丹参酮Ⅱ_A白蛋白纳米粒的制备及其体外抗肿瘤药效研究

采用高压均质法制备丹参酮Ⅱ_A白蛋白纳米粒,以粒径、包封率和载药量为评价指标,采用星点设计-效应面法优选处方,进而考察其体外抗肿瘤效果。结果表明,采用优选的处方制备的丹参酮Ⅱ_A白蛋白纳米粒形态为规则的圆球形,粒径分布均匀,平均粒径为(175.7±3.07)nm,包封率和载药量分别为90.8%±1.47%和5.52%±0.09%。对于人早幼粒细胞白血病NB4细胞,载丹参酮Ⅱ_A白蛋白纳米粒较游离药物有更优的抑瘤效果。白蛋白纳米粒制备工艺简便,可显著改善丹参酮Ⅱ_A的溶解度,有助于拓展其在抗血液肿瘤方面的应用。     

丹参酮Ⅱ_A纳米结构脂质载体的处方优化及其体外透皮研究

为研制丹参酮Ⅱ_A纳米结构脂质载体(Tan Ⅱ_A-NLC),并进行体外透皮研究。该文采用高压均质技术制备Tan Ⅱ_ANLC,运用Box-Behnken设计-效应面法优化处方,并对其进行表征。采用Franze扩散池法评价Tan Ⅱ_A-NLC体外透皮性能。结果显示,以最优处方:脂药比为88、固液脂质比为2、稳定剂用量为1%,制得的Tan Ⅱ_A-NLC粒径为(182±14)nm,多分散指数(PDI)为0.190 6±0.024 5,Zeta电位(-27.8±5.4)m V,包封率(EE)为86.44%±9.26%,载药量(DL)为0.98%±0.18%;体外透皮吸收实验结果显示Tan Ⅱ_A-NLC的24 h药物累积透皮量低于溶液,但其在表皮中的滞留量是溶液的3.18倍。TanⅡ_A-NLC可有效提高Tan Ⅱ_A在表皮层的滞留量,具有广阔的应用前景。     

丹参酮Ⅱ_A聚乙二醇-聚己内酯纳米胶束的制备、细胞内分布及减少心肌缺血再灌注损伤的研究

目的采用薄膜水化法制备丹参酮Ⅱ_A聚乙二醇-聚己内酯(PEG-PCL)纳米胶束,并研究该胶束的细胞内分布及抗心肌缺血再灌注损伤的作用。方法采用正交试验优选丹参酮Ⅱ_APEG-PCL纳米胶束的制备工艺条件,优选后的丹参酮Ⅱ_A PEG-PCL纳米胶束进行粒径、Zeta电位和透射电镜检测表征,并进行稳定性评价,以香豆素-6作为荧光探针,评价PEG-PCL纳米胶束在细胞内的摄取及分布,再进行细胞外存留药物实验,验证PEG-PCL纳米胶束促进药物的细胞摄取性能;采用结扎冠状动脉方法构建心肌缺血再灌注损伤大鼠模型,评价丹参酮Ⅱ_APEG-PCL纳米胶束的药效作用。结果丹参酮Ⅱ_A PEG-PCL纳米胶束的优选工艺条件:丹参酮Ⅱ_A与PEG-PCL投料比为1.2∶10,转速为100 r/min,水化温度为37℃,采用旋蒸方式形成薄膜,然后冷冻干燥除尽有机溶剂,在水化超声形成纳米胶束;优选工艺后的丹参酮Ⅱ_A PEG-PCL纳米胶束粒径为(16.8±0.4)nm,Zeta电位为(-29.8±4.9)m V,载药量为(7.8±0.6)%,包封率为(86.4±5.2)%,稳定性良好;荧光实验表明,PEG-PCL纳米胶束可以促进药物的细胞摄取,进入细胞后,还可将药物聚集在线粒体周围,重合性良好;药效实验结果表明,丹参酮Ⅱ_APEG-PCL可以明显降低模型动物血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、心肌肌钙蛋白(cTnI)水平,升高超氧化物歧化酶(SOD)水平,减少心肌梗死面积,改善心肌病理变化,这些药效结果均明显优于丹参酮Ⅱ_A。结论丹参酮Ⅱ_A PEG-PCL纳米胶束可以很大程度上提高丹参酮Ⅱ_A的心肌细胞摄取量,并聚集在线粒体周围,增强药物减轻心肌缺血再灌注损伤的作用。     

