大蒜超氧化物歧化酶分离方法的研究

目的:从大蒜中提取分离超氧化物歧化酶(SOD)。方法:用丙酮沉淀法从蒜汁液中沉淀出粗品SOD,用自制的联有亚氨基二乙酸的联连壳聚糖作为载体进行金属鏊合亲和层析(IMAC)分离纯化的大蒜SOD,检测其酶活性质和SOD的所属种类,用电泳分析其性质及分子量。结果:从丙酮沉淀法能较快地从大蒜汁中分离到粗品SOD,经过金属鏊合层析纯化的SOD活性达到4206 u/mg,属Cu/Zn-SOD种,分子量27750。     

不同铵盐对山豆根组培苗的影响

目的 以山豆根组培苗为供试材料,评价不同种类铵盐对硝酸铵的替代效果。方法 分别采用氯化铵、碳酸氢铵、硫酸铵或尿素代替硝酸铵的改良MS培养基培养山豆根组培苗,研究其对山豆根组培苗丛生芽继代增殖、丛生芽壮苗和生根诱导的影响,结合山豆根组培苗的生长发育状况,多角度评价改良培养基的组培效果。结果 氯化铵或碳酸氢铵代替硝酸铵的改良MS培养基适合山豆根丛生芽的继代增殖,氯化铵代替硝酸铵的改良MS培养基适合山豆根丛生芽壮苗培养,氯化铵、碳酸氢铵、硫酸铵或尿素代替硝酸铵的改良MS培养基不适合山豆根生根培养。结论 氯化铵可代替硝酸铵用于山豆根丛生芽的继代增殖和丛生芽壮苗培养,碳酸氢铵可代替硝酸铵用于山豆根丛生芽的继代增殖。     

蜣螂疏水壳聚糖的制备及其止血活性研究

目的制备蜣螂疏水壳聚糖,研究其止血性能。方法以蜣螂壳聚糖为原料,通过与月桂酸酐酰基化反应,进行疏水改性与表征,同时采用离体凝集实验与小鼠肝创面实验研究其凝血性能。结果制备的蜣螂疏水壳聚糖疏水基取代度为(11.69±0.14)%,高于疏水市售壳聚糖;离体凝集实验表明其与血液混合后质量分数达6.0 mg/g时即可快速凝血(3.42±0.39)s,较蜣螂壳聚糖与市售疏水壳聚糖效果更优;小鼠肝创面实验显示蜣螂疏水壳聚糖的止血时间较蜣螂壳聚糖与疏水市售壳聚糖明显缩短。结论采用疏水改性可明显提高壳聚糖的凝血性能,且蜣螂疏水壳聚糖最为优良,有望成为一种有巨大潜力的新型止血材料。     

低抗凝活性肝素修饰SOD的性质及抗炎活性

 用溴化氰活化低抗凝活性肝素对超氧化物歧化酶进行共价修饰制得修饰酶。经测定结合于酶蛋白上的低抗凝肝素的氨基己糖、己糖醛酸、硫醚基及抗凝效价均降低；修饰后超氧化物歧化酶活性降低；Cu、Zn部分丢失。对不同的炎症模型的抗炎试验表明，修饰酶具有较强的抗炎活性。     

