加味四君子汤干预脾气虚肺癌survivin基因研究

目的:探讨加味四君子汤对脾气虚肺癌survivin基因的影响。方法:用苦寒泻下、劳倦、饮食节制复合因素法成功建立小鼠脾气虚证模型后,按实验设计方案处理各组小鼠,同时观察小鼠的整体情况。第17天,摘取肺组织,检测肺组织匀浆上清液中TNF-α。造模后以加味四君子汤灌胃14 d,脱颈椎处死小鼠,剥取肿瘤组织计算瘤重及采用RT-PCR方法检测肿瘤组织中survivin基因表达。结果:脾气虚小鼠的整体状况低下,肺组织匀浆中TNF-α与正常组比较差异有统计学意义(P<0.01)。加味四君子汤可明显改善脾气虚肺癌小鼠的整体情况,升高小鼠脾指数,抑制肺癌生长且可下调脾气虚肺癌组织survivin基因表达。结论:加味四君子汤可以抑制脾气虚证肺癌小鼠肿瘤的生长,其机制可能与下调survivin基因表达有关。     

加味黄芪建中汤对脾虚证肺癌小鼠肿瘤转移及HIF-1α、V-ATPase c mRNA表达的影响

目的:探讨加味黄芪建中汤对脾虚证肺癌小鼠肿瘤转移及HIF-1α、V-ATPase c mRNA表达的影响。方法:复因素法建立脾虚证小鼠模型,进行分组并接种Lewis肺癌瘤株后的第10天,取肺及肿瘤组织,压片法计肺转移结节数,RTPCR法检测V-ATPase c mRNA的表达,Power Vision法检测HIF-1α的表达。结果:与肺癌对照组比较,肺癌脾虚组小鼠肺转移结节数增多(P<0.05),与脾虚肺癌组比较,脾虚肺癌治疗组肺转移结节数减少,HIF-1α表达下调(P<0.01)。结论:加味黄芪建中汤对小鼠肿瘤转移有抑制作用,其机制可能与肿瘤微环境的HIF-1α表达下调有关。     

黄芪建中汤抑制脾气虚证肺癌小鼠肿瘤转移的实验研究

目的:探讨黄芪建中汤对脾气虚证肺癌小鼠抑制肿瘤转移的作用机制。方法:苦寒泻下法建立小鼠脾气虚证Lewis肺癌模型,模型成功建立后,按实验设计方案处理各组小鼠,同时观察小鼠的整体情况。14 d后,眼球取血,检测血清木糖水平,28 d后,取胸腺、肺及肿瘤组织。分别称取每只小鼠胸腺重量、体重,计数肺转移结节数,计算胸腺指数,采用RT-PCR方法检测nm23、CD44的表达。结果:脾气虚小鼠的整体状况及免疫功能降低,高剂量黄芪建中汤可明显改善脾气虚证Lewis小鼠的整体情况,升高小鼠胸腺指数,结节数少于模型组;黄芪建中汤各剂量组均可下调CD44-mRNA的表达、上调nm23-mRNA的表达。结论:高剂量黄芪建中汤对脾气虚证肺癌小鼠肿瘤的转移具有一定的抑制作用能够,其机制可能与提高胸腺指数,下调CD44-mRNA及上调nm23的表达有关。     

加味黄芪建中汤对脾气虚证Lewis肺癌小鼠CXCL12、CXCR4、TGF-β基因表达的影响

目的:研究加味黄芪建中汤对脾气虚证肺癌小鼠趋化因子受体4(CXCR4)、趋化因子12(CXCL12)、转化生长因子-β(TGF-β)基因表达的影响。方法:采用苦寒泻下、劳倦、节食的方法建立小鼠脾气虚证小鼠模型,小鼠右腋部皮下接种肿瘤细胞建立Lewis肺癌模型。小鼠分为正常组、脾气虚组、肺癌组、脾气虚肺癌组、脾气虚肺癌黄芪组,其中脾气虚肺癌黄芪组用中药加味黄芪建中汤灌胃,其余各组均用0.9%NaCl溶液灌胃;连续灌胃9 d。Real-time PCR方法检测肿瘤组织CXCR4、CXCL12、TGF-β的mRNA表达。结果:与肺癌组比较,CXCL12 mRNA水平明显增高(P0.05);与脾气虚肺癌组比较,脾气虚肺癌黄芪组CXCL12 mRNA表达水平明显降低(P0.01)。肺癌组、脾气虚肺癌组和脾气虚肺癌黄芪组的CXCR4、TGF-β的mRNA表达差异无统计学意义(P0.05);脾气虚肺癌黄芪组和脾气虚肺癌组CXCL12 mRNA与CXCR4 mRNA的表达呈正相关(P0.05,P0.01)。结论:加味黄芪建中汤抑制了肿瘤微环境中的趋化因子CXCL12基因的高表达,影响CXCL12/CXCR4通路,可能通过解除肿瘤微环境免疫抑制网络的形成而达到治疗肿瘤的目的。     

