华支睾吸虫合并HBV感染对肝星状细胞和巨噬细胞作用的体外研究

目的华支睾吸虫合并HBV感染对肝星状细胞和巨噬细胞的作用。方法以华支睾吸虫分泌排泄蛋白(CsESP)(10μg/mL)合并HepG2.2.15细胞(5×10~5个)共孵育人肝星状细胞(LX-2),同时设10μg/mL CsESP、5×10~5个HepG2.2.15单独处理组和PBS组。荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各组肝纤维化相关指标α-平滑肌蛋白(α-SMA)、胶原蛋白Collagen-Ⅰ、Collagen-Ⅲ的转录水平;利用CsESP(10μg/mL)合并乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)(5μg/mL)共同刺激巨噬细胞RAW264.7细胞,同时设10μg/mL CsESP、5μg/mL HBeAg单独处理组和PBS组,qRT-PCR法检测各组一氧化氮合酶(iNOS)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β(TGF-β)、白细胞介素6(IL-6)、NLRP3炎症小体、白细胞介素-1β(IL-1β)的表达情况,同时使用流式细胞术检测其凋亡水平变化。结果 qRT-PCR法检测结果显示,CsESP合并HepG2.2.15处理组中LX-2细胞α-SMA和Collagen-Ⅰ的m RNA水平与CsESP或HepG2.2.15单独处理组相比显著上升,差异有统计学意义(P0.05),而Collagen-Ⅲ表达变化不明显。CsESP与HBeAg共处理诱导RAW264.7细胞中NLRP3、IL-1β、IL-6、TGF-β、TNF-α和iNOS的mRNA水平与CsESP或HBeAg单独刺激组相比显著上升,差异有统计学意义(P0.05)。CsESP与HBeAg共处理组凋亡细胞比率为16.35%,明显高于CsESP、HBeAg单独处理组的6.03%和12.52%,差异有统计学意义(P0.05)。结论华支睾吸虫合并HBV感染体外可促进肝星状细胞的激活,并可促进巨噬细胞炎症因子的释放及细胞凋亡,可能促进肝脏炎症、肝纤维化的进展。     

黄芪多糖和黄芪总甙调控LX-2细胞因子分泌

目的:用黄芪多糖和黄芪总甙对LX-2细胞分泌的与纤维化相关的主要细胞因子进行研究,以探讨黄芪抗纤维化的确切分子机制。方法:不同浓度的黄芪多糖和黄芪甙作用于LX-2细胞,以Real Time Cell Electronics Sensing技术实时检测细胞增殖状态;分别再以25μg/ml和300μg/ml的黄芪多糖和黄芪总甙作用LX-2细胞24 h,提取细胞mRNA,以荧光定量PCR测定转化生长因子1(TGF-β1)、肝细胞生长因子(HGF)、基质金属蛋白酶2(MMP2)及基质金属蛋白酶9(MMP9)mRNA的变化。结果:300μg/ml的黄芪多糖可抑制LX-2的增殖(P<0.05,94.7 h),但不同浓度的黄芪总甙对LX-2细胞均有促进增殖的作用(P<0.05);25μg/ml的黄芪多糖和黄芪总甙在TGF-β1促进分泌的同时,也上调其它抗纤维化因子,其中黄芪多糖对MMP2的上调(104.9倍)、黄芪总甙对IL-10的上调(550.65倍)最为显著;300μg/ml的黄芪多糖可抑制TGF-β1及HGF、MMP9、IL-10的表达,但仍然上调MMP2的表达,300μg/ml的黄芪总甙也可抑制TGF-β1的表达,但对抗纤维化因子MMP2、MMP9及IL-10仍有明显的上调作用。结论:低浓度(25μg/ml)和高浓度(300μg/ml)的黄芪多糖和黄芪总甙可通过不同的分子机制调控肝星状细胞因子的分泌而发挥抗纤维化作用;黄芪多糖主要以促进MMP2分泌为主,而黄芪总甙则主要通过上调MMP2、MMP9及IL-10的分泌而发挥作用。高剂量的黄芪多糖和总甙抗纤维化效果优于低剂量组。     

