益气解毒化瘀小复方及其单味药对大鼠肾小球系膜细胞MMP3、TIMP1表达及细胞外基质产生的影响

目的:探讨益气解毒化瘀小复方及其单味药对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠肾小球系膜细胞MMP3(GMCs),TIMP1表达及细胞外基质FN,Col-IV胶原蛋白的影响。方法:常规培养大鼠肾小球系膜细胞,RT-PCR法检测各组对大鼠肾小球系膜细胞MMP3、TIMP1的表达,双抗体ELISA夹心法检测各组对细胞外基质FN,Col-IV胶原蛋白的影响。结果:小复方组降低系膜细胞MMP3、TIMP1表达最为明显,小复方组降低细胞外基质FN,Col-IV胶原蛋白的影响最为明显,与各单味药,西药对照组比较,有显著性差异(P0.01或P0.05)。结论:益气解毒化瘀小复方可有效地抑制肾小球系膜细胞增殖,有效地促进系膜细胞凋亡,并优于单味药,从而达到抗肾小球硬化,保护肾脏的目的。     

益气化瘀清热方及其拆方对大鼠肾小球系膜细胞TGF-β1/Smad3信号通路的影响

目的:对益气化瘀清热方进行拆方,通过观察各类含药血清对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导下体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(primary mesangial cells,Ms C)表达TGF-β1及Smad3蛋白的影响,探讨不同类中药的作用强度以及益气化瘀清热方治疗肾小球肾炎的作用机制。方法:采用Wersten Blot法检测各组含药血清对大鼠Ms C表达TGF-β1及Smad3蛋白的影响。结果:Wersten印迹结果显示:各组含药血清均能抑制体外培养的Ms C表达TGF-β1及Smad3蛋白,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);其中复方组作用最强,与其他含药血清组比较差异有统计学意义(P<0.05),清热组与化瘀组比较无明显差异(P>0.05),但优于益气组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:益气化瘀清热方及其拆方、雷公藤多苷均能抑制体外培养的大鼠Ms C表达TGF-β1及Smad3蛋白的表达。复方组作用明显优于其他组,清热组及化瘀组次之,益气组最弱。     

益气化瘀清热方及其拆方对大鼠肾系膜细胞表达Smad2及泛素mRNA的影响

目的观察益气化瘀清热方及其拆方各类含药血清对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导下体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(primary mesangial cells,Ms C)表达Smad2及泛素mRNA的影响。方法采用RT-PCR法检测各类含药血清对Ms C表达Smad2及泛素mRNA的影响。结果各组含药血清均能抑制体外培养的Ms C表达Samd2及泛素mRNA,与对照组比较均有明显差异(P0.01),其中复方组作用最强,优于TW组(P0.01);清热组和化瘀组优于益气组(P0.01),但二者比较无明显差异(P0.05)。结论益气化瘀清热方及其拆方、TW含药血清均能抑制体外培养的大鼠Ms C表达Samd2及泛素mRNA,复方组较强,化瘀组、TW组次之,益气组较弱。     

益气化瘀清热方及其拆方对大鼠肾小球系膜细胞表达p38MAPKmRNA及其蛋白的影响

目的:对益气化瘀清热方进行拆方,通过观察各类含药血清对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导下体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(primary mesangial cells,Ms C)表达p38MAPKmRNA及其蛋白的影响,探讨不同中药的作用强度以及益气化瘀清热方治疗肾小球肾炎的作用机制。方法:RT-PCR法检测各组含药血清对Ms C表达的p38MAPK mRNA。Wersten Blot法检测各组含药血清对大鼠Ms C表达的p38MAPK蛋白。结果:1RT-PCR结果显示:各组含药血清均能抑制体外培养的Ms C表达p38MAPKmRNA,复方组作用最强(P0.01),清热组与化瘀组比较无明显差异(P0.05),但优于益气组,差异显著(P0.01);2 Wersten印迹结果显示:各组含药血清均能抑制体外培养的Ms C表达p38MAPK蛋白,复方组作用最强(P0.01),清热组与化瘀组比较无明显差异(P0.05),但优于益气组,差异有统计学意义(P0.01)。结论:各类含药血清对大鼠Ms C表达p38MAPK mRNA及其蛋白的影响在不同组中药的比较中,复方组作用最强,化瘀组和清热组的作用明显优于益气组。     