加味四君子汤对lewis肺癌小鼠缺氧诱导因子-1α基因、CXC型趋化因子受体4基因及D-木糖的影响

目的探讨加味四君子汤对肺癌小鼠可能作用机制及肺癌对小鼠消化系统的影响。方法建立小鼠Lewis肺癌模型,模型成功建立后,加味四君子汤灌胃14d,第15天脱颈椎处死小鼠,取肿瘤组织采用Real-timePCR方法检测缺氧诱导因子-1a基因（HIF-ls）、CXC型趋化因子受体4基因（CXCR4）的表达;取血清采用间苯三酚法检测D-木糖。结果加味四君子汤干预lewis肺癌小鼠后,肺癌健脾组与肺癌组的HIF．Is、CX。CR4mRNA有统计学意义（P〈0．01）;肺癌组和肺癌健脾组与正常组相比均有统计学意义（P〈0．01）。结论加味四君子汤对肺癌有抑制作用,肺癌能降低小鼠消化吸收功能。     

加味四君子汤对H22肝癌小鼠的抑瘤作用和免疫功能的影响

目的探讨加味四君子汤的体内抑瘤活性及对肝肾毒性、免疫系统的影响。方法建立H22荷瘤小鼠模型,将荷瘤小鼠分 为空白组、模型组、环磷酰胺组、加味四君子汤低、中、高剂量组。通过计算抑瘤率,观察肿瘤组织HE染色病理切片,免疫组化法 检测Bax、Bcl-2、Bax/Bcl-2及caspase-3水平研究加味四君子汤的抑瘤活性及相关机制;通过肝肾生化指标观察加味四君子汤的 肝肾毒性;通过计算荷瘤小鼠免疫器官指数、外周血检测血常规和酶联免疫法检测小鼠血清的IL-2、TNF-α的水平探讨加味四君 子汤对H22荷瘤小鼠免疫功能的影响。结果环磷酰胺组、加味四君子汤中剂量、高剂量组的肿瘤质量均低于模型组（P<0.05）, 抑瘤活性差异均有统计学意义;其肿瘤细胞有不同程度的破裂坏死,免疫组化各实验组能有效上调Bax和caspase-3蛋白表达, 下调Bcl-2蛋白表达,提高Bax/Bcl-2比值。同时,加味四君子汤降低了荷瘤小鼠的Cr、BUN、AST与ALT水平,提高了免疫器官 指数和外周血白细胞、红细胞和血红蛋白含量,上调了TNF-α、IL-2 水平,其中,高剂量组与模型组差异具有统计学意义（P< 0.01）。结论加味四君子汤具有较好的体内抑瘤活性,能改善荷瘤小鼠的肝肾功能,其抑瘤作用可能与上调Bax、caspase-3表 达、TNF-α和IL-2水平,下调Bcl-2蛋白表达以及增强小鼠的非特异性免疫功能有关。     

补肾及健脾复方对皮质酮大鼠T细胞凋亡信号相关基因群调控模式的对比研究

目的:探讨补肾及健脾复方对皮质酮大鼠T细胞凋亡信号相关基因表达的调控模式.方法:采用TUNEL标记的流式细胞技术,对皮质酮大鼠模型及各治疗组激活诱导的T细胞凋亡进行定量分析;采用荧光实时定量PCR技术对各组大鼠T细胞凋亡信号相关基因群mRNA表达水平进行定量与比较;采用分光光度法检测caspase-8、caspase-3的活性.结果:(1)与正常组相比,模型组T细胞凋亡百分率明显增高;右归饮组及补肾益寿胶囊组T细胞凋亡百分率与皮质酮模型组相比明显降低;四君子汤与模型组相比T细胞凋亡百分率无显著性差异.(2)模型组促凋亡的Fas、FasL、TNR1、Bax基因表达上调,抗凋亡的TNFR2、Bcl-2、cIAP1、cIAP2基因表达下调;两个补肾复方均可下调FasL、TNFR1 mRNA表达水平,并可上调Bcl-2、cIAPl、cIAP2 mRNA表达水平;四君子汤仅对Bcl-2,cIAP2 mRNA表达水平有显著上调作用.(3)模型组caspase-8、caspase-3活性显著增高,两个补肾复方均可降低caspase-8、caspase-3的活性,四君子汤对caspase-8、caspase-3的活性无显著下调作用.结论:两个补肾复方下调促凋亡基因FasL、TNFR1的转录,上调抗凋亡基因Bcl-2、cIAPl、cIAP2的转录,并且降低caspase-8、caspase-3的活性,从而降低皮质酮大鼠过度的T细胞凋亡,是补肾法特有的对皮质酮大鼠T细胞凋亡相关基因群的调控模式.     

