糖尿病周围神经病变小鼠神经生长因子及其受体的变化及周络通胶囊的干预作用

目的观察糖尿病周围神经病变(DPN)小鼠神经生长因子(NGF)及其受体的变化及周络通胶囊的干预作用。方法 40只KK/Upj-Ay小鼠随机分为模型组、周络通胶囊高、中、低剂量组(6.85,3.43,1.71 g生药.kg-1),另设10只C57BL/6小鼠对照组。灌胃给药12周,测定运动神经传导速度(MNCV);荧光定量PCR和Western blot法测定坐骨神经NGF、高亲和力受体Trk A、低亲和力受体p75NTR表达。结果模型组与对照组比较,MNCV明显下降(P<0.01),NGF、Trk A、p75NTR表达明显下降(P<0.01);与模型组比较,周络通组能提高MNCV(P<0.05,P<0.01);升高NGF、Trk A、p75NTR表达(P<0.05,P<0.01)。结论周络通胶囊对DPN小鼠有保护作用,与升高NGF及其受体TrkA、p75NTR表达有关。     

筋脉通对实验性糖尿病大鼠坐骨神经AGEs及其受体表达的影响

目的:观察中药复方筋脉通对实验性糖尿病大鼠坐骨神经晚期糖基化终产物AGEs及其受体RAGE表达的影响。方法:采用链脲佐菌素造模后,将大鼠随机分为模型对照组、筋脉通小剂量、中剂量和大剂量组,并设立正常对照组。成模后即开始灌胃给药,筋脉通小、中、大剂量组分别按成人剂量的5、10、20倍给药。模型组和正常组予灌服蒸馏水。检测各组治疗前及治疗后4、8、12、16周的体质量和血糖变化,并测定大鼠机械痛阈,采用免疫组化法测定坐骨神经AGEs及其受体的表达。结果:治疗后正常组大鼠的体质量、血糖与其余各组比较有明显的差异(P<0.01);而模型组及各用药组之间均无明显的差异。机械痛阈结果显示,与正常组比较模型组及各治疗组的机械痛阈值显著降低(P<0.01)。正常组大鼠坐骨神经中AGEs及RAGE表达呈弱阳性,模型组坐骨神经AGEs及RAGE的阳性表达比正常组明显增强,筋脉通各治疗组介于两者之间。IOD值测定显示,与正常组比较,模型组的AGEs及RAGE的IOD值显著升高(P<0.01),各治疗组均较正常组升高,较模型组降低,其中筋脉通中剂量组治疗组明显降低,有显著性差异(P<0.01)。结论:筋脉通能够减少糖尿病大鼠周围神经中AGEs的生成,并下调其受体的异常表达。     

艾炷灸命门穴对衰老模型大鼠脑组织中AGEs、RAGE表达影响

目的:观察艾炷灸命门穴对D-半乳糖致衰老大鼠脑组织中AGEs及其受体RAGE表达的影响,探讨艾炷灸命门穴延缓衰老的作用机制。方法:雄性SD大鼠40只,随机分为空白组10只、模型制备组30只,空白组腹腔注射生理盐水,模型制备组进行腹腔注射D-半乳糖500 mg/kg,每日1次,连续60天,模型制备成功后随机选取20只分为模型对照组、命门穴治疗组,艾炷灸治疗4周。酶联免疫吸附测定法(Elisa)观察各组大鼠脑组织匀浆中AGES、RAGE表达水平,RT-PCR观察RAGE mRNA的表达水平。结果:模型对照组大鼠脑组织中AGES、RAGE及RAGE mRNA表达水平比空白组明显增加(P<0.01);命门穴治疗组脑组织中AGES、RAGE及RAGE mRNA表达水平明显低于模型对照组(P<0.01)。结论:艾炷灸命门穴可以延缓衰老,其机制可能是AGEs的水平下调减少了对蛋白的直接修饰及抑制AGEs与特异性配体RAGE结合而引发一系列的生物学效应而达到延缓衰老的目的。     

