糖肾方含药血清对高糖诱导肾小管上皮细胞增殖作用及对TGF-β1、HO-1干预作用的研究

[目的]探讨糖肾方含药血清对高糖诱导肾小管上皮细胞增殖作用及对转化生长因子(TGF)-β1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、血红素氯合酶-1(HO-1)干预作用。[方法]制备小鼠含药血清;培养肾小管上皮细胞分为:空白对照组、高糖组(30 mmol/L葡萄糖)、空白血清组(30 mmol/L葡萄糖+10%空白血清)、糖肾方低剂量血清组(30 mmol/L葡萄糖+10%低剂量含药血清)、糖肾方高剂量血清组(30 mmol/L葡萄糖+10%高剂量含药血清)。使用4-甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测糖肾方含药血清对高糖诱导肾小管上皮细胞增殖的影响。运用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测肾小管上皮细胞中TGF-β1、HO-1和α-SMA蛋白的表达。[结果]高糖诱导下,肾小管上皮细胞呈成纤维细胞样的长梭形,细胞核呈梭形改变。MTT检测:与空白组比较,高糖组光度值明显增高(P0.05);与高糖组比较,高低剂量含药血清组在培养24 h后吸光度值均有下降,吸光度差异有统计学意义(P0.05),且高剂量组光度值下降强于低剂量组(P0.05)。Western blotting及RT-PCR测定实验结果显示:与空白对照组细胞对比,高糖组中TGF-β1、α-SMA含量增加;经过含药血清干预后,高糖诱导的HK-2细胞TGF-β1、α-SMA含量降低,差别有统计学意义(P0.05);糖肾方高、低剂量组血清比较,在降低TGF-β1方面,高剂量组效果较好(P0.05),在降低α-SMA方面没有统计学差异(P0.05)。HO-1在高糖诱导后含量稍升高,与空白对照组对比,差异有统计学意义(P0.05);在经过糖肾方含药血清干预后,含量升高,与高糖组对比,差异有统计学意义(P0.05),糖肾方高低剂量组血清比较,升高HO-1含量方面没有统计学差异(P0.05)。[结论]糖肾方通过抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞增殖和干预TGF-β1、α-SMA、HO-1相关分子的表达,可以抑制细胞外基质成分沉积,减少氧化应激反应,减轻细胞损伤,逆转上皮-间质转分化,从而抑制肾间质纤维化,延缓糖尿病肾病病情进展。     

三七总皂苷对高糖诱导的肾小管上皮细胞转分化的研究

目的 探讨三七总皂苷(PNS)对高糖诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)转分化的影响及机制.方法 体外培养人HK-2细胞并分为3组:正常对照组(含5.5 mmol/L D-葡萄糖)、高糖组(含25 mmol/L D-葡萄糖)和高糖+PNS组;48h后细胞免疫化学方法测定各组HK-2细胞的α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),用ELISA法检测细胞培养上清中纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)和细胞转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的表达.结果 对照组HK-2细胞形态为立方形铺路石样,未见α-SMA阳性表达;高糖组细胞变为梭形长条样,α-SMA的表达也明显增多(P＜0.05);治疗组细胞大部分仍呈立方形铺路石样,α-SMA的表达明显下降(P＜0.05).高糖组TGF-β1与FN浓度显著高于对照组(均P＜0.01),治疗组TGF-β11与FN的表达明显低于高糖组(均P＜0.01).α-SMA的表达与TGF-β1、FN的表达呈正相关.结论 PNS可能通过抑制肾小管上皮细胞α-SMA的表达和细胞外基质分泌,从而抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞转分化,对糖尿病肾病有一定防治作用.     

