miR-150-5p与NCAPG的靶向关系及其对肝细胞肝癌Huh7细胞的抑制作用

目的 探究miR-150-5p与非SMC凝聚体Ⅰ复合物亚基G（NCAPG）的靶向关系及其对肝细胞肝癌（HCC）细胞生物学功能的影响，为HCC的临床诊断和治疗提供潜在靶点。 方法 通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-150-5p与NCAPG的靶向关系。将HCC Huh7细胞根据转染质粒不同分为模拟物阴性对照（mimic NC）组、miR-150-5p模拟物（miR-150-5p mimic）组、miR-150-5p模拟物+过表达阴性对照（miR-150-5p mimic+ovNC）组和miR-150-5p模拟物+过表达NCAPG（miR-150-5p mimic+ovNCAPG）组。实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测各组细胞中NCAPG mRNA表达水平，Western blotting法检测各组细胞中NCAPG蛋白表达水平，5-乙炔基-2'-脱氧尿嘧啶核苷（EdU）实验检测各组细胞EdU阳性率，流式细胞术检测各组细胞凋亡率，Transwell实验检测各组细胞中迁移和侵袭细胞数。将裸鼠分为agomiR-NC组、agomiR-150-5p组、agomiR-150-5p+过表达阴性对照（agomiR-150-5p+ovNC）组和agomiR-150-5p+过表达NCAPG（agomiR-150-5p+ovNCAPG）组，Huh7细胞皮下成瘤，检测各组裸鼠肿瘤体积和质量。 结果 双荧光素酶报告基因实验证实NCAPG是miR-150-5p的靶基因。与mimic NC组比较，miR-150-5p mimic组Huh7细胞中NCAPG mRNA和蛋白表达水平及EdU阳性率明显降低（P<0.05），细胞凋亡率明显升高（P<0.05），迁移细胞数和侵袭细胞数明显减少（P<0.05）；与miR-150-5p mimic+ovNC组比较，miR-150-5p mimic+ovNCAPG组Huh7细胞中NCAPG mRNA和蛋白表达水平及EdU阳性率明显升高（P<0.05），细胞凋亡率明显降低（P<0.05），迁移细胞数和侵袭细胞数明显增加（P<0.05）。与agomiR-NC比较，agomiR-150-5p组裸鼠Huh7细胞移植瘤体积和质量明显减少（P<0.05）；与agomiR-150-5p+ovNC组比较，agomiR-150-5p+ovNCAPG组裸鼠Huh7细胞移植瘤体积和质量明显增加（P<0.05）。 结论 miR-150-5p通过靶向结合抑制NCAPG表达进而抑制HCC细胞增殖、迁移、侵袭和肿瘤生长，促进细胞凋亡。     

白藜芦醇通过上调miR-186-5p表达抑制肝癌细胞迁移、侵袭和上皮-间质转化

目的：探讨白藜芦醇抑制肝癌细胞转移的分子机制。方法：利用CCK-8法检测白藜芦醇对肝癌细胞HepG2和Huh7存活率的影响,筛选后续实验适合的浓度;实时定量RT-PCR检测肝癌组织和肝癌细胞中miR-186-5p的表达;细胞划痕实验、Transwell小室实验和蛋白质印迹法分别检测白藜芦醇或miR-186-5p表达变化对肝癌细胞HepG2和Huh7迁移、侵袭和上皮-间质转化相关蛋白表达的影响。结果：6.25?μmol/L白藜芦醇对肝癌细胞HepG2和Huh7的存活率无显著影响,遂后续实验中白藜芦醇的浓度选择6.25?μmol/L。实验结果显示, 白藜芦醇可以抑制肝癌细胞的迁移和侵袭,并增加上皮钙黏素表达,降低波形蛋白和Twist1表达（均P<0.05）。与癌旁组织和正常肝细胞相比,肝癌组织和肝癌细胞中miR-186-5p表达均下调（均P<0.05）。白藜芦醇能诱导肝癌细胞中miR-186-5p的表达（均P<0.01）。上调miR-186-5p表达可显著抑制肝癌细胞的迁移、侵袭和上皮-间质转化（均P<0.05）,而敲低miR-186-5p表达能阻断白藜芦醇对肝癌细胞迁移、侵袭和上皮-间质转化的抑制作用。结论：白藜芦醇能体外抑制肝癌转移,其机制可能与上调miR-186-5p表达有关。     