愈肾颗粒不同药对配伍对肾小球系膜细胞基质金属蛋白酶-2及其抑制剂-2的影响

目的:考察黄芪、太子参(益气摄血组),牡丹皮、丹参(凉血化瘀组),紫草、益母草(解毒化瘀组)3组药对对大鼠肾小球系膜细胞基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及基质金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)m-RNA表达的影响.方法:应用血清药理学方法,制取中药药对的含药血清.以血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)作为刺激因子,培养大鼠肾小球系膜细胞,使其发生增殖.应用反转录多聚酶链反应技术(RT-PCR)观察各组间MMP-2,TIMP-2的基因表达情况.结果:益气摄血组对TIMP-2抑制作用显著,与模型组比较有显著性差异;其他2组虽有抑制趋势,但无统计学意义.3组药对对MMP-2的影响均无统计学意义.结论:黄芪、太子参可通过抑制TIMP-2的基因表达,发挥防治肾小球硬化的作用.     

益气化瘀清热方及其拆方对大鼠肾系膜细胞表达NF-κBp65 mRNA及其蛋白的影响

目的:把益气化瘀清热方拆方成益气、化瘀、清热3组,并与复方组和雷公藤组(TW组)对比,通过体外培养的方法,观察各组含药血清对大鼠肾小球系膜细胞(mesangial cells,MsC)中NF-κBp65 mRNA及蛋白的表达水平高低,进而探讨益气化瘀清热方的作用机制及不同类中药的作用强度。方法:采用RT-PCR法及Wersten Blot法分别检测含药血清对MsC表达NF-κBp65 mRNA及蛋白的作用强度。结果:各组含药血清均能抑制MsC中NF-κBp65 mRNA及其蛋白的表达,化瘀组、TW组作用较强(P0.05);拆方后的益气、化瘀、清热3组比较:化瘀组作用较益气组、清热组明显增强(P0.05)。结论:益气化瘀清热方及其拆方、TW均能抑制体外培养的大鼠MsC表达NF-κBp65mRNA及其蛋白,其中化瘀组、TW组作用较强,益气组较弱。     

丹参多酚酸盐对人肾小球系膜细胞TGF-β/Smad信号转导通路的影响

目的:探讨丹参多酚酸盐对血管紧张素Ⅱ诱导的人肾小球系膜细胞TGF-β/Smad信号传导通路的影响。方法:培养人肾小球系膜细胞,分为正常组;模型组;丹参多酚酸盐高剂量(200μmol/L);中剂量(20μmol/L);低剂量(2μmol/L)组。经预实验筛选结果,采用10-8mol/L血管紧张素Ⅱ诱导模型组及丹参多酚酸盐各组人肾小球系膜细胞增殖,采用MTT法检测各组及各时间点的细胞活性。收集培养48 h时间点各组细胞,采用Western blot法及Real-timePCR法分别检测Smad2、Smad3蛋白及TGF-β及Smad7 mRNA的表达情况。结果:模型组与正常组比较,在培养24 h,48 h,72 h内系膜细胞的增值活性增强、丹参多酚酸盐各组能够抑制其增殖,于48 h达到稳定;模型组与正常组比较,系膜细胞中Smad2、Smad3蛋白及TGF-βmRNA的表达显著上升(P0.05),而Smad7mRNA的表达则明显降低(P0.05);丹参多酚酸盐各组与模型组比较,均能逆转上述变化(P0.05)。结论:血管紧张素Ⅱ能够有效刺激肾小球系膜细胞增殖,丹参多酚酸盐可能通过多靶点抑制TGF-β/Smad信号通路的传导,从而抑制延缓肾小球硬化及纤维化。     