中药降糖复方水提取物对KK-Ay糖尿病小鼠糖基化终末端产物及氧化应激的影响

研究中药降糖复方水提取物对KK-Ay小鼠AGEs和RAGE的影响。将自发性2型糖尿病模型KK-Ay小鼠随机分成5组:模型组、二甲双胍组、中药降糖复方低、中、高剂量组。另外,C57BL/6J小鼠作为正常对照组。其中二甲双胍组灌胃盐酸二甲双胍250 mg·kg~(-1);中药降糖复方低、中、高剂量组分别灌胃水提取物2,4,8 g·kg~(-1);正常对照组和模型组灌胃等体积蒸馏水,每日1次,共12周。实验过程中分别对小鼠血清中及(或)尿液中的谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、肌酐(creatinine,Cr)、血清尿素氮(urea nitrogen,BUN)、糖基化终末端产物(advanced glycation end products,AGEs)及糖基化终末端产物受体(receptor of glycation end products,RAGE)等进行检测。于灌胃12周后处死小鼠,取小鼠肾脏做病理切片及免疫组化,同时取肾组织做蛋白印记法Western blot、荧光实时定量PCR、酶联免疫吸附测定法ELISA检测AGEs,RAGE,过氧化氢酶(Cata-lase,CAT)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)等氧化应激指标。该研究证实中药降糖复方水提取物能在一定程度上改善KK-Ay小鼠肾功能(P0.05),缓解糖尿病肾病,猜测其机制可能与降低体内AGEs和RAGE,抑制氧化应激有关。     

通心络胶囊对糖尿病周围神经病变小鼠黏附分子的作用及其机制

目的:观察通心络胶囊对糖尿病周围神经病变小鼠黏附分子的作用并探讨其机制。方法:KK/Upj-Ay小鼠随机分为模型组、通心络高、中、低剂量组(4,2,1 g·kg-1),另设C57BL/6小鼠为对照组。灌胃给药12周,测定运动神经传导速度(MNCV)和感觉神经传导速度(SNCV);流式细胞仪测定血液中细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)含量;实时定量荧光PCR(q PCR)和蛋白质印迹(Western blot)法测定坐骨神经ICAM-1,VCAM-1和核因子-κB(NF-κB)表达。结果:与对照组比较,模型组小鼠MNCV,SNCV明显减慢,血液中ICAM-1,VCAM-1含量显著上升,坐骨神经中ICAM-1,VCAM-1和NF-κB表达均明显升高(P<0.01)。与模型组比较,通心络中、高剂量组小鼠MNCV,SNCV明显增快(P<0.05,P<0.01);血液中ICAM-1,VCAM-1含量显著下降(P<0.05,P<0.01);通心络组坐骨神经中ICAM-1,VCAM-1和NF-κB mRNA和蛋白表达显著下降(P<0.05,P<0.01)。结论:通心络胶囊通过下调NF-κB抑制糖尿病周围神经病变小鼠黏附分子表达,改善糖尿病周围神经病变。     

绞股蓝皂苷对晚期糖基化终末产物诱导人肾小球系膜细胞晚期糖基化终末产物受体表达及氧化应激水平的影响

目的观察绞股蓝皂苷(GP)对晚期糖基化终末产物(AGEs)诱导下人肾小球系膜细胞(HMCs)中晚期糖基化终末产物受体(RAGE)表达及氧化应激水平的影响。方法用含13%FBS的DMEM低糖培养液体外培养HMCs细胞,将细胞分为6组:对照组(DMEM培养液),AGEs组(200 mg/L),GP低、中、高剂量(25、75、150 mg/L)组和阳性对照组(氨基胍0.1 mmol/L)。培养72 h后,采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞中RAGE m RNA的表达水平,Western blotting法检测RAGE蛋白表达水平。应用试剂盒检测各组细胞上清液中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及细胞内微量还原型谷胱甘肽(GSH)活性。结果 AGEs显著促进HMCs中RAGE m RNA及蛋白表达(P0.01),增强细胞氧化应激水平。GP能有效抑制RAGE m RNA及蛋白表达,增加上清液中SOD和细胞内GSH水平,降低细胞上清液中MDA水平,且呈浓度依赖效应,与AGEs组比较差异显著(P0.01)。结论 GP下调AGEs刺激后HMCs细胞RAGE的异常高表达,同时改善细胞内氧化应激水平,其可能的机制是GP阻断了RAGE介导的AGEs-RAGE-氧化应激信号通路,表现为细胞上清液中MDA水平降低和SOD水平增加及细胞内GSH水平增加。     

