余甘子总酚对RAW264.7巨噬细胞源泡沫细胞胆固醇代谢的影响研究

目的:观察余甘子总酚对RAW264.7巨噬细胞源泡沫细胞胆固醇代谢的影响。方法:80μg/mL氧化修饰型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导RAW264.7巨噬细胞泡沫化,通过油红O染色、胆固醇含量鉴定泡沫细胞模型,用不同浓度的余甘子总酚处理RAW264.7泡沫细胞后,测定细胞内脂质及胆固醇含量;采用q-PCR和Western blotting方法检测胆固醇代谢相关基因和蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组细胞内脂滴增多,总胆固醇(TC)、胆固醇酯(CE)含量显著增多(P<0.01),清道夫受体(Cd36、Sra1)基因表达明显上调(P<0.05或P<0.01),CD36、SR-A1、ABCA1蛋白表达明显上调(P<0.05或P<0.01);与模型对照组比较,余甘子总酚75、150、300μg/mL组可剂量依赖性降低细胞内TC、CE含量(P<0.01),明显下调Cd36、Sra1基因及蛋白表达(P<0.05或P<0.01),余甘子总酚150、300μg/mL组ATP结合盒转运体A1(Abca1)基因表达显著上调(P<0.01),余甘子总酚300μg/mL组ATP结合盒转运体G1(Abcg1)基因及ABCA1蛋白表达明显上调(P<0.05)。结论:余甘子总酚可通过调节CD36、SRA1、ABCA1介导的胆固醇转运而影响RAW264.7巨噬细胞源泡沫细胞的胆固醇代谢,提示余甘子总酚可通过改善巨噬细胞胆固醇代谢而起到抗动脉粥样硬化的作用。     

总丹参酮抑制LPS诱导巨噬细胞炎症反应的作用机制研究

目的:探讨总丹参酮抑制脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7炎症反应的潜在分子机制。方法:MTT检测1、2、4μg/mL总丹参酮对RAW264.7细胞活力的影响;ELISA和qRT-PCR检测1、2、4μg/mL总丹参酮对LPS诱导RAW264.7细胞合成分泌细胞因子TNF-α、IL-6、IL-1β的影响;Western blot检测1、2、4μg/mL总丹参酮对LPS诱导RAW264.7细胞iNOS、COX-2及NF-κB、TLR4/MyD88/TAK1通路蛋白表达影响。结果:不同浓度总丹参酮(1、2、4μg/mL)对RAW264.7细胞活力无明显影响;2、4μg/mL总丹参酮显著抑制了LPS诱导RAW264.7细胞中iNOS、COX-2表达及细胞因子TNF-α、IL-6、IL-1β合成分泌增加,阻断了TLR4/MyD88/TAK1/NF-κB信号传导。结论:总丹参酮能通过阻断TLR4/MyD88/TAK1/NF-κB信号级联反应发挥抗炎作用,提示总丹参酮是一种用于治疗炎性疾病的潜在药物。     

橙皮苷对RAW264.7 巨噬细胞泡沫化及ICAM-1 表达的影响

目的：探讨橙皮苷对RAW264.7巨噬细胞泡沫化及细胞间黏附因子-1表达的影响。方法：体外培养RAW264.7 巨噬细胞,橙皮苷作用于未经诱导的RAW264.7 巨噬细胞及ox-LDL(50 μg?mL- 1）诱导后的RAW264.7巨噬细胞,将细胞分为空白对照组、ox-LDL模型组和橙皮苷给药组。MTT法检测不同浓度的橙皮苷对RAW264.7细胞活性的影响;用油红O染色观察橙皮苷对RAW264.7巨噬细胞内脂类堆积与泡沫细胞形成。观察橙皮苷对ox-LDL诱导RAW264.7巨噬细胞泡沫化的影响;免疫印迹法检测RAW264.7巨噬细胞中ICAM-1的蛋白表达。逆转录聚合酶链反应法检测RAW264.7巨噬细胞中ICAM-1的mRNA表达。结果：橙皮苷浓度大于或等于5 μM时,RAW264.7巨噬细胞存活率大于80%。橙皮苷抑制RAW264.7巨噬细胞泡沫化。橙皮苷能减少泡沫细胞的ICAM-1蛋白表达水平。橙皮苷能减少泡沫细胞ICAM-1 mRNA表达水平。结论：橙皮苷能抑制RAW264.7巨噬细胞泡沫化及ICAM-1的蛋白和mRNA表达,提示橙皮苷具有抗动脉粥样硬化临床应用价值。     

