何首乌饮含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞端粒酶活性的影响

目的观察不同剂量的中药何首乌饮对大鼠卵巢颗粒细胞端粒酶活性的影响,探讨其在调节卵泡微环境过程中所起的作用。方法制备大鼠排卵前卵巢模型,收集颗粒细胞(GC)分别与雌性SD幼鼠空白血清及含不同剂量何首乌饮的药物血清在体外共同培养。用TRAP-ELISA方法分析GC的端粒酶活性;运用流式细胞术分析GC凋亡、坏死情况。结果各剂量组何首乌饮含药血清可明显上调GC端粒酶活性,与对照组比较,中、高剂量何首乌饮含药血清能够显著提高GC端粒酶活性(P均<0.05)。随着中药血清药物剂量的增加,颗粒细胞凋亡率逐渐下降,与对照组比较,中、高剂量组何首乌饮含药血清均能够显著降低离体GC的凋亡率(P均<0.01),各含药血清组细胞坏死率虽较对照组高,但与各组比较差别无统计学意义。结论何首乌饮通过上调离体培养的大鼠卵巢GC端粒酶活性、抑制凋亡从而对卵泡局部微环境的调节,可能是其调节下丘脑-垂体-卵巢轴的重要靶点之一。     

顺铂诱导颗粒细胞损伤及二仙汤含药血清保护颗粒细胞的作用机制

目的:探讨顺铂对卵巢颗粒细胞的影响及二仙汤含药血清改善大鼠卵巢颗粒细胞损伤的作用机制。方法:选取大鼠原代卵巢颗粒细胞体外培养及顺铂处理的方法,将顺铂处理后卵巢颗粒细胞随机分为:c DDP组、c DDP+雌二醇组、c DDP+二仙汤组,另设正常组,加入相应药理血清连续培养48 h。采用Western Blotting法检测各组大鼠卵巢颗粒细胞bcl-2、bax蛋白表达; RT-PCR法检测各组大鼠卵巢颗粒细胞bcl-2、bax mRNA表达。结果:与正常对照组比较,c DDP组bax mRNA及蛋白表达上调,差异有统计学意义(P 0. 05)。与c DDP组比较,CDDP+雌二醇组及c DDP+二仙汤组Bax mRNA及蛋白表达均下调,差异有统计学意义(P 0. 05)。与正常组比较,c DDP组bcl-2 mRNA水平及蛋白表达下调,差异有统计学意义(P 0. 05)。与c DDP组比较,CDDP+雌二醇组及c DDP+二仙汤组bcl-2 mRNA转录及蛋白表达上调,差异有统计学意义(P 0. 05)。结论:二仙汤能够抑制c DDP诱导的卵巢颗粒细胞损伤,其作用机制可能与调节bcl-2/bax平衡有关。     

扶正利湿抗癌方含药血清对前列腺癌PC-3细胞增殖的影响及机制研究

目的:探讨扶正利湿抗癌方含药血清对前列腺癌细胞株PC-3体外增殖能力的影响及其作用机制。方法:应用CCK-8法测定不同浓度扶正利湿抗癌方含药血清对PC-3细胞生长抑制情况,流式细胞仪检测其对PC-3细胞凋亡及细胞周期的影响,并以Western blot分析扶正利湿抗癌方含药血清对PC-3细胞凋亡调控蛋白bcl-2和bax蛋白表达的影响。结果:扶正利湿抗癌方含药血清对PC-3细胞体外增殖抑制作用明显,呈浓度及时间依赖性。流式结果显示,扶正利湿抗癌方含药血清可诱导PC-3细胞凋亡,并能够增加G_2/M期细胞比例,降低S期细胞比例,呈浓度依赖性。Western blot结果显示,扶正利湿抗癌方含药血清可下调bcl-2蛋白的表达,而上调bax蛋白的表达,呈浓度依赖性。结论:扶正利湿抗癌方含药血清可以通过调节bcl-2和bax蛋白的表达发挥体外抑制PC-3细胞增殖的作用。     