丹参酮Ⅱ_A通过激活PPARα减轻4-HNE诱导的肝细胞损伤的机制研究

丹参酮Ⅱ_A(tanshinoneⅡ_A,TanⅡ_A)是丹参主要的脂溶性有效成分,能够增强对脂质的代谢功能,降低血清中脂质过氧化物浓度,也具有抗氧化损伤、清除自由基及抑制肝内坏死炎症反应的作用,对肝功能损害预后起到保护作用。因此,研究TanⅡ_A保护肝功能的确切机制可以为TanⅡ_A防治肝损伤提供重要的理论与实验依据。该文主要通过体外细胞实验,研究TanⅡ_A减轻4-羟基壬烯酸(4-hydroxynonenal,4-HNE)诱导的肝细胞氧化损伤的作用及机制。以正常肝细胞系NCTC 1469为细胞模型,建立4-HNE处理的肝细胞氧化损伤模型。通过乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放及Hoechst染色法检测TanⅡ_A对肝细胞氧化损伤的保护作用; Western blot法检测TanⅡ_A作用前后过氧化物酶增殖激活受体α(peroxisome proliferator-activated receptorα,PPARα)及过氧化物酶体增殖物反应元件(peroxisome proliferator response element,PPRE)的蛋白表达变化; Real-time PCR法检测其下游关键酶脂肪醛脱氢酶(fatty aldehyde dehydrogenase,FALDH)的基因表达变化。结果表明4-HNE可增加肝细胞LDH释放,降低细胞存活率,而TanⅡ_A能逆转4-HNE引起的肝细胞损伤。Western blot及Real-time PCR法检测结果显示4-HNE可显著下调肝细胞内PPARα及其下游FALDH的表达,增加细胞内4-HNE蛋白质水平,而经过TanⅡ_A处理后PPARα及FALDH的表达可显著提高,4-HNE蛋白水平也得到了降低。这揭示TanⅡ_A可逆转脂质氧化产物4-HNE引起的肝细胞损伤,其作用机制可能与激活PPARα特异性结合PPRE元件,激活下游FALDH的表达以及清除4-HNE有关,这可能是TanⅡ_A发挥治疗作用的关键机制之一。     

血瘀证相关的microRNA-520b对白介素-8的影响及丹参酮ⅡA的干预作用

目的:研究血瘀证相关的micorRNA-520b(miR-520b)对白介素-8(IL-8)的影响及丹参酮ⅡA(TanⅡA)的干预作用。方法:采用脂质体介导的转染方法将microRNA-520b模拟物(50 nmol·L-1)或抑制物(100 nmol·L-1)转染进入含1.6×104cells/well人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)的6孔板中24,36,48 h,采用5,10,20,40 mg·L-1TanⅡA干预24,48 h。荧光显微镜观察转染情况,MTT法检测细胞活性(n=5),硝酸还原酶法、酶联免疫法(ELISA)测定培养液中一氧化氮(NO),内皮素(ET),蛋白C受体(EPCR),血管内假性血友病因子(v WF)和血栓调节蛋白(TM)含量(n=3)。半定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR),蛋白质免疫印迹(Western blotting)检测细胞IL-8信使核糖核酸(mRNA)和蛋白表达水平(n=3)。结果:与对照组比较,模型组(miR-520b组)细胞有荧光,48 h荧光最强。细胞活性降低(P0.01)且48 h最显著,NO含量下降(P0.01),EPCR,v WF,ET含量升高(P0.01),转染48 h后IL-8 mRNA和蛋白质表达下调(P0.01)。与模型(miR-520b)组比较,给药组(TanⅡA组)细胞活性升高(P0.01),TanⅡA(10 mg·L-1,48 h)干预效果最佳;NO含量升高(P0.01);EPCR,v WF,TM,ET含量降低(P0.01),IL-8 mRNA和蛋白质表达上调(P0.01)。结论:miR-520b调节IL-8在血瘀证中发挥作用,可能为TanⅡA作用靶点。     