山香圆总黄酮对LPS诱导的RAW264.7细胞MAPK信号通路的影响

目的观察山香圆总黄酮对脂多糖诱导的RAW264.7细胞MAPK信号通路的影响。方法采用脂多糖刺激RAW264.7细胞制备炎症模型;CCK-8法测定细胞活力;ELISA法检测TNF-α、IL-1β、IL-6的分泌量;western blot法检测ERK1/2、JNK和p38蛋白的磷酸化水平。结果低于400μg/mL的山香圆总黄酮对RAW264.7细胞生长无影响;山香圆总黄酮各剂量组均能抑制p-ERK1/2、p-JNK、p-p38蛋白的表达以及TNF-α、IL-1β、IL-6的分泌,中、高剂量组呈显著性抑制(P0.05,P0.01)。结论山香圆总黄酮能通过抑制ERK1/2、JNK、p38磷酸化水平,降低TNF-α、IL-1β、IL-6的分泌,发挥抗炎作用。     

均一猪苓多糖对肿瘤微环境中RAW264.7细胞表达IL-10及相关机制的影响北大核心

目的:探讨在肿瘤微环境中均一猪苓多糖对RAW264.7细胞表达抗炎因子IL-10及其相关机制的影响。方法:建立小鼠膀胱癌细胞MB49与小鼠巨噬细胞RAW264.7共培养的细胞模型,体外模拟肿瘤微环境。实验分为对照组、IL-4(20 ng/mL)组及均一猪苓多糖低(50μg/mL)、中(100μg/mL)、高(200μg/mL)浓度组。采用CCK-8实验检测均一猪苓多糖及IL-4对RAW264.7细胞增殖的影响;ELISA法和RT-qPCR法分别检测共培养体系细胞上清中IL-10水平及RAW264.7细胞中IL-10的mRNA表达;Western Blot检测RAW264.7细胞中IL-10蛋白及激活IL-10的上游信号通路PI3K/AKT/mTOR和下游信号通路JAK1、STAT3、SOCS3、IL-1Ra蛋白表达。结果:与对照组比较,均一猪苓多糖及IL-4对RAW264.7细胞增殖均无明显影响;均一猪苓多糖中、高浓度组及IL-4组促进了肿瘤微环境中RAW264.7细胞IL-10的分泌及细胞中IL-10 mRNA及蛋白表达;不同浓度均一猪苓多糖干预后,均上调了肿瘤微环境中RAW264.7细胞SOCS3、IL-1Ra蛋白表达及p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR、p-STAT3/STAT3、p-JAK1/JAK1水平。结论:在膀胱癌肿瘤微环境中均一猪苓多糖可能通过激活PI3K/AKT/mTOR信号通路促进RAW264.7细胞表达抗炎因子IL-10,同时通过IL-10/JAK1/STAT3通路,上调SOCS3及IL-1Ra协同IL-10发挥抗炎功能。     

基于PPARγ/LXRα/ABCG1通路探讨黄连解毒汤对泡沫细胞脂质蓄积的干预作用

目的 基于过氧化物酶体增殖物激活受体γ/肝脏X受体α/ATP结合盒转运体G1 (PPARγ/LXRα/ABCG1)信号通路观察黄连解毒汤含药血清对巨噬细胞源性泡沫化脂质蓄积的影响，探讨清热解毒法干预动脉粥样硬化的部分作用机制。方法 采用80μg/mL的氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein, ox-LDL)诱导小鼠巨噬细胞RAW 264.7建立泡沫细胞模型。制备黄连解毒汤高(6.3g/kg)、低剂量组(3.15g/kg)含药血清以及正常对照组血清进行干预。收集细胞上清液，通过油红O染色观察巨噬细胞内脂滴形成及泡沫化程度；CCK-8法观察黄连解毒汤含药血清对泡沫细胞活力的影响；生化仪检测细胞内总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、游离胆固醇(FC)和胆固醇酯(CE)水平；酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清脂蛋白脂酶(LPL)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量；流式细胞仪测定细胞凋亡水平；蛋白免疫印迹法(Western Blot)测定细胞PPARγ、LXRα、ABCG1蛋白的表达；实时荧光定量聚合酶链式反...     