肾康丸对高糖培养的大鼠系膜细胞TGF-β1及FN的影响

目的:观察肾康丸对高糖培养大鼠系膜细胞(MC)分泌转化生长因子(TGF-β1,及纤连蛋白(FN)分泌mRNA表达的影响,探讨其防治DN的分子机制。方法:体外培养大鼠MC,将细胞分为6组:低糖组、高糖组、正常血清组、开搏通组、肾康丸高、低剂量组。培养72 h后,采用双抗夹心酶联免疫吸附(ELISA)法检测高糖对MC分泌TGF-β1和FN的影响;采用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)法检测高糖对TGF-β1和FN mRNA的表达的影响;同时研究药物血清对上述指标的影响。结果:高糖可以促进MC分泌TGF-β1和FN,并提高MC中TGF-β1和FN mR-NA的表达,肾康丸可以明显抑制上述作用。结论:肾康丸可以通过TGF-β1途径抑制MC基质分泌。     

糖肾清1号对糖尿病肾病大鼠肾组织AngⅡ 及TGF-β1转录表达的影响

目的:观察中药糖肾清1号对糖尿病肾病肾组织局部AngⅡ及TGFβ1 mRNA转录表达及蛋白表达水平的影响。方法:建立糖尿病肾病大鼠模型,设空白组、模型组、阳性药对照组(卡托普利24 mg.kg-1.d-1)、糖肾清1号甲、乙、丙、丁的高、中、低剂量治疗组(甲组给药糖肾清1号有效成分A,高剂量组94 mg.kg-1.d-1,中剂量组47 mg.kg-1.d-1,低剂量组23.5mg.kg-1.d-1。乙组给药糖肾清1号有效成分B,高剂量组94 mg.kg-1.d-1,中剂量组47 mg.kg-1.d-1,低剂量组23.5 mg.kg-1.d-1。丙组用药为1/2A与1/2B配成,高剂量组94 mg.kg-1.d-1,中剂量组47 mg.kg-1.d-1,低剂量组23.5 mg.kg-1.d-1。丁组为糖肾清1号生药制剂,高剂量组用药为195 mg.kg-1.d-1,中剂量为97.5 mg.kg-1.d-1,低剂量组48.75 mg.kg-1.d-1),每组10只。分别采用RT-PCR,Western blot,ELISA等方法检测大鼠AngⅡ,TGF-β1 mRNA转录及蛋白表达水平,进行组织形态学观测。结果:糖肾清1号呈量效依赖性下调AngⅡ,TGF-β1 mRNA转录和蛋白表达(P<0.01或0.05),减少细胞外基质的沉积(P<0.05)。结论:糖肾清1号可通过调控AngⅡ,TGF-β1 mRNA转录和蛋白表达,抑制肾组织纤维化的发生发展。     

茶多糖对高糖诱导下HK-2细胞氧化应激损伤的保护作用及TGF-β_1、α-SMA表达的影响

目的:研究茶多糖(TPS)对高糖诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)的氧化应激损伤的保护作用及其机制,探讨茶多糖对高糖诱导下HK-2细胞转化生长因子β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响。方法:DCFH-DA(组织活性氧荧光定量)法检测茶多糖对高糖刺激下HK-2细胞内活性氧(ROS)水平的影响。RTPCR检测TGF-β1、α-SMA m RNA的表达。Western-blot检测核因子NF-E2相关因子(Nrf2)、血红素氧合酶1(HO-1)、TGF-β1、α-SMA蛋白的表达。结果:与正常对照组比较,高糖组ROS水平显著升高,经茶多糖干预后,ROS水平显著降低,其作用呈浓度依赖性;与正常对照组比较,高糖组Nrf2、HO-1蛋白表达均显著升高,经茶多糖干预后,与高糖组比较,Nrf2、HO-1蛋白表达均显著升高;与正常对照组比较,高糖组TGF-β1、α-SMA m RNA和蛋白表达均显著升高,经茶多糖干预后,TGF-β1、α-SMA m RNA和蛋白表达均显著降低。结论:茶多糖能减少高糖诱导的氧化应激损伤,其机制与激活Nrf2/ARE途径有关。茶多糖能降低TGF-β1和α-SMA的表达,减少高糖诱导下HK-2细胞EMT的发生。     

