基于ROS/NLRP3/Caspase-1通路的鹿芪方对慢性心力衰竭小鼠心肌细胞焦亡的影响

目的观察鹿芪方对慢性心力衰竭小鼠心肌细胞焦亡的影响,从ROS/NLRP3/Caspase-1通路探讨其作用机制。方法 60只C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、模型组、鹿芪方组、培哚普利组,采用冠状动脉前降支结扎法制备慢性心力衰竭小鼠模型。鹿芪方组和培哚普利组分别予相应药液灌胃,假手术组和模型组予等量生理盐水灌胃,连续6周。超声检测小鼠心功能,HE染色、Masson染色检测小鼠心肌组织病理变化和胶原纤维沉积,DHE荧光探针检测心肌组织活性氧(ROS)含量,Westernblot检测心肌组织NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达,免疫组化检测白细胞介素(IL)-1β表达,透射电镜观察心肌组织超微结构。结果与假手术组比较,模型组小鼠左室射血分数(LVEF)和左室收缩分数(LVFS)降低,左室舒张末期内径(LVIDd)与左室收缩末期内径(LVIDs)升高;心肌细胞明显增大,排列不规则,有较多炎性细胞聚集及胶原纤维沉积;心肌组织ROS含量增加,NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白及IL-1β表达升高,差异均有统计学意义(P0.01)。与模型组比较,鹿芪方组与培哚普利组小鼠LVEF和LVFS升高,LVIDd和LVIDs降低;心肌细胞损伤改善,胶原纤维沉积明显减少,心肌纤维化明显减轻;心肌组织ROS含量减少,NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白及IL-1β表达降低,差异均有统计学意义(P0.01)。结论鹿芪方能有效减轻慢性心力衰竭小鼠心肌细胞焦亡,其机制可能与抑制ROS/NLRP3/Caspase-1通路活化,减轻心肌炎症反应相关。     

电针对急性心肌梗死小鼠心肌组织炎症反应、趋化因子及心肌细胞凋亡水平的影响

目的观察电针对急性心肌梗死小鼠心肌组织炎症反应、趋化因子及心肌细胞凋亡水平的影响,探讨其保护心肌的作用机制。方法结扎左冠状动脉前降支,构建小鼠急性心肌梗死模型。实验小鼠随机分为对照组、模型组和电针组,电针治疗3、7 d后,取心脏组织,分别用于制备冰冻切片和提取总RNA。免疫荧光染色检测梗死及周边区CD11b表达,RT-q PCR检测梗死及周边区炎症相关因子白细胞介素(IL)-10、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和趋化因子基质细胞衍生因子-1(SDF-1)、干细胞因子(SCF)及单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的表达,TUNEL染色检测梗死及周边区细胞凋亡情况。结果与模型组比较,电针组梗死及周边区CD11b阳性表达下降(P<0.05),促炎因子IL-1β相对表达量下调,治疗7 d时TNF-α明显上调(P<0.01),IL-10、MCP-1无明显变化,SCF相对表达量治疗3d时明显升高(P<0.01)、SDF-1相对表达量治疗7d时明显升高(P<0.05),梗死及周边区心肌细胞凋亡明显减少(P<0.05)。结论电针可能通过抑制模型小鼠梗死区炎症反应,调节趋化因子水平,从而降低模型小鼠心肌损伤。     