益气化瘀清热方及其拆方对大鼠肾小球系膜细胞TGF-βRⅠmRNA及其蛋白的影响

目的:观察益气化瘀清热方及其拆方各类含药血清对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导下体外培养大鼠肾小球系膜细胞(primary mesangial cells,Ms C)表达转化生长因子βI型受体(transforming growth factorβ,TGF-β-RI)mRNA及其蛋白的影响。方法:采用RT-PCR法检测各组含药血清对Ms C表达TGF-βRⅠ mRNA的影响;采用Wersten Blot法检测各组含药血清对大鼠MsC表达TGF-βRⅠ蛋白的影响。结果:(1)RT-PCR结果显示:各组含药血清均能抑制体外培养的Ms C表达TGF-βRⅠ mRNA(P<0.01),复方组作用最强,与其他含药血清组比较差异显著(P<0.01),清热组与化瘀组比较无明显差异(P>0.05),但优于益气组(P<0.01)。(2)Wersten印迹结果显示:各组含药血清均能抑制体外培养的Ms C表达TGF-βRⅠ蛋白,复方组作用最强,与其他含药血清组比较差异显著(P<0.01),清热组与化瘀组比较无明显差异(P>0.05),但优于益气组(P<0.01)。结论:益气化瘀清热方及其拆方、雷公藤多苷的含药血清均能抑制体外培养的大鼠Ms C表达TGF-βRⅠmRNA及其蛋白。复方组作用较强,清热组及化瘀组次之,益气组最弱。     

糖肾康中药复方含药血清对高糖环境下RMCs的增殖及TGF-β1/Smad2/3 信号通路的影响

目的研究糖肾康中药复方含药血清对高糖环境下大鼠肾系膜细胞(RMCs)增殖及TGF-β1/Smad2/3信号通路的影响。方法 12只SD大鼠采用随机数字法分为小剂量中药组、中剂量中药组、大剂量中药组,空白组,每组3只,灌胃7天后门静脉取血。分别用含中药血清和普通大鼠血清培养RMCs。采用4-甲偶氮唑蓝(MTT)法测定系膜细胞的增殖率,以确定最佳中药血清浓度;实时定量、PCR及酶联免疫吸附剂(ELISA)法测定TGF-β1mRNA及蛋白的表达,蛋白免疫印迹(Western blot)及免疫荧光方法测定Smad2/3蛋白表达及磷酸化水平。结果不同剂量的糖肾康中药含药血清均能抑制大鼠肾小球系膜细胞的增殖;中药血清可显著抑制高糖诱导的TGF-β1表达及Smad2/3磷酸化。结论糖肾康中药含药血清能抑制高糖刺激下的RMCs增殖,其作用机制可能与抑制TGF-β1/Smad2/3通路有关。     

复方鬼箭羽合剂对糖尿病肾病大鼠肾组织Smad4、Smad7的影响

目的:观察复方鬼箭羽合剂对早期糖尿病肾病的治疗作用,以及探讨这种治疗作用的机制.方法:单侧肾切除STZ腹腔注射造模的方法,采用肾小球光镜和电镜病理染色的方法、以及Smad4和Smad 7免疫组织化学染色的方法观察方法复方鬼箭羽合剂对肾小球Smad4和Smad 7表达的调控作用.结果:8、12周末模型组大鼠肾小球内Smad 4阳性相对面积显著高于正常对照组(P<0.01),复方鬼箭羽合剂治疗组大鼠肾小球内Smad4的蛋白表达量较模型组显著降低(P<0.01),8、12周末模型组大鼠肾小球内Smad 7阳性相对面积显著低于正常对照组(P<0.01),复方鬼箭羽合剂治疗组大鼠肾小球内Smad 7阳性相对面积与正常对照组差别并不显著(P>0.05),而12周时复方鬼箭羽合剂治疗组大鼠肾小球内Smad 7阳性相对面积较8周有所下降,有显著性差异(P<0.05).结论:复方鬼箭羽合剂治疗组能显著上调Smad4和使Smad 7蛋白的表达降低,说明复方鬼箭羽合剂可通过调节Smad4和Smad7蛋白表达,从而降低TGF-β1的表达,达到防治糖尿病肾病肾小球硬化的作用.     