miR-1-3p抑制肝癌细胞SMMC-7721增殖、迁移并诱导其凋亡

目的 探讨在肝癌细胞SMMC-7721中微小RNA(miR)-1-3 p的表达变化对其增殖、迁移和凋亡的影响及miR-1-3p的作用机制.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-1-3p和CAAP1的相对表达量;SMMC-7721细胞按miR-1-3p过表达载体(miR-1-3p组)、pcDNA3组、miR-1-3p inhib-itor组和NC inhibitor组(对照组)分别转染,采用qRT-PCR检测转染效果,CCK-8实验检测细胞增殖能力,克隆形成实验观察并比较组间克隆形成率,流式细胞术和Western blot检测细胞凋亡及CAAP1蛋白表达,划痕和Transwell实验观察SMMC-7721迁移和侵袭.利用miRDB、TargetScan、miRanda数据库预测miR-1-3 p靶基因,双荧光素酶报告验证miR-1-3和CAAP1靶向性.结果 miR-1-3p在SMMC-7721细胞中的表达明显低于正常肝细胞LO2,差异有统计学意义(P<0.05);miR-1-3p上调,SMMC-7721增殖、迁移和侵袭能力显著下降,凋亡显著增强,而下调miR-1-3p的表达则作用相反;miR-1-3p和CAAP1具有靶向性;miR-1-3p过表达明显抑制CAAP1表达.结论 miR-1-3p上调可能通过与CAAP1的3'-UTR结合抑制SMMC-7721细胞增殖、侵袭、迁移.     

miR-552-3p通过抑制DACH1促进肝细胞性肝癌细胞增殖、迁移、侵袭功能

目的：探讨miR-552-3p在肝细胞性肝癌（Hepatocellular carcinoma, HCC）中的表达及其促进细胞增殖和迁移、侵袭功能的机制。方法：qRT-PCR检测HCC细胞系及人正常肝细胞系中miR-552-3p的表达情况;下载TCGA数据库的HCC样本的微阵列数据分析miR-552-3p在HCC癌组织及癌旁组织中是否存在表达差异;miR-552-3p mimics以及miR-552-3p inhibitor转染HCC细胞,荧光素酶报告基因验证miR-552-3p与DACH1是否存在靶向关系,CCK8及Transwell实验检测miR-552-3p及其与DACH1相互作用对于HCC细胞增殖、迁徙、侵袭功能的影响。结果：TCGA数据库中HCC样本的分析结果表明miR-552-3p在HCC中高表达,同时qRT-PCR显示miR-552-3p在HCC细胞系中的表达水平显著高于人肝细胞系L02;miR-552-3p的高表达促进HCC细胞的增殖、迁移、侵袭功能而抑制miR-552-3p的结果则相反;荧光素酶报告实验验证了miR-552-3p靶向作用于DACH1的3’-UTR,上调miR-552-3p的表达抑制DACH1而下调miR-552-3p则DACH1表达增加;DACH1的过表达可抑制HCC细胞相关功能,但同时过表达miR-552-3p后DACH1对于HCC细胞相关功能的抑制即可解除;miR-552-3p正向调控Wnt/β-catenin 信号通路的激活。结论：miR-552-3p靶向作用于DACH1促进HCC细胞增殖、迁移、侵袭功能,并参与调控Wnt/β-catenin 信号。可能作为HCC的诊疗策略提供潜在靶点。     

miR-3614-5p在卵巢癌细胞中的表达及对卵巢癌细胞增殖和迁移的影响

目的 分析微小RNA(microRNA)-3614-5p在卵巢癌细胞中的表达,探讨其对卵巢癌细胞增殖和迁移的影响及分子机制。方法 OncoLnc在线数据库分析miR-3614-5p表达水平与卵巢癌患者生存期的关系。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测miR-3614-5p在卵巢癌细胞系(SKOV-3、OVCAR-3、A2780、HO-8910、OC3)和正常卵巢上皮细胞系(IOSE80)中的表达。以miR-3614-5p表达最低的细胞系为转染对象,分别转染化学合成的miR-3614-5p模拟物(miR-3614-5p组)和miR-NC(对照组)。分别采用CCK-8法和Transwell迁移实验检测高表达miR-3614-5p对细胞增殖和迁移能力的影响。采用生物信息学和双荧光素酶报告基因法预测并验证miR-3614-5p的靶基因。qRT-PCR和Western blot法检测miR-3614-5p对靶基因表达的影响。结果 miR-3074-5p表达水平较高的卵巢癌患者生存期长于miR-3074-5p表达水平较低的患者(P<0.05)。与IOSE80细胞比较,miR-3614-5p在卵巢癌细胞系中的表达显著减少(P<0.01),其在OVCAR-3细胞中表达最少(P<0.01)。与对照组比较,miR-3614-5p组OVCAR-3细胞增殖能力显著降低(P<0.05)、细胞迁移能力显著降低(P<0.01)。miR-3614-5p与G蛋白α抑制剂2(G protein alpha inhibiting activity polypeptide 2,GNAI2)mRNA的3′非翻译区存在结合位点(P<0.01)。高表达miR-3614-5p可显著干扰GNAI2基因的表达(P<0.01)。结论 miR-3614-5p在卵巢癌细胞系中的表达降低,其可通过干扰靶基因GNAI2的表达,抑制卵巢癌细胞的增殖和迁移过程,miR-3614-5p可能是治疗卵巢癌的新靶点。     