金匮肾气丸对肾阳虚模型小鼠肺和气道组织GR、β-防御素-2表达的调控作用

目的:探讨金匮肾气丸对肾阳虚模型小鼠气道和肺组织中糖皮质激素受体(GR)、β-防御素-2(BD-2)及其mRNA表达的影响和意义。方法:用腺嘌呤灌胃复制小鼠肾阳虚模型,并在腺嘌呤灌胃的同时予金匮肾气丸灌胃干预,通过免疫组化法(SP)测定肺及气道组织GR和BD-2的表达水平,原位杂交(ISH)法对GR和BD-2 mRNA表达进行定位定量分析。结果:与正常对照组比较,肾阳虚组肺和气道组织GR及其mRNA表达下调(P<0.05),BD-2及其mRNA表达上调(P<0.05),肺组织呈炎症改变;与肾阳虚组比较,金匮肾气丸组GR及其mRNA表达上调(P<0.05),BD-2及其mRNA无统计学差异(P>0.05),但肺组织炎症程度减轻。结论:金匮肾气丸可通过上调肾阳虚小鼠肺和气道组织GR及其mRNA表达而抑制肺组织炎症,这可能是金匮肾气丸纠正肾阳虚证的分子机制之一。     

脾气虚证肺癌小鼠血清IL-12，IL-10的表达及加味黄芪建中汤的影响

目的 研究脾气虚证肺癌小鼠血清IL-12、IL-10的表达及加味黄芪建中汤影响。方法 采用苦寒泻下，劳倦，节食的方法造模，在建立小鼠脾气虚证Lewis肺癌模型后，按实验设计方案处理各组小鼠。造模后加味黄芪建中汤灌胃，脱颈椎处死小鼠，取血清。分别称取每只小鼠瘤重，ELISA方法检测肺癌小鼠血清IL-12，IL-10。结果 “脾气虚”可明显影响肺癌小鼠血清IL-12、IL-10的表达；加味黄芪建中汤可下调肺癌小鼠血清IL-10（P<0.05）的表达，上调肺癌小鼠血清IL-12（P<0.05）的表达。结论 “脾气虚”可导致肺癌小鼠Th细胞的异常漂移，可能是肺癌小鼠免疫调节紊乱的一种表现失调；加味黄芪建中汤有助于恢复肺癌小鼠免疫调节。     

健脾补肾方对小鼠肠癌原位移植瘤肺转移及MMP-2蛋白表达的影响

目的:探讨健脾补肾方对肠癌原位移植瘤小鼠肺转移以及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)蛋白表达的影响。方法:建立小鼠肠癌原位移植瘤模型,将小鼠随机分为模型组(生理盐水组)及健脾补肾方高、中、低剂量组,每组6只。各组予相应的药物每日灌胃给药1次,连续治疗14 d,于末次给药结束后处死动物,HE染色观察肺转移情况,免疫组化及Western Blot法检测MMP-2的蛋白表达。结果:健脾补肾方各剂量组的肺转移面积明显小于生理盐水组;健脾补肾方各剂量组MMP-2多呈弱或中阳性表达,而生理盐水组呈强阳性表达,MMP-2蛋白在健脾补肾方各剂量组的表达均低于生理盐水组(P<0.05)。结论:健脾补肾方具有抑制小鼠肠癌原位移植瘤模型肺转移的作用,并可能与下调MMP-2蛋白的表达有关。     

雷火灸联合四君子汤治疗肺脾气虚型慢性咽炎的疗效及对炎性因子、免疫因子水平的影响

目的  观察雷火灸联合四君子汤治疗肺脾气虚型慢性咽炎的疗效及对炎性因子、免疫因子水平的影响。方法  选取60例肺脾气虚型慢性咽炎患者随机分为观察组和对照组, 每组30例, 观察组给予雷火灸联合四君子汤加减治疗, 对照组给予常规西药治疗, 每个疗程7 d, 共4个疗程。观察2组患者治疗前后白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白E(IgE)及分泌型免疫球蛋白A(SIgA)水平、中医证候积分变化及临床疗效。结果  治疗后, 2组中医证候积分明显改善(P < 0.05, P < 0.01), 观察组优于对照组(P < 0.05, P < 0.01)。2组患者炎性因子IL-6、TNF-α及免疫因子IgE水平下降, 免疫因子IgA、SIgA水平上升(P < 0.01), 观察组优于对照组(P < 0.05, P < 0.01)。结论  雷火灸联合四君子汤加减治疗能明显改善肺脾气虚型慢性咽炎患者咽部症状, 其机制与降低体内炎症因子IL-6、TNF-α水平及免疫因子IgE水平, 提高免疫因子IgA、SIgA水平, 增强全身免疫力,改善局部环境有关。      