西红花苷对巨噬细胞泡沫化中炎症和脂质代谢的影响

目的探讨西红花苷对巨噬细胞泡沫化中炎症和脂质代谢的影响。方法采用50μg/mL氧化低密度脂蛋白诱导巨噬细胞RAW264.7泡沫化,分为正常组、模型组及西红花苷低、中、高剂量组(0.01、0.1、1μmol/L),药物处理细胞12、24、48 h。酶比色法检测细胞内胆固醇水平,ELISA法检测IL-1β、TNF-α、MCP-1水平,Western blot法检测NF-κB蛋白表达。结果与模型组比较,西红花苷中、高剂量组IL-1β、TNF-α、MCP-1水平降低(P0.05,P0.01),NF-κB蛋白表达降低(P0.01),高剂量组胆固醇水平下降(P0.05),不同时间点所测同一药物组的胆固醇水平差异无统计学意义(P0.05)。结论西红花苷可降低泡沫细胞中胆固醇及相关炎症因子水平,并且可能调控NF-κB信号通路。     

淫羊藿苷通过影响MAPK信号通路抑制ox-LDL诱导的血管平滑肌细胞增殖作用研究

研究淫羊藿苷(ICA)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的抑制作用,以及对增殖细胞核抗原(PCNA)表达和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的影响。以ox-LDL(50 mg·L-1)诱导VSMC增殖,采用MTT法检测ICA对ox-LDL诱导VSMC增殖的抑制作用;Real-time PCR和Western blot方法检测ICA对ox-LDL诱导增殖VSMC内细胞周期相关蛋白PCNA基因及蛋白表达的影响;Western blot方法检测ICA对ox-LDL诱导增殖VSMC内p38MAPK,ERK1/2,JNK信号通路相关信号蛋白磷酸化的影响。结果显示,经ox-LDL(50 mg·L-1)刺激后,VSMC增殖活性显著增强,细胞存活率显著提升,S期、G2/M期细胞显著增加,G0/G1期细胞显著减少;同时,PCNA基因及蛋白表达水平显著提升;不同浓度的ICA(40,20,10μmol·L-1)可显著抑制ox-LDL诱导的VSMC增殖,减少S期、G2/M期细胞,增加G0/G1期细胞,降低ox-LDL诱导的PCNA基因及蛋白的表达水平,下调ox-LDL诱导的p-p38和p-ERK1/2蛋白的表达,但不影响p-JNK蛋白的表达。上述结果表明,ICA对ox-LDL诱导的VSMC增殖具有抑制作用,可能通过降低PCNA表达和阻断p38MAPK和ERK1/2信号通路抑制VSMC增殖。     