miR-129-5p通过靶向SALL4抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的实验研究

目的：探讨miR-129-5p在肝细胞癌（HCC）发展中的作用及其机制。方法：通过实时荧光定量-PCR(qRT-PCR)检测miR-129-5p在正常血清及肝癌患者血清、人正常肝细胞LO2和人肝癌细胞系中的表达情况。采用脂质体转染技术将miR-129-5p mimics转染至人肝癌细胞HCCLM3细胞,应用Western印迹检测人类婆罗双树样基因-4(SALL4)和程序性死亡受体-配体1(PD-L1)蛋白的表达。通过CCK-8实验、克隆形成实验、细胞周期检测、细胞划痕实验和Transwell实验等检测在体外过表达miR-129-5p对肝癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。此外,通过生物信息学工具、数据库分析和荧光素酶报告基因检测实验,探索miR-129-5p在HCC中的靶点,并探讨靶点SALL4是否介导miR-129-5p对HCC细胞的作用。结果：与正常血清相比,肝癌患者血清miRNA-129-5p表达量显著降低（t=13.32,P<0.001）,与LO2相比,肝癌细胞系HepG2、Hep3B、HCCLM3、BEL-7402和QGY-7703的miR-129-5p表达量均显著降低（...     

miR-96-5p靶向PTEN激活PI3K-Akt信号通路抑制非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭实验研究

目的:探讨miR-96-5p对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞迁移、侵袭和增殖的作用及分子机制。方法:在人NSCLC细胞系A549中转染miR-96-5p类似物(miR-96-5p mimics)、阴性对照(NC mimics)或miR-96-5p抑制剂(miR-96-5p inhibitor)、阴性对照(NC inhibitor),通过CCK-8法检测细胞的增殖能力,通过划痕实验和Transwell迁移实验检测细胞的迁移侵袭能力;采用荧光素酶报告基因实验检测miR-96-5p与磷酸酯酶与张力蛋白同源物(PTEN)启动子区DNA的结合;采用蛋白质免疫印迹实验检测miR-96-5p对PTEN/PI3K/Akt信号通路的调控作用。结果:抑制miR-96-5p, NSCLC细胞的迁移、侵袭和增殖能力降低,过表达miR-96-5p促进NSCLC细胞的迁移、侵袭和增殖(均P<0.05)。荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-96-5p能与PTEN启动子区DNA结合;蛋白质免疫印迹实验结果表明,抑制miR-96-5p, PTEN表达升高、p-Akt的表达降低,过表达miR-96-5p后,PTE...     

miR-30-5p在食管癌中的表达及对食管癌细胞增殖和迁移的影响

目的：探讨miR-30-5p对食管癌细胞增殖和迁移的影响及分子机制。方法：选取开封市中心医院心胸血管外科和河南省人民医院胸外科2014年6月到2019年6月收集的食管癌和癌旁组织样本各120例,采用荧光定量PCR测定miR-30-5p mRNA表达水平。采用慢病毒建立食管癌细胞系EC109中建立miR-30-5p过表达稳定细胞系（miR-30-5p组）和对照细胞系（miR-control组）。采用EdU染色分析2组细胞的增殖情况;采用Transwell分析2组细胞的迁移情况;采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-30-5p的靶基因;在miR-30-5p组和miR-control组过表达靶基因对细胞增殖和迁移的影响。结果：与癌旁组织比较,食管癌组织中miR-30-5p mRNA表达水平明显上调,差异有统计学意义（P<0.05）。与miR-control组比较,miR-30-5p组细胞增殖能力和细胞迁移能力明显下降,差异有统计学意义（P<0.05）。生物信息学和双荧光素酶报告基因显示BCL-9是miR-30-5p的靶基因。在miR-control组细胞中过表达BCL-9,可显著提高细胞的增殖和迁移,差异有统计学意义（P<0.05）。而miR-30-5p组细胞过表达BCL-9,细胞增殖和迁移差异无统计学意义（P<0.05）。结论：miR-30-5p在食管癌中呈低表达,可导致靶基因BCL-9表达上调,进而促进食管癌细胞的增殖和迁移。     

