可使SS、SD和SR哮喘GR mRNA表达以及SS、SD哮喘HSP90 mRNA 表达增强,但不能使SR哮喘HSP90 mRNA表达增强。 结论 SR哮喘中HSP90 mRNA表达相对不足造成HSP90/GR比值降低可能是SR哮喘形成的原因之一, IL-2+IL-4对GR和HSP90 mRNA表达的不同调节作用可能是形成SR哮喘HSP90/GR比值降低的原因之一。     

热休克蛋白90和糖皮质激素受体比例失衡对哮喘患者T淋巴细胞凋亡的影响

目的探讨热休克蛋白90(HSP90)与糖皮质激素受体(GR)比例失调对T淋巴细胞凋亡的作用,同时观察地塞米松(Dex)对HSP90和GR mRNA表达的影响.方法选择10例哮喘患者和7例正常对照,利用格尔得霉素(GA)特异性阻断HSP90的作用, 造成功能性HSP90与 GR比例降低,用碘化丙啶(PI)染色流式细胞仪计数凋亡细胞的方法,观察用Dex和GA处理的T细胞凋亡情况;用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法观察Dex和GA处理对哮喘T淋巴细胞HSP 90和GR mRNA 表达的影响.结果 Dex可明显诱导哮喘T淋巴细胞的凋亡(3 3 .8%±3.2% 比 23.2%±1.5%,P<0.01),GA对T淋巴细胞的凋亡无明显影响,却可阻断Dex诱导T淋巴细胞凋亡的作用(24.5%±6.0% 比 33.8%±3.2%, P<0.01);De x对正常人T淋巴细胞的凋亡有诱导作用,但其程度较弱(25.9%±3.5% 比 23.1%±1.5%, P<0.05).Dex可抑制哮喘患者T淋巴细胞HSP90和GR 的表达(分别为1.23±0.16比1.68±0.38 和 0.42±0.06比0.54±0.07, P 均<0.05),GA对 Dex的这一作用有阻断作用,但GA本身对HSP90和GR mRNA的表达无明显影响.结论 HSP90/GR 比例降低可影响Dex诱导的T细胞凋亡;Dex对哮喘患者GR和HSP90mRNA的表达有下调作用,而 Dex的这一作用可被GA所阻断.     

不同剂量地塞米松对脓毒症小鼠肺组织糖皮质激素受体-α表达及肺损伤的影响

目的 观察不同剂量地塞米松(Dex)对脓毒症小鼠急性肺脏损伤的影响。方法 92只雄性昆明种小鼠随机分为假手术组(12只)、脓毒症组(20只)及Dex干预组(生理剂量组、应激剂量组和大剂量组,各20只)。采用盲肠结扎穿孔术复制脓毒症模型。术后24h时观察肺组织病理学改变,免疫组织化学法检测肺组织中糖皮质激素受体-α(GR-α)和核转录因子-κB(NF-κB)蛋白的表达,实时荧光定量PCR检测肺组织中GR-α 和NF-κB mRNA的表达,酶联免疫吸附法测定血浆中TNF-α、IL-1β水平。 结果①与脓毒症组相比,Dex干预组肺损伤均有所减轻,但仅其中的生理剂量组和应激剂量组明显减轻(P均＜0.05)。②生理剂量组和应激剂量组肺组织GR-α蛋白的表达均高于脓毒症组(P均＜0.05)。③生理剂量组和应激剂量组肺组织GR-α mRNA表达水平高于脓毒症组和大剂量组(P＜0.05);Dex干预组肺组织NF-κB mRNA表达与脓毒症组相比,差异无统计学意义(P＞0.05 )。④生理剂量组和应激剂量组血浆TNF-α、IL-1β含量低于脓毒症组和大剂量组(P＜0.05)。结论 在脓毒症小鼠模型中,生理剂量和应激剂量Dex均可上调肺组织GR-α的表达,减轻炎症反应与肺损伤程度,其作用均明显优于大剂量Dex。     

人参茎叶皂苷对失血性休克大鼠糖皮质激素受体的影响

目的 观察人参茎叶皂昔(ginsenosides，GSS)对失血性休克大鼠糖皮质激素受体(GR)的影响，并分析其作用机制，为研制及时抢救失血性休克患者的天然药物制剂提供实验依据。方法 雄性SD大鼠随机分为失血性休克组和对照组，失血性休克组分别每日ig200，100，50mg／kg GSS水溶液，对照组和模型组ig蒸馏水2mL，共10d。以[^3H]地塞米松为配体，用一点分析法测脑和肝胞液GR结合活性(Rs)、半定量RT—PCR方法测肝胞液GR mRNA水平、放免法测血浆促肾上腺皮质激素(ACTH)和皮质酮(GC)浓度。结果 GSS组大鼠脑和肝胞液的GR结合活性高于单纯失血性休克组，其中以中剂量组最明显(P＜0．01)；GSS组大鼠肝胞液GR mRNA表达水平高于单纯失血性休克组；GSS组大鼠血浆ACTH和GC浓度和单纯失血性休克组没有明显差别。结论 GSS可减轻失血性休克大鼠GR结合活性的下降幅度，作用机制可能与其促进了GR mRNA表达有关，并可能存在一个最佳剂量。     

糖皮质激素炎症通路研究现状

糖皮质激素(glucocorticoid,GC)由于其强大的抗炎和免疫抑制等作用被广泛应用于临床.但是,随着对GC认识的深入,研究者们发现GC还能发挥促炎作用,这种效应甚至是机体活动所必须的.机体对GC的反应取决于GC的浓度、机体免疫系统的生理状态、刺激持续时间(急性或慢性)以及疾病的类型等.此外,越来越多的患者出现了对GC反应性差甚至是无反应的状况,临床上常称之为糖皮质激素抵抗(glucocorticoid resistance,GCR).GC炎症通路上的糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)和下游炎症因子都可能导致GCR的发生.因此,本文就GC炎症通路研究现状等方面进行相关综述.