当归-红花药物组合效应物质基础研究

目的研究不同配比当归-红花药物组合的物质基础与效应的相关性,探索两味中药配伍应用的变化规律。方法利用中医方剂数据库归纳分析当归-红花配伍比例,并以此设计方案,采用HPLC法分析不同配比当归-红花共煎液与单味药材煎液中阿魏酸、羟基红花黄色素A、绿原酸、香豆酸量的变化。采用凝血时间和清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基药效指标评价当归-红花配伍的药理效应。结果获得应用频率前10位的当归-红花不同配比;HPLC分析结果显示,当归配伍红花有利于有效成分的溶出;与同等生药量的单味药相比,当归配伍红花能延长凝血时间,增加DPPH自由基清除率。结论当归配伍红花具有合理性,有利于两味药材中芳香酸类成分的溶出,这与配伍后凝血时间延长、DPPH自由基清除率增加具有一定的相关性。     

黄药子配伍当归合煎液与单煎混合液主要成分的含量比较

目的:建立测定黄药子配伍当归中主要成分含量的分析方法,比较黄药子配伍当归合煎液与单煎混合液中阿魏酸和黄独乙素的含量差异.方法:采用HPLC/PDA方法,对黄药子配伍当归合煎液与单煎混合液中的上述2个主要成分进行含量测定.应用Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),0.1%乙酸水与纯色谱甲醇进行梯度洗脱,流速为0.8ml·min-1,检测波长300 nm,柱温为30℃,进样量为10μL.结果:这2个化合物在测定的范围内表现出良好的线性(r>0.9995),方法的回收率在93.7%～102.8%之间.黄药子配伍当归合煎液中阿魏酸的含量高于单煎混合液,而黄独乙素在黄药子配伍当归合煎液中的含量低于单煎混合液.结论:黄药子配伍当归合煎可提高有效成分的溶出,降低有毒成分的含量.     

HPLC法研究当归-红花单煎及共煎液中有效成分含量的变化

目的 研究和探讨当归-红花单煎及共煎液中有效成分阿魏酸和羟基红花黄色素A含量的变化,初步探索两味中药配伍应用的变化规律.方法 采用Phenomenex C18柱(4.6 mm×150 mm,5 μm),以甲醇-0.05%磷酸水溶液(pH=2.45,25:75)为流动相;流速:1.0 mL/min;柱温:30℃;进样温度:5℃;检测波长分别为320 nm、403 nm.测定追踪当归-红花共煎液与单煎液中主要有效成分阿魏酸和羟基红花黄色素A含量的变化.结果 阿魏酸回归方程为Y=3.837 2X+0.0219(r=0.999 8),在0.5～10.0μg/mL范围内线性关系良好,平均加样回收率为92.68～101.13%,RSD小于3.2%;羟基红花黄色素A回归方程为Y=1.364 7X-0.371 4(r=0.999 9),在5.0～100.0 μg/mL范围内线性关系良好,平均加样回收率为100.17～102.97%,RSD小于2.8%;当归红花共煎液中阿魏酸含量比当归单煎液中平均升高142.64%,羟基红花黄色素A含量比红花单煎液中平均升高145.37%.结论 当归-红花共煎液中阿魏酸和羟基红花黄色素A的含量高于各单煎液中含量,两者配伍具有一定的合理性.该法快速、简便、准确,可为评价提取物中阿魏酸和羟基红花黄色素A的质量提供依据.     

金银花-连翘配伍比例对有效成分溶出和大鼠体内药动学的影响

目的:比较金银花-连翘药对配伍前后及不同配伍比例煎出液中绿原酸、连翘苷、连翘酯苷A的溶出量,考察配伍比例对绿原酸在大鼠体内药动学行为的影响.方法:采用HPLC测定金银花-连翘单煎、共煎提取物中绿原酸、连翘苷、连翘酯苷A的含量;分别给予大鼠灌胃金银花-连翘1∶1,1∶2共煎提取物(剂量为绿原酸60 mg· kg-),测定血浆中绿原酸浓度,用DAS软件根据非房室模型法计算药动学参数.结果:绿原酸和连翘苷在共煎提取物中含量高于单煎提取物,而连翘酯苷A在药对中煎出量低于连翘单煎液.金银花-连翘(1∶1,1∶2)共煎提取物的药时曲线下面积(AUC0-t)分别为0.95,1.19 mg·h.L-1,Cmax分别为0.18,0.26 mg·L-1,药动学行为无显著差异.结论:金银花-连翘配伍有助于绿原酸和连翘苷的溶出,但连翘酯苷A的溶出量减少.不同配伍比例的金银花-连翘提取物按相同绿原酸剂量给药,绿原酸在大鼠体内的药动学参数无明显差异.     