黄芪总苷上调miRNA-744表达抑制肝星状细胞活化的效应机制

目的:探析黄芪总苷抑制肝星状细胞活化的作用机制。方法:(1)以转化生长因子β_1(TGF-β_1,2.5 ng/ml)诱导人肝星状细胞株LX-2细胞活化,并给予不同浓度黄芪总苷(1.25、2.5、5、10、20、30、40μg/ml)。药物作用24 h后,Edu掺入法检测细胞增殖,筛选适合的药物浓度。(2)将LX-2细胞分为对照组、TGF-β_1(2.5 ng/ml)组、TGF-β_1+黄芪总苷(20μg/ml)组、TGF-β_1+SB431542(10μmol/L)组。各组给予相应干预24 h后,PCR检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)、TGF-β_1、miRNA-744基因表达;Western blot检测ColⅠ、TGF-β受体Ⅰ(TβRⅠ)、Smad2、p-Smad2、Smad7的蛋白表达;免疫荧光检测纤维状肌动蛋白(F-actin)表达。(3)取细胞分别加入miRNA-744激动剂(50 nmol/L)、miRNA-744拮抗剂(100 nmol/L)或阴性对照试剂,构建相应的转染细胞。在3种体系的转染细胞,将细胞分为对照组、TGF-β_1(2.5 ng/ml)组、TGF-β_1+黄芪总苷(20μg/ml)组、黄芪总苷(20μg/ml)组。各组给予相应干预24 h后,Edu掺入法检测细胞增殖,免疫荧光检测F-actin表达。结果:(1)20、30和40μg/ml黄芪总苷可显著抑制TGF-β_1诱导的LX-2细胞增殖,选用20μg/ml的剂量进行后续实验。(2)TGF-β_1组细胞F-actin、α-SMA、ColⅠ、TGF-β_1和TβRⅠ的表达以及p-Smad2/Smad2蛋白表达比值较对照组显著升高(P0.05,P0.01);而与TGF-β_1组相比,TGF-β_1+黄芪总苷组细胞F-actin、α-SMA、ColⅠ、TGF-β_1和TβRⅠ的表达以及p-Smad2/Smad2蛋白表达比值显著降低(P0.05,P0.01)。TGF-β_1组细胞Smad7和miRNA-744的表达较对照组显著降低(P0.05,P0.01),而TGF-β_1+黄芪总苷组细胞Smad7和miRNA-744的表达较TGF-β_1组显著升高(P0.01)。(3)与阴性对照组相比,miRNA-744拮抗剂作用可显著升高LX-2细胞的Edu阳性染色细胞占比和F-actin表达(P0.05),且对TGF-β_1诱导的LX-2细胞具有相似效应。在miRNA-744拮抗剂构建的转染细胞,给予黄芪总苷协同干预后,Edu阳性染色细胞占比和F-actin表达显著降低(P0.05,P0.01)。结论:黄芪总苷通过上调miRNA-744表达,抑制TGF-β/Smad信号通路,进而抑制肝星状细胞活化。     

蒿鳖养阴软坚方对TGF-β1诱导的肝纤维化的作用

目的:研究蒿鳖养阴软坚方在体外对LX-2细胞的影响,从而探讨蒿鳖养阴软坚方对TGF-β1诱导的肝纤维化的作用。方法:体外培养人肝星状细胞LX-2,实验分为正常对照组、TGF-β1刺激组和蒿鳖养阴软坚方低、中、高浓度给药组。MTT法检测LX-2细胞增殖情况;比色法检测细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）的活性;酶消化法检测细胞上清羟脯氨酸（Hyp）的含量;Western blot法检测collagen Ι以及α-SMA蛋白表达量。结果:TGF-β1作用于LX-2能够明显促进细胞的增殖,collagen I、α-SMA的表达量显著升高。蒿鳖养阴软坚方能抑制LX-2细胞增殖并且能够降低collagen Ι和α-SMA的表达。结论:蒿鳖养阴软坚方能够显著抑制LX-2增殖,下调collagen Ι和α-SMA的表达,降低Hyp生成,从而发挥抗肝纤维化的作用。     