EGCG通过Hedgehog信号抑制人胃癌MGC-803细胞增殖的机制研究

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)通过Hedgehog信号抑制人胃癌MGC-803细胞增殖的机制。方法:采用不同浓度的EGCG干预人胃癌MGC-803细胞。MTT比色法观察EGCG对细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡率;分光光度法检测细胞caspase-3活性;电泳法检测Smo、Gli-1蛋白表达;RT-PCR测定bcl-2,bax mRNA表达水平。结果:EGCG(10,20 mol/L)以剂量依赖性地抑制MGC-803细胞增殖,诱导其凋亡,增加caspase-3活性,抑制Smo、Gli-1蛋白表达,上调bax mRNA表达水平的同时下调bcl-2 mRNA表达水平。结论:EGCG通过Hedgehog信号抑制人胃癌MGC-803细胞增殖,诱导其凋亡。     

芹菜素诱导人卵巢癌细胞凋亡作用及机制研究

目的研究芹菜素(API)对人卵巢癌细胞凋亡的影响及其机制。方法培养人卵巢癌SKOV3细胞株,加入不同浓度的API,孵育48 h。PI染色流式细胞术(FCM)分析测定凋亡率;罗丹明染色FCM分析测定细胞线粒体跨膜电位(Δψm);caspase-9分光光度法检测试剂盒测定caspase-9活性;Western印迹检测线粒体凋亡信号转导通路相关蛋白的表达,包括bax、bcl-2、caspase-9和caspase-3。结果API(20,40和80μmol/L)作用48 h能呈浓度依赖性地诱导SKOV3细胞凋亡。而且,API也能降低SKOV3细胞的Δψm,增加caspase-9活性,促进细胞色素c(Cyt c)释放,上调bax、caspase-9和caspase-3蛋白的表达,同时下调bcl-2蛋白表达,且呈剂量依赖性。结论API通过活化线粒体信号转导途径诱导人卵巢癌细胞凋亡。     

二仙汤含药血清对顺铂干预的大鼠卵巢颗粒细胞凋亡调控蛋白bcl-2、bax表达的影响

目的:观察二仙汤含药血清对顺铂干预的大鼠卵巢颗粒细胞凋亡调控蛋白bcl-2、bax表达的影响,从细胞凋亡的角度探讨二仙汤含药血清对卵巢颗粒细胞凋亡的作用机制。方法:22~24 d的SD雌性大鼠30只,随机分为3组,分别为生理盐水组,补佳乐组,二仙汤组。每组大鼠10只。给药4 d后处死大鼠,心脏取血,制备药物血清。22~24 d的SD大鼠卵巢颗粒细胞,经培养贴壁后,用顺铂损伤大鼠原代卵巢颗粒细胞。经各组药理血清作用后,应用放免法,进行雌激素和孕激素水平测定及分析。应用免疫组化法,测定各分组bcl-2、bax蛋白的表达情况,并进行图像分析。结果:放免结果显示,与正常组相比,模型组和补佳乐组E2表达明显改变,有统计学意义(P0.05)。与模型组相比,补佳乐组、二仙汤组E2表达均有增加;与正常组相比,模型组P表达水平有所变化,有统计学意义(P0.05)。与模型组相比,二仙汤组P表达略高于补佳乐组,但低于正常组。免疫组化结果显示,在卵巢颗粒细胞细胞质上可见bcl-2和bax蛋白表达的棕黄色颗粒。和正常组相比较,顺铂干预后各组bcl-2表达均减弱,而以模型组最明显,有统计学意义(P0.05);和模型组比较,各药物组均可见bcl-2阳性表达增加,但弱于正常组,有统计学意义(P0.05)。bax与bcl-2表达强度结果相反,和正常组比较,顺铂干预后的各组bax均表达增强,模型组呈现极强表达现象,有统计学意义(P0.05);和模型组比较,各药物组均可见阳性表达减弱,但表达高于正常组,有统计学意义(P0.05)。结论:二仙汤能降低经顺铂干预后大鼠bax蛋白在卵泡颗粒细胞表达,增强bcl-2蛋白的表达,二仙汤能够通过调节凋亡蛋白bcl-2、bax蛋白的表达,抑制卵巢颗粒细胞发生凋亡,从而保护卵巢功能。     