丹参酮ⅡA通过NLRP3/Caspase-1信号通路对心肌成纤维细胞的保护作用

目的:探讨丹参酮ⅡA对心肌成纤维细胞损伤的保护作用及可能机制。方法:分离和培养大鼠心肌成纤维细胞(Cardiac Fibroblast, CFs)。以脂多糖(LPS)刺激CFs建立脓毒症心肌损伤体外模型,以不同浓度丹参酮ⅡA预处理CFs 30 min后,给予LPS刺激,设对照组,LPS模型组,LPS+不同浓度TSA(2μmol/L、10μmol/L、50μmol/L)组;采用蛋白质免疫印迹试验法(Western blotting)检测CFs的NLRP3和Caspase-1蛋白表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清中IL-1β和IL-18的含量。结果:LPS刺激24 h后,CFs的NLRP3蛋白的表达水平最高。LPS模型组NLRP3和Caspase-1蛋白的表达较对照组明显升高(P0.01)。与LPS模型组比较,丹参酮ⅡA(10μmol/L、50μmol/L)处理组NLRP3和Caspase-1蛋白的表达均明显降低(P0.05);丹参酮ⅡA处理组的IL-1β和IL-18水平均明显低于LPS模型组(P0.05)。结论:丹参酮ⅡA能抑制LPS诱导的心肌成纤维细胞内NLRP3/Caspase-1炎症反应信号通路分子的表达,这可能是其保护心肌细胞的分子机制之一。     

心肌康对慢性病毒性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡及Fas/FasL蛋白表达影响的实验研究

目的:观察心肌康对慢性病毒性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡及Fas/FasL蛋白表达的影响,探讨心肌康的作用机制。方法:给Balb/c小鼠多次接种嗜鼠心肌柯萨奇B3病毒制作慢性VMC模型,首次感染病毒50天后将存活小鼠分为模型组、心肌康组及氯沙坦组,同时设正常对照组,分别予以相应药物干预30天,采用原位末端标记法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡及免疫组化方法检测Fas/FasL蛋白表达。结果:正常组未见到心肌细胞凋亡,模型组心肌细胞凋亡,凋亡率较正常组显著增加(P<0.05),心肌康组和氯沙坦组凋亡率较模型组显著降低(P<0.05)。模型组Fas/FasL蛋白表达较正常组显著增多(P<0.01),心肌康组和氯沙坦组较模型组显著降低(P<0.01)。结论:心肌细胞凋亡参与了慢性病毒性心肌炎的发病,心肌康能够抑制VMC心肌细胞的凋亡,通过下调Fas/FasL蛋白表达,对心肌细胞起到保护作用。     

电针预处理对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌Gasdermin D、半胱氨酸蛋白酶-1及白细胞介素-1β表达的影响

目的:观察电针预处理对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠心肌细胞焦亡相关蛋白半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、Gasdermin D(GSDMD)、白细胞介素-1β(IL-1β)的影响,探讨电针预处理减轻MIRI损伤的可能机制。方法:SD大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、电针组,每组10只。电针组电针大鼠双侧“内关”,每次20 min,每日1次,连续3 d。采用冠状动脉左前降支结扎法复制MIRI大鼠模型。采用超声心动图观察造模4 h后大鼠左心室射血分数(LVEF)以评估心功能;TTC染色法观察大鼠心肌梗死面积;免疫组织化学法观察大鼠心肌组织中GSDMD表达情况;Western blot法检测心肌组织GSDMD、Caspase-1、IL-1β蛋白表达水平。结果:与空白组相比,假手术组心肌组织GSDMD表达升高(P<0.05)。与假手术组相比,模型组大鼠术后4 h时LVEF明显下降(P<0.000 1),梗死面积增大(P<0.000 1),心肌组织GSDMD表达显著升高(P<0.000 1),心肌GSDMD、Caspase-1、IL-1β蛋白表达升高(P...     