欧亚旋覆花总黄酮对糖基化终末产物诱导L929细胞衰老及RAGE表达的影响

目的探讨欧亚旋覆花总黄酮(IBFTF)对糖基化终末产物(AGEs)诱导小鼠皮肤成纤维细胞株L929衰老的保护作用,和AGEs特异性受体(RAGE)的表达机制。方法采用0.100 g/L AGEs培养液刺激离体培养的L929细胞48 h制备衰老模型,药物组分别给予不同质量浓度IBFTF(0.1、0.2、0.4 g/L)继续作用6 h,阳性对照组给予0.1 g/L氨基胍半硫酸盐(AG)继续作用6 h,对照组给予完全培养液。检测胞内β-半乳糖苷酶阳性染色细胞数量和细胞周期比例等衰老指标;检测胞内活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平等氧化应激指标。采用细胞免疫荧光检测RAGE荧光强度,Western blotting和q RT-PCR分别检测RAGE蛋白和m RNA表达情况。结果 IBFTF可显著抑制AGEs诱导的L929细胞衰老并降低RAGE的蛋白和m RNA表达水平;不同质量浓度IBFTF作用于衰老的L929细胞后,可显著提高细胞内SOD活性,显著降低MDA和ROS水平,具有浓度依赖性。结论 IBFTF对AGEs诱导衰老的L929细胞有保护作用,其机制可能是通过抑制RAGE表达来实现的。     

莫诺苷对晚期糖基化终末产物加重链脲佐菌素诱导糖尿病肾病保护作用及其机制

目的探讨山茱萸Cornus officinalis中效应成分莫诺苷对晚期糖基化终末产物(AGEs)加重链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病肾病(DN)小鼠的保护机制。方法将STZ诱导成功的DN小鼠饲喂高AGEs饲料,并分别ig给予氨基胍(0.1 g/kg)、二甲双胍(0.2 g/kg)、卡托普利(0.02 g/kg)、莫诺苷低剂量(0.02 g/kg)和莫诺苷高剂量(0.10 g/kg)12周。检测空腹血糖、胰岛素、血清肌酐和尿素氮、血清和肾脏AGEs、24 h尿蛋白等指标,RT-PCR法检测肾组织中晚期糖基化终末产物受体(RAGE)m RNA表达,Westorn blotting法检测肾组织中RAGE蛋白表达,观察各组小鼠胰腺和肾脏的病理改变。结果莫诺苷可显著降低DN小鼠血糖,改善"三多一少"症状,增加胰岛素分泌,降低24 h尿蛋白、血清尿素氮和肌酐、血清和肾脏AGEs水平,缓解胰腺及肾脏病变,下调肾皮质RAGE m RNA和蛋白的表达。结论莫诺苷具有保护DN小鼠的作用,且高剂量作用较优,其相关机制可能与降低血清、肾脏AGEs水平,下调肾皮质RAGE m RNA和蛋白的表达有关。     

芪参益气滴丸对糖尿病大鼠视网膜AGEs及RAGE mRNA表达的影响

目的观察芪参益气滴丸对糖尿病大鼠视网膜内晚期糖基化终末产物(advanced glycation endproducts,AGEs)及其受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)mRNA表达的影响。方法 70只SD大鼠以链脲佐菌素(65 mg/kg)诱导糖尿病大鼠模型,随机分成模型组、阳性对照组(羟苯磺酸钙胶囊)和芪参益气滴丸组,另设正常对照组12只。10个月后用免疫组织化学方法检测各组视网膜AGEs表达水平,反转录聚合酶链反应检测RAGE mRNA表达水平。结果糖尿病大鼠视网膜AGEs和RAGE mRNA表达较正常组增强(P<0.01);阳性对照组和芪参益气滴丸组视网膜AGEs和RAGE mRNA表达较模型组降低(P<0.01)。结论芪参益气滴丸可降低视网膜AGEs和RAGE mRNA的表达,从而减轻视网膜微血管损伤。     