复方861对人肝星状细胞α-平滑肌肌动蛋白mRNA表达的调节作用

目的 研究复方861对人肝星状细胞(LX-2)中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)基因表达的调节作用。方法应用基于SYBR-Green Ⅰ的实时定量荧光PCR方法，研究复方861分别作用24、48、72h后，LX-2细胞中α-SMAmRNA含量的变化情况。结果 复方861在48和72h可以显著降低LX-2细胞中α-SMA mRNA含量。结论 复方861可抑制LX-2细胞中α-SMA基因的表达，提示其抗肝纤维化作用可能与其抑制I，X-2细胞的活化有关。     

Wnt5a对肝星状细胞增殖、迁移和衰老的调控作用

目的 寻找抗纤维化的治疗方案和治疗靶点具有重要意义。文章旨在探讨Wnt蛋白家族成员5a(Wnt5a)对肝星状细胞(HSCs)增殖、克隆形成、迁移能力以及衰老的影响。方法 构建胆汁淤积性肝纤维化大鼠模型，利用芯片分析差异表达的基因。用不同浓度的TGF-β₁刺激肝星状细胞，将实验分为3组，分别为只加完全培养基的对照组以及用5μg/L和10μg/L TGF-β₁刺激的处理组，通过qRT-PCR、Western blot和免疫荧光检测平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原α1(COL1A1)和Wnt5a的表达。Wnt5a的siRNA(si-Wnt5a)转染LX-2细胞后，通过qRT-PCR和Western Blot检测LX-2细胞中α-SMA、COL1A1、Wnt5a的mRNA和蛋白表达；通过CCK-8、集落形成、Transwell、划痕、β-半乳糖苷酶染色分别检测LX-2细胞的增殖、集落形成、迁移能力以及细胞的衰老情况。利用生物信息学网站预测与Wnt5a有靶向关系的miRNAs, STRING数据库分析与Wnt5a有相互作用的蛋白，并用Cytosc...     

马兜铃酸对体外培养大鼠近端肾小管上皮细胞的损伤作用

目的:观察马兜铃酸(aristolochic acid,AA)对体外培养的大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK-52E)的损伤作用。方法:体外培养NRK-52E,分别以不同浓度的AA-Na刺激细胞,每组设6个复孔,孵育24 h。透射电镜观察NRK-52E细胞的超微结构,MTT法检测不同浓度AA对NRK-52E细胞增殖的影响,流式细胞仪检测NRK-52E细胞的凋亡,免疫细胞化学法检测AA对NRK-52E细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响;检测不同时间段(12、24、48 h)马兜铃酸对NRK-52E细胞转化生长因子-β1(TGF-β1)及内皮素-1(ET-1)mRNA和Ⅰ型胶原(ColⅠ)表达的影响。结果:①AA浓度低于10μg/ml时对NRK-52E的增殖无明显影响,20~40μg/ml浓度的AA可明显抑制NRK-52E细胞的增殖;②较高浓度的AA(40μg/ml)可明显刺激细胞凋亡;③AA5、10、20、40μg/ml均可刺激NRK-52E表达α-SMA,其中AA10μg/ml对α-SMA表达较强;④AA刺激NRK-52E细胞24 h后TGF-β1mRNA、ET-1 mRNA表达最多,48 h时表达水平下降,而COL-I的表达水平随时间的延长而上调,呈时间依赖性。结论:AA可直接损伤肾小管上皮细胞,促进其表达肌成纤维细胞标志蛋白α-SMA,即有促转分化作用,且其对NRK-52E细胞的损伤作用呈剂量及时间依赖性。     

线粒体内膜转位酶13调控肝星状细胞活化和增殖的实验研究

目的：研究线粒体内膜转位酶13(TIMM13)的表达对小鼠肝星状细胞活化和增殖的影响，探讨TIMM13在肝纤维化的的进展中的作用。方法：用5 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL转化生长因子-β1(TGF-β1)作用小鼠肝星状细胞系JS-1细胞24 h，诱导JS-1细胞活化，实验分为对照组（0 ng/mL组）、5 ng/mL组、10 ng/mL组、20 ng/mL组；采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白质印迹（western blotting）法检测各组TIMM13、肝纤维化指标α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和Ⅰ型胶原蛋白（COL1A1）的mRNA与蛋白表达水平；在JS-1细胞中分别敲低和过表达TIMM13，将实验分为空载组（对照组）和沉默组/过表达组，用RTqPCR和western blotting法检测TIMM13、α-SMA和COL1A1的mRNA与蛋白表达水平，用细胞计数试剂盒（CCK-8）检测沉默/过表达TIMM13的第0、第24、第48和第72小时细胞的增殖情况。结果：与对照组比较，5 ng/mL组、10 ng/mL组、20 ng/mL组中TIMM13...     

