肝细胞癌中CK7、CK19及AFP的表达相关性研究

目的探讨CK7、CK19在肝细胞癌（HCC）中的表达,以及与HCC患者甲胎蛋白（AFP）表达及临床病理特征的关系。方法收集65例原发性HCC患者的癌组织标本及血清标本,免疫组化检测CK7、CK19表达情况,并用ELISA法检测血清中AFP水平。结果HCC患者癌组织中CK7的表达阳性率为46.2%（30/65）,CK19表达阳性率为18.5%（12/65）。HCC癌组织中可见表达CK7、CK19的卵圆细胞,可同时表达AFP。CK19表达与血清AFP表达水平有显著相关性（P=0.000）。结论人类HCC中同样有卵圆细胞的存在,这部分HCC患者预后较差,AFP及CK19的联合检测可有助于这部分患者的早期诊断。     

β-连环蛋白在原发性肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的：研究β－连环蛋白在原发性肝细胞癌中的表达及其与原发性肝细胞癌分化、侵袭转移和预后的关系。方法：应用免疫应运地63例原发性肝细胞癌石蜡包埋标本进行β－连环蛋白半定量检测。结果：有49例（78％）原发性肝细胞癌β－连环蛋白阳性表达，低分化癌的β－连环蛋白阳性率明显高于高分化癌（P＜0．05）。β－连环蛋白阳性表达率在AFP高表达肝癌组高于AFP低表达组（P＜0．05）。β－连环蛋白阳性表达率在有淋巴结转移肝癌组织高于无淋巴结转移组（P＜0．05）。β＝连环蛋白阳性表达患者2a生存率（11％）显著低于阴性表达者（32％，P＜0．05）。结论：β－连环蛋白表达与肝癌组织的分化程度、有无淋巴结转移、患者的AFP水平呈正相关，β－连环蛋白表达与患者预后相关，可以作为判断原发性肝细胞癌预后的生物学指标。     

Bim蛋白在原发性肝细胞癌中的表达及临床意义

目的：探讨促凋亡蛋白Bim基因在肝癌组织中的表达及其与肝癌临床病理、预后的相关性。方法：收集南通大学附属医院病理科80例原发性肝细胞癌及癌旁组织标本,应用免疫组化Envision法检测Bim蛋白的表达,结合临床病理参数和随访资料进行统计学分析。结果：免疫组化结果显示,在肝癌组织中Bim表达阳性率为15%（12/80）,明显低于癌旁正常肝组织的83.75%（67/80）,两者之间比较差异有统计学意义（χ2=13.714,P<0.001）。Bim蛋白在原发性肝细胞癌中的表达与TNM分期有关（χ2=7.521,P=0.023）。Kaplan-Meier生存曲线显示Bim低表达组比高表达组5年生存率低。结论：Bim蛋白的表达与人原发性肝细胞癌的发生、发展存在一定的关系,可能成为肝细胞癌潜在的治疗靶点。     

人肝细胞癌中转录因子FoxM1表达与甲胎蛋白产生相关

目的：探讨人肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）中叉头框M1（forkhead box M1,FoxM1）表达与甲胎蛋白（alpha-fetoprotein,AFP）产生的关系。方法：分别采用Western blot和荧光定量PCR（fluorescence quantitative PCR,FQ-PCR）技术检测52例HCC患者肝癌组织中FoxM1蛋白和AFP mRNA表达水平,并查询患者术前血清AFP水平,分析三者相关性;FoxM1特异性抑制剂硫链丝菌素（thiostrepton,TST）和重组FoxM1B腺病毒（adenovirus combined with FoxM1B gene,Ad-FoxM1B）分别作用人HepG2和HepG2.2.15肝癌细胞后,FQ-PCR检测FoxM1 mRNA表达变化,Western blot检测FoxM1蛋白表达变化,电化学发光法检测培养基上清AFP分泌变化。结果：（1）肝癌组织中FoxM1蛋白表达水平与组织中AFP mRNA表达水平及血清AFP分泌水平均呈正相关（r=0.448,P=0.001;r=0.381,P=0.005）;（2）下调FoxM1表达可明显抑制HepG2和HepG2.2.15细胞分泌AFP（P1=0.000,P2=0.000）;（3）FoxM1可明显促进HepG2和HepG2.2.15细胞表达和分泌AFP（P1=0.000,P2=0.000;P1=0.001,P2=0.000）。结论：人肝细胞癌中FoxM1与AFP的表达密切相关,FoxM1可能在促进AFP表达中发挥重要作用。     