灵芝多糖对2型糖尿病大鼠心肌AGEs及其受体表达的影响

目的:观察灵芝多糖(GLPs)对2型糖尿病大鼠心肌组织中晚期糖基化终产物(advanced glycation end products,AGEs)及其受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)表达的影响,探讨其防治糖尿病大鼠心肌病变的作用机制。方法:采用高能量饮食加小剂量腹腔注射链脲佐菌素(STZ)的方法建立2型糖尿病大鼠模型(Type 2 Diabetes Mellitus,T2DM),成模后将大鼠随机分成6组:正常对照组、模型对照组、灵芝多糖低、中、高剂量治疗组、小檗碱对照组。灌胃治疗12周后测定各组大鼠空腹血糖、血浆胰岛素,免疫组化和蛋白印迹法检测心肌组织中AGEs、RAGE含量的表达。结果:与DM组比较,灵芝多糖组、小檗碱组能有效降低血糖、升高血浆胰岛素水平,降低心肌组织中AGEs、RAGE的表达,其中灵芝多糖高剂量组效果优于小檗碱组。结论:灵芝多糖可显著改善糖尿病大鼠血糖、空腹血浆胰岛素水平,并可能通过抑制心肌组织中AGEs、RAGE的表达实现其保护糖尿病大鼠心肌的作用。     

酸味中药复方对2型糖尿病大鼠主动脉AGEs含量及受体基因表达的影响

目的 观察酸味中药复方对2型糖尿病(T2DM)大鼠主动脉晚期糖基化终产物(AGEs)含量及受体(RAGE)基因表达的影响，探讨其防治糖尿病大血管病变的机制。     

灵芝多糖对2型糖尿病大鼠胸主动脉AGEs 及其受体的影响

目的:研究灵芝多糖对2型糖尿病大鼠胸主动脉糖基化终末产物及其受体的影响,探讨灵芝多糖对糖尿病大鼠主动脉的保护机制.方法:SD大鼠经4周高脂饮食后腹腔注射链脲佐菌素(STL)30mg·㎏-1建立2型糖尿病(T2DM)模型.大鼠随机分为对照组、模型组、小檗碱阳性对照组、灵芝多糖低、中、高剂量组(200,400,800mg·㎏-1).给药治疗12周后,测定大鼠空腹血糖、血清中糖基化终末产物(AGES)含量,免疫组化法和蛋白印迹法测定胸主动脉AGES,RAGE蛋白的表达情况.结果:灵芝多糖高、中剂量组与模型组大鼠相比,血糖和血清AGES明显降低(P＜0.01).各治疗组胸主动脉AGE.和RAGE的表达量较模型组都有所下调,其中灵芝多糖高剂量组表达明显下调(P＜0.01).结论:灵芝多糖对T2DM大鼠血糖的降低和主动脉保护作用明显,其机制可能是下调AGES及RAGE的表达从而对糖尿病大鼠主动脉起到保护作用.     

阿魏酸钠对糖尿病大鼠肾脏糖基化终产物受体mRNA表达的影响

 目的探讨阿魏酸钠(sodium ferulate,SF)对糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠肾脏皮质糖基化终产物受体(receptor for advanced glcation end products,RAGE)mRNA表达的影响。方法 对链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导的DM大鼠灌胃给予SF110 mg·kg^-1·d^-1),治疗8周,测定各组大鼠肾重／体重、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、血肌酐(serum creatinine,Scr)、24h尿蛋白定量,并用RT-PCR方法检测肾脏皮质RAGE mRNA的表达,观察肾脏病理改变。结果 DM组大鼠肾重／体重,BUN,Scr,24h尿蛋白定量,肾皮质RAGE mRNA的表达显著高于正常对照组;SF组肾重／体重,BUN,24 h尿蛋白定量,肾皮质RAGE mRNA的表达显著低于DM组;DM组大鼠肾脏病理显著异常,SF可显著减轻其病理学改变。结论SF可通过抑制肾脏RAGE mRNA的表达,减轻糖基化终产物(advanced glycation end products,AGEs)-RAGE之间的相互作用对DM大鼠肾脏产生保护作用。     