从线粒体凋亡通路探讨参附注射液对脓毒症小鼠心肌损害的影响

目的观察参附注射液对脂多糖(Lipopolysaccharides, LPS)所致脓毒症小鼠心肌线粒体凋亡及Caspase-9蛋白表达的影响,从线粒体凋亡通路探讨参附注射液对脓毒症心肌细胞的保护机制。方法选用56只6周龄SPF级雄性B6小鼠,随机分为正常对照组(NC)、假脓毒症组(Sham)、脓毒症模型组(LPS)、参附注射液组(SFI)4组。采用腹腔注射LPS法构建脓毒症小鼠模型,分别于造模后6小时、12小时、24小时取小鼠心肌组织,电镜观察小鼠心肌超微结构变化,苏木精-伊红染色(HE)及心肌细胞凋亡TUNEL检测,Western-blot法测定心肌组织B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(B-cell lymPhoma-2,Bcl-2)、BH3介导的死亡域激动剂(BH3 interacting-domain death agonist, Bid)、截短型Bid(truncated Bid, tBid)、半胱胺酸-天门冬胺酸酶(cysteine-dePendent asPartate-sPecifc Proteases-9,Caspase-9)蛋白表达。结果电镜可见脓毒症小鼠心肌线粒体肿胀明显,部分出现"空泡样变"。造模后12小时LPS模型组小鼠心肌线粒体改变最严重,经过参附注射液处理后小鼠心肌空泡样变以及线粒体肿胀均有明显缓解。HE染色可见LPS组心肌结构破坏、局部坏死、间质水肿、炎性细胞浸润以及空泡样变;而SFI组心肌结构基本完整,间质水肿以及炎性细胞浸润明显改善;TUNEL染色可见参附组凋亡水平有明显改善(P0.05);Western-blot检测造模后LPS组小鼠心肌Bcl-2表达较Sham组明显降低,SFI组与LPS组相较表达明显增强,差异具有统计学意义(P0.01),同时SFI组Bid、tBid、Caspase-9表达较LPS组明显降低,差异有统计学意义(P0.01)。结论参附注射液可通过下调脓毒症小鼠心肌Bid、tBid、Caspase-9表达,上调Bcl-2表达,保护心肌线粒体结构和功能,抑制心肌线粒体凋亡,对脓毒症小鼠心肌损伤起保护性作用。     

氧化苦参碱对高糖引起的H9C2细胞氧化应激损伤的影响

目的:研究氧化苦参碱对高糖诱导H9C2细胞氧化应激损伤的保护机制。方法:分组培养H9C2心肌细胞并分为空白组,高糖组,氧化苦参碱低、高剂量组(50,100 mg·L^-1),阳性药维生素E组(1×10^-4 mol·L^-1),甘露醇等渗组。通过乳酸脱氢酶外漏法检测细胞损伤,检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量变化,通过荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)含量和细胞线粒体功能的完整性,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白的表达。结果:与空白组比较,模型组细胞内MDA,ROS含量,Bax蛋白表达水平显著升高(P<0.01),而SOD活性、线粒体膜电位和Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。与高糖组比较,氧化苦参碱显著降低乳酸脱氢酶的外泄、显著抑制细胞内ROS的产生(P<0.01),明显降低MDA的含量和Bax蛋白的表达(P<0.05),增加SOD活性、线粒体膜电位和Bcl-2蛋白的表达(P<0.01)。结论:氧化苦参碱通过改善线粒体功能来调节氧化应激从而抑制由高糖引起的H9C2心肌细胞凋亡。     

氧化苦参碱心肌保护作用及其作用靶点的研究

目的研究氧化苦参碱对心肌缺血的保护作用,并进一步探讨其可能的作用靶点。方法采用结扎大鼠左冠状动脉前降支制备急性心肌缺血模型,观察氧化苦参碱对心肌缺血的保护作用;应用TUNEL法检测氧化苦参碱对心肌缺血大鼠心肌细胞凋亡指数的影响;应用半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)研究氧化苦参碱对急性心肌缺血大鼠心肌L型Ca2 通道蛋白mRNA表达的作用。结果氧化苦参碱大、中、小剂量(20、10、5mg/kg)组均可缩小心肌梗死面积;氧化苦参碱大、中剂量能明显提高血清SOD活力、降低MDA水平;TUNEL法证实氧化苦参碱可降低心肌细胞凋亡指数;RT-PCR检测结果表明,急性心肌缺血大鼠心肌L型Ca2 通道蛋白α1CmR-NA表达水平明显高于假手术组(P<0.01),经氧化苦参碱治疗后,心肌L型Ca2 通道蛋白α1CmRNA表达降低(P<0.05)。结论氧化苦参碱对大鼠急性心肌缺血具有保护作用,其机制可能与抑制脂质过氧化,降低大鼠心肌L型Ca2 通道蛋白α1CmRNA表达,从而抑制心肌细胞凋亡有关。     