糖肾汤对氧化低密度脂蛋白诱导的系膜细胞血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1表达及细胞外基质分泌的影响

目的:观察糖肾汤对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的系膜细胞血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)表达及转化生长因子-β1(TGF-β1)和细胞外基质分泌的影响,探讨其防治糖尿病肾病的机制。方法:培养大鼠系膜细胞,分为空白组、ox-LDL组、糖肾汤高、中、低剂量组和罗格列酮组,培养24h后,RT-PCR检测系膜细胞mRNA表达,ELISA技术检测细胞上清液中TGF-β1、四型胶原(ColⅣ)和纤黏连蛋白(FN)含量。结果:糖肾汤、罗格列酮含药血清均能抑制ox-LDL诱导的TGF-β1、LOX-1 mRNA表达上调,及TGF-β1、FN、ColⅣ的分泌,其中糖肾汤含药血清呈剂量依赖性作用,中浓度作用最强。结论:糖肾汤可能通过降低ox-LDL受体LOX-1的表达以减少ox-LDL摄入及由此引起的细胞因子分泌和细胞外基质产生,从而起到防治糖尿病肾病的作用。     

肾康丸对高糖培养的火鼠系膜细胞TGF—β1及FN的影响

目的：观察肾康丸对高糖培养大鼠系膜细胞（MC）分泌转化生长因子（TGF-β1，及纤连蛋白（FN）分泌mRNA表达的影响，探讨其防治DN的分子机制。方法：体外培养大鼠MC，将细胞分为6组：低糖组、高糖组、正常血清组、开搏通组、肾康丸高、低剂量组。培养72h后，采用双抗夹心酶联免疫吸附（ELISA）法检测高糖对MC分泌TGF-β1，和FN的影响；采用逆转录-多聚酶链反应（RT-PCR）法检测高糖对TGF-β1和FNmRNA的表达的影响；同时研究药物血清对上述指标的影响。结果：高糖可以促进MC分泌TGF-β1和FN，并提高MC中TGF-β1和FNmR—NA的表达，肾康丸可以明显抑制上述作用。结论：肾康丸可以通过TGF-β1途径抑制MC基质分泌。     

人参皂苷Rg1对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤保护作用

目的探讨人参皂苷Rg1对高糖诱导的人肾小管上皮细胞HK-2中炎症反应和纤维化的影响及可能的机制。方法 细胞计数法(CCK-8)检测不同浓度人参皂苷Rg1对细胞活性的影响。HK-2细胞随机分为正常对照组、高糖组、低、高人参皂苷Rg1组。ELISA检测TNF-α和IL-1β,Western blot分析α-SMA、E-cadherin、Fn、TGF-β1、Smad 2和Smad 3的表达情况。结果人参皂苷Rg1对HK-2细胞无明显毒性作用。与正常对照组相比,高糖组TNF-α和IL-1β含量升高(P 0.05),α-SMA、Fn、TGF-β1、Smad 2和Smad 3的表达水平上调(P 0.05),E-cadherin的表达水平下调(P 0.05);与高糖组相比,低、高人参皂苷Rg1组TNF-α和IL-1β含量降低(P 0.05),α-SMA、Fn、TGF-β1、Smad 2和Smad 3的表达水平下调(P 0.05),E-cadherin的表达水平上调(P 0.05)。结论人参皂苷Rg1通过抑制HG诱导的肾小管上皮细胞炎症反应和EMT来阻碍肾纤维化进展,其机制可能与阻断TGF-β/Smad信号通路有关。     