丹参酮Ⅱ_A/β-环糊精包合物制备工艺优化及体外溶出性能研究

采用饱和水溶液法制备丹参酮Ⅱ_A(Tan-Ⅱ_A)与β-环糊精(β-CD)包合物,在单因素试验的基础上,以β-环糊精与丹参酮Ⅱ_A的配比、包合温度和包合时间为自变量,包合物的收率、包封率和总评"归一值"为响应值,使用Box-Benhnken设计效应面法优化丹参酮Ⅱ_A的包合工艺;采用红外光谱法(IR)、核磁共振法(NMR)对包合物进行鉴定。结果表明,丹参酮Ⅱ_A与β-环糊精包合物的最优制备工艺为:丹参酮Ⅱ_A与β-环糊精的配比为1∶7,包合温度为48℃,包合时间为3 h;采用优选的工艺条件制备丹参酮Ⅱ_A与β-环糊精的包封率为84.75%。丹参酮Ⅱ_A与β-环糊精包合物可以明显提高丹参酮Ⅱ_A溶出度。     

甘草次酸衍生物18-GA-Gly介导肝主动靶向脂质体的制备及体内相关研究

基于国内外对甘草次酸配体介导主动肝靶向脂质体的研究情况,该文主要对以甘草次酸为母核的肝靶向配体18-GA-Gly修饰的脂质体的肝靶向效果进行研究。采用薄膜分散-高压乳匀法制备18-GA-Gly配体介导的丹参酚酸B-丹参酮ⅡA脂质体及未修饰配体的脂质体,考察2种脂质体的制剂学性质,考察粒径、电位、包封率和配体结合率;尾静脉给药后不同时间点获取血浆样本以及小鼠心、肝、脾、肺、肾组织样本,UPLC测定各样本中丹参酚酸B(Sal B)和丹参酮IIA(TSN)含量,评价18-GA-Gly配体的肝靶向效果。结果显示脂质体Gly-TS-Lip和TS-Lip的粒径、电位、包封率、配体结合率基本符合要求;体内靶向性考察结果显示Gly-TS-Lip组脂质体与TS-Lip组脂质体血浆数据无显著性差别;甘草次酸衍生物配体18-GA-Gly介导脂质体可以增加Sal B和TSN在肝组织的峰浓度,但并未显示明显的肝靶向效果。     

丹参酮ⅡA对脓毒症大鼠外周血CD4~+T细胞调节的作用研究

目的探讨丹参酮ⅡA对脓毒症大鼠外周血CD4+T细胞的作用。方法采用盲肠结扎穿孔术制备脓毒症大鼠模型(CLP),给予丹参酮ⅡA(TanⅡA)处理,分别于治疗前及治疗后24、48、72 h各时间点取静脉血,流式细胞仪检测全血细胞中辅助性T细胞(Th1、Th2、Th17);采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血中白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-17(IL-17)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。结果 CLP组大鼠血清TNF-α、IL-17、IL-1水平和Th17比例明显高于同期Sham组(P0.05),而TanⅡA各亚组血清TNF-α、IL-17、IL-1水平和Th17比例均低于CLP同期各亚组(P0.05);CLP组大鼠血清IL-10水平和Th1/Th2比值明显低于Sham组(P0.05),而TanⅡA各亚组血清IL-10水平和Th1/Th2比值高于CLP同期各亚组(P0.05)。结论丹参酮ⅡA可能通过作用于脓毒症大鼠的外周血CD4+T细胞发挥调节免疫、改善炎症反应的作用。     

透明质酸修饰的中药提取物咖啡酸脂质体的制备及初步细胞学研究

目的:制备透明质酸(HA)修饰的中药提取物咖啡酸(CA)脂质体(HA-CA脂质体)并考察其对透明质酸受体(CD44)高表达A549及透明质酸受体(CD44)低表达HepG2细胞的增殖抑制作用。方法:合成HA-DOPE;通过薄膜分散法制备HA-CA脂质体并用动态光散射粒径分析仪测定粒径;采用HPLC法建立绿原酸体外含量测定方法并测定HA-CA脂质体的包封率;采用MTT法考察游离CA、CA脂质体及HA-CA脂质体对A549细胞和HepG2细胞的增殖抑制作用;采用荧光细胞摄取实验验证HA脂质体的靶向性。结果:HA-CA的平均粒径为210.5 nm,PDI=0.17;包封率(88.87±1.32)%;MTT法结果显示,HA-CA脂质体对A549细胞的增殖抑制作用明显大于CA脂质体,且CA脂质体大于游离CA;CA脂质体和HA-CA脂质体对HepG2细胞的增殖抑制作用则基本相当,均大于游离CA;A549细胞对载6-香豆素HA脂质体(HA-C脂质体)的摄取高于HepG2细胞组。结论:MTT实验结果显示,HA-CA脂质体对A549细胞的增殖抑制作用最强。细胞摄取实验研究显示,HA-C脂质体与高表达的HA受体细胞特异性结合,达到肿瘤主动靶向效果。以HA为主动靶向配体制备的HA-CA脂质体可通过配体-受体特异性结合的机制将药物递送至靶部位,提高药物对肿瘤细胞的增殖抑制作用。     