复方丹参滴丸调控LOX-NF-κB炎症途径治疗心肌缺血的机制研究

目的 基于动物心肌缺血模型及体外心肌细胞损伤模型探究复方丹参滴丸调控脂氧合酶（lipoxygenase,LOX）-核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)途径抑制炎症反应治疗心肌缺血的作用机制。方法 采用冠状动脉左前降支结扎术制备大鼠心肌缺血模型,心电图检测心肌缺血情况;Western blotting检测心肌组织LOX途径关键酶LOX5、LOX12、LOX15及下游分子p-NF-κB p65和白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)的蛋白表达。体外培养H9c2心肌细胞,采用缺氧缺糖6 h诱导心肌细胞损伤模型,荧光倒置显微镜下观察心肌细胞形态;MTT法检测细胞活力;Western blotting检测LOX-NF-κB途径相关蛋白表达。结果 复方丹参滴丸显著抑制心肌缺血大鼠心肌组织中LOX5、LOX12、LOX15和IL-1β的蛋白表达及NF-κB p65的磷酸化水平（P<0.01、0.001）。体外细胞实验结果显示复方丹参滴丸明显改善H9c2心肌细胞缺氧缺糖损伤,显著提高心肌细胞存活率（P<0.01、0.001）,降低LOX5、L...     

基于焦亡途径研究香青兰总黄酮对博来霉素诱导的肺纤维化小鼠的作用机制北大核心CSCD

探讨香青兰总黄酮(TFDM)在博来霉素(BLM)所致肺纤维化小鼠的作用机制,并探究其针对焦亡途径的作用机制。肺纤维化小鼠模型使用气管内滴注博来霉素(4 mg·kg^(-1))药液的方法建立,在相同条件下,正常组使用等量的生理盐水。造模次日,将纯水灌胃于正常组以及博来霉素组,香青兰总黄酮组和地塞米松组灌胃对应药物治疗,连续28 d。28 d后测定肺纤维化小鼠肺组织中羟脯氨酸(HYP)的含量,HE和Masson染色观察肺部炎症和纤维化的程度,ELISA检测肺纤维化小鼠血清中白细胞介素-18(IL-18)和白细胞介素-1β(IL-1β)的含量。采用Western blot法检测肺纤维化小鼠肺组织中蛋白的表达情况。HE染色显示,博来霉素组小鼠肺组织结构异常,并出现较多炎性细胞浸润;Masson染色显示,博来霉素组小鼠肺组织出现较多被染成蓝色的胶原纤维化组织。与正常组相比,博来霉素组小鼠肺组织中HYP含量以及血清中IL-18和IL-1β的水平显著上调(P<0.01);肺组织中Col-1、FN1、α-SMA、caspase-1、GSDMD、NLRP3、p62、ASC蛋白的表达显著升高(P<0.01);ATG5和Beclin1蛋白的表达显著降低(P<0.01)。与博来霉素组相比,香青兰总黄酮组和地塞米松组小鼠肺组织结构正常,炎性细胞浸润减少;蓝色的胶原纤维组织较少,肺组织纤维化程度得到缓解;HYP含量以及IL-18、IL-1β的水平显著下调(P<0.05,P<0.01);肺组织中Col-1、FN1、α-SMA、caspase-1、GSDMD、NLRP3、p62、ASC蛋白的表达显著降低(P<0.01),ATG5和Beclin1蛋白表达显著升高(P<0.01)。结果表明,香青兰总黄酮可以通过下调炎性因子及相关蛋白水平,并通过调控焦亡途径,同时有可能影响自噬,来有效缓解博来霉素所致的肺纤维化进程。     