益气化瘀方对糖尿病溃疡大鼠Smad3、Smad4表达的影响

目的探讨益气化瘀方对糖尿病溃疡大鼠Smad3、Smad4表达的影响。方法将72只清洁级雄性SD大鼠分为正常创面组、糖尿病创面组、贝复济组、益气化瘀组、益气组和化瘀组。以糖尿病大鼠背部全层皮肤缺损开放性创面为模型,各组分别给予相应的处理措施后,应用免疫组化、图像分析、westernblot等技术,观察各组大鼠创面肉芽组织中Smad3、Smad4表达水平的变化。结果糖尿病创面组Smad3、Smad4的表达水平明显高于正常创面组(P<0.01),各中药组Smad3、Smad4的表达水平明显低于糖尿病创面组(P<0.01);Westernblot检测结果显示,益气化瘀组Smad3、Smad4的表达水平明显低于益气组和化瘀组(P<0.01),化瘀组Smad4的表达水平低于益气组(P<0.05)。结论糖尿病创面难愈合与Smad3、Smad4的高表达有关;益气化瘀中药能明显促进糖尿病溃疡大鼠的创面愈合,下调Smad3、Smad4的表达水平是其作用机制之一。     

丹皮酚对急性心肌梗死大鼠Smad2, Smad3, Smad7 mRNA含量表达的影响

目的:研究丹皮酚对急性心肌梗死(AMI)大鼠进行性心室重构的保护作用及其对转化生长因子-β(TGF-β)/Smads信号通路上Smad2,Smad3,Smad7 mRNA含量表达的影响。并探讨其延缓甚至逆转心室重构的分子机制。方法:采用左冠状前降支(LAD)结扎法制作在体大鼠急性心肌梗死模型,在心电图评价的基础上,将造模成功的大鼠随机分为模型组、丹皮酚低、中、高剂量组、卡托普利组,另有只穿线不结扎的假手术组,每组10只,共6组。丹皮酚低、中、高剂量组分别给予ip8,12,16 mg·kg-1剂量的丹皮酚注射液,假手术组与模型组每天ip等体积生理盐水,卡托普利组用蒸馏水稀释其片剂碾成的药粉,给予ig 10 mg·kg-1,所有干预均1次/d;4周后分别取材,测定各组大鼠心脏质量指数及梗死面积,采用实时荧光定量RTq PCR技术检测各组心肌组织Smad2,Smad3,Smad7 mRNA的表达水平。结果:与模型组比较,丹皮酚低、中、高剂量组、卡托普利组大鼠心肌梗死面积明显减少(P0.05),心脏质量指数降低(P0.05);模型组Smad2,Smad3 mRNA的表达水平均明显高于假手术组(P0.01),Smad7的表达低于假手术组(P0.01);丹皮酚各剂量干预组Smad2,Smad3 mRNA的表达明显低于模型组(P0.01),Smad7 mRNA的表达则明显强于模型组(P0.01)。结论:丹皮酚有抗AMI大鼠心肌纤维化的作用,其机制与上调TGF-β1抑制性信号蛋白Smad7的mRNA表达及下调TGF-β受体调控信号蛋白Smad2,Smad3的mRNA表达有关。即其作用机制可能与干预TGF-β/Smads信号转导有关。     

壮肝逐瘀煎对大鼠肝Smad3、Smad4、Smad7表达的影响

目的研究壮肝逐瘀煎对肝纤维化(HF)大鼠Smad3、Smad4、Smad7表达的影响,探讨其抗HF的作用机制。方法Wistar大鼠采用CCl4复合因素法进行HF造模。对HF大鼠予壮肝逐瘀煎灌胃治疗,并以秋水仙碱及大黄虫丸为对照。6周后获取肝组织,苏木精-伊红染色观察HF的程度;免疫组织化学染色、图像分析方法对Smad3、Smad4、Smad7的组织分布进行半定量分析。结果与病理模型组大鼠比较,壮肝逐瘀煎治疗组肝小叶结构趋于正常,纤维间隔明显变薄,肝组织Smad3、Smad4表达显著减少,Smad7表达显著增加。结论壮肝逐瘀煎能够显著改善HF大鼠肝组织的病理变化,具有明显的抗HF作用,其作用机制可能与壮肝逐瘀调控Smad3、Smad4、Smad7的表达有关。     