基于NF-κB通路的芒果苷干预脂多糖诱导的细胞炎症作用机制研究

目的研究芒果苷对小鼠巨噬细胞RAW 264.7的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法采用脂多糖(LPS)诱导RAW 264.7细胞炎症模型。实验分四步:(1)细胞存活率实验分5组,即:空白组、LPS组、LPS+不同浓度(50、100、150μg/mL)芒果苷组。MTT法检测细胞存活率。(2)一氧化氮(NO)、白介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白介素6(IL-6)分泌实验分6组,即:空白组、LPS组、LPS和不同浓度芒果苷(50、100、150μg/mL)组、LPS+BAY 11-7082[核因子κB(NF-κB)抑制剂]组。Griess法检测NO分泌量,ELISA法检测IL-1β、TNF-α及IL-6分泌量。(3)诱导型一氧化氮合酶(iNOS)与环氧化酶-2(COX-2)mRNA及蛋白表达实验分组同细胞存活率实验。实时荧光定量PCR检测iNOS及COX-2 mRNA水平变化,Western blot检测iNOS及COX-2蛋白表达水平。(4)细胞质、细胞核中NF-κB表达实验分3组,即:空白组、LPS组、LPS+150μg/mL(终末浓度)芒果苷共处理组, Western blot检测细胞质、细胞核中NF-κB p65蛋白表达量。结果 (1)与空白组比较,LPS组显著降低RAW264.7细胞存活率(P0.05);与LPS组比较,50～150μg/mL芒果苷预处理对RAW264.7细胞增殖无显著影响(P0.05)。(2)与空白组比较,LPS组NO、IL-1β、TNF-α、IL-6分泌量显著升高(P0.05);与LPS组比较,除50μg/mL芒果苷预处理组NO、TNF-α分泌量无显著变化外(P0.05),其余各组NO、IL-1β、TNF-α、IL-6分泌量均显著降低(P0.05)。(3)与空白组比较,LPS组iNOS、COX-2 mRNA及蛋白表达量均显著升高(P0.05);与LPS组比较,50～150μg/mL芒果苷预处理组iNOS、COX-2 mRNA及蛋白表达显著下降(P0.05)。(4)与空白组比较,LPS组细胞质中NF-κB p65蛋白量减少,细胞核中则增多(P0.05);与LPS组比较,150μg/mL芒果苷预处理组细胞质中NF-κB p65蛋白量升高,细胞核中蛋白量减少(P0.05)。结论芒果苷可能通过抑制NF-κB信号通路,而抑制iNOS、COX-2表达及相关炎症因子的分泌,干预LPS诱导的RAW264.7细胞炎症。     

川芎嗪与黄芪甲苷配伍对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用及机制

摘要：目的：研究川芎嗪与黄芪甲苷及不同浓度配伍对过氧化氢（H2O2）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）氧化损伤模型的保护作用及机制。方法：建立H2O2诱导损伤模型,将细胞分为十七组,空白对照组、过氧化氢(0.2mmol/L)模型组,川芎嗪（40,80,160μg/mL）剂量组、黄芪甲苷（10,20,40μg/mL）剂量组及两两配伍组,MTT法检测不同浓度川芎嗪、黄芪甲苷及其配伍对氧化损伤人脐静脉内皮细胞的增值影响,筛选出最佳配伍比例;检测最佳配伍组MDA含量和SOD活性,Annexin V- FITC/PI 染色荧光显微镜观察细胞凋亡率, Western Blot 检测 p- Akt 和Akt 蛋白的表达 ,RT-PCR检测AKt mRNA的表达。结果： 与模型组相比,川芎嗪与黄芪甲苷不同浓度配伍组均能提高细胞存活率,且川芎嗪（80μg/mL）剂量组 黄芪甲苷（40μg/mL）剂量组具有极显著差异(P<0.001);川芎嗪、黄芪甲苷配伍组降低细胞MDA含量(P<0.001),提高细胞SOD活力(P<0.001)。同时,川芎嗪、黄芪甲苷配伍组能降低细胞凋亡率（P<0.01）,上调 p-Akt/Akt蛋白（P<0.01）,上调Akt基因mRNA的表达（P<0.001）。结论：川芎嗪（80μg/mL） 黄芪甲苷（40μg/mL）对 H2O2诱导的 HUVECs氧化损伤有保护作用,能缓解氧化应激诱导的 HUVECs 凋亡,其机制与 PI3K/Akt 信号通路有关     