氧化苦参碱对神经痛小鼠坐骨神经功能的修复作用研究

目的:探讨氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)对神经性疼痛小鼠坐骨神经功能的修护作用。方法:将C57BL/6小鼠分为假手术组、模型组(慢性坐骨神经结扎)和氧化苦参碱组;氧化苦参碱组小鼠腹腔注射OMT,150 mg/kg,给药7 d,假手术组和模型组小鼠腹腔注射生理盐水;Von Frey纤毛笔检测各组小鼠的机械缩足反射阈值;计算坐骨神经功能指数并测定其传导速度观测坐骨神经功能恢复情况;qRT-PCR法检测各组小鼠坐骨神经IL-1βmRNA、IL-6 mRNA和TNF-αmRNA的表达;ELISA法检测各组小鼠坐骨神经IL-1β、IL-6和TNF-α炎性因子的含量。结果:氧化苦参碱组小鼠机械缩足反射阈值、坐骨神经功能指数及其传导速度均明显高于模型组;氧化苦参碱组小鼠坐骨神经IL-1βmRNA、IL-6 mRNA和TNF-αmRNA表达及蛋白含量均显著低于模型组。结论:氧化苦参碱对慢性坐骨神经结扎小鼠坐骨神经的功能损伤有一定的修护作用,其作用机制可能为减轻炎症反应所致坐骨神经损伤。     

红芪多糖通过调控PI3K/Akt信号通路对异丙肾上腺素所致小鼠心肌肥厚的改善作用

目的 研究红芪多糖对异丙肾上腺素(ISO)诱导小鼠心肌肥厚及PI3K/Akt信号通路的影响。方法 50只小鼠随机分为空白组、模型组、普萘洛尔组(40 mg/kg)和红芪多糖低、高剂量组(60、120 mg/kg),每组10只，灌胃给予相应剂量药物15 d,给药1 d后皮下注射ISO 14 d进行造模。给药结束后24 h,计算小鼠心脏指数，Masson染色观察心肌组织形态变化，ELISA法检测心肌组织FFA、ATP、AMP水平，RT-qPCR法检测心肌组织ANP、BNP mRNA表达，Western blot法检测心肌组织PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达。结果 与空白组比较，模型组小鼠心脏指数升高(P<0.05,P<0.01),心肌细胞肥大、胶原纤维增生，FFA水平升高(P<0.01),ATP/AMP比值降低(P<0.01),ANP、BNP mRNA表达升高(P<0.01),p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt蛋白表达均降低(P<0.01);红芪多糖可改善ISO诱导小鼠的各项指标(P<0.05,P<0.01),且高剂...     

强心一号复方对脓毒症小鼠心肌细胞凋亡的影响

目的从心肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达调节的角度探讨强心一号复方对脓毒症小鼠的心脏保护机制。方法取36只健康雄性C57BL/6小鼠,随机分为假手术组、模型组、强心组,每组12只。模型组和强心组采取盲肠结扎穿孔术(CLP)制备脓毒症模型。强心组于术后2 h给予1 g/kg强心一号药液灌胃,模型组和假手术组给予等量0.9%氯化钠注射液灌胃。采用临床分级评价术后临床指数,麦胚凝集素(WGA)染色评价心肌细胞肥大,原位末端标记法(TUNEL)评价心肌细胞凋亡,蛋白免疫印迹法检测凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Cleaved Caspase3)的蛋白表达水平。结果与假手术组相比,模型组临床评分显著下降(P 0.05),心肌细胞代偿性肥大(P 0.05),心脏组织TUNEL阳性细胞增多(P 0.05),Cleaved Caspase3蛋白表达显著增高(P 0.05)。与模型组相比,强心组临床评分显著改善(P 0.05),心肌细胞代偿性肥大情况改善(P 0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白表达显著增高(P 0.05),促凋亡蛋白Bax和Cleaved Caspase3蛋白表达显著下降(P 0.05)。结论强心一号复方可抑制CLP小鼠心肌细胞凋亡从而发挥心脏保护作用,其机制可能与调节凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Cleaved Caspase3的表达有关。     