糖肾清1号对糖尿病肾病模型大鼠肾组织MCP-1,RANTES表达的影响

目的:观察中药糖肾清1号高、中、低剂量对糖尿病肾病肾组织局部CC族细胞趋化因子表达的影响。方法:建立糖尿病肾病大鼠模型,设正常组、模型组、卡托普利组、糖肾清1号高、中、低剂量组,正常组和模型组每日予去离子水10 m L·kg~(-1)灌胃;卡托普利组每日予卡托普利2.33 mg·kg~(-1)灌胃,糖肾清1号高、中、低剂量组每日分别予糖肾清1号颗粒187,93.5,46.75 mg·kg~(-1)灌胃,连续给药12周后取材。采用时实荧光定量PCR(Real-time PCR)检测肾组织单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和调节正常T细胞表达和分泌的细胞因子(RANTES)mRNA转录,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测MCP-1蛋白表达水平,酶联免疫吸附法(ELISA)测定RANTES蛋白表达水平。结果:糖肾清1号可以下调肾组织的MCP-1,RANTES mRNA转录和蛋白表达(P0.05,P0.01),并且呈量效依赖性,肾组织MCP-1和RANTES的表达量为糖肾清1号高剂量组中剂量组低剂量组,中药各组以糖肾清1号高剂量组疗效明显。结论:糖肾清1号可通过抑制肾组织MCP-1,RANTES mRNA转录和蛋白表达,延缓糖尿病肾病的发生发展。     

糖耐康对转化生长因子-β1诱导的HK-2细胞分泌细胞外基质成分的影响

目的观察糖耐康对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)对细胞外基质成分表达的影响,探讨糖耐康治疗肾间质纤维化的作用机制。方法将HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12(1∶1)培养基培养,并分为6组：空白对照组、TGF-β1诱导组(TGF-β110 ng/mL)、空白血清对照组(TGF-β110 ng/mL＋10%空白血清)、干预1组(TGF-β110 ng/mL＋5%糖耐康药物血清)、干预2组(TGF-β110 ng/mL＋10%糖耐康药物血清)、干预3组(TGF-β110 ng/mL＋20%糖耐康药物血清)。药物干预24 h,荧光定量PCR检测Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)和纤连蛋白(FN)的mRNA表达。结果 HK-2细胞经TGF-β1诱导后,ColⅠ、ColⅢ和FN的mRNA表达显著上升,与空白对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05)。经糖耐康药物血清干预后,其表达逐步下降,与TGF-β1诱导组比较,差异有统计学意义(P＜0.05)。而空白血清无此作用。结论糖耐康在一定程度上能够抑制TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞ColⅠ、ColⅢ和FN的mRNA表达,减少细胞外基质成分的分泌,具有防治肾间质纤维化的作用。     

止消通脉宁干预转化生长因子-β1诱导人肾小管上皮细胞表型转化的研究

目的观察止消通脉宁药物血清对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)表型转化的影响,并探讨其机制。方法将HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12(1∶1)培养基培养并分为空白对照组、TGF-β1诱导组(TGF-β110 ng/mL)、空白血清对照组(TGF-β110 ng/mL+10%空白血清)、干预1组(TGF-β110 ng/mL+10%低剂量止消通脉宁药物血清)、干预2组(TGF-β110 ng/mL+10%中剂量止消通脉宁药物血清)、干预3组(TGF-β110 ng/mL+10%高剂量止消通脉宁药物血清)。药物干预24 h后,免疫组化检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达。在24、48、72 h应用酶联免疫吸附法检测细胞培养上清中Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)和纤连蛋白(FN)的含量。结果正常HK-2细胞表达E-cadherin,不表达α-SMA,经TGF-β1刺激后细胞表型发生转变,E-cadherin的表达明显减弱,α-SMA表达明显增强,且ColⅠ、ColⅢ和FN的分泌明显增加,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。止消通脉宁药物血清干预后α-SMA表达明显减弱,E-cadherin表达明显增强;同时抑制了ColⅠ、ColⅢ和FN的分泌,与TGF-β1诱导组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论止消通脉宁在一定程度上能够抑制人肾小管上皮细胞表型转化,减少细胞外基质成分的分泌,具有防治肾间质纤维化的作用。     