PICK1在肝纤维化中的表达变化及功能研究

目的：研究蛋白激酶 C 结合蛋白1（PICK1）在小鼠肝纤维及活化的肝星状细胞中的表达变化,并探讨其对人肝星状细胞株（LX-2）活化的影响。方法建立四氯化碳（CCl4）诱导的小鼠肝纤维化模型,观察 PICK1在肝纤维化过程中的表达变化;转化生长因子β1（TGF-β1）刺激 LX-2活化,West-ern blot 测定 PICK1的蛋白表达情况;转染 PICK1过表达质粒至 LX-2中,再以 TGF-β1诱导活化,Western blot 检测PICK1、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、I 型胶原（Col1a1）和Smad2、3及其磷酸化水平的蛋白表达情况。结果正常组小鼠肝脏中 PICK1表达较高,随着肝纤维化的加重,PICK1的表达逐渐递减。TGF-β1诱导活化的 LX-2细胞中 PICK1表达降低。转染 PICK1过表达质粒后,TGF-β1诱导的α-SMA、Colla1的表达明显减少,且 Smad2、3磷酸化水平显著下降。结论 PICK1在纤维化肝组织及活化的 HSC 中表达下调。过表达 PICK1可抑制 TGF-β1诱导的 LX-2活化,可能是通过抑制 TGF-β／Smad 通路而发挥作用,为肝纤维化的防治研究提供了新的思路和靶点。     

Effects of IL-10 on inhibiting the activation of HSC induced by TNF-α

目的 探讨白细胞介素-10(IL-10)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的人肝星状细胞(HSC)激活的抑制作用.方法 使用10 ng/ml TNF-α刺激体外培养的HSC,建立HSC激活模型,给予HSC激活模型不同浓度IL-10(2、10、20 ng/ml)作用不同时间(1、2、24、48、72、96 h)后,油红O染色观察细胞脂肪含量,分别用Western blot和RT-PCR检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA) 和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达水平.结果 TNF-α刺激后,HSC脂肪含量显著减少,α-SMA和MCP-1表达量水平均随时间延长而升高(P<0.05).联合使用IL-10,α-SMA水平显著下降(P<0.05),且具有浓度依赖性(P<0.05),MCP-1水平亦下降(P<0.05).结论 IL-10可以抑制由TNF-α诱导的HSC激活,在肝脏早期炎症和肝纤维化进程中起保护作用.     