丹参酮Ⅱ_A通过miR30b-p53信号通路诱导人肝癌细胞凋亡的研究

目的:研究丹参酮Ⅱ_A诱导人肝癌细胞HepG_2凋亡的作用及其机制。方法:用不同浓度的丹参酮Ⅱ_A处理细胞24 h后,检测LDH释放水平,观察丹参酮Ⅱ_A对HepG_2活力的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡;Real-time PCR检测microRNA30家族主要亚型(a,b,c,d)表达;Western Blot检测肝癌细胞内凋亡相关分子Bax、Bcl-2、Caspase-3及p53蛋白表达水平。结果:丹参酮Ⅱ_A对HepG_2细胞内LDH释放及细胞凋亡的诱导均存在量效关系。≥20μmol/L丹参酮Ⅱ_A能显著诱导细胞凋亡(P0.05),在80μmol/L时最大诱导率达20%。Real-time PCR结果显示,丹参酮Ⅱ_A对miR30b的抑制最为显著。同时丹参酮Ⅱ_A通过抑制miR30b从而诱导了下游分子p53的表达。Western Blot检测结果显示,丹参酮Ⅱ_A上调p53蛋白水平,诱导Bax/Bcl-2及凋亡执行分子Caspase-3的表达。结论:丹参酮Ⅱ_A能诱导肝癌细胞凋亡,其机制可能为通过调控miR30b-p53介导的细胞凋亡信号通路。     

星点设计-效应面法结合主成分分析法优选心脑苏颗粒醇提工艺

目的:优选心脑苏颗粒的醇提工艺条件,为该制剂的成型工艺研究提供参考。方法:在单因素试验基础上,选择乙醇体积分数、加液量、提取时间为自变量,以抗凝血酶效价、丹参酮Ⅱ_A和隐丹参酮提取量的总评"归一值"为因变量,通过星点设计-效应面法优选心脑苏颗粒醇提工艺,利用主成分分析法对优选的提取工艺进行分析与验证。采用HPLC测定丹参酮Ⅱ_A和隐丹参酮的含量,流动相甲醇-水(75∶25),检测波长270 nm。结果:最佳醇提工艺为加8倍量70%乙醇提取120 min,提取数1次。丹参酮Ⅱ_A和隐丹参酮的平均提取量分别为0.523,0.225 mg·g~(-1),抗凝效价平均值92.599 U·g~(-1),总评"归一值"预测值和实测值的偏差2.9%。结论:优选的提取工艺简单、稳定、可行,为心脑苏颗粒的成型工艺研究奠定基础。     

定心方和丹参酮ⅡA对心律失常大鼠血小板膜粘附分子表达的影响

目的:研究定心方(DXR)和丹参酮Ⅱ_A(Tan)对心律失常大鼠血小板膜粘附分子表达的影响。方法:冠状动脉结扎再通制作心律失常模型,流式细胞仪测定血小板膜粘附分子表达。结果:DXR和Tan能明显降低CD41和CD62P的表达(P<0.01),减少心律失常发生(P<0.05);L—N—硝基精氨酸甲酯(L—NAME)能抑制丹参酮的减少血小板膜粘附分子表达以防治心律失常的作用(P<0.05),但不能抑制DXR的该种作用。结论:DXR和Tan通过减少血小板膜粘附分子的表达防治心律失常。     