miR-185对肝癌细胞生长增殖及侵袭迁移的影响

目的 探讨miR-185对人肝癌细胞HepG2和SMMC-7721生长增殖、侵袭迁移能力的影响.方法 构建miR-185过表达载体、合成miR-185反义寡聚核苷酸(antisense oligonucleotide,ASO),经脂质体转染肝癌细胞HepG2和SMMC-7721.利用CCK-8和Transwell小室实验检测细胞的增殖、侵袭和迁移能力;生物信息学数据库预测结合基因芯片结果确定miR-185的候选靶基因NRl D1;利用实时荧光定量PCR技术和Western blot检测miR-185对细胞中NRlD1基因表达水平的影响;荧光报告载体实验验证miR-185对靶基因的调控作用.结果 miR-185在人肝癌细胞中的mRNA表达水平显著低于正常肝细胞(P＜0.01);过表达miR-185使人肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力降低,下调肝癌细胞中NRl D1基因的mRNA和蛋白的表达水平(P＜0.01);荧光报告载体实验证明miR-185可以通过作用于NRlDl mRNA的3’端非翻译区(untranslated region,UTR)下调其表达水平(P＜0.05).结论 miR-185能抑制肝癌细胞的增殖、侵袭迁移能力,NRlD1是miR-185的直接靶基因.     

miR-202通过降低肝癌细胞ROCK1表达抑制其迁移和侵袭

目的：研究微小RNA-202（miR-202）对肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响,并探讨其可能的分子机制。方法：通过实时定量PCR检测Hep3B、Huh7及HCCLM3人肝癌细胞和LO2人正常肝细胞中miR-202的表达水平。以miR-202表达水平最低的HCCLM3细胞为转染对象,转染miR-202模拟物或空白对照miRNA,以miR-202表达水平最高的Hep3B细胞为转染对象,转染miR-202抑制物或阴性对照miRNA,并利用实时定量PCR验证转染效率。采用Transwell迁移和侵袭实验检测过表达和敲低miR-202对肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响。生物信息学网站检索并应用荧光素酶报告基因实验验证miR-202的靶基因。实时定量PCR和Western blot检测miR-202靶基因的表达水平。结果：与正常肝细胞LO2相比,miR-202在肝癌细胞的表达水平显著降低;HCCLM3细胞转染miR-202模拟物后,细胞miR-202的表达水平显著增加;过表达miR-202后,HCCLM3细胞的迁移和侵袭能力显著降低;Hep3B细胞转染miR-202抑制物后,细胞miR-202的表达水平显著降低;敲低miR-202后,Hep3B细胞的迁移和侵袭能力显著增强;生物信息学检索及荧光素酶报告基因证明ROCK1基因为miR-202的靶基因。过表达miR-202可明显降低肝癌细胞中ROCK1基因的表达,而敲低miR-202可明显增加肝癌细胞中ROCK1基因的表达。结论：miR-202在肝癌细胞中低表达,miR-202通过抑制ROCK1的表达抑制肝癌细胞的迁移和侵袭。     