化瘀祛痰方药及其拆方对H_2O_2诱导EA.hy926细胞凋亡的影响及机制研究

目的探讨化瘀祛痰方药及其拆方含药血清对过氧化氢(H2O2)诱导人脐静脉内皮细胞EA.hy926凋亡的影响及其机制。方法 40只SD大鼠随机分为5组,即全方组、补气组、化瘀组、祛痰组、空白血清对照组。各组大鼠分别以相应中药煎剂或生理盐水连续灌胃9 d,末次灌胃给药2 h后,腹主动脉采血,离心后分离血清。体外培养EA.hy926细胞,随机分为7组,即①正常对照组、②H2O2刺激组、③全方组、④补气组、⑤化瘀组、⑥祛痰组、⑦空白血清对照组。其中②组加入终浓度为300μmol.L-1H2O2,③～⑦组用各组含药血清(浓度为10%)预处理24 h后加入终浓度为300μmol.L-1H2O2,各组细胞培养24 h后进行各项指标测定。采用流式细胞术检测EA.hy926细胞凋亡;实时定量反转录—聚合酶链反应(Real-time PCR)定量分析bcl-2、bax、caspase-3 mRNA表达;比色法检测caspase-3活性;蛋白质免疫印记技术(Western-blot)检测bcl-2、bax蛋白表达。结果与正常对照组相比,H2O2刺激后EA.hy926细胞凋亡率、bax、caspase-3表达显著增加,而bcl-2表达显著减少。全方组细胞凋亡率、bax、caspase-3水平较H2O2刺激组相比显著降低,而bcl-2水平显著升高,且全方组干预作用强于各拆方组。拆方各组中,化瘀组、祛痰组细胞凋亡率显著降低,化瘀组bax、cas-pase-3表达显著减少,而bcl-2表达显著增加。结论化瘀祛痰方药全方及化瘀拆方可显著抑制内皮细胞凋亡,影响凋亡相关基因bcl-2、bax、caspase-3的表达,这可能是其抗AS的作用机制之一。     

清金得生片对人肺腺癌细胞端粒酶及凋亡相关基因蛋白表达的影响

目的探讨清金得生片抑制肺癌细胞生长的相关分子机制。方法采用免疫组织化学染色(SABC)方法检测清金得生片含药血清处理后人肺腺癌细胞株端粒酶活性和凋亡相关基因bcl-2、bax的表达水平。结果清金得生片含药血清作用72h,人肺腺癌细胞端粒酶活性明显抑制,同时可下调bcl-2蛋白阳性细胞染色率、上调bax蛋白阳性细胞染色率。结论清金得生片通过抑制人肺腺癌细胞端粒酶活性,调节bcl-2和bax蛋白的表达,发挥抗肿瘤作用。     

温胆汤改良方对Aβ(25-35)诱导AD细胞模型bcl-2、bax蛋白表达的影响

目的:温胆汤改良方含药脑脊液及含药血清对AD细胞模型凋亡及凋亡相关蛋白bcl- 2、bax表达的影响。方法:温胆汤改良方含药脑脊液和含药血清分别作用于Aβ25-35诱导NG108-15 细胞建立的AD细胞模型,镜下观察细胞生长状况,流式细胞术检测细胞凋亡,免疫组化检测bcl- 2、bax蛋白的表达。结果:与模型组比较,含药脑脊液组和含药血清组细胞凋亡率降低（p<0．05）, bel-2表达无显著性差异（p>0．05）,bax蛋白表达减弱（p<0．01）,bcl-2／bax比值升高（p<0．01）。结论:温胆汤改良方能有效地抑制AD细胞模型凋亡,其作用机理可能与其干预凋亡相关基因bax的表达,升高bcl-2／bax比值有关。     