解毒洗药对糖尿病溃疡大鼠Smad3、Smad4表达的影响

目的:探讨解毒洗药对糖尿病大鼠创面肉芽组织中Smad3、Smad4表达的影响。方法:取50只Wistar大鼠制备糖尿病溃疡模型,将造模成功的18只随机分成3组,即解毒洗药组、贝复剂组、糖尿病模型组,每组6只;另取10只大鼠制备正常大鼠溃疡模型,选取造模成功的6只,设为正常模型组。各组分别给予相应处理后,应用免疫组化、Western Blot等技术观察各组大鼠创面肉芽组织中Smad3、Smad4表达水平的变化。结果:糖尿病模型组Smad3、Smad4表达水平明显高于解毒洗药组、贝复剂组和正常模型组(P0.01);解毒洗药组Smad3、Smad4表达水平低于贝复济组(P0.05),且与正常模型组比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论:Smad3、Smad4的高表达可能是糖尿病创面难以愈合的机制之一,解毒洗药可通过下调Smad3、Smad4的表达水平促进创面愈合。     

补肾泻肝汤对前列腺组织Smad2、Smad4表达的影响

目的:观察补肾泻肝汤对实验性大鼠前列腺增生组织Smad2和Smad4表达的影响及意义。方法:去势加丙酸睾酮注射法复制大鼠前列腺增生模型,免疫组织化学法检测大鼠前列腺增生组织及正常前列腺组织Smad2和Smad4的表达。结果:模型组大鼠前列腺组织Smad2和Smad4表达水平均下调,不论Smad2还是Smad4,其在前列腺增生组织中的阳性表达率与正常前列腺组织及补肾泻肝汤组阳性表达率比较,差别有显著意义(P0.05)。结论:Smad2和Smad4参与了前列腺增生的病理过程,补肾泻肝汤对前列腺增生组织Smad2和Smad4表达的改变有调节作用。     

四逆汤对异丙肾上腺素诱导的大鼠心肌纤维化Smad2和Smad7的影响

目的 观察四逆汤对异丙肾上腺素诱导的大鼠心肌纤维化Smad2和Smad7的影响。方法 Wistar大鼠随机分为对照组、模型组和四逆汤组。模型组及四逆汤组给予注射异丙肾上腺素,对照组注射生理盐水。四逆汤组给予四逆汤灌胃,对照组和模型组均给予生理盐水灌胃。4周后,各组行Masson染色和电镜分析;通过免疫组化方法检测心肌Smad 2和Smad 7蛋白在心肌的表达;RT-PCR法检测Smad 2和Smad 7 mRNA表达。结果 Masson染色示模型组心肌胶原纤维IOD值为9303,而四逆汤组为2459,对照组为4224,提示模型组心肌纤维化较四逆汤和对照组明显;模型组心肌Smad 2蛋白IOD值为20275,mRNAI OD值为0.919;而四逆汤组Smad 2蛋白IOD值为9949,mRNAI OD值为0.561,提示模型组Smad 2表达明显高于四逆汤组（P<0.05);模型组心肌Smad 7蛋白IOD值为25667,mRNAI OD值为0.222,而四逆汤组Smad 2蛋白IOD值为93 147,mRNAI OD值为0.412,提示模型组Smad 7表达明显低于四逆汤组（P<0.05)。结论 四逆汤可以有效抑制异丙肾上腺素所致的大鼠心肌纤维化,其机制可能与下调Smad 2表达和上调Smad 7表达有关。     

皂荚提取物对肝癌细胞小鼠Smad4和Smad7蛋白表达的影响

目的研究皂荚提取物对小鼠肝癌细胞Smad4和Smad7蛋白调控的影响.方法造模采用小鼠右腋皮下接种肝癌H22细胞悬液的方法.实验分为模型对照组、皂荚提取物3个浓度组(26mg/d、13mg/d、7.8mg/d)和阳性对照组(金龙胶囊).通过免疫组化(Envision二步法)方法检测肝组织Smad4和Smad7蛋白的表达...