miR-4715-5p通过靶向MUC1基因对乳腺癌细胞迁移和增殖的影响

目的 分析微小RNA(miRNA,miR)-4715-5p在乳腺癌组织和细胞系中的表达水平,探讨其高表达对乳腺癌细胞迁移和增殖的影响及机制。方法 采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测miR-4715-5p在乳腺癌组织和细胞系中的表达水平。在miR-4715-5p表达水平最低的乳腺癌细胞中,采用体外转染法分别转染对照模拟物(NC)和miR-4715-5p模拟物,分别命名为对照组和实验组。qRT-PCR法检测两组细胞中miR-4715-5p的表达水平。采用细胞划痕实验和细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测高表达miR-4715-5p对乳腺癌细胞迁移和增殖的影响。采用生物信息学软件和双荧光素酶报告基因实验分别预测和验证miR-4715-5p的靶基因。采用qRT-PCR和Western blot法分别检测靶基因在mRNA和蛋白水平的表达。结果 与癌旁组织比较,乳腺癌组织miR-4715-5p的表达水平显著降低(P<0.01)。与正常乳腺细胞系比较,乳腺癌细胞系miR-4715-5p的表达水平显著降低(P<0.05),MCF-7细胞中的表达水平最低(P<0.01)。与对照组比较,实验组MCF-7细胞中miR-4715-5p的表达水平显著增加(P<0.01)。高表达miR-4715-5p可显著抑制乳腺癌MCF-7细胞的迁移(P<0.01)和增殖(P<0.05)。miR-4715-5p的靶基因可能是黏蛋白1(mucins 1,MUC1),miR-4715-5p可互补结合MUC1 mRNA(P<0.01)。高表达miR-4715-5p可显著抑制MUC1基因的表达(P<0.01)。结论 miR-4715-5p在乳腺癌组织和细胞系中的表达水平显著降低,高表达miR-4715-5p可通过下调MUC1基因的表达,抑制乳腺癌MCF-7细胞的迁移和增殖。     

miR-590-5p和miR-590-3p参与肝细胞肝癌发展的机制

目的研究miR-590的两个臂—miR-590-5p和miR-590-3p对肝癌细胞增殖能力的影响,以及参与肿瘤发生发展的机制。
方法利用miRNA芯片、QPCR对肝癌标本和各细胞株miR-590的表达谱系进行分析和验证。通过脂质体将miR-590 mimic或
inhibitor 转染正常肝细胞或肝癌细胞,MTT生长曲线分析和软琼脂克隆形成实验检测转染后细胞增殖及存活能力的变化。
Targetscan预测miR-590-5p和miR-590-3p的靶基因,并通过萤光素酶报告系统以及western blot进行验证。结果miRNA芯片
结果显示3个肝细胞肝癌（hepatocellular carcinoma, HCC）组织相对于癌旁正常组织,miR-590-5p和miR-590-3p表达上调。通
过QPCR验证了10 例临床HCC肿瘤标本发现80%的HCC组织相对于癌旁组织miR-590-5p 和miR-590-3p 均同步显著上调。
QPCR结果进一步发现,HepG2、Hep3B、Huh7三株HCC细胞株相对于正常肝细胞株L-O2 miR-590-5p/3p同样表达上调。MTT
和软琼脂克隆形成结果显示,L-O2 分别过表达miR-590-5p 和miR-590-3p,细胞的增殖能力都显著增加（P<0.05）;而HepG2、
Hep3B、Huh7分别下调miR-590-5p和miR-590-3p的表达后,细胞的增殖能力也都显著降低（P<0.05）。Targetscan预测,PDCD4
和PTEN 分别作为miR-590-5p 和miR-590-3p 的潜在靶基因。萤光素酶报告系统以及western blot 结果显示miR-590-5p 和
miR-590-3p 可以分别直接下调靶基因PDCD4 和PTEN的表达（P<0.05）。进一步我们发现miR-590-3p 通过下调PTEN激活
PI3K-AKT信号通路,促进AKT1-S473的磷酸化水平。结论在HCC发展过程中miR-590扮演着重要的致癌因子角色,我们结
果发现miR-590的两个臂都具有促进肿瘤发生的生物学功能,它们分别通过靶向调节抑癌基因PDCD4和PTEN的表达来促进
HCC细胞的增殖和存活,并激活核心的PI3K-AKT肿瘤信号通路。由此可见miR-590 在HCC发生发展过程中具有重要的意
义,也可作为临床诊治潜在的新靶标。
     

Hsa_circ_USP42竞争性结合miR-182-5p抑制三阴性乳腺癌转移的机制研究

目的探索hsa_circ_USP42作为miR-182-5p海绵在TNBC中的生物学功能及调控机制。方法RT-PCR技术检测hsa_circ_USP42在TNBC癌组织及癌旁组织中表达;通过双荧光素酶报告基因分析等技术研究hsa_circ_USP42和miR-182-5p的相互作用;过表达hsa_circ_USP42,qPCR技术及Western印迹法检测靶miRNA miR-182-5p及靶基因MTSS1的表达水平;Transwell及CCK8实验检测hsa_circ_USP42对细胞增殖、侵袭和迁移的影响。结果Hsa_circ_USP42在TNBC中表达明显下调（P=0.000）,淋巴结阳性组表达低于淋巴结阴性组（P=0.003）。双荧光素酶实验证实hsa_circ_USP42与靶miR-182-5P可有效结合;细胞功能实验表明,过表达hsa_circ_USP42可抑制TNBC细胞迁移、侵袭和增殖。体外实验表明,过表达hsa_circ_USP42后,靶miRNA miR-182-5p上调,而靶基因MTSS1在转录水平及蛋白水平均降低。结论Hsa_circ_USP42在TNBC中低表达,与miR-182-5p有效结合,可发挥miRNA海绵上调MTSS1表达,抑制TNBC侵袭及转移,是参与TNBC生物学行为机制之一。     