肝细胞线粒体NDUFA13蛋白缺陷可诱导小鼠自发性慢性肝纤维化

目的 探究肝细胞线粒体NDUFA13蛋白表达缺失在诱导小鼠肝脏纤维化发生中的作用及可能机制。方法 以肝脏特异性NDUFA13杂合敲除小鼠品系（NDUFA13fl/-;Alb-Cre）作为研究对象,以同窝NDUFA13fl/fl小鼠作为对照,8只/组,进行长达两年的实验观察,分别在实验早期和晚期处死小鼠获取肝组织样本。采用HE染色、Masson染色观察不同时期小鼠的肝组织病理变化及纤维化表型。Western blot检测肝组织中NDUFA13蛋白表达水平。免疫荧光分析巨噬细胞标志物F4/80与转化生长因子TGF-β1、肿瘤坏死因子TNF-α与白介素IL-1β的表达。免疫组化分析肝星型细胞活化标志物α-SMA、基质金属蛋白酶MMP-9与基质金属蛋白酶组织抑制剂TIMP-1、胶原纤维Collagen-Ⅰ与Collagen-Ⅲ的表达情况。结果 HE染色、Masson染色发现4周 龄NDUFA13fl/-小鼠肝组织炎症浸润明显但未出现纤维化表型;2年龄NDUFA13fl/-小鼠肝组织严重损伤且伴大量胶原纤维产生。Western Blot结果显示2年龄NDUFA13fl/-小鼠肝组织中NDUFA13蛋白表达水平较对照小鼠明显降低（P<0.05）。免疫荧光与免疫组化结果显示,NDUFA13fl/-小鼠肝组织中巨噬细胞F4/80聚集增多并伴随大量TGF-β1产生（P<0.05）,以及TNF-α、IL-1β等炎症因子大量分泌（P<0.05）;同时,α-SMA、Collagen-Ⅰ及Collagen-Ⅲ表达明显增多（P<0.05）,基质金属蛋白酶MMP-9表达降低（P<0.05）,而其抑制剂TIMP-1表达明显增加（P<0.05）。结论 肝细胞线粒体NDUFA13蛋白缺陷能够诱导小鼠自发的慢性肝纤维化病理表型,可能与巨噬细胞/炎症因子信号诱导的肝星状细胞异常活化有关。     

VEGF对上皮间充质转化的抑制与Smad信号途径及SnoN表达的变化

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)抑制转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导HK-2细胞发生肾小管上皮-间充质细胞转化(EMT)的过程中对Smad2/3,Smad7信号途径以及SnoN表达的影响。方法体外培养的HK-2细胞分为:①正常对照组;②TGF-β1(5μg/L)阳性对照组;③VEGF165(100μg/L)作用组;④TGF-β1(5μg/L)+VEGF165(100μg/L)共同作用组。采用WesternBlot法和RT-PCR分别检测各组细胞p-Smad2/3和Smad2/3(共同作用30和60min),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Smad7、SnoN的表达水平(共同作用48h)。结果 TGF-β1组α-SMA蛋白和mRNA表达与正常对照组比较明显增强,TGF-β1与VEGF165共同作用组α-SMA蛋白和mRNA表达与TGF-β1单独作用组比较明显减弱(P0.05)。体外HK-2细胞,TGF-β1组刺激30、60min,与正常对照组比较,(p-Smad2/3)/(Smad2/3)比值明显升高,TGF-β1+VEGF165组与TGF-β1单独作用组相比明显下降,且以30min时下降明显。TGF-β1组作用48h与正常对照组比较,Smad7蛋白和mRNA表达明显下降,VEGF165+TGF-β1组较TGF-β1单独作用组Smad7表达明显升高(P0.05)。VEGF165组与正常对照组相比,α-SMA、(p-Smad2/3)/(Smad2/3)、Smad7蛋白和mRNA表达的差异无统计学意义(P﹥0.05)。TGF-β1组SnoN蛋白表达与正常对照组比较明显增强(P0.05),TGF-β1与VEGF165共同作用组SnoN蛋白表达与TGF-β1单独作用组相比差异无统计学意义(P﹥0.05),各组SnoNmRNA表达差异均无统计学意义(P﹥0.05)。结论 VEGF165抑制TGF-β1诱导HK-2细胞EMT的机制可能与直接抑制Smad2/3磷酸化、上调Smad7信号表达有关,而与调节SnoN表达无关。     

IL-10对TNF-α诱导肝星状细胞激活的抑制作用

目的探讨白细胞介素-10(IL-10)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的人肝星状细胞(HSC)激活的抑制作用。方法使用10 ng/ml TNF-α刺激体外培养的HSC,建立HSC激活模型,给予HSC激活模型不同浓度IL-10(2、10、20 ng/ml)作用不同时间(1、2、24、48、72、96 h)后,油红O染色观察细胞脂肪含量,分别用Western blot和RT-PCR检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达水平。结果 TNF-α刺激后,HSC脂肪含量显著减少,α-SMA和MCP-1表达量水平均随时间延长而升高(P<0.05)。联合使用IL-10,α-SMA水平显著下降(P<0.05),且具有浓度依赖性(P<0.05),MCP-1水平亦下降(P<0.05)。结论 IL-10可以抑制由TNF-α诱导的HSC激活,在肝脏早期炎症和肝纤维化进程中起保护作用。     