氧化苦参碱对大鼠急性心肌缺血时心肌细胞凋亡的影响

 目的研究氧化苦参碱对大鼠急性缺血性心肌细胞凋亡的影响及其机制。方法以结扎左冠状动脉前降支方法建立大鼠急性心肌缺血模型,缺血6h后分别测定心肌梗死范围,血清超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量;采用HE染色检测心肌组织病理学改变;分别采用原位末端脱氧核糖核酸转移酶介导的d-UTP缺口末端标记(TUNEL)法及SP免疫组织化学法检测心肌细胞凋亡指数,凋亡相关蛋白Fas/FasL和Bcl-2的表达情况。结果氧化苦参碱能缩小大鼠缺血心肌梗死范围,提高血清SOD活力,降低MDA含量,减轻心肌组织病理性损伤,降低心肌细胞凋亡指数,抑制Fas蛋白表达,增强Bcl-2蛋白表达,但对FasL蛋白表达无明显影响。结论氧化苦参碱对大鼠急性心肌缺血损伤保护作用的机制可能与其抗脂质过氧化作用,抑制Fas蛋白和增强Bcl-2蛋白表达从而抑制心肌细胞凋亡有关。     

氧化苦参碱对病毒性心肌炎小鼠巨噬细胞移动抑制因子及肥大细胞的影响

目的探讨氧化苦参碱对病毒性心肌炎小鼠心肌组织中肥大细胞数量及巨噬细胞移动抑制因子(MIF)蛋白表达的影响。方法将60只4周龄Balb/c小鼠随机分为空白组、模型组、氧化苦参碱低剂量组和氧化苦参碱高剂量组,每组15只。空白组小鼠每日腹腔接种0.1 mL不含病毒的Eagle’s液,余3组腹腔接种0.1 mL含柯萨奇病毒B3的病毒液建立病毒性心肌炎模型,共7 d。第8天开始,氧化苦参碱低、高剂量组分别给予0.025 mg/(kg·d)和0.1 mg/(kg·d)氧化苦参碱溶液灌胃,空白组与模型组予等量的生理盐水灌胃,均每日1次,连续10 d。第18天取各组小鼠心肌组织,甲苯胺蓝染色法观察小鼠心肌肥大细胞数量,免疫组化法检测心肌组织中MIF蛋白表达情况,用偏相关分析研究MIF蛋白表达水平与心肌病理积分的相关性。结果模型组肥大细胞数量和MIF蛋白表达水平均明显高于空白组(P均0.05),氧化苦参碱低、高剂量组均明显低于模型组(P均0.05),且氧化苦参碱高剂量组均明显低于氧化苦参碱低剂量组(P均0.05);相关分析显示MIF蛋白表达水平与心肌病理积分呈正相关(P0.05)。结论 MIF蛋白高表达与心肌损害密切相关,氧化苦参碱可能通过减少心肌肥大细胞数量、降低MIF表达抑制病毒性心肌炎小鼠心肌的炎性病变,且有剂量依赖性。     