miRNA-210-3p在大肠癌细胞迁移侵袭中的促进作用及其靶基因的生物信息学分析

目的 探讨miR-210-3p在大肠癌细胞迁移、侵袭中的作用,并利用生物信息学方法预测其靶基因及信号通路。方法 采用dbDEMC和OncomiR数据库分析miR-210-3p在大肠癌中的表达情况,通过荧光定量PCR法验证miR-210-3p在大肠癌细胞系中的表达;通过转染miRNA 模拟物、抑制剂上调和下调大肠癌细胞内miR-210-3p的表达量,Transwell法检测转染后大肠癌细胞的迁移和侵袭能力变化;通过miRDB、TargetScan7.2、starBase和miRPathDB数据库预测miR-210-3p靶基因,利用DAVID数据库进行GO分析及信号通路的富集分析,利用GEPIA数据库分析关键基因在大肠癌组织中的表达。结果dbDEMC和OncomiR数据库显示miR-210-3p在大肠癌组织中高表达,并与肿瘤转移和患者预后相关。荧光定量PCR验证miR-210-3p在高转移性结肠癌细胞系HCT-116、LoVo中的表达量高于中转移性细胞系SW480和低转移性细胞系CL187、HCT-8。过表达miR-210-3p能明显增强SW480细胞迁移和侵袭能力;下调miR-210-3p的表达后,LoVo细胞迁移和侵袭能力则明显减弱。共预测出3035个靶基因,其功能主要富集在细胞迁移、黏附、蛋白质代谢等生物学过程以及癌症通路、HIF、Rap1等信号转导通路,GEPIA数据库验证显示RGMA在临床大肠癌组织中呈显著低表达,可能是miR-210-3p的靶基因。结论 miR-210-3p可促进大肠癌细胞迁移和侵袭能力,有望成为大肠癌治疗的新型生物靶点。     

miR-30a-5p调控ECM-受体作用信号通路相关蛋白抑制肺腺癌细胞的侵袭和迁移

目的 探讨miR-30a-5p和细胞外基质（ECM）-受体作用信号通路相关蛋白在肺腺癌细胞进展中发挥的调控作用。方法 将miR-30a-5p模拟物及其阴性对照分别转染到肺腺癌Calu-3细胞内,设为miR-30a-5p模拟物组、模拟物对照组。通过基因集富集分析（GSEA）软件对miR-30a-5p进行通路富集分析。将miR-30a-5p抑制剂及其阴性对照转染到细胞内,设为miR-30a-5p抑制剂组、抑制剂对照组,在miR-30a-5p抑制剂组的细胞中加入ECM-受体相互作用通路蛋白抑制剂,设为miR-30a-5p抑制剂+ECM-受体相互作用抑制剂组。采用qRT-PCR法检测不同处理组细胞中miR-30a-5p mRNA表达水平,采用Western blot法检测肺腺癌细胞系中ECM-受体作用信号通路相关蛋白磷酸化水平,采用噻唑蓝（MTT）实验、细胞划痕愈合实验和Transwell实验分别检测各处理组细胞的增殖、迁移与侵袭能力。结果 与人正常支气管上皮细胞BEAS-2B比较,肺腺癌细胞系SPC-A1、Calu-3、HCC827、PC14中miR-30a-5p表达水平下调（均P<0...     