Oncol2012: Dusp6 在肝细胞肝癌肿瘤组织较癌旁组织高表达与肿瘤复发相关

背景 探讨dusp-6在肝细胞肝癌中的表达与MAPK、临床病理学特征及预后相关性。方法 305例肝细胞肝癌组织芯片,免疫组化EnVision法检测dusp-6、p-ERK、p-JNK和p-p38α表达,同临床病理学特征及术后随访资料进行统计学相关性及预后生存分析。结果 肝细胞肝癌肿瘤组织较癌旁组织和肝血管瘤旁正常肝组织dusp-6显著高表达（P＜0.001）。 相对癌旁肿瘤细胞dusp-6表达与无瘤生存率具有显著相关性（P = 0.013）。相对癌旁肿瘤细胞dusp-6表达为无瘤生存率的独立预后风险因素（HR= 1.635, P = 0.006）。结论 Dusp-6在HCC中肿瘤组织较癌旁组织和正常肝组织过表达。相对癌旁dusp-6高表达HCC患者术后更易复发。相对癌旁肿瘤细胞dusp-6表达可以作为HCC术后复发风险预测指标。     

肝细胞癌及癌旁肝组织EGFR和EGFR vⅢ的表达及其临床意义

 [目的]检测人体肝癌组织及癌旁肝组织中表皮生长因子受体EGFR及其突变体EGFRvⅢ的表达情况,并分析其临床意义.[方法]用免疫组化法检测58例肝细胞癌患者肿瘤及癌旁肝组织中EGFR、EGFRvⅢ的表达情况,与患者的临床资料进行相关分析,同时对EGFR和EGFRyⅢ不同表达的患者无瘤生存期和总生存期进行生存分析.[结果]肝癌组织EGFR、EGFRvⅢ表达的阳性率分别为74.1%、63.8%;癌旁肝组织EGFR、EGFRvⅢ表达阳性率分别为81.0%、77.6%.肝癌组织EGFRvⅢ的表达情况与肿瘤病理分级（P=0.028）及术前AFP值（P=0.035）呈负相关.癌栓及/或卫星灶（P＜0.001）和肿瘤病理分级（P=0.023）是肝癌术后无瘤生存期的主要影响因素;肝癌患者术后总生存期的主要影响因素包括患者的肿瘤家族史（P=0.014）、肿瘤最大径（P＜0.001）、癌栓及/或卫星灶（P=0.039）以及肿瘤的病理分级（P=0.002）.生存分析显示肝癌组织EGFR及EGFRvⅢ表达阴性的患者与表达阳性的患者无瘤生存率及总生存率均无明显差异.[结论]肝细胞癌患者肿瘤组织及癌旁肝组织中均存在EGFR以及EGFRvⅢ高表达,EGFR以及EGFRvⅢ过度表达可能是肝癌发生过程中的事件.肝癌组织EGFRvⅢ的表达情况与肿瘤病理分级及术前AFP值呈负相关,肝癌组织EGFR及EGFRvⅢ的表达情况不是肝癌预后的独立影响因素.     