蒲黄-五灵脂配伍前后效应成分变化及其抗血小板聚集和抗凝血酶活性评价

为了探讨蒲黄-五灵脂药对配伍的科学性与合理性,对蒲黄-五灵脂配伍前后效应成分的溶出变化进行分析,并进一步评价其与抗血小板聚集和抗凝血酶活性的相关性。采用超高效液相色谱飞行时间串联质谱仪(UPLC-QTOF-MS-Markerlynx)联用技术分析蒲黄-五灵脂配伍前后效应成分群的溶出变化;采用体外实验评价蒲黄-五灵脂配伍前后对ADP诱导的家兔血小板聚集及抗凝血酶活性。结果表明,蒲黄-五灵脂分煎混合液与配伍合煎液总离子流色谱峰存在明显不同,鉴定出5个相对含量具有显著差异的化合物,分别为香蒲新苷、柚皮素、异鼠李素-3-O-芸香糖苷、槲皮素-3-O-新橙皮糖苷、山柰酚-3-O-新橙皮糖苷。活性评价结果表明,蒲黄-五灵脂合煎液抗血小板聚集和延长凝血酶时间活性优于蒲黄、五灵脂单煎液活性。研究结果为蒲黄-五灵脂两药配伍后效应物质基础及效应机制的阐明提供了一定的科学依据。     

四物汤类方与组方药材及其所含主要芳香酸体外抗氧化活性比较与量效关系研究

目的对四物汤类方与组方药材及其所含主要芳香酸体外抗氧化活性进行评价与比较。方法采用2,2-二苯基-1-苦肼基(DPPH)自由基清除率法测定四物汤及相关方剂(桃红四物汤、香附四物汤、少腹逐瘀汤及芎汤)与16种组方药味及其所含主要芳香酸的抗氧化活性。结果所选5个方剂都具有明显的清除自由基活性,四物汤清除自由基活性最强,芎汤最弱;16味组方药材中,赤芍、白芍、红花、川芎、木香活性最强,桃仁活性最弱;芳香酸中没食子酸、原儿茶酸、香草酸、咖啡酸、绿原酸、对香豆酸和阿魏酸具有明显的清除自由基能力,且表现出明显的量效关系,对羟基苯甲酸、苯甲酸、肉桂酸无明显清除自由基活性(P>0.05)。结论四物汤及相关方剂中芳香酸类成分对其抗氧化活性具有一定贡献。     

基于绿原酸、阿魏酸、肉桂酸和哈巴俄苷提取率的四妙勇安汤拆方分析

目的：研究四妙勇安汤不同配伍组合对绿原酸、阿魏酸、肉桂酸和哈巴俄苷提取率的影响。方法：将四妙勇安汤拆方后,采用高效液相色谱法,SunFireTM C₁₈色谱柱（4.6mm×150mm,5μm）,以乙腈（A）-0.1%磷酸水溶液（B）为流动相,流速1.0mL·min^-1,柱温35℃,测定绿原酸、阿魏酸、肉桂酸和哈巴俄苷的含量并分别计算其提取率。结果：测定了原方及拆方后共14组样品中绿原酸、阿魏酸、肉桂酸和哈巴俄苷的含量并计算相应提取率,其回归方程分别为Y=2945611.51X-77211.93（r=0.9996）,Y=5266108.02X-2733.36（r=0.9996）,Y=8599526.24X-11646.29（r=0.9996）和Y=2822342.06X-1685.64（r=0.9998）,线性范围分别为0.237-1.422,0.00976-0.05856,0.01568-0.09408和0.00727-0.0436μg,平均加样回收率分别为99.39%（RSD=1.76%）,102.59%（RSD=2.55%）,103.60%（RSD=1.07%）和99.32%（RSD=2.93%）。结论：与单味金银花、当归相比,拆方组绿原酸和阿魏酸的提取率均有明显降低,而其全方配伍后的提取率仅低于单味药单煎时提取率;玄参中肉桂酸和哈巴俄苷在全方配伍后提取率最高。本研究有助于揭示四妙勇安汤单味药配伍过程中化学组分变化及配伍作用机制。     