LncRNA CASC7通过调控miR-19b-3p/SMG1轴抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)癌易感性候选基因7(CASC7)对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测肝癌组织、对应癌旁组织和肝癌细胞系Huh7、HepG2和MHCC97H及正常肝细胞系THLE-2中CASC7、微小RNA-19b-3p(miR-19b-3p)和生殖器形成抑制基因1(SMG1)mRNA表达水平。以肝癌HepG2细胞为研究对象,转染CASC7过表达载体、miR-19b-3p抑制剂或SMG1过表达载体至HepG2细胞,3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)、Transwell和蛋白印迹(Western blot)分别检测过表达CASC7、沉默miR-19b-3p表达或过表达SMG1对HepG2细胞增殖、迁移和侵袭及细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子1A(p21)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和E-钙粘附素(Ecadherin)蛋白表达的影响。双荧光素酶报告基因实验验证CASC7与miR-19b-3p及miR-19b-3p与SMG1之间的调控关系。结果与癌旁组织比较,肝癌组织中CASC7和SMG1 mRNA水平降低,miR-19b-3p水平升高,差异均有统计学意义(P0.05)。与THLE-2细胞比较,肝癌细胞系Huh7、HepG2和MHCC97H中CASC7和SMG1 mRNA水平降低,miR-19b-3p水平升高,差异均有统计学意义(P0.05)。过表达CASC7、沉默miR-19b-3p表达或过表达SMG1均可降低HepG2细胞存活率、迁移和侵袭数及Cyclin D1和MMP-2蛋白表达,提高p21和E-cadherin蛋白表达,差异均有统计学意义(P0.05)。CASC7负调控miR-19b-3p表达,miR-19b-3p负调控SMG1表达。过表达miR-19b-3p或沉默SMG1表达逆转了过表达CASC7对HepG2细胞存活率、迁移和侵袭及相关蛋白Cyclin D1、p21、MMP-2和Ecadherin表达的影响。结论过表达CASC7可能通过调控miR-19b-3p/SMG1轴抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

miR-200c-3p靶向CCNE2抑制肾母细胞瘤细胞增殖

目的 预测和验证miR-200c-3p的靶基因并探讨其对肾母细胞瘤增殖的抑制作用。方法 应用生物信息学软件对miR-200c-3p在肾母细胞瘤中的靶基因进行预测,建立SK-NEP-1及G401的miR-200c-3p过表达及抑制表达的稳定细胞系。实验设未转染组（Blank）、模拟物阴性对照组（mimic NC）、miR-200c-3p模拟物组（miR-200c-3p mimic）、抑制剂阴性对照组（inhibitor NC）及miR-200c-3p抑制剂组（miR-200c-3p inhibitor）。采用 RT-PCR及Western blot方法检测CCNE2在SK-NEP-1及G401不同组中的表达水平,荧光素酶报告基因检测miR-200c-3p 和CCNE2的靶向关系,细胞计数盒（CCK-8）和软琼脂克隆形成实验检测miR-200c-3p对SK-NEP-1及G401细胞增殖的抑制作用。结果 生物信息学方法预测CCNE2为miR-200c-3p的靶基因之一。RT-PCR实验结果示肾母细胞瘤细胞中miR-200c-3p模拟物组的CCNE2的表达水平低于模拟物阴性对照组（P<0.05）;荧光素酶报告基因检测证实CCNE2是miR-200c-3p的靶基因（P<0.01）。Western blot示在肾母细胞瘤细胞中miR-200c-3p模拟物组的CCNE2蛋白的表达水平低于模拟物阴性对照组（P<0.05）;CCK-8和软琼脂克隆形成实验证实miR-200c-3p对肾母细胞瘤细胞的增殖能力有明显抑制作用（P<0.01）;而miR-200c-3p抑制剂组结果相反。结论 miR-200c-3p通过靶基因 CCNE2抑制肾母细胞瘤细胞的增殖。     