肝细胞癌及癌旁肝组织EGFR和EGFR vⅢ的表达及其临床意义

[目的]检测人体肝癌组织及癌旁肝组织中表皮生长因子受体EGFR及其突变体EGFRvⅢ的表达情况,并分析其临床意义.[方法]用免疫组化法检测58例肝细胞癌患者肿瘤及癌旁肝组织中EGFR、EGFRvⅢ的表达情况,与患者的临床资料进行相关分析,同时对EGFR和EGFRyⅢ不同表达的患者无瘤生存期和总生存期进行生存分析.[结果]肝癌组织EGFR、EGFRvⅢ表达的阳性率分别为74.1%、63.8%;癌旁肝组织EGFR、EGFRvⅢ表达阳性率分别为81.0%、77.6%.肝癌组织EGFRvⅢ的表达情况与肿瘤病理分级（P=0.028）及术前AFP值（P=0.035）呈负相关.癌栓及/或卫星灶（P＜0.001）和肿瘤病理分级（P=0.023）是肝癌术后无瘤生存期的主要影响因素;肝癌患者术后总生存期的主要影响因素包括患者的肿瘤家族史（P=0.014）、肿瘤最大径（P＜0.001）、癌栓及/或卫星灶（P=0.039）以及肿瘤的病理分级（P=0.002）.生存分析显示肝癌组织EGFR及EGFRvⅢ表达阴性的患者与表达阳性的患者无瘤生存率及总生存率均无明显差异.[结论]肝细胞癌患者肿瘤组织及癌旁肝组织中均存在EGFR以及EGFRvⅢ高表达,EGFR以及EGFRvⅢ过度表达可能是肝癌发生过程中的事件.肝癌组织EGFRvⅢ的表达情况与肿瘤病理分级及术前AFP值呈负相关,肝癌组织EGFR及EGFRvⅢ的表达情况不是肝癌预后的独立影响因素.     

甲胎蛋白在原发性肝癌的诊断和预后判断中的临床价值

目的：探讨癌组织和血清中的甲胎蛋白(AFP)水平与原发性肝癌(PHC)的临床特点和预后关系,为临床诊治提供依据。方法选取2004年11月至2014年6月期间顺德人民医院收治的均经组织学病理证实为新发PHC患者62例,分别应用免疫组化S-P法和化学发光免疫分析法检测所有患者的AFP,分析不同AFP水平患者的临床特点和生存时间的差异。结果 PHC患者中,肝癌组织中AFP的表达程度与血清中AFP的浓度之间呈正相关的(χ2=22.71,P<0.001,r=0.488);PHC患者血清中AFP浓度高低与肿瘤大小有关(χ2=7.83,P=0.025);组织中AFP表达程度与有无HBV感染有关(χ2=4.08,P=0.043);PHC组织中AFP阳性组生存时间长于阴性组(39.0个月vs 24.9个月),差异无统计学意义(χ2=1.90,P>0.05)。结论血清中甲胎蛋白的浓度与原发性肝癌肿瘤大小有关;HBV感染影响肝癌患者甲胎蛋白的表达量,定期监测甲胎蛋白浓度变化,有助于早期肝癌的发现。肝癌组织中AFP阳性患者生存期高于阴性,但差异无统计学意义,今后可加大样本量进行进一步的探讨。     

C-IAP2在肝细胞肝癌中的表达及与临床预后的关系

目的探讨C-IAP2 mRNA和蛋白在肝细胞癌中的表达及其与临床预后的关系。方法采用荧光定量PCR和免疫组化方
法检测肝细胞癌组织及对应的非癌组织中C-IAP2 mRNA和蛋白的表达水平并分析肝癌组织中C-IAP2的表达和临床病理特征
之间的关系。结果肝细胞肝癌中C-IAP2 mRNA的表达是非癌组织的2.70倍（P<0.001）。C-IAP2蛋白在肝癌组织阳性表达率
为70.8%,显著高于非癌组织中的阳性表达率27.8%（P=0.001）。C-IAP2 mRNA和蛋白在肝癌组织中的表达与术前有无癌栓、
有无淋巴结转移、甲胎蛋白水平、肿瘤病理分化类型、TNM分期以及术后复发转移时间有关（P<0.05）,而与患者性别、年龄、乙型
肝炎表面抗原、肿瘤大小、肿瘤数目、肝硬化以及包膜完整性无关（P>0.05）。结论C-IAP2表达水平与原发性肝癌的转移、复发
有关,可作为原发性肝细胞癌预后的新生物学指标。     