姜黄素对大鼠肝星状细胞中TGF-β调节的NADPH氧化酶4的激活及Smad信号通路的影响

目的：研究姜黄素潜在的抗纤维化作用,以及转化生长因子β( TGF-β)诱导大鼠肝星状细胞( HSC-T6)激活的机制。方法不同浓度的姜黄素(0、5、10、20、40μmol/L)处理HSC-T6后,用MTT法测定其对HSC-T6增殖作用的影响;用RT-PCR法检测其mRNA水平的表达;用Westem blot法检测表达α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、细胞外基质主要成分α1I胶原(Col1α1)、NADPH氧化酶4(NOX 4)、 Smad 2、Smad 3及其磷酸化的水平。结果40μmol/L的姜黄素组刺激HSC-T648 h后,其抑制率达到最大,显著低于仅TGF-β1刺激组、5、10及20μmol/L姜黄素组( P<0．05)。姜黄素可显著降低激活型HSC-T6的α-SMA、α1I胶原mRNA与蛋白表达,从而可以降低细胞外基质的沉积;有效降低了NOX 4的蛋白水平,减少了活性氧的水平;还明显降低Smad 2、Smad 3的磷酸化程度,呈浓度依赖性。结论姜黄素在体外能够明显地抑制HSC-T6激活,对肝纤维化的发生发展具有一定抑制作用,其机制可能与抑制TGF-β诱导的NOX4的激活及Smad信号通路有关。     

游离SiO_2粉尘对大鼠循环成纤维细胞胶原和α-平滑肌肌动蛋白的作用

目的:观察、探讨不同浓度的游离SiO2刺激巨噬细胞(AM)的上清液对循环成纤维细胞(circulating fibrocytes,cFb)的影响作用。方法:构建大鼠外周血cFb、大鼠腹腔AM体外原代培养模型,用一些列浓度游离SiO2(0、20、40、60、80、100、120μg/ml)刺激AM 24h,离心后取上清液,用上清液刺激cFb 24h。对不同SiO2浓度刺激cFb后,采用PCR法测其对Ⅰ型、Ⅲ型胶原、α-SMA mRNA的相对表达水平。结果:20、40、60、80μg/ml浓度差异有统计学意义(P0.05),从0到80μg/ml表达增加。结论:游离SiO2刺激AM的培养上清液再刺激cFb后随SiO2浓度增大表现对Collagen-Ⅰ、Collagen-Ⅲ、α-SMA mRNA表达增加     

MAPKs通路在转化生长因子β1诱导气道上皮细胞转化中的作用

目的探讨丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号通路在转化生长因子β1(TGF-β1)体外诱导气道上皮细胞表型向肌成纤维细胞转化中的作用。方法TGF-β1(10μg/L)刺激气道上皮细胞株16HBE-14o,采用Westernblot方法检测刺激5min,15min,30min,1h和24h后细胞内磷酸化p38、Erk1/2和JNK的表达。分别预先加入p38MAPK、ERK1/2和JNK的特异性抑制剂孵育1h,再加入TGF-β1刺激16HBE-14o48h,免疫荧光方法检测E-cadherin、α-SMA和F-actin的表达。结果TGF-β1刺激5min后磷酸化p38、Erk1/2表达量较未予TGF-β1刺激的正常对照组明显增加,刺激15min,30min和1h后表达量稍有下降但仍较正常对照组明显增加,刺激24h后表达量恢复至基础水平。正常对照组与TGF-β1刺激组均有极微弱的磷酸化JNK表达,表达量无显著差别。加入p38MAPK和ERK1/2特异性抑制剂组,绝大多数细胞F-actin和E-cadherin仍定位在细胞边缘,表达α-SMA的阳性细胞数显著减少;加入JNK特异性抑制剂组E-cadherin、α-SMA和F-actin的表达与单纯TGF-β1刺激组相似。结论TGF-β1活化了16HBE-14o细胞内MAPKs信号通路,MAPKs(p38MAPK和ERK1/2)信号通路参与了TGF-β1诱导的16HBE-14o向肌成纤维细胞的转化过程。     