肾元颗粒含药血清对高糖诱导人肾小管上皮-间充质细胞转分化中Klotho/FGFR1/FGF2信号途径的影响

目的探讨高糖诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)上皮-间充质细胞转分化过程中Klotho/FGFR1/FGF2信号转导途径的表达及肾元颗粒含药血清的干预作用。方法 30只Wistar大鼠采用随机数字表法分为空白组、肾元颗粒组及厄贝沙坦组,每组10只,灌胃7天后门静脉取血。采用CCK-8法测定细胞增殖率以确定大鼠血清加入浓度,以LDH法检测含药血清对HK-2细胞的毒性作用。以高糖(30 mmol/L)诱导HK-2细胞上皮-间充质细胞转分化建立模型,分为正常组、模型组、高渗对照组、肾元颗粒组、厄贝沙坦组及ERK阻断剂组。免疫荧光检测Klotho及FGF2的表达,Western blot及RT-PCR检测Klotho、FGF2、ECadherin、α-SMA、FN、CollgenⅣ蛋白及m RNA表达水平,Western blot分析各组细胞ERK及磷酸化ERK(p-ERK)水平。结果 CCK-8法结果显示大鼠空白血清培养HK-2细胞最佳浓度为20%。LDH结果显示,与10%胎牛血清比较,肾元颗粒含药血清、厄贝沙坦含药血清对细胞LDH活性的影响差异无统计学意义(P 0. 05)。与正常组比较,模型组Klotho、E-Cadherin蛋白及m RNA表达降低(P 0. 05),FGF2、α-SMA、FN、CollgenⅣ蛋白及m RNA表达增高(P 0. 05),p-ERK水平显著增高(P 0. 05)。与模型组比较,肾元颗粒组Klotho、E-Cadherin蛋白及m RNA表达显著增高(P 0. 05),FGF2、α-SMA、FN、CollgenⅣ蛋白及m RNA表达显著降低(P 0. 05),p-ERK水平显著降低(P 0. 05)。结论肾元颗粒含药血清能改善高糖诱导的人肾小管上皮细胞转分化,其作用机制可能与调节Klotho/FGFR1/FGF2信号通路有关。     

组分复方“CKJ”药物血清对大鼠原代肝星状细胞活化和转化生长因子β_1及其受体的影响

目的探讨由虫草多糖、苦杏仁苷、绞股蓝总皂苷组成的"CKJ方"药物血清对大鼠原代肝星状细胞(primary hepatic stellate cells,r HSCs)活化的影响及相关药理作用机制。方法分离并培养r HSCs,将培养4天的r HSCs分为正常组、模型组及CKJ组。模型组及CKJ组以2.5 ng/m L转化生长因子β1(TGF-β1)刺激造模24 h,正常组以不含TGF-β1的基质液(无血清的DMEM)作为对照。药物组以5%CKJ方药物血清继续孵育24 h,正常组及模型组以5%空白血清孵育24 h。采用细胞高内涵筛选技术(HCS)免疫荧光法及Western blot检测r HSCsα-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白(Col-Ⅰ)、血小板源性生长因子β受体(PDGF-βR)、TGF-β1、转化生长因子β受体1(TGF-βR1)、转化生长因子β受体2(TGF-βR2)mRNA的表达水平。结果与正常组比较,模型组r HSCsα-SMA蛋白表达及α-SMA、Col-Ⅰ、PDGF-βR、TGF-β1、TGF-βR1、TGF-βR2 mRNA表达水平明显升高(P0.05,P0.01);与模型组比较,5%CKJ药物血清组r HSCsα-SMA蛋白表达及α-SMA、Col-Ⅰ、PDGF-βR、TGF-β1、TGF-βR1、TGF-βR2 mRNA表达水平明显降低(P0.05,P0.01)。结论组分复方"CKJ"药物血清可降低大鼠r HSCsα-SMA的蛋白表达,其主要作用机理可能与抑制TGF-β1及其相关受体有关。     