雷公藤红素/丹参酮Ⅱ_A磺酸钠共传递脂质体的制备、表征及协同抗乳腺癌研究

目的探索组分配比可控的雷公藤红素(Cel)/丹参酮Ⅱ_A磺酸钠(STS)共传递脂质体(celastrol/sodium tanshinon Ⅱ_A sulfonate-coloaded liposome,Cel/STS-CL)制备工艺,并验证其体外抗乳腺癌协同效应。方法通过体外MTT实验确定Cel和STS协同抗肿瘤的最佳配比,以薄膜分散法构建最佳比例的双组分共传递脂质体系统,借助动态光散射(DLS)、透射电镜(TEM)及HPLC等手段表征脂质体的制剂学和形态学行为。同时,以人乳腺癌MCF-7细胞为模型,通过考察脂质体胞内滞留、抗细胞增殖以及诱导细胞凋亡等实验验证递药系统体外协同抗乳腺癌效应。结果通过常规的薄膜分散法将亲水性和亲脂性组分同时高效地包埋至脂质体中,该粒子形态圆整,双分子层清晰可见,平均粒径为(104.7±2.1)nm,多分散指数(PDI)为0.217±0.002,Zeta电位为(-48.8±2.3)m V,Cel和STS的包封率分别为(82.2±2.7)%和(66.2±2.3)%。细胞实验表明,Cel/STS-CL的细胞摄取能力相比对照组提高30倍,对MCF-7细胞的半数抑制浓度(IC50)为(1.42±0.12)μmol/L,相较单组分治疗组的协同指数为0.81;Cel/STS-CL诱导MCF-7细胞凋亡率达到80%,相比雷公藤红素单组分脂质体(celastrol-loaded liposome,Cel-Lip)提高0.1倍。结论所构建的Cel/STS-CL制备工艺可靠,体外协同抗乳腺癌效应明显,具有较高的后续研究价值。     

包载紫杉醇的透明质酸聚合物胶束细胞毒性及细胞摄取研究

目的:研究CD44受体单靶向的透明质酸-十八烷基(HA-C18)、叶酸和CD44受体双靶向的叶酸-透明质酸-十八烷基(FA-HA-C18)载紫杉醇(PTX)胶束的肿瘤细胞靶向功能。方法:选择叶酸和CD44受体表达丰富的MCF-7细胞,评价PTX-HA-C18和PTX-FA-HA-C18胶束的细胞毒性和细胞摄取。结果:相比于市售制剂泰素(taxol),HA载药胶束在低浓度下表现出较强的细胞毒性,且PTX-FA-HA-C18胶束的细胞毒性显著强于PTX-HA-C18胶束。HA胶束能显著提高PTX在细胞中的摄取量,且细胞摄取呈现浓度-时间依赖性。相比于HA-C18胶束,FA-HA-C18胶束表现出更强的摄取能力。结论:HA胶束具有良好的肿瘤细胞靶向功能,FA-HA-C18双靶向胶束表现出最佳的靶向能力。     

基于网络药理学和生物信息学的丹参酮Ⅱ_A治疗冠心病的分子生物学机制分析

目的基于网络药理学和生物信息学方法分析丹参酮Ⅱ_A治疗冠心病(CHD)的分子生物学机制。方法利用Pharm Mapper数据库筛选出丹参酮Ⅱ_A的作用靶点,利用OMIM、GeneCards、CTD数据库筛选CHD疾病作用相关靶点。利用STRING数据库进行蛋白互作网络分析,利用Cytoscape构建蛋白相互作用网络,利用ClueGO插件进行GO分析和KEGG信号通路富集分析,利用Systemsdock数据库进行系统分子对接,利用i GEMDOCK软件进行分子对接来预测丹参酮Ⅱ_A对CHD作用靶点的结合性。结果筛选出丹参酮Ⅱ_A的潜在靶点173个;与CHD相关的靶点42个;信号通路49条。结论丹参酮Ⅱ_A治疗CHD具有多靶点、多通路作用的特点;其可能作用机制是通过调控CHD发展过程中的血压调节、细胞代谢、血管新生、内分泌、活性氧代谢等过程对CHD进行干预。     