四君子汤治疗脾胃气虚证的研究进展

四君子汤在治疗内、外、妇、儿各科以及各系统脾胃气虚证疗效显著,不仅能提高机体的免疫功能、造血功能,改善中医偏颇体质,还可显著减轻西药对机体产生的副作用及不良反应。本文对四君子汤治疗脾胃气虚证的现代临床应用和实验研究进展综述,为临床进一步研究奠定基础,同时为四君子汤在脾胃气虚型亚健康领域的应用提供研究思路。     

扶正益气中药对脾虚大鼠脑内IL-6Rα水平及其基因表达的影响

目的研究脾虚大鼠脑内白介素-6受体α（interleukin-6receptora,IL-6Rα）水平及其mRNA表达的变化,以及扶正益气中药的干预作用。方法将40只SPF级雄性Wistar大鼠分为正常组、模型组、治疗1组（四君子汤治疗）、治疗2组（玉屏风散治疗）。采用耗气破气、饮食失节、劳倦过度结合的方法,复制脾虚动物模型;采用免疫组织化学法测定大鼠脑内IL-6Rα水平,原位杂交法测定大鼠脑内IL-6RamRNA表达的变化。结果与正常组比较,模型组大鼠海马CAI区和下丘脑腹侧核IL-6Rα水平及IL-6RamRNA表达水平显著升高（P〈0．01）;与模型组比较,治疗1组和治疗2组IL-6Rα水平及IL-6RαmRNA表达水平显著降低（P〈0．01）;治疗1组与治疗2组IL-6Ra水平及IL-6RamRNA表达水平比较,差异无显著性。结论脾虚可导致IL-6Rα水平及其mRNA表达水平异常,扶正益气类中药四君子汤、玉屏风散可以通过调节IL-6Rα水平及其mRNA表达水平,改善机体防御功能。     

两种不同剂型四君子膏对脾气虚模型大鼠胃肠功能、AchE及NOS水平的影响

目的:观察颗粒剂四君子膏和传统四君子膏对脾气虚模型大鼠胃肠功能、Ach E及NOS水平的影响。方法:60只SD大鼠(雌雄各半)随机分为正常组对照、模型对照组、颗粒剂四君子膏组(颗粒膏组)、传统四君子膏方组(传统膏组)、四君子汤组(汤剂组)。采用耗气破气+劳倦过度+饥饱失常法连续造模3周,复制脾气虚证大鼠模型,颗粒膏组、传统膏组、四君子汤组分别给予相应药物10 mL·kg^-1灌胃4周。第4周末,各组大鼠腹主动脉取血,取空肠组织,HE染色观察大鼠空肠组织病理形态学变化;通过酶联免疫法、免疫组织化学法检测各组大鼠乙酰胆碱酯酶(acetylcholin esterase,AchE)、一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)水平;并计算胃残留率、小肠推进率。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清及小肠组织AchE水平显著降低、模型组NOS水平显著升高、模型组大鼠胃残留率显著升高、模型组小肠推进率显著下降(P<0.05,P<0.01);经不同剂型四君子方治疗后,治疗组AchE水平显著上升、NOS水平显著下降,与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);颗粒膏组血清AchE、空肠NOS水平及小肠推进率与传统膏组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:颗粒剂四君子膏方和传统四君子膏方两种剂型均可通过提高AchE水平,降低NOS活力改善大鼠胃肠平滑肌收缩和舒张运动,达到益气健脾的功效。因两种四君子膏剂型有差异,颗粒剂四君子膏可以通过提高AchE水平和小肠推进率,降低NOS活力起到益气健脾的功效。     