参地补肾胶囊对高糖培养的肾小管上皮细胞TGF-β1、α-SMA和E-cadherin mRNA表达的影响

目的:观察参地补肾胶囊对高糖培养下肾小管上皮细胞TGF-β1、α-SMA、E-cadherin mRNA表达的影响,探讨参地补肾胶囊抗肾间质纤维化的作用机制。方法:以高糖培养的人肾小管上皮细胞作为研究对象,采用血清药理学研究方法和Real-time PCR检测技术,观察空白对照组、高糖模型组、参地补肾胶囊组和贝那普利组的TGF-β1、α-SMA、E-cadherin mRNA的表达,采用SPSS19.0统计软件进行统计分析。结果:高糖培养下的人肾小管上皮细胞TGF-β1、α-SMA mRNA的表达与空白对照组比较明显增加(P0.05),E-cadherin mRNA的表达与空白对照组比较明显降低(P0.05);参地补肾胶囊组能够下调肾小管上皮细胞对TGF-β1、α-SMA mRNA的表达,上调E-cadherin mRNA的表达,与高糖模型组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:本研究表明参地补肾胶囊通过下调高糖刺激的人肾小管上皮细胞对TGF-β1、α-SMA mRNA的异常表达,上调E-cadherin mRNA的异常表达,从而发挥抗肾间质纤维化的作用。     

糖肾宁对高糖培养的小鼠系膜细胞TGF-β1和P38MAPK表达的影响

目的观察糖肾宁对高糖培养的小鼠系膜细胞转化生长因子-1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)和P38丝裂原活化蛋白激酶(P38 mitogen activated protein kinases,P38MAPK)表达的影响。方法以体外高糖培养的小鼠系膜细胞为研究对象,实验分为正常对照组、高糖培养组、高糖+缬沙坦组和高糖+糖肾宁高、中、低剂量组,使用大鼠含药血清给药分别处理24小时,用ELISA法检测细胞上清液中纤维连接蛋白(fibronectin,FN)的含量水平;运用Western Blot方法检测P-P38MAPK、环磷腺苷效应元件结合蛋白(c AMP-response element binding protein,CREB)、TGF-β1的蛋白水平。结果与正常对照组比较,高糖培养组系膜细胞上清液中FN蛋白表达明显升高(P0.05);与高糖组比较,糖肾宁组能明显抑制P38MAPK及其下游核转录因子CREB的水平,下调TGF-β1和FN的表达(P0.05)。结论糖肾宁能够抑制细胞外基质增生,可能与下调TGF-β1,抑制P38MAPK/CREB信号通路的激活,从而抑制FN等细胞外基质的合成有关。     