扶正通络解毒汤对急性心肌梗死大鼠心肌组织内游离钙离子浓度、MMP-9、MDA及SOD的影响

目的探讨扶正通络解毒汤对急性心肌梗死(AMI)大鼠模型血清基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、丙二醛(MDA)浓度、超氧化物歧化酶(SOD)活性及心肌组织内游离钙离子浓度的影响。方法选取60只健康雄性SD大鼠,采用随机数字表法分为造模组与假手术组,每组30只,造模组采用改良冠脉结扎手术法制作AMI大鼠模型,术中进行心电图监测,以大鼠左室前壁变白、心跳减弱、心电图Ⅱ导联ST段弓背向上抬高≥0.1 mV或病理性Q波作为手术成功的标志;假手术组仅开胸,不给予冠脉结扎,术后2 h抽取鼠尾静脉血测定血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)活性、心肌钙蛋白(cTnI)浓度,造模组大鼠血清CK-MB活性比值及c TnI浓度较假手术组升高,差异有统计学意义(P<0.05),证明造模成功。将30只AMI大鼠随机分为3组,每组10只,造模后笼养24 h灌胃给药,中药组给予8 g/kg扶正通络解毒汤,西药组给予2.6 mg/kg的硫氮酮,模型组给予等量0.9%氯化钠溶液。每日给药1次,给药第7日抽取鼠尾静脉血,采用酶联免疫吸附法在给药前后测定血清中MMP-9、MDA浓度和SOD活性。取血后处死大鼠,取出心脏组织,将梗死区剪成小块,采用比色法测定梗死区心肌细胞游离钙离子浓度。结果1)给药前,3组大鼠血清MMP-9、MDA浓度和SOD活性比较差异无统计学意义(P>0.05)。给药7 d后,3组大鼠血清MMP-9、MDA浓度较给药前降低,血清SOD单位活性较给药前增加,差异有统计学意义(P<0.05)。且给药后3组血清MMP、MDA浓度、SOD活性差异有统计学意义(P<0.05)。MMP-9、MDA浓度:中药组<西药组<模型组;SOD活性:中药组>西药组>模型组。2)给药第7日,3组大鼠梗死区心肌组织内游离钙离子浓度比较,差异有统计学意义(P<0.05):中药组<西药组<模型组。结论扶正通络解毒汤可促进AMI模型大鼠的MMP-9、MDA浓度和SOD活性的改善,也能降低缺血心肌组织内游离钙离子浓度。     

川芎嗪治疗胎儿宫内生长迟缓中氧自由基与血栓素B2、6-酮-前列腺素1α的相关性研究

探讨胎儿宫内生长迟缓的病理生理改变及有效治疗方法。方法：５８例患者分为川芎嗪组和氨基酸组，分别给予治疗，并测定了８５名正常妊娠及本病患者及有关指标。结果：ＩＵＧＲ者母血脂质过氧化物异常增高，而ＳＯＤ，谷胱甘肽过氧化物酶活力及６－酮－前列腺素１α水平显著下降，血栓素Ｂ２／６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α比值增高，该比值与ＳＯＤ，ＧＳＨ－Ｐｘ活力呈负相关，与ＬＰＯ水平呈正相关；     

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??OBJECTIVE To investigate the effect of chlorinated N-trimethyl chitosan (TMC??Cl) nanoparticle with different modified degrees on the transfection efficiency of mouse marrow-derived dendritic cells (DC) to provide a theoretical basis for the study of DC biological immune vaccine with chitosan (CS) nanoparticle adjuvant.METHODS TMC??Cl/pEGFP-C1 nanoparticles with different modified degrees were prepared by ion-crosslinking method. Particle size and Zate potential were measured by laser particle size analyzer. Nanoparticle quality was evaluated by enzyme protection experiment. DC were cultured in vitro by a modified Insba method, and TMC??Cl nanoparticles with different degrees of modification were analyzed by in vitro transfection experiments to verify the cytotoxicity and transfection efficiency.RESULTS The nanoparticle size was (220??15) nm, Zeta potential was (29??5) mV, encapsulation efficiency was 99.8%, and the transfection efficiency of TMC??Cl nanoparticles on DC in vitro increased by 10% than that of CS nanoparticles.CONCLUSION TMC??Cl nanoparticles can effectively improve the transfection efficiency of pEGFP-C1 plasmid in DC.     