乌蔹莓醇提物对LPS诱导RAW264.7细胞炎症模型的抗炎作用

目的 探讨乌蔹莓70%醇提物对脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞炎症模型的作用及其机制。方法 MTT法观察不同质量浓度乌蔹莓醇提物对RAW264.7细胞活性的影响，筛选合适的实验剂量。以LPS(1μg/mL)诱导建立细胞炎症模型，同时加入30、60、120μg/mL乌蔹莓醇提物进行处理，24 h后Griess法检测细胞上清液NO水平，DCFH-DA荧光探针检测细胞内ROS水平，ELISA法检测细胞上清液PGE₂、TNF-α、IL-6、IL-1β水平，RT-qPCR法检测细胞TNF-α、IL-6、IL-1β mRNA表达，Western blot法检测细胞iNOS、COX-2、NF-κB p65、p-NF-κB p65、Akt、p-Akt、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白表达。结果 乌蔹莓醇提取物质量浓度在180μg/mL及以下时对RAW264.7细胞存活率无明显变化(P>0.05)。与模型组比较，乌蔹莓醇提物组细胞内ROS水平及上清液NO、PGE₂、TNF-α、IL-6、IL-1β水平均降低(P<0.01),细胞T...     

苦杏仁苷对脂多糖诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症模型的影响

目的研究苦杏仁苷(Amygdalin)体外对脂多糖(LPS)诱导的小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7炎症模型的影响。方法采用MTT法检测苦杏仁苷对RAW264.7细胞及其LPS(0.5μg·m L~(-1))诱导后增殖作用的影响;q RTPCR法检测RAW264.7细胞炎症模型的炎症因子IL-17A、IL-23以及趋化因子CCL2、CCL5的m RNA表达;Western Blot法检测胞浆和胞核NF-κB p65以及p38、p-p38的蛋白表达。结果与正常对照组比较,苦杏仁苷在6.25~200μmol·L~(-1)浓度范围对RAW264.7细胞生长没有明显影响(P0.05),而400μmol·L~(-1)可导致RAW264.7细胞活力明显下降(P0.001)。与正常对照组比,LPS作用后RAW264.7细胞活力下降,细胞增殖受到抑制(P0.05);LPS刺激3h后可诱导RAW264.7细胞炎症因子IL-17A、IL-23以及趋化因子CCL2、CCL5 m RNA表达显著上升(P0.05,P0.01);LPS作用1h后可引起RAW264.7细胞的胞核NF-κB p65表达明显上调,胞浆NF-κB p65表达下调,胞核与胞浆比值明显上调(P0.05),p-p38蛋白表达也显著上升(P0.001)。与模型组比较,5μmol·L~(-1)苦杏仁苷对LPS诱导的RAW264.7细胞炎症模型未见明显变化(P0.05),而20,50μmol·L~(-1)苦杏仁苷作用后细胞增殖抑制状态恢复(P0.05,P0.01);苦杏仁苷(50μmol·L~(-1))提前干预后,IL-17A、IL-23、CCL2及CCL5 m RNA表达均显著下降(P0.01,P0.001);RAW264.7细胞NF-κB p65的胞核与胞浆比值明显下调,p-p38蛋白表达也显著下调,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论苦杏仁苷对LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7炎症模型的干预作用可能与抑制炎症因子IL-17A、IL-23以及趋化因子CCL2、CCL5的表达,抑制NF-κB、p38MAPK信号通路的过度激活有关。     

基于网络药理学探讨顾步汤治疗糖尿病足溃疡作用机制

目的 采用网络药理学方法分析顾步汤治疗糖尿病足溃疡（DFU）的可能作用靶点及相关机制，并进行细胞实验验证。方法 利用TCMSP数据库查找顾步汤主要有效成分及作用靶点，通过GeneCards、OMIM数据库收集与DFU相关基因，建立疾病-靶点-化学成分网络。通过GO和KEGG通路富集分析探讨顾步汤对DFU可能的作用途径。构建NIH/3T3细胞和RAW264.7细胞共培养体系，将细胞随机分为空白组、模型组、抑制剂组及顾步汤低、中、高剂量组，除空白组外，其余各组均以脂多糖诱导RAW264.7细胞构建巨噬细胞模型，采用白细胞介素-4(20 ng/mL)诱导建立巨噬细胞M2极化模型。采用流式细胞术检测NIH/3T3细胞凋亡率及M2型巨噬细胞数量，CCK-8法检测NIH/3T3细胞增殖率，划痕实验检测NIH/3T3细胞迁移率，Western blot检测Arg-1、FIZZ1及Wnt/β-Catenin信号通路相关蛋白表达，RT-PCR检测Arg-1、FIZZ1、Wnt4a、β-Catenin mRNA表达，免疫荧光染色检测Wnt4a和β-Catenin蛋白表达。结果 通过数据库检索获得顾步汤有效...     