赤芍水提物对肝星状细胞HSC-T6中bax、bcl-2、caspase-3蛋白表达的影响

目的 研究赤芍水提物对肝星状细胞株HSC-T6中bax、bcl-2、caspase-3蛋白表达的影响.方法 采用乙醛造模后的肝星状细胞株HSC-T6细胞作为酒精性肝纤维化的体外研究模型;以赤芍水提物给彼格犬一次性灌胃,取给药后2 h的血清作为实验药物血清;免疫细胞化学法检测肝星状细胞HSC-T6中bax、bcl-2、caspase-3蛋白表达.结果 乙醛造模后的HSC-T6细胞中bcl-2的表达较正常组细胞增加,bax 、caspase-3表达降低;药物血清作用后的肝星状细胞HSC-T6细胞中bcl-2的表达较模型组的HSC-T6细胞显著性降低, bax、caspase-3的表达较模型组细胞显著性增加.结论 赤芍水提物可能是通过影响bax、bcl-2、caspase-3等基因异常表达来实现对HSC-T6的抑制增殖及促凋亡作用的,这可能与一些凋亡相关疾病如酒精性肝纤维化的发生有关.     

扶正抑瘤颗粒对H22瘤细胞bax、bcl-2及 caspase-3蛋白表达的影响

目的观察扶正抑瘤颗粒对H 22瘤细胞bax、bcl-2及caspase-3蛋白表达的影响.方法采用免疫组织化学方法检测瘤组织切片中bax、bcl-2及caspase-3的蛋白表达.结果扶正抑瘤颗粒各治疗组bax及caspase-3的IOD值均高于模型组,与模型组比较有显著性差异(P＜0.05);扶正抑瘤颗粒各治疗组bcl-2的IOD值均低于模型组,与模型组比较有显著性差异(P＜0.05).结论通过促进bax及caspase-3的蛋白表达、抑制bcl-2基因的蛋白表达来诱导H22瘤细胞凋亡,进而发挥抑瘤效应.     

育肾助孕方对卵巢储备功能降低大鼠卵巢颗粒细胞ERK1/2、JNK1/2蛋白活化的影响

目的:观察育肾助孕方对卵巢储备功能降低(DOR)大鼠卵巢颗粒细胞卵巢组织细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)、c-Jun氨基末端激酶1/2(JNK1/2)蛋白活化的影响,初步探讨其作用机制.方法:选择48只雌性SD大鼠随机分为六组:对照组、模型组、补佳乐组和育肾助孕方低、中、高剂量组,每组8只.除对照组以外,其...     

温阳通脉方对大鼠心肌缺血再灌注RISK通路机制研究

目的：观察温阳通脉方对缺血再灌注大鼠心肌的保护作用及其可能机制。方法将40只SD雄性大鼠随机分为假手术组、心肌缺血再灌注损伤组（IR组）、心肌缺血预适应组（IP组）、温阳通脉方组（WY组）。建立大鼠心肌缺血再灌注损伤（IR）模型及心肌缺血预适应（IP）模型。检测各组大鼠血清心肌坏死标记物肌钙蛋白T （cTnT）含量,免疫组化法检测心肌bax、bcl-2蛋白表达, western-blot检测akt、 p-akt表达。结果 WY组、 IP组血清cTnT含量低于IR组（P 〈0.05）,高于假手术组（P〈0.05）。 WY组、 IP组bax表达低于IR组（P〈0.05）。 WY组和IP组bcl-2、 akt蛋白表达高于IR组（P〈0.05）。 WY和IP组血清cT-nT含量及心肌bcl-2、 bax、 akt表达比较无统计学差异（P〉0.05）。结论温阳通脉方预处理具有心肌保护作用,其保护机制可能与激活akt通路,上调bcl-2,抑制bax蛋白表达有关。     