脾虚大鼠中枢单胺类神经递质含量及四君子汤干预的研究

目的 研究脾虚大鼠中枢单胺类神经递质含量的变化和四君子汤干预的途径.方法 将60只大鼠分为空白对照组、脾虚组、四君子汤组,每组各20只,使用高效液相检测大鼠纹状体中5-HT、DA、5-HIAA、DOPAC和HVA的含量.结果 与对照组比较,脾虚组大鼠纹状体内5-HT(2.25±0.78)ng/mg水平显著升高,DA(26.06±9.01)ng/mg水平显著下降(P<0.01);脾虚大鼠使用四君子汤干预后,纹状体内5-HT(1.86±0.53)ng/mg和DA(38.95±10.86)ng/mg水平基本恢复正常,与对照组差异无显著性,而DA水平与脾虚组大鼠差异有显著性(P<0.05).结论 脾虚证大鼠纹状体中的单胺类神经递质的含量异常,脾虚证存在有中枢机制,健脾名方四君子汤可以调节脾虚大鼠中枢单胺类神经递质含量.     

NF-ATc在肝气郁结、脾气虚证模型大鼠的表达以及柴胡疏肝散、四君子汤的干预作用

目的探讨肝郁证、脾虚证的分子免疫学机制及二者的相互关系。方法应用RT-PCR法以及Western-blot法检测柴胡疏肝散、四君子汤对肝郁证、脾虚证模型大鼠T细胞NF-ATcmRNA及蛋白质表达水平影响。结果与正常组比较,肝郁组NF-ATcmRNA及蛋白质表达较明显降低(P<0.05),脾虚模型大鼠NF-ATcmRNA及蛋白质表达则明显升高(P<0.05)。用柴胡疏肝散治疗后,与正常组比较,肝郁组NF-ATcmRNA及蛋白质表达上调,基本恢复了正常水平(P>0.05),脾虚组则无明显变化(P<0.05);而四君子汤治疗后,脾虚组NF-ATcmRNA及蛋白质表达下调(P>0.05),肝郁组则无明显变化(P<0.05)。结论肝郁证与脾虚证的免疫功能失调与NF-ATc的表达异常密切相关;NF-ATc通过调节肝郁证与脾虚证的不同细胞因子的表达,介导二者Th0细胞向Th1、Th2不同的方向分化;柴胡疏肝散、四君子汤通过不同的免疫调节功能,调节NF-ATc表达,使其恢复正常水平。     

消岩汤剂治疗晚期非小细胞肺癌临床研究

[目的]观察消岩汤剂治疗非小细胞肺癌的临床疗效。[方法]将中医辨证为正气内虚、瘀毒并存的101例肺癌患者随机分为消岩汤剂组(A组)、消岩汤剂加化疗组(B组)及单纯化疗组(C组)进行对比观察。[结果]A组(33例)治疗后完全缓解(CR)、部分缓解(PR)、无变化(NC)0%、9%、70%,B组(37例)治疗后为27%、32.4%、56.0%,C组(31例)治疗后为0%、24%、33%。远端转移率为A组23%、B组为16%、C组为28%等。[结论]消岩汤剂在抑制肺癌生长、转移、提高患者生活质量及免疫功能,并且对化疗的减毒增效方面具有一定的作用。     

加味四君子汤对小鼠CT26大肠癌移植瘤的抑制作用及肿瘤相关巨噬细胞CD68、CD206蛋白表达的影响

目的:观察加味四君子汤对小鼠CT26大肠癌移植瘤的抑制作用及肿瘤相关巨噬细胞CD68、CD206蛋白表达的影响。方法:取大肠癌CT26细胞体外培养,建立BALB/C小鼠大肠癌皮下移植瘤模型。取造模成功的BALB/C小鼠随机分为模型组和加味四君子汤低、中、高剂量组,每组5只。加味四君子汤各组小鼠分别灌胃给予0.035、0.07、0.14 g/g药液,模型组小鼠灌胃给予等体积0.9%NaCl溶液,连续21 d。末次给药后,剥离瘤体,测量移植瘤体积并计算抑瘤率;免疫组化检测各组小鼠瘤体组织中肿瘤相关巨噬细胞CD68和CD206的蛋白表达。结果:药物干预21 d后,与模型组相比,加味四君子汤中剂量组小鼠的移植瘤体积显著减小(P0.05),肿瘤生长抑制率显著升高(P0.05),且其抑瘤效果明显优于低、高剂量组(P0.05)。免疫组化观察显示,与模型组相比,加味四君子汤中剂量组小鼠瘤体组织内肿瘤相关巨噬细胞CD68和CD206表达显著降低(P0.01);且中剂量组对CD68和CD206表达的抑制作用明显强于低、高剂量组(P0.05,P0.01)。结论:加味四君子汤能有效抑制小鼠CT26大肠癌移植瘤生长,其作用机制可能与下调肿瘤相关巨噬细胞CD68和CD206的表达有关。