UPLC-MS/MS测定复方丹参方中丹参酮Ⅱ_A、丹参酚酸B、人参皂苷Rg_1及其在大鼠血浆和脑组织的药代动力学研究

建立大鼠血浆和脑组织中丹参酮Ⅱ_A(TSⅡ_A)、丹酚酸B(SAB)、人参皂苷Rg_1(GRg_1)的UPLC-MS/MS分析方法,并开展药物动力学研究。选用SD大鼠,单剂量灌胃(ig)复方丹参方,采集血液与脑组织样品,采用UPLC-MS/MS测定血浆和脑组织中TSⅡ_A、SAB和GRg_1的浓度,以Phoenix Win Nolin 6.1药动学程序软件对数据进行非房室模型拟合,采用统计矩法计算药动学参数。经方法学考证,3种成分的峰面积与其在血样及脑组织中的浓度线性关系良好(r0.992 2);回收率为58.86%~112.1%,日内、日间RSD≤9.7%,准确度及稳定性均符合体内药物分析的要求。大鼠ig给复方丹参方后的血浆药动参数如下:丹参酮Ⅱ_AT_(max)(1.58±0.081)h,C_(max)(725.4±88.20)μg·L~(-1),AUC_(0-t)(2 101.3±124.85)μg·h·L~(-1),MRT_(0-t)(3.66±0.05)h;丹酚酸B T_(max)(1.29±0.21)h,C_(max)(307.9±46.75)μg·L~(-1),AUC_(0-t)(537.4±88.24)μg·h·L~(-1),MRT_(last)(2.08±0.11)h;人参皂苷Rg_1T_(max)(1.42±0.20)h,C_(max)(460.38±154.60)μg·L~(-1),AUC_(0-t)(383.4±88.16)μg·h·L~(-1),MRT_(last)(1.87±0.046)h。脑组织药动参数如下:丹参酮Ⅱ_AT_(max)(0.75±0.22)h,C_(max)(1.41±0.420)ng·g~(-1),AUC_(0-t)(4.34±2.48)ng·h·g~(-1),MRT_(0-t)(4.00±1.90)h;丹酚酸B T_(max)(1.08±0.20)h,C_(max)(21.09±4.850)ng·g~(-1),AUC_(0-t)(14.83±3.160)ng·h·g~(-1),MRT_(0-t)(0.99±0.08)h;人参皂苷Rg_1T_(max)(0.50±0.16)h,C_(max)(130.96±54.220)ng·g~(-1),AUC_(0-t)(136.24±34.350)ng·h·g~(-1),MRT_(0-t)(2.87±0.33)h。该研究所建立的UPLC-MS/MS方法可用于大鼠血浆及脑组织中丹参酮Ⅱ_A、丹酚酸B、人参皂苷Rg_1中的药动学研究。     

线粒体靶向性的姜黄素TPP-PEG-PLGA脂质体的制备及促肝癌细胞凋亡研究

目的 研究姜黄素3-苯羧基-三苯基溴化膦-聚乙二醇-聚乳酸聚乙醇酸共聚物(TPP-PEG-PLGA)脂质体的线粒体靶向性及促肝癌细胞凋亡效果。方法 以薄膜水化法制备姜黄素TPP-PEG-PLGA脂质体,评价该载药系统的稳定性、溶血、体外释放及体内代谢情况;以荧光实验研究脂质体的肝癌细胞摄取、线粒体靶向和肝肿瘤组织靶向效果;在等剂量给药条件下,评价姜黄素TPP-PEG-PLGA脂质体促肝癌细胞凋亡效果。结果 姜黄素TPP-PEG-PLGA脂质体呈圆球型结构,具有较好的稳定性、较小的溶血率和良好的缓释药物性能;药动学结果显示,姜黄素TPP-PEG-PLGA脂质体能将药物的半衰期延长3倍,生物利用度提高4倍;荧光实验显示,TPP阳离子能促进脂质体的细胞摄取,靶向进入线粒体,还可以提高药物在肝肿瘤组织部位的靶向和滞留效果;细胞药效显示,姜黄素TPP-PEG-PLGA脂质体能明显升高肿瘤细胞内H₂O₂水平,降低线粒体膜电位,提高促凋亡蛋白Bax表达,明显降低抗凋亡蛋白BCl-2表达,这些细胞凋亡试验结果均明显优于姜黄素脂质体和姜黄素。结论 本研究表明姜黄素TPP-PEG-PLGA脂质体具有良好的线粒体靶向功能,能增强药物促肝癌细胞凋亡效果。     