木犀草素通过调节上皮钠通道影响肺上皮离子转运

目的探究木犀草素(luteolin,Lut)对H441细胞和小鼠肺组织上皮钠通道(epithelial sodium channels,ENaC)的影响及相关机制。方法通过CCK-8毒性实验检测Lut对H441细胞的最佳处理浓度;将生长状态良好的H441细胞分为空白组、脂多糖(LPS)模型组(10μg·mL^-1)、Lut组(10μmol·L^-1)、Lut+LPS组,将各组进行对应处理后,以Western Blot法检测各组H441细胞α-、γ-ENaC蛋白表达情况;将16只雄性BALB/c小鼠随机分为空白组、LPS模型组(5 mg·kg^-1)、Lut组(20 mg·kg^-1)、Lut+LPS组,其中LPS模型组和Lut+LPS组用LPS复制急性肺损伤(acute lung injury,ALI)模型,模型复制前、后12 h Lut组及Lut+LPS组给予腹腔注射Lut治疗,模型复制24 h后,处死小鼠,取小鼠肺组织及血清,应用组织切片HE染色技术观测ALI小鼠肺组织病理变化以及Lut对其的治疗作用;以Western Blot法检测各组α-、γ-ENaC蛋白在小鼠肺组织中的表达;用ELISA技术检测各组小鼠血清中环磷酸鸟苷(cGMP)蛋白表达的变化。结果CCK-8实验结果表明,与空白组相比,5、10μmol·L^-1Lut能促进H441细胞增殖(P<0.05),但当Lut浓度达到25μmol·L^-1后,Lut抑制H441细胞增殖(P<0.01)。组织切片HE染色结果说明,LPS诱导小鼠ALI模型复制成功,Lut能改善ALI模型小鼠肺组织病理变化。Western Blot实验结果表明,与空白组比较,模型组的H441细胞以及小鼠肺组织α-、γ-ENaC蛋白表达均下降(P<0.01);与模型组比较,Lut+LPS组的H441细胞及小鼠肺组织α-、γ-ENaC蛋白表达水平升高(P<0.01)。ELISA结果表明,与空白组比较,LPS能降低小鼠血清中cGMP水平(P<0.01);与模型组比较,Lut+LPS组小鼠血清中cGMP表达水平升高(P<0.01)。结论木犀草素能通过提高急性肺损伤中肺ENaC蛋白表达来调节肺上皮离子转运,其机制可能与调节c GMP水平有关。     

益脉颗粒对高脂合并心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞焦亡的影响

目的 观察高脂合并心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠使用中药益脉颗粒进行干预后,大鼠心肌细胞焦亡的变化情况,阐述细胞焦亡在益脉颗粒预防治疗MIRI中的调节效应以及分子机制。方法 将60只实验动物随机将其分成3个组别,即假手术组、模型组和益脉颗粒高剂量组。常规饲料喂养假手术组,高脂饲料喂养模型组和益脉颗粒高剂量组,均喂养2周。假手术组和模型组大鼠每天灌服2次10 mL/kg生理盐水,益脉颗粒组每日灌服2次10 mL/kg中药煎液,1周后进行缺血再灌注造模。MIRI造模完成后(缺血30 min再灌注2 h),大鼠腹主动脉进行取血,后分离血清备用。全自动生化分析仪检测3组大鼠血脂水平;HE染色观察各组大鼠心肌病理形态学变化;实时荧光定量PCR和Wes全自动蛋白质印迹定量分析系统检测细胞焦亡相关蛋白GSDMD、Caspase1、IL-1β、NLRP3、TLR4 mRNA及蛋白表达。结果 相较于假手术组,模型组大鼠HDL-C含量显著降低(P<0.05),其余各指标血清含量(TC、TG、LDL-C)均显著升高(P<0.05);心肌组织存在间质水肿、炎性细胞的浸润,大鼠心肌GSDMD、C...     