扶正化瘀方对脂多糖诱导的RAW264.7巨噬细胞M1型炎性极化JNK通路的影响

目的观察扶正化瘀方对脂多糖(LPS)诱导的M1型RAW264.7巨噬细胞一氧化氮合酶(i NOS)基因和一氧化氮(NO)分子过表达的影响,探讨其可能的抗炎机制。方法采用LPS刺激小鼠RAW264.7巨噬细胞,建立M1型巨噬细胞炎性细胞模型,分别给予扶正化瘀方50、100、200μg/mL和10 nmol/L JNK蛋白抑制剂SP600125进行孵育。Griess法检测炎症介质NO含量,RT-PCR检测炎症因子白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和i NOS基因表达,Western blot检测i NOS蛋白表达和MAPK信号通路中JNK、p38、ERK蛋白的磷酸化水平。结果与LPS比较,扶正化瘀方和SP600125均显著降低巨噬细胞中NO分泌(P0.01)和i NOS蛋白表达(P0.01),降低MAPK信号通路JNK蛋白的磷酸化水平(P0.05,P0.01);扶正化瘀方对炎症因子IL-6、TNF-α的基因表达及MAPK信号通路ERK、p38蛋白的磷酸化水平无明显影响。结论扶正化瘀方可能通过抑制JNK蛋白的磷酸化而抑制i NOS基因过表达,最终减少NO的生成,从而抑制RAW264.7巨噬细胞M1型极化,发挥抗炎作用。     

倒心盾翅藤抗炎活性部位对马兜铃酸肾病大鼠肾脏的保护作用

目的 筛选倒心盾翅藤抗炎活性成分，考察其对马兜铃酸肾病大鼠肾脏的保护作用。方法 采用CCK-8法评价倒心盾翅藤各个极性部位对RAW264.7细胞的毒性，确定适宜的给药剂量。利用脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞复制炎症模型，给予药物干预后，Griess法检测NO水平，筛选出具有抗炎活性的部位。采用灌胃关木通水提液的方法复制大鼠马兜铃酸肾病模型，给予不同剂量倒心盾翅藤提取物(相当于生药15、30、60 g/kg)干预后，BCA法检测大鼠24 h尿蛋白量，ELISA法检测血清白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平，HE染色观察肾组织病理变化，Western blot法检测肾组织p-p38 MAPK、p-NF-κB p65蛋白表达。结果 倒心盾翅藤二氯甲烷部位在12.5～200μg/mL质量浓度范围内对RAW264.7未产生细胞毒性。25、50、100μg/mL二氯甲烷部位能抑制LPS诱导RAW264.7细胞释放NO(P<0.05,P<0.01)。倒心盾翅藤二氯甲烷部位各剂量组均降低马兜铃酸肾病大鼠24 h尿蛋白量和血清IL-...     

栀子苷通过PI3K通路抑制OX-LDL诱导HUVEC中KLF2表达

目的:探讨栀子苷((Geniposide)对氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中人Krüppel转录因子2(KLF2)表达的影响。方法:将人脐静脉内皮细胞随机分为空白对照组、OX-LDL模型组、栀子苷25、50、100μg/ml剂量组。造模后,除空白对照组和OX-LDL模型组外,分别用25、50、100μg/ml栀子苷预处理HUVEC 24 h。24 h后,除空白对照组外,用100μg/ml OX-LDL干预HUVEC 24 h。采用酶联免疫吸附(ELISA)检测细胞上清液中IL-6、TNF-α及KLF2的含量;CCK-8法测定细胞活性,Western Blotting检测细胞中KLF2、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)及其磷酸化蛋白(P-PI3K)的含量。结果:与OX-LDL模型组相比,栀子苷组HUVEC细胞增殖明显抑制,细胞内IL-6、TNF-α分泌明显增加,KLF2蛋白表达下降,以100μg/ml栀子苷干预效果最明显。阻断PI3K通路后,再加入栀子苷,对HUVEC的抑制效应降低,与空白对照组相比差异不明显。结论:栀子苷能显著诱导HUVEC损伤,主要与其阻断PI3K信号通路传导,进而抑制细胞中KLF2表达有关。     