藤茶总黄酮通过调控TGF-β1/p38MAPK通路对肝纤维化大鼠的作用及机制研究

目的 探讨藤茶总黄酮(TF)通过调控转化生长因子β1/p38-促分裂原活化蛋白激酶(TGF-β1/p38MAPK)通路对肝纤维化大鼠的作用及机制.方法 65只Wistar大鼠,随机分为5组,对照组(灌胃生理盐水)、模型组(灌胃生理盐水)、藤茶总黄酮低剂量组(灌胃75 mg/kg)、藤茶总黄酮高剂量组(灌胃300 mg/kg)、激动剂组(灌胃300 mg/kg藤茶总黄酮加腹腔注射2 mg/kg anisomycin),每组13只,除对照组外,余组采用皮下注射25％CCl4建立肺纤维化模型,给予相应药物干预5周.检测5组血清ALT、AST、肝组织ColI、ColⅢ水平,HE染色观察肝组织病理改变,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测肝组织中TGF-β1、p38MAPK、α 平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA相对表达量,Western blot法检测肝组织中TGF-β1、p38MAPK、p-p38MAPK、α-SMA、MMP-9蛋白相对表达量.结果 与模型组比较,藤茶总黄酮低剂量组、藤茶总黄酮高剂量组及激动剂组血清ALT、AST及肝组织ColI、ColⅢ水平均降低,其中藤茶总黄酮高剂量组ALT、AST、ColI低于藤茶总黄酮低剂量组和激动剂组(P<0.05).HE染色结果显示模型组肝组织结缔严重,肝脏明显纤维化,藤茶总黄酮低剂量组、藤茶总黄酮高剂量组、激动剂组肝纤维化程度明显减轻,其中藤茶总黄酮高剂量组肝脏恢复程度最佳.与模型组比较,藤茶总黄酮低剂量组、藤茶总黄酮高剂量组及激动机组TGF-β1、α-SMA mRNA和蛋白相对表达量均降低,p-p38MAPK蛋白相对表达量降低,MMP-9 mRNA和蛋白相对表达量均升高(P<0.05),其中藤茶总黄酮高剂量组TGF-β1、α-SMA mRNA和蛋白相对表达量及p-p38MAPK蛋白相对表达量均低于藤茶总黄酮低剂量组及激动剂组,MMP-9 mRNA和蛋白相对表达量均高于藤茶总黄酮低剂量组及激动剂组(P<0.05).结论 藤茶总黄酮可显著抑制大鼠肝纤维化,其调控机制可能与TGF-β1/p38MAPK信号通路有关.     

白花丹醌对TGF-β1 刺激人肝星状细胞α-SMA表达的影响

目的:研究白花丹醌(plumbagin)对转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激的体外培养人肝星状细胞HSC-LX2α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA和蛋白表达的影响。方法:体外培养HSC-LX2,随机设立空白组,TGF-β1刺激的模型组,TGF-β1+白花丹醌2.0μmol·L-1高剂量组,TGF-β1+白花丹醌1.5μmol·L-1中剂量组和TGF-β1+白花丹醌1.0μmol·L-1低剂量组,各药物与细胞孵育72 h后,采用RT-PCR检测各组HSC-LX2α-SMA mRNA的表达,采用免疫细胞化学方法(ICC)检测HSCLX2中α-SMA蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组α-SMA mRNA及蛋白表达明显升高(P0.01);与模型组比较,白花丹醌作用72 h后,高、中剂量组HSC-LX2细胞中α-SMA mRNA的表达明显降低(P0.01);免疫细胞化学结果显示白花丹醌高、中剂量组对HSC-LX2细胞α-SMA蛋白的表达有显著地抑制作用(P0.05),尤以高剂量组更明显(P0.01)。结论:白花丹醌能抑制HSC-LX2的活化和增殖,其机制之一可能是从mRNA水平和蛋白水平抑制α-SMA的表达,从而发挥其抗肝纤维化作用。     

止消通脉宁对TGF-β1诱导的HK-2细胞Smad 2、3、7 mRNA表达的影响

目的：探讨止消通脉宁对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)Smad 2、Smad 3、Smad 7的影响。方法：将HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12(1：1)培养基培养;实验分为6组：空白对照组、单纯TGF-β1诱导组(TGF-β110 ng/mL)、空白血清对照组(TGF-β110 ng/mL+10%空白血清)、中药含药血清低剂量组(TGF-β110 ng/mL+10%低剂量止消通脉宁含药血清)、中药含药血清中剂量组(TGF-β110 ng/mL+10%中剂量止消通脉宁含药血清)、中药含药血清高剂量组(TGF-β110 ng/mL+10%高剂量止消通脉宁含药血清)。药物干预24小时后,荧光定量PCR检测Smad 2、smad 3、Smad 7的mRNA表达。结果：HK-2细胞经TGF-β1诱导后, Smad 2、smad 3的mRNA表达显著上升,Smad 7的mRNA表达下降,与空白对照组相比有显著性差异(P＜0.05),但经止消通脉宁含药血清干预后, Smad 2、smad 3的mRNA表达逐步下降,Smad 7的mRNA表达上调,与单纯TGF-β1诱导组相比有显著性差异(P＜0.05)。而空白血清无此作用。结论：止消通脉宁能够调控TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞转分化Smad信号通路mRNA表达的作用,在一定程度上具有抑制肾间质纤维化的作用。     