GPC3在原发性肝细胞癌中的表达及其临床病理相关性研究

目的 测定磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（Glypican-3,GPC3）在原发性肝细胞癌、癌旁组织、肝硬化组织及正常肝组织中的表达,分析其与原发性肝癌临床病理特征的关系.方法 筛选赣州市人民医院肝胆外科近5年手术切除并经病理确诊为肝细胞癌患者43例（术前均未经任何抗肿瘤治疗）,应用免疫组化通用型二步法检测并对比GPC3在原发性肝细胞癌组织、癌旁组织、肝硬化组织及正常肝组织中的表达情况.同时对比分析GPC3和AFP在原发性肝细胞癌中的阳性表达率.结果 1.GPC3在肝细胞癌组织中阳性表达率高,与在癌旁组织、肝硬化组织及正常肝脏组织中表达差异有统计学意义（P＜0.05）.2.GPC3表达与肿瘤分化程度有关,差别有统计学意义（P＜0.05）.3.GPC3与AFP在肝细胞癌组织中的表达比较,GPC3对肝癌免疫组化诊断敏感性更高（P＜0.0005）.结论 1.与目前应用最广泛的肿瘤标志物AFP相比,GPC3具有更高的免疫组化诊断敏感性,有望成为一种新的免疫标志物应用于肝癌的临床免疫组化诊断和鉴别诊断.2.GPC3表达强度与肝癌患者肿瘤细胞分化有一定相关性.     

TGF-β1信号介导的肝星状细胞促进胚胎肝前体细胞向胆管细胞方向分化

目的 探讨转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1) 激活的小鼠肝星状细胞(mouse hepatic stellate cells,mHSCs) 对小鼠胚胎肝前体细胞(mouse hepatic progenitor cells, mHPCs) 分化的影响.方法 mHSCs细胞株加入10 ng /mL TGF-β1刺激48 h,并分为激活组(mHSCs- TGF-β1) 和对照组(mHSCs) .qRT-PCR和Western blot法检测mHSCs激活情况.采用荧光激活细胞筛选法(fluorescence-activated cell sorter,FACS) 分选DLK1(delta-like1 homologue) 表面抗原阳性的原代mHPCs,分选的细胞利用免疫荧光染色法观察甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP) 、白蛋白(albumin, ALB) 及细胞角蛋白19(cytokeratin 19,CK19) 抗原表达情况.mHPCs与mHSCs Transwell共培养6 d后,分为mHPCs + mHSCs-TGF-β1组、mHPCs + mHSCs组和mHPCs组.细胞免疫荧光技术法和qRTPCR法检测分化标志物表达情况.结果 激活组mHSCs中TGF-β1、α-SMA、TGF-β-R1、Jagged1、VEGF、 HGF等mRNA和TGF-β1、a-SMA、TGF-β-R1、Jagged1等蛋白的表达量均较对照组明显增加(P＜0. 01);FACS新分选的mHPCs胞质中表达AFP和少量ALB,但不表达CK19;mHPCs + mHSCs-TGF-β1组mHPCs胞质中大量表达胆管细胞标志物,并且CK19、SOX9、Hes1等mRNA表达量均较其他两组明显增加,而其他两组mHPCs中ALB、AFP等的表达量明显增加(P＜0. 01) .结论 TGF-β1激活的肝星状细胞诱导胚胎肝前体细胞向胆管细胞分化.     

肝细胞癌中卵圆细胞表面标记的表达及意义

目的探讨卵圆细胞部分表面标记在肝细胞癌中的表达状况和意义。方法应用免疫组织化学SABC法检测20例肝细胞癌中CK7、CK19、CK18、CD34、e—kit抗原的表达。结果14例肝细胞癌CK7表达呈阳性，其阳性表达率为70％（14／20）；9例c—kit的阳性表达率为45％（9／20）；在20例肝细胞癌癌组织中的CK18全部呈阳性表达，CK19和CD34全部呈阴性表达。CK7、C—kit表达与患者年龄、性别无关，与肿瘤大小、是否合并肝硬化以及组织学分级也不相关（P〉0．05）。结论肝细胞癌癌组织中存在表达卵圆细胞表面标记的细胞，其表达CK7、C—kit，不表达造血干细胞标记物CD34。其进一步提示，肝细胞癌可能不是起源于肝干细胞而是来源于过渡性的前体细胞／祖细胞，如来源于Hering管的卵圆细胞。     