毛蕊花苷对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症模型的作用及其机制研究

目的采用脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞的炎症模型,考察炎症相关指标,探讨毛蕊花苷的抗炎作用及其机制。方法用MTT比色法检测毛蕊花苷对RAW264.7细胞活性的影响;Griess法检测NO的含量;Westernblotting检测核转录因子-κB(NF-κB)通路相关蛋白的表达,ELISA试剂盒检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的释放,流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)、一氧化氮(NO)、Ca~(2+)的释放情况。结果毛蕊花苷浓度为20、40、80μmol/L时对RAW264.7细胞没有毒性。不同浓度的毛蕊花苷对LPS诱导RAW264.7细胞导致的NO、TNF-α、IL-6的释放,细胞内ROS、NO、Ca~(2+)释放的增加均有很好的抑制效果,对诱导型一氧化氮合酶(i NOS)、环氧化酶-2(COX-2)、p-IKKα/β、p-p65、p-IκBα蛋白的表达也有抑制作用。结论毛蕊花苷具有明显的抗炎作用,其作用机制是通过抑制NF-κB信号通路而发挥抗炎作用。     

豨桐丸对尿酸钠晶体诱导巨噬细胞NF-κB活化的影响

目的探讨豨桐丸对尿酸钠晶体诱导巨噬细胞NF-κB活化的影响。方法巨噬细胞RAW264.7随机分为对照组、模型组(200μg/mL)、秋水仙碱组(0.4μg/mL)及豨桐丸低、中、高剂量组(100、200、400μg/mL)。预给药2 h后,加入尿酸钠晶体诱导RAW264.7细胞,ELISA法检测IL-1β水平,Western blot法检测IκBα、p65表达,试剂盒法检测NF-κB与DNA的结合活性。结果尿酸钠晶体刺激RAW264.7细胞18 h后,IL-1β水平显著升高,30 min后细胞内IκBα表达显著降低,2 h后细胞核中p65表达、NF-κB与DNA的结合活性显著升高(P0.01);200、400μg/mL豨桐丸作用后,IL-1β水平、p65表达、NF-κB与DNA的结合活性显著降低,IκBα表达显著升高(P0.05,P0.01)。结论豨桐丸通过抑制尿酸钠晶体诱导巨噬细胞NF-κB活化,从而降低IL-1β水平。     

黄精皂苷对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症模型的抗炎作用及其机制

目的在脂多糖诱导的小鼠腹腔巨噬细胞(RAW264.7)中研究黄精皂苷通过NF-κB/MAPKs信号通路发挥体外抗炎作用及其机制。方法 MTT比色法检测黄精皂苷对RAW264.7细胞活性的影响,Griess试剂法检测NO释放,ELISA试剂法检测细胞释放TNF-α、IL-6的水平,流式细胞仪检测细胞释放ROS的水平,JC-1荧光染色法检测胞内线粒体膜电位水平变化,Western blot法检测细胞iNOS、COX-2、p-IKKα/β、p-IκBα、p-p65、p-p38、p-ERK、p-JNK蛋白表达。结果黄精皂苷质量浓度为20、40、80μg/mL时对RAW264.7细胞没有毒性。不同质量浓度的黄精皂苷对LPS诱导RAW264.7细胞导致的NO、TNF-α、IL-6、ROS的释放均有很好的抑制作用,对iNOS、COX-2、p-IKKα/β、p-p65、p-IκBα、p-p38、p-ERK、p-JNK蛋白表达也有抑制作用。结论黄精皂苷通过抑制NF-κB/MAPKs信号通路来发挥体外抗炎作用。