丹参酮Ⅱ_A联合维生素D_3对维甲酸诱导骨质疏松大鼠骨组织的影响

目的:探讨丹参酮Ⅱ_A(TanshinoneⅡ_A)联合维生素D_3(Vitamin D_3,Vit D_3)对维甲酸诱导的雌性骨质疏松大鼠骨组织的影响,观察二者联合给药是否优于丹参酮Ⅱ_A单独给药。方法:12周龄SPF级健康雌性SD大鼠40只,随机分为正常对照组、模型组、丹参酮Ⅱ_A组、丹参酮Ⅱ_A+Vit D_3组。除正常对照组外,其余各组每日给予维甲酸80 mg/kg灌胃造模21 d。造模21 d后除模型组外,其余各组进行给药,给药70 d后,检测各组大鼠体质量,测定血清雌二醇(Estradiol,E_2)、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、破骨细胞异化因子(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、血钙、血磷含量。采集股骨干骺端组织进行石蜡包埋、HE染色,并用病理图像分析系统进行组织形态计量学测定。结果:模型组大鼠血清E_2含量较正常对照组显著降低,丹参酮Ⅱ_A与联合用药组较模型组显著升高。模型组血清OPG含量较正常对照组显著降低,联合用药组血清OPG含量较模型组显著升高,RANKL、ALP、血钙、血磷含量模型组较正常对照组显著升高,联合用药组较模型组显著降低。通过股骨干骺端组织形态计量学分析显示,联合用药组骨小梁厚度、骨小梁间距、骨小梁面积百分率均优于丹参酮Ⅱ_A组。结论:丹参酮Ⅱ_A+Vit D_3对维甲酸诱导骨质疏松大鼠骨组织的修复作用优于丹参酮Ⅱ_A单独给药。     

整合素受体介导的SiRNA和多柔比星靶向耐药肿瘤的研究

 目的 采用整合素受体介导的靶向载体输送系统实现RNA干扰技术和抗肿瘤药物对耐药肿瘤的联合治疗。方法 分别用静电复合法和硫酸铵梯度法制备载多药耐药基因（MDR1）相关的小干扰RNA（siRNA）的精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸三肽（RGD）修饰阳离子脂质体复合物和载多柔比星（DOX）的RGD修饰长循环脂质体，采用激光共聚焦显微镜来观察siRNA和多柔比星的细胞摄取和细胞内分布情况；采用流式细胞术和SRB（磺酰罗丹明B）实验测定多柔比星的细胞累积量和多柔比星对人乳腺癌耐药细胞（MCF7/A）的毒性；采用活体成像技术考察了靶向和非靶向制剂输送siRNA到肿瘤模型裸鼠体内的组织分布情况。结果 所制备的各种脂质体的平均粒径均在200 nm以内；与细胞孵育6 h后，观察发现siRNA和多柔比星各自主要分布在细胞质和细胞核中，与非靶向组相比，靶向脂质体组细胞摄取siRNA更快更多，且有利于siRNA在细胞质中均匀分布；细胞毒实验结果证实，1%摩尔比RGD修饰的阳离子脂质体对siRNA的转染效果最好，流式细胞术实验结果也同样证实RGD修饰脂质体组细胞中多柔比星累积量更高；活体成像结果显示荧光标记的siRNA经靶向脂质体输送后主要集中在肿瘤且比非靶向组蓄积量更高。结论 采用RGD修饰脂质体载运技术可将MDR1 siRNA和多柔比星两种药物同位点输送到肿瘤部位提高靶向性，并有利于改善多药耐药肿瘤的治疗效果。     

丹参酮ⅡA诱导白血病细胞凋亡过程中端粒酶活性的改变

目的观察丹参酮Ⅱ_A(TanⅡ_A)对HL60,K562细胞端粒酶活性的抑制作用和对凋亡相关基因的影响,探讨丹参酮Ⅱ_A对造血细胞的作用机理。方法以HL60,K562为靶细胞,应用细胞培养技术,流式细胞术,透射电镜观察TanⅡ_A对HL60,K562细胞的作用,利用PCRTRAP方法检测TanⅡ_A处理前后HL60,K562细胞端粒酶活性的改变。结果经05μg·mL^-1TanⅡ_A作用6d后,HL60,K562细胞生长明显受到抑制,生长抑制率分别为756%和563%。经丹参酮诱导后,HL60,K562细胞发生凋亡,出现亚二倍体峰;同时显著下调HL60及K562细胞的cmyc,bcl2基因表达,上调cfos基因表达。HL60,K562细胞在TanⅡ_A作用后,端粒酶活性受到抑制,端粒酶活性抑制率分别为308%,508%。结论TanⅡ_A可明显抑制HL60和K562细胞的增殖和细胞端粒酶活性,并诱导细胞凋亡。