黄芩汤对溃疡性结肠炎小鼠NLRP3/caspase-1细胞焦亡通路的影响

探讨黄芩汤对溃疡性结肠炎小鼠细胞焦亡的影响,并通过NOD样受体热蛋白结构域3(NOD-like receptor thermoprotein domain 3,NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸酶-1(caspase-1)通路阐释其可能的作用机制。建立3%葡聚糖硫酸钠诱导小鼠实验性溃疡性结肠炎模型,实验分为6组:正常组,模型组,黄芩汤低、中、高(4.55,9.1,18.2 g·kg~(-1))剂量组及柳氮磺胺吡啶组(0.45 g·kg~(-1))。造模同时给予灌胃给药,连续7 d,第8天实验结束时采集结肠组织进行HE染色观察病理变化,酶联免疫法检测结肠组织中细胞因子白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18)含量的变化,微板法检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)水平,TUNEL染色法检测细胞死亡,免疫组织化学染色法检测结肠组织中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD,ASC)的表达水平,蛋白免疫印迹法检测结肠中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、caspase-1、消皮素D(gasdermin D,GSDMD)蛋白的表达。经过检测发现,与正常组相比,模型组LDH含量、TUNEL染色阳性、炎症因子(IL-18和IL-1β)及焦亡相关蛋白表达显著升高(P0.05)。与模型组相比,黄芩汤不同剂量干预组LDH含量、TUNEL染色阳性、炎症因子(IL-18和IL-1β)及焦亡相关蛋白表达降低,其中以黄芩汤高剂量组效果更显著(P0.05)。HE染色结果表明,黄芩汤能改善小鼠结肠组织病理学变化。以上结果表明黄芩汤对溃疡性结肠炎小鼠细胞焦亡有抑制作用,其作用机制与调控NLRP3/caspase-1通路密切相关。     

苦参碱对缺血再灌损伤心肌细胞凋亡及bcl-2/bax基因转录的影响

目的探讨苦参碱(Oxymatrine)对缺血-再灌心肌细胞凋亡的影响极其作用机制。方法40只大鼠随机分为两组,采用结扎左冠状动脉制备心肌缺血再灌(IR)模型;苦参碱(OMT组)处理组(腹腔注射苦参碱60mg/kg)及缺血-再灌组(腹腔注射等量生理盐水)(IR组);实验结束前取心脏标本,进行细胞凋亡TUNEL法检测以及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分析bcl-2和baxmRNA的表达水平;结果①苦参碱治疗组心肌细胞凋亡指数(AI)明显低于对照组(P<0.01);②苦参碱处理组心肌组织bcl-2的mRNA的相对表达量明显高于对照组(P<0.01),baxmRNA的相对表达量无明显改变(P>0.05),bcl-2mRNA/baxmRNA比值则明显增高(P<0.05)。结论苦参碱可通过上调缺血-再灌心肌细胞bcl-2的基因转录,抑制细胞凋亡,减轻心肌损伤。     

脑心通调控NLRP3/Caspase-1通路抑制脂多糖诱导的BV2细胞焦亡

目的:探索脑心通醇提物对脂多糖(LPS)诱导的小胶质细胞BV2焦亡的影响,并通过NOD样受体热蛋白结构域3(NLRP3)/半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)通路阐释其可能的作用机制。方法:LPS(1 mg·L^-1)体外诱导BV2细胞的同时,加入不同质量浓度脑心通醇提物(2,10,50 mg·L^-1)干预后,分别采用MTS法检测细胞活性,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测白细胞介素-1β(IL-1β),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和NLRP3的mRNA水平;免疫荧光法检测NLRP3蛋白表达的情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测NLRP3/Caspase-1通路关键蛋白表达。结果:与空白组比较,LPS(1 mg·L^-1)能明显降低BV2细胞活性,显著升高IL-1β,TNF-α及NLRP3 mRNA表达水平(P<0.01),且可提升NLRP3蛋白表达水平以及Caspase-1剪切体和前体蛋白的比值(Caspase-1 p20/Caspase-1)。与LPS组比较,脑心通醇提物(2,10,50 mg·L^-1)干预后,逆转了LPS导致的细胞活性降低(P<0.01),50 mg·L^-1脑心通醇提物可显著降低IL-1β,TNF-α及NLRP3 mRNA表达水平(P<0.05,P<0.01),显著降低LPS诱导的NLRP3的高表达以及Caspase-1 p20/Caspase-1(P<0.01)。结论:脑心通能明显抑制LPS诱导的小胶质细胞焦亡,其作用机制与NLRP3/Caspase-1通路密切相关。