p53表达与肝细胞癌临床病理学特征及AFP、HBV感染之间的关系研究

目的:探讨p53与肝细胞癌临床病理学特征和患者预后、AFP、HBV感染之间的关系.方法:应用免疫组化方法,检测70例肝细胞癌和20例肝良性肿瘤标本p53的表达;结合肝细胞癌临床分期、病理分级、门静脉癌栓、术后生存期、血清甲胎蛋白(AFP)、乙型肝炎病毒(HBV)感染等资料进行统计分析.结果:肝细胞癌的p53阳性率显著高于肝良性肿瘤(P＜0.01);p53阳性表达与肝细胞癌患者的性别、年龄、肿瘤大小、肝硬化、临床分期均无显著性相关(P＞0.05);包膜不完整、并有门静脉癌栓、分化未成熟及血清AFP阳性的肝细胞癌组织的p53阳性率明显高于有完整包膜、无门静脉癌栓、分化较成熟及血清AFP阴性的组织(P＜0.05) ;HBsAg阳性的肝细胞癌p53阳性率显著高于HBsAg阴性者(P＜0.01);p53阳性的肝细胞癌患者术后2年存活率显著低于阴性者 (P＜0.01).结论:p53是评价肝细胞癌恶性程度及预后的一个有价值的生物学指标;它的表达与肝细胞癌患者的血清AFP水平及HBV感染有密切相关性.     

原发性肝癌不同病理组织类型中肝干细胞的起源分析

目的观察原发性肝癌不同病理组织类型中肝干细胞的活化、分布、来源和免疫表达特征.方法应用HE染色、免疫组化S-P方法观察94例肝细胞癌(HCC)和12例肝内胆管细胞癌(ICC)和10例混合型肝癌的肝干细胞情况,用5例肝硬化和4例正常肝组织为对照.结果在原发性肝癌不同病理组织类型中干细胞免疫标志均有不同程度的表达,均可观察到肝于细胞向肝癌细胞的转化,以混合型肝细胞癌中肝于细胞免疫表型表达率最高(P＜0.05).结论不同病理组织类型的肝癌组织中均存在不同分化状态和不同来源的肝干细胞,可能由于肝干细胞(hepatic stem cell,HSC)分化不全或分化异常所致.     

Musashi-1在肝细胞肝癌中的表达及其与临床预后的关系

目的 研究Musashi-1在肝细胞肝癌患者癌组织及癌旁组织中的表达,探讨其与临床预后的关系及对肝癌细胞转移侵袭的影响.方法 收集我院2000年6月至2010年6月间138例行根治性肝细胞肝癌切除术患者的术中肝癌以及癌旁样本,利用免疫组织化学方法检验癌组织与癌旁组织中Musashi-1的表达水平;通过Pearson x2检验和Fisher精确检验分析Musashi-1与患者临床特征以及预后之间的关系.利用qPCR检测癌组织和癌旁组织中CD133的表达并对癌组织中Musashi-1与CD133的表达水平进行相关性分析.构建稳定过表达Musashi-1的人肝癌细胞系SMMC-7721细胞,利用Sphere成球实验检测Musashi-1对肿瘤细胞成球能力的影响,利用肿瘤侵袭实验探究Musashi-1对肿瘤细胞侵袭能力的影响.结果 138例肝细胞肝癌患者中有105例(76.1％)癌组织中Musashi-1的表达高于癌旁组织(P＜0.05).Musashi-1的表达与甲胎蛋白(AFP)水平、腹水、远处转移有关(P＜0.05),而与性别、年龄、乙肝病史、肿瘤大小、子灶、门静脉癌栓、镜下癌栓等无关.Musashi-1的表达水平对患者总体生存率和无瘤生存率有显著影响(P＜0.05).肝癌组织中CD133 mRNA的表达高于癌旁组织(P＜0.05),且CD133的表达与Musashi-1的表达呈正相关(R2=0.78,P＜0.001).体外实验证实过表达Musashi-1的SMMC-7721细胞的成球能力和侵袭能力增强.结论 Musashi-1在肝细胞肝癌中表达增加,对肝细胞肝癌的进展可能具有促进作用,其表达水平可以为判断预后提供参考.     