miR-485-5 p介导SOX5基因表达对肝细胞肝癌细胞活力及迁移侵袭的影响

目的 研究微小RNA(miR)-485-5 p靶向性别决定区Y框蛋白5(SOX5)对肝细胞肝癌(HCC)细胞活力和迁移侵袭能力的影响及作用机制.方法 采用Targetscan 7.1预测软件及双荧光素酶报告基因试验检测miR-485-5 p对SOX5基因的靶向调控作用.qRT-PCR检测HCC组织中miR-485-5 p和SOX5 mRNA的表达水平,并分析两者的相关性.常规培养HCC细胞Huh7,将其分为NC、miR-485-5p mimic和miR-485-5 p mimic+oe-SOX5组,采用lip2000进行各组质粒的转染.CCK-8实验检测各组细胞的活力,Transwell实验检测各组细胞的迁移侵袭能力.Western blot检测各组细胞中pAkt和pGSK3β蛋白的表达.结果 Targetscan 7.1预测软件、双荧光素酶报告基因试验表明miR-485-5 p靶向调控SOX5.与HCC癌旁组织相比,miR-485-5 p在HCC组织中低表达,SOX5 mRNA在HCC组织中高表达,两者的表达呈负相关性.与NC组相比,miR-485-5 p mimic组和miR-485-5 p mimic+oe-SOX5组HCC细胞活力和迁移侵袭能力降低.而与miR-485-5 p mimic组相比,miR-485-5 p mimic+oe-SOX5组HCC细胞活力和迁移侵袭能力增加,过表达SOX5减弱了miR-485-5 p mimic对HCC细胞活力和迁移侵袭能力的抑制作用.与NC组相比,miR-485-5 p mimic和miR-485-5 p mimic+oe-SOX5组细胞中pAkt和pGSK3β蛋白表达降低.而与miR-485-5 p mimic组相比,miR-485-5 p mimic+oe-SOX5组pAkt和pGSK3β蛋白表达增加,过表达SOX5减弱了miR-485-5 p mimic对Akt/GSK3β信号通路活性的抑制作用.结论 miR-485-5 p靶向调控SOX5表达抑制HCC细胞活力及迁移侵袭能力.     

lncRNA MNX1-AS1通过调控miR-218-5p影响非小细胞肺癌细胞的增殖、凋亡及迁移

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)MNX1-AS1通过调控miR-218-5p的表达对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法qRT-PCR检测MNX1-AS1和miR-218-5p在肺癌细胞系及肺正常上皮细胞系中的表达;采用双荧光素酶报告基因实验和RNA pull down实验验证MNX1-AS1和miR-218-5p之间的靶向关系;干扰A549细胞中MNX1-AS1和miR-218-5p的表达后,MTT、流式细胞术和Transwell实验检测MNX1-AS1靶向miR-218-5p对癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响。结果与肺正常上皮细胞系相比,肺癌细胞系中MNX1-AS1表达升高,miR-218-5p表达降低(P＜0.05);荧光素酶报告基因实验显示,MNX1-AS1可与miR-218-5p结合导致荧光素酶活性显著降低(P＜0.05);RNA pull down实验证实miR-218-5p能特异性结合MNX1-AS1(P＜0.05);抑制A549细胞中MNX1-AS1的表达后,miR-218-5p水平上调,细胞的增殖、迁移和侵袭能力均显著降低,凋亡率显著升高;与MNX1-AS1抑制剂组相比,共抑制MNX1-AS1和miR-218-5p的细胞增殖、迁移、侵袭能力升高,凋亡率下降(P＜0.05)。结论MNX1-AS1可以通过靶向下调miR-218-5p的表达影响非小细胞癌的增殖、凋亡、迁移和侵袭。     

前列腺癌中miR-140-5p靶向YES1抑制细胞增殖和迁移的作用研究

  目的  研究miR-140-5p与YES1的靶向调控关系,阐明miR-140-5p通过YES1调控前列腺癌发生发展的作用,并研究miR-140-5p在前列腺癌细胞中的潜在作用机制。   方法  采用实时定量PCR检测前列腺癌组织和细胞系中miR-140-5p的表达,采用CCK-8、细胞克隆实验、迁移和划痕实验测定miR-140-5p上调对前列腺癌细胞增殖和迁移的影响,用荧光素酶报告实验和蛋白印迹实验鉴定miR-140-5p的靶基因。   结果  癌组织中的miR-140-5p表达量相对癌旁组织明显下调,差异有统计学意义(P＜0.05)。与RWPE-1细胞相比,前列腺癌细胞系中miR-140-5p的表达水平较低,差异具有统计学意义(P＜0.05)。CCK-8实验转染后miR-140-5p的细胞增殖率显著下降,细胞克隆实验实验组相比对照组细胞克隆数目偏少,差异均有统计学意义(P＜0.05)。划痕实验转染miR-140-5p细胞系的愈合能力明显减弱(P < 0.05);Transwell小室实验转染miR-140-5p的细胞系的迁移能力下降(P < 0.05);说明过表达miR-140-5p可抑制细胞的增殖和迁移。生物信息学分析和荧光素酶报告分析确定YES1为miR-140-5p的潜在靶基因。YES1在前列腺癌细胞中过表达,与miR-140-5p表达呈负相关,差异具有统计学意义(P＜0.05)。   结论  以上实验表明miR-140-5p通过直接靶向YES1在前列腺癌发生发展中起抑制作用,提示miR-140-5p可能是一个新的靶点,用于前列腺癌的诊断和治疗。