增免抑瘤合剂合并化疗对卵巢癌大鼠bcl-2、bax基因表达的影响

目的从卵巢癌大鼠bcl-2、bax凋亡相关基因表达的变化,探讨增免抑瘤合剂辅助治疗卵巢癌的作用机制。方法采用DMBA诱发的原发性卵巢癌大鼠模型,随机分为化疗组(DDP化疗)、合并组(化疗结合增免抑瘤合剂灌胃)、中药组(增免抑瘤合剂灌胃)和模型组(生理盐水灌胃)。共治疗2周,比较各组大鼠bcl-2、bax表达及bcl-2/bax变化。结果治疗各组的bcl-2,bcl-2/bax均较模型组下降,差异显著(P<0.01),其中合并组下降最明显,与中药组及化疗组相比,也具有统计学意义(P<0.01)。合并组的bax表达较其余各组明显提高(P<0.01)。本研究凋亡指数曲线与bax曲线趋于一致性,显示增免抑瘤合剂辅助化疗能促进细胞凋亡。合并组平均凋亡指数最高(33.53%),模型组最低(13.35%),各组间具统计学意义(P<0.01)。结论增免抑瘤合剂合并化疗能下调卵巢癌bcl-2表达,提升bax表达,从而下调bcl-2/bax比值,激活卵巢癌细胞的凋亡途径,这可能是其抗癌增效的作用机制之一。     

大黄提取物对雄性未成年大鼠生殖毒性的实验研究

目的探讨长期应用大黄及其总蒽醌对雄性未成年大鼠生殖功能的影响。方法3周龄sD大鼠50只,随机分为空白对照组,大黄水提物小、中、大剂量组（0．3、0．6、1．2g／kg）及大黄总蒽醌组（0．1g／kg）。各组连续灌胃给药30天,取睾丸计算睾丸指数并进行病理学检查,检测精子数量、活动率及畸变率。采用ELISA法检测血清睾酮（T）、黄体生成素（LH）、卵泡刺激素（FSH）;采用免疫组化sP法检测睾丸bcl-2、bax蛋白表达水平的变化。结果与空白对照组比较,大黄水提物中、大剂量组和大黄总蒽醌组睾丸、附睾指数降低;各给药组大鼠精子数量和活动率均降低;血清中T水平降低,LH及FSH水平升高;睾丸生精上皮和睾丸间质细胞内bax蛋白表达升高,而bcl-2蛋白表达降低;差异均有统计学意义（P〈0．05）。大黄水提物各剂量组的精子数量、活动率,血清性激素T、LH、FSH水平及blax、bcl-2表达比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）。大黄水提物各剂量组和大黄总蒽醌组大鼠睾丸病理组织学可观察到间质细胞、生精上皮细胞的破坏。结论长期应用大黄对未成年大鼠生殖功能有较强的毒性,且毒性反应程度有明显的剂量依赖关系。     

逍遥散加减方对高催乳素血症大鼠卵巢自分泌及旁分泌机制的影响

目的:探讨逍遥散加减方对高催乳素血症大鼠模型卵巢自分泌及旁分泌机制的影响。方法:采用腹腔注射甲氧氯普胺制成高催乳血症大鼠模型,随机分为6组:空白组、模型组、逍遥散加减方高、中、低剂量组(分别予以逍遥散加减方60、30、15g·kg^-1·d^-1)、溴隐亭组0.001g·kg^-1·d^-1,药物治疗30d后通过免疫组化检测大鼠卵巢组织胰岛素样生长因子1(IGF-1)、胰岛素样生长因子2(IGF-2)阳性结果的表达;采用MTT检测卵巢颗粒细胞存活率及增殖率;采用ELISA法测定卵巢抗苗勒试管激素(AMH)的含量;采用PCR检测血清促卵泡激素受体(FSHR)的含量。结果:与空白组比较,模型组IGF-1、AMH、FSHR、卵巢颗粒细胞存活率、细胞增殖显著减少(P<0.05,P<0.01);逍遥散加减方中、低剂量组IGF-1显著降低(P<0.01),逍遥散加减方低剂量组AMH及卵巢颗粒细胞存活率显著降低(P<0.05),溴隐亭组IGF-1、卵巢颗粒细胞存活率显著降低(P<0.05);与模型组比较,逍遥散加减方高剂量组AMH、IGF-1、卵巢颗粒细胞存活率显著升高(P<0.01,P<0.05),逍遥散加减方高剂量组细胞增殖率及FSHR升高(P<0.05,P<0.01)。结论:逍遥散加减方高剂量组通过提高IGF-1、FSHR及AMH的含量调节卵巢自分泌/旁分泌机制,进而提高动物模型卵巢颗粒细胞存活率。     