大鼠肝卵圆细胞增殖模型建立及其纯化鉴定

为建立大鼠卵圆细胞增殖模型，分离纯化卵圆细胞并对其特性进行研究，SD大鼠喂饲2-乙酰氨基芴(2-acetyailamif1uorene，2-AAF)，剂量分别为5、10、15、20mg／kg，连续给药6d，于第7天行三分之二部分肝切除，术后继续给药1周，每隔3d取肝组织行常规组织学观察，作细胞增殖试验及免疫组化染色。通过免疫磁珠标记C-kit阳性细胞以纯化卵圆细胞(Magnetic activated cell sorting，MACS)，用免疫细胞化学及RT-PCR对纯化细胞进行鉴定。结果：10、15、20mg／kg三种剂量2-AAF均可成功建立卵圆细胞增殖模型，卵圆细胞增殖于第8天较明显，至第11天达高峰，第14天有所减少。卵圆细胞胞核Brdu染色阳性，其除表达卵圆细胞特异性抗原OV6外，尚表达肝细胞标记白蛋白及胆管细胞标记CKl9。胚胎期肝细胞抗原AFP、连接蛋白43在卵圆细胞中亦有高表达，同时还表达造血干细胞标记C-kit。以MACS纯化的C-kit阳性卵圆细胞，90％以上为OV6阳性，并有AFP、白蛋白、CK19 mRNA转录。结论：2-AAF剂量为10～20mg／kg时可获得满意的大鼠卵圆细胞增殖模型，增生的卵圆细胞为具有双向分化潜能的肝干细胞／前体细胞，利用C-kit标记通过MACS可纯化这种肝干细胞／前体细胞。     

长链非编码RNA linc00261在肝细胞癌中的表达及意义

目的研究长链非编码RNA linc00261 在肝细胞癌（HCC）中的表达、功能及其临床意义。方法采用实时荧光定量PCR （qRT-PCR）法检测linc00261在74例肝癌、癌旁肝组织中的表达;采用卡方检验分析其表达量与临床病理指标的相关性;应用 COX回归模型分析其表达水平与肝癌患者术后预后的关系;qRT-PCR检测linc00261在5株肝癌细胞株中的表达;在肝癌细胞 株MHCC-LM3和SNU-449中采用siRNA（si-linc00261-1,si-linc00261-2,si-NC和空白对照组）和Lipofectamine3000进行转染 敲低linc00261,活细胞计数（CCK8）、Transwell实验分别研究linc00261对肝癌细胞增殖,侵袭迁移能力的影响。结果HCC组 织中linc00261的表达水平与肝癌患者术前血清AFP（P=0.032）、肿瘤大小（P=0.007）、有无微血管癌栓（P=0.01）、TNM分期（P= 0.02）显著相关;HCC组织中linc00261的低表达与患者的不良预后相关,其术后无瘤生存期明显缩短（P<0.05）,是影响HCC患 者术后无瘤生存期的一个独立危险因素;下调linc00261的表达可促进肝癌细胞株MHCC-LM3（P<0.01）和SNU-449（P<0.001） 的迁移和侵袭能力,对细胞增殖无明显影响（P>0.05）。结论Linc00261有望成为肝癌切除术后的一种新的预后指标。     

METTL14在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的 探究RNA甲基转移酶METTL14在肝细胞癌（HCC）中的表达,及其临床意义。方法 采用免疫组织化学染色的方法,检测METTL14在147对肝癌、癌旁肝组织中的表达,根据病理医师的评分,把147例肝癌组织表达分为METTL14高表达组与METTL14低表达组,通过卡方检验分析其表达量高低与临床病理指标的相关性;应用Kaplan-Meier方法分析METTL14表达水平与肝癌患者术后预后生存的关系,包括总生存期与无瘤生存期;运用COX回归模型对METTL14表达与肝癌患者术后的总生存期与无瘤生存期进行单因素分析以及多因素分析,以探索METTL14的表达水平是否可作为肝癌患者术后预后的独立预后危险因素。结果 与癌旁组织相比,METTL14在HCC组织中表达明显降低（P<0.001）;HCC组织中METTL14表达与HCC患者肿瘤大小（P=0.044）及TNM分期（P=0.046）相关;HCC组织中METTL14的低表达与患者的不良预后显著相关,其术后总生存期及无瘤生存期明显缩短（P<0.05）,且是影响HCC患者术后总生存期及无瘤生存期的一个独立危险因素。结论 METTL14可能成为一种原发性肝癌切除术后的新的预后指标。