糖肾康中药复方含药血清对高糖环境下RMCs的增殖及TGF-β1/Smad2/3 信号通路的影响

目的研究糖肾康中药复方含药血清对高糖环境下大鼠肾系膜细胞(RMCs)增殖及TGF-β1/Smad2/3信号通路的影响。方法 12只SD大鼠采用随机数字法分为小剂量中药组、中剂量中药组、大剂量中药组,空白组,每组3只,灌胃7天后门静脉取血。分别用含中药血清和普通大鼠血清培养RMCs。采用4-甲偶氮唑蓝(MTT)法测定系膜细胞的增殖率,以确定最佳中药血清浓度;实时定量、PCR及酶联免疫吸附剂(ELISA)法测定TGF-β1mRNA及蛋白的表达,蛋白免疫印迹(Western blot)及免疫荧光方法测定Smad2/3蛋白表达及磷酸化水平。结果不同剂量的糖肾康中药含药血清均能抑制大鼠肾小球系膜细胞的增殖;中药血清可显著抑制高糖诱导的TGF-β1表达及Smad2/3磷酸化。结论糖肾康中药含药血清能抑制高糖刺激下的RMCs增殖,其作用机制可能与抑制TGF-β1/Smad2/3通路有关。     

益气活血降浊复方对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织TGF-β_1、α-SMA、HGF的影响

目的:研究益气活血降浊复方对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾组织TGF-β1、α-SMA、HGF蛋白及其mRNA表达的影响,探讨本方抑制肾间质纤维化的作用机制。方法:132只雄性SD大鼠以单侧输尿管结扎术建立肾间质纤维化动物模型,造模成功后大鼠随机分为正常组,假手术组,模型组,西药组,益气活血降浊复方大、中、小剂量组。益气活血降浊复方大剂量组给药34.6g/kg,中剂量组17.3g/kg,小剂量组8.6g/kg灌胃给药,模型组和假手术组、正常组灌入相应0.9%氯化钠溶液,西药组灌胃福辛普利钠10g/kg,1次/d。采用免疫组化方法检测肾组织中TGF-β1、α-SMA、HGF蛋白表达,采用Real-time PCR方法检测TGF-β1、α-SMA、HGF mRNA表达。结果:与正常组、假手术组相比,模型组大鼠第1、2、3周肾间质中TGF-β1、α-SMA蛋白表达明显增多(P0.01),益气活血降浊复方大、中、小剂量组及西药组正常组、假手术组在各个时间点TGF-β1、α-SMA蛋白表达有所增加,但与模型组比较显著降低(P0.01)。正常组肾小管上皮细胞胞浆中HGF呈弱阳性表达,随着梗阻时间的延长模型组HGF蛋白表达逐渐减少,益气活血降浊复方大、中、小剂量组与模型组相比,HGF蛋白阳性表达显著增加(P0.01)。与正常组、假手术组相比,造模后第3周模型组肾组织TGF-β1、α-SMA基因高表达(P0.05,P0.01),益气活血降浊复方大、小剂量组和福辛普利钠组与模型组比较TGF-β1、α-SMA基因低表达(P0.05)。造模后第1周,正常组、假手术组HGF基因低表达,益气活血降浊复方大、中、小剂量组与模型组比较HGF基因高表达(P0.05)。结论:益气活血降浊复方可以促进内源性HGF蛋白和基因的生成,使肾组织α-SMA基因、TGF-β1基因表达降低,抑制肾间质纤维化的发展。