育麟方对卵巢储备功能降低大鼠颗粒细胞分泌功能的影响

目的: 研究育麟方影响环磷酰胺致卵巢储备功能降低大鼠模型卵巢颗粒细胞的分泌功能的机制。 方法: 性成熟雌性SD大鼠参考文献制备卵巢储备功能降低大鼠模型,分为育麟方高、中、低剂量组,补佳乐组,模型组,正常组。正常组,模型组予蒸馏水20 mL ·kg^-1,补佳乐组予戊酸雌二醇片0.21 mg ·kg^-1,育麟方低、中、高组分别予育麟方生药15.2,30.4,60.8 g ·kg^-1 ig 21 d后,予动情前期处死,放射免疫法测定大鼠血清卵泡刺激素(FSH),黄体生成素(LH)水平及抗苗勒管激素(AMH)表达水平,光镜下观察卵巢组织形态学变化,卵泡数目及黄体数目。 结果: 与正常组比较,模型组FSH,LH含量明显升高(P<0.05),AMH含量明显降低(P<0.05),各级卵泡数目,黄体数目明显减少(P<0.05);与模型组比较,育麟方治疗组大鼠血清FSH,LH水平明显减少(P<0.05),育麟方中剂量组及补佳乐组血清AMH水平明显增高(P<0.05),育麟方中、高剂量组的各级卵泡及黄体数量明显增多(P<0.05)。 结论: 育麟方可能通过影响卵巢储备功能降低模型鼠的颗粒细胞内分泌功能而改善其卵巢储备功能。     

更年汤含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞PI3K/Akt/m TOR通路的影响

目的研究更年汤对围绝经期模型大鼠颗粒细胞磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素蛋白(m TOR)信号通路的影响。方法 10～14月龄雌性SD大鼠150只,筛选出围绝经期模型大鼠,随机分为模型组、替勃龙组(0.22 mg/kg)和更年汤低、中、高剂量(1.0、2.0、4.0 g/kg)组,连续ig给药15 d,1次/d,第15天后采血,制备大鼠含药血清;3～4月龄雌性SD大鼠120只,筛选出动情前期老鼠,剔出卵巢行体外颗粒细胞原代培养,分别用各组含药血清培养液培养颗粒细胞,72～120h后用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测颗粒细胞中PI3K、Akt、m TOR、生长分化因子9(GDF9)、翼状螺旋转录因子2(FOXL2)mRNA表达水平;Western blotting法检测PI3K、Akt、mTOR、GDF9、FOXL2蛋白表达。结果与模型组比较,替勃龙组和更年汤各剂量组卵巢颗粒细胞中PI3K、m TORm RNA和蛋白表达水平均显著升高(P0.05、0.01),Akt mRNA和蛋白表达水平显著降低(P0.05、0.01),GDF9、FOXL2 mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P0.01)。结论更年汤含药血清在临床剂量上可提高卵巢颗粒细胞PI3K、mTOR的表达,抑制Akt及其下游的GDF9、FOXL2表达,从而推测更年汤可调节卵泡的生长发育,抑制卵泡闭锁、改善卵巢功能。