补肾通络方对糖尿病周围神经病变氧化应激影响

目的:观察补肾通络方对糖尿病周围神经病变(DPN)氧化应激影响.方法:将48例DPN患者随机分为治疗组30例,对照组18例,两组均给予常规治疗+硫辛酸针,治疗组在对照组基础上配合补肾通络方治疗,疗程90 d.观察患者临床疗效及血糖、糖化血红蛋白(HbA1c)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(CHOL)、神经传导速度、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的变化.结果:治疗后总有效率治疗组83.3％,对照组为66.7％,两组比较差异显著(P＜0.05).两组治疗后空腹血糖(FBG),HbA1c,TG,CHOL较治疗前显著下降(P＜0.05);且治疗组TG,CHOL下降明显优于对照组(P＜0.05).治疗后两组运动神经传导速度(MNCV)、感觉神经传导速度(SNCV)较治疗前明显提高(P＜0.01,P＜0.05);治疗组提高明显优于对照组(P＜0.01).治疗后两组MDA较治疗前明显下降,SOD较治疗前明显提高(P ＜0.01,P＜0.05);治疗组MDA下降、SOD提高明显优于对照组(P＜0.01).结论:在对照组治疗基础上配合补肾通络方治疗DPN可以提高临床疗效,改善血脂代谢,降低氧化应激反应,提高神经传导速度.     

人参皂苷对糖基化终末产物条件下视网膜Müller细胞活力的影响

目的：探讨人参皂苷对糖基化终末产物（advanced glycation end products,AGEs）条件下视网膜Müller细胞活力的影响。方法：以改良酶消化法培养SD大鼠视网膜Müller细胞,将纯化培养的视网膜Müller细胞分别置于低剂量AGEs（终质量浓度为75 mg·L^-1）及高剂量AGEs（终质量浓度为150 mg·L^-1）下进行培养,并分别以人参皂苷Rg₁、人参皂苷Re、人参皂苷Rb₁及人参皂苷提取物干预。在干预24,48,72 h后以酶联免疫吸附法测定各组细胞外液中乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）的漏出量,以推测Müller细胞活力。结果：低AGEs组24,48 h的LDH漏出量较正常对照组均无明显差异,但72 h的LDH漏出量较正常对照组增多（P<0.05）;高AGEs组各时段LDH漏出量均较正常对照组以及低AGEs组增多（P<0.05）;人参皂苷Rg₁,Re,Rb₁及人参皂苷提取物均能减少低AGEs组48,72 h的LDH漏出量（P<0.05）,减少高AGEs组各时段的LDH漏出量（P<0.05）。结论：AGEs能明显增加视网膜Müller细胞膜的通透性,降低细胞活力,并且与干预的时间、浓度有关;人参皂苷Rg₁,Re,Rb₁及人参皂苷提取物能降低本实验中AGEs条件下Müller细胞膜的通透性、提高Müller细胞膜稳定性,增强细胞活力,尤其以人参皂苷提取物效果显著。     

葛根素对体内外晚期糖基化终末产物形成的抑制作用

目的研究葛根素对体内外晚期糖基化终末产物(AGEs)形成的影响。方法 C57BL/6小鼠采用高糖高脂饲料联合链脲佐菌素(40 mg/kg)构建糖尿病模型。造模成功后随机分为模型组,氨基胍组(100 mg/kg),葛根素低、中、高剂量(50、100、200 mg/kg)组,另设对照组。连续给药8周后,检测空腹血糖(FBG)、口服糖耐量(OGTT)、糖化血清蛋白(GSP)及血清AGEs水平。此外将不同浓度的葛根素(0.5、1.0、2.0 mmol/L)与丙酮醛和牛血清白蛋白共孵育144 h,建立体外非酶糖基化反应模型,用荧光光度法测定AGEs的荧光值,考察葛根素体外抑制AGEs生成的规律。结果葛根素能够显著降低糖尿病小鼠的FBG,改善OGTT,抑制GSP及血清AGEs的生成。葛根素在体外非酶糖基化反应体系中抑制AGEs的生成,并有一定的剂量依赖性。结论葛根素可以显著降低糖尿病小鼠的FBG,对体内外AGEs的形成具有明显的抑制作用。