电针“内关”穴对急性心肌缺血小鼠心肌组织氯离子通道蛋白表达的影响

目的:观察电针"内关"穴对急性心肌缺血小鼠心肌CLC-2氯离子通道[chloride channel-2,CLC-2]、钙激活的氯离子通道(calcium-activated chloride channel accessory,CLCA)蛋白表达的影响,探讨针刺抗心肌缺血的可能作用机制。方法:30只基因敲除ASIC 3-/-小鼠随机分为空白组、模型组、内关组、列缺组、非经非穴组。采用多点皮下注射异丙肾上腺素制备急性心肌缺血模型。内关组电针双侧"内关"穴,列缺组电针双侧"列缺"穴,非经非穴组电针"天枢"穴与"神阙"穴连线中点,每天治疗1次,共治疗7d。造模前后记录Ⅱ导联心电图ST段电压幅值,HE染色观察小鼠心肌组织病理变化,比色法检测血清超氧化物歧化酶(SOD)活性,Western blot法检测心肌组织CLC-2、CLCA蛋白表达。结果:造模后各组小鼠Ⅱ导联心电图ST段明显抬高,与造模前比较差异具有统计学意义(P0.05)。HE染色结果显示,模型组、列缺组、非经非穴组与空白组比较有不同程度的心肌细胞缺血区;与模型组比较,内关组有明显改善。与空白组比较,模型组小鼠血清SOD活性明显下降(P0.01);与模型组比较,内关组可明显抑制SOD的下降(P0.01)。与空白组比较,模型组CLC-2、CLCA蛋白表达水平显著升高(P0.01);与模型组比较,内关组CLC-2、CLCA蛋白表达显著降低(P0.01)。结论:针刺"内关"穴可显著降低急性心肌缺血小鼠心肌组织CLC-2、CLCA蛋白表达水平,可能是针刺治疗小鼠急性心肌缺血的作用机制之一。     

壳聚糖修饰的丹皮酚PEG-PLGA纳米粒的制备及其体外释药性能考察

目的:制备壳聚糖修饰的丹皮酚聚乙二醇-(聚乳酸-羟基乙酸共聚物)(PEG-PLGA)纳米粒,对其体外性质进行表征,考察纳米粒的体外释药性能,为丹皮酚的新型纳米制剂研究提供参考。方法:以PEG-PLGA为载体材料,壳聚糖为表面修饰剂,采用纳米沉淀法制备了壳聚糖修饰的丹皮酚PEG-PLGA纳米粒,利用正交试验优化处方工艺,并对其体外性质进行表征。以p H 7.4磷酸盐缓冲液为释放介质,考察壳聚糖修饰的丹皮酚PEG-PLGA纳米粒的体外释药行为。结果:载药纳米粒经壳聚糖修饰后,Zeta电位由负电荷转为正电荷且更加稳定,粒径略有增加。制备出的纳米粒外观呈球形,平均粒径和Zeta电位分别为(96.6±3.2)nm,(30.61±0.34)m V,载药量及包封率分别为10.87%和79.37%。体外释药试验表明载药纳米粒24 h的累计释放率62.4%。结论:按优选的处方成功制备了壳聚糖修饰的丹皮酚PEG-PLGA纳米粒,该制剂的体外性质良好且具有一定的缓释特性。     

天花粉凝集素的提取工艺及降糖活性研究

目的:从天花粉中提取凝集素并研究其降糖活性。方法:采用单因素及正交试验对各提取因素进行优化,确定最佳提取工艺参数;用硫酸铵分级沉淀得到凝集素粗品;以5%的A型人血细胞凝血效价为指标,测定其凝集活性;检测天花粉凝集素对人肝癌细胞HepG2的葡萄糖消耗量及四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖的影响。结果:天花粉凝集素凝血效价为32;细胞试验和动物试验结果均显示天花粉凝集素表现出降糖活性。结论:天花粉凝集素最佳提取工艺为:缓冲液PBS,料液比1∶30,提取时间24 h,pH7.2,硫酸铵最佳饱和度70%,离心转速10 000 r/min;天花粉凝集素具有较强的降糖作用。