新城疫病毒抑制肝星状细胞活化的初步研究

目的：探讨新城疫病毒（newcastle disease virus,NDV）在活化肝星状细胞（hepatic stellate cell,HSC）中的复制对HSC的活化增殖以及细胞生物学功能的影响。方法：用不同滴度的NDV溶瘤株Italien（NDV-Italien）感染经转化生长因子-β1（trans－formation growth factor-β1,TGF-β1）刺激活化的人HSC系LX-2。MTT法检测NDV 对细胞增殖率的影响。免疫荧光显微镜技术检测活化标志物α-SMA的表达变化。结果：NDV的感染抑制了LX-2细胞的增殖,细胞增殖率和病毒滴度呈负相关。与未刺激组相比,NDV在TGF-β1刺激的LX-2细胞中的增殖抑制率提高,LX-2细胞的活化标志物α-SMA的表达显著性下调。结论：NDV在活化LX-2细胞中的复制具有抑制细胞增殖和HSC活化的作用。     

ASPP2在人肝星状细胞活化中的作用

目的 探讨p53凋亡刺激蛋白2(apoptosis-stimulating protein of p53-2,ASPP2)对人肝星状细胞活化的调节作用及机制.方法 人永生的肝星状细胞系LX-2在孵箱中培养,转染ASPP2腺病毒和单荧光自噬指示体系(GFP-LC3)质粒,免疫印迹法检测ASPP2、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、自噬基因表达相关蛋白(Beclin-1)的表达水平.免疫荧光检测,LX-2细胞共转染ASPP2腺病毒和GFP-LC3质粒后,ASPP2过表达对LX-2细胞自噬的影响,M30染色检测ASPP2过表达对LX-2细胞凋亡的影响.结果 转染ASPP2腺病毒后LX-2细胞内ASPP2蛋白表达明显增加;与转染对照空载腺病毒的LX-2细胞相比,转染ASPP2腺病毒的LX-2细胞自噬和α-SMA的表达明显减少,肝星状细胞的活化受到抑制;转染ASPP2腺病毒后LX-2细胞的凋亡水平增加明显.结论 ASPP2过表达在体外具有抑制肝星状细胞活化的作用.     

黄芩素通过Smad信号通路抑制TGF-β1诱导的HSC-T6细胞活化

探讨黄芩素是否通过Smad信号通路抑制TGF-β1诱导的肝星状细胞(HSC-T6)活化。用不同浓度黄芩素和/或5 μg/L的转化生长因子β1(TGF-β1)刺激细胞,用免疫细胞化学法测定α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,用Western blot法检测p-Smad 2、p-Smad 3表达。结果显示,TGF-β1可使HSC-T6细胞α-SMA表达增加,黄芩素预处理后,可剂量依赖性地降低α-SMA表达;TGF-β1可使HSC-T6细胞p-Smad 2和p-Smad 3的蛋白水平增加,500 nmol/L黄芩素预处理并未显著降低p-Smad 2和p-Smad 3的蛋白水平。结果说明,黄芩素可抑制TGF-β1诱导的HSC-T6细胞活化,其机制与TGF-β1/Smad信号通路无关。     

ERK信号通路调控二氧化硅诱导的人支气管上皮细胞上皮-间质转化

目的:探讨细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)信号通路在二氧化硅(SiO2)诱导人支气管上皮细胞(human bronchial epithelial cells,HBEC)上皮-间质转型(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)中的作用机制。方法:SiO2(0～300μg/mL)处理HBEC 72 h,或不同浓度的U0126(0～30μmol/L)干预1 h后再行200μg/mL SiO2刺激72 h,Western印迹检测E-cadherin和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的改变;使用丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)活性检测试剂盒检测SiO2(200μg/mL)处理HBEC(0～8 h)后ERK激活情况。结果:SiO2刺激HBEC后,E-cadherin蛋白表达水平逐渐下调,以300μg/mL时最为明显(P<0.01),α-SMA蛋白表达水平逐渐上调,以200μg/mL时最为明显(P<0.01)。SiO2刺激HBEC后,ERK明显活化,ERK磷酸化水平于30 min开始升高,1 h后逐渐降低。ERK抑...