LC-MS法结合化学计量学法探讨发酵时间对六神曲中化学成分的影响

目的 采用LC-MS法结合化学计量学分析法探究不同发酵时间六神曲中葫芦巴碱、没食子酸、原儿茶酸、原儿茶醛、隐绿原酸、苦杏仁苷、香草酸、咖啡酸、芦丁、金丝桃苷、东莨菪内酯、阿魏酸、紫云英苷、槲皮素、槲皮苷、异绿原酸B、木犀草素、芹菜素的含量，并筛选差异性标志物。方法 该药物的分析采用Hypersil GOLD C₁₈色谱柱(100 mm×2.1 mm, 1.9μm);流动相乙腈-0.1%甲酸，梯度洗脱；体积流量0.3 mL/min;柱温30℃。采用主成分分析(PCA)对六神曲进行分类和评价，再借助正交偏最小二乘-判别分析(OPLS-DA)法筛选出差异性标志物，并通过聚类热图进行区分。结果 发酵过程中，葫芦巴碱、原儿茶醛、苦杏仁苷、芦丁、金丝桃苷、东莨菪内酯、紫云英苷质量分数呈下降趋势，没食子酸、原儿茶酸、香草酸、木犀草素、芹菜素质量分数呈上升趋势，隐绿原酸、咖啡酸、阿魏酸、槲皮素、槲皮苷、异绿原酸B质量分数存在波动；PCA结果显示，不同发酵时间六神曲可聚类为4个发酵阶段；OPLS-DA结果表明，原儿茶酸、苦杏仁苷、金丝桃苷、东莨菪内酯、阿魏酸、异绿原酸B为差异性标志...     

赤芍-牡丹皮药对配伍药效物质基础研究

目的:对赤芍-牡丹皮药对配伍药效基础物质进行研究。方法:应用HPLC技术对药对共煎物及单味药材水煎物进行了分析。结果:芍药苷在共煎物中的含量比赤芍单味药水煎物提高了5.3倍,丹皮酚在共煎物中的含量与牡丹皮单味药水煎物无明显差别。结论:赤芍-牡丹皮药对配伍的物质基础可能为芍药苷含量的增加。     

不同配伍比例对麻黄-杏仁药对有效成分含量的影响

目的 探讨药对麻黄-杏仁不同比例配伍对水煎液中有效成分含量的影响.方法 采用HPLC分别测定麻黄与杏仁不同比例配伍的水煎液中苦杏仁苷、盐酸去甲基麻黄碱(NME)、盐酸去甲基伪麻黄碱(NMP)、盐酸麻黄碱(E)、盐酸伪麻黄碱(PE)、盐酸甲基麻黄碱(ME)的煎出量.结果 不同比例的麻黄-杏仁配伍后对水煎液中有效成分含量的影响具有显著性差异(P＜0.05).结论 药对麻黄-杏仁配伍后可以显著增加有效成分苦杏仁苷的含量,与麻黄单煎液相比,苦杏仁的加入则会降低麻黄生物碱的煎出量.     

当归标准汤剂质量评价体系的建立

目的:建立当归标准汤剂的质量控制方法,为其他中药饮片标准汤剂的质量评价提供参考。方法:收集代表性当归饮片,制备当归标准汤剂;测定阿魏酸含量,建立指纹图谱并采用UPLC-Q-TOF/MS对主要色谱峰进行结构确认,明确汤剂中的主要化学成分;计算出膏率、指标成分转移率,评价工艺的稳定性。结果:当归标准汤剂中阿魏酸平均质量分数0.077%;与对照指纹图谱相比,指纹图谱相似度均0.9;当归标准汤剂对照指纹图谱主要共有峰有11个,包括有机酸类、挥发油类、核苷类等;当归标准汤剂平均出膏率51%,阿魏酸平均转移率78.5%。结论:建立的质量评价方法可用于系统评价当归标准汤剂,为当归水煎剂相关制剂的质量控制制定提供参考。     

半归-菟丝子干预肾虚血瘀型多囊卵巢综合征网络药理学作用机制

目的:运用网络药理学方法和技术,研究"当归-菟丝子"药对治疗多囊卵巢综合征(PCOS)的主要活性成分、靶点、通路等药理学作用机制。方法:通过数据挖掘获得PCOS肾虚血瘀型核心药对当归-菟丝子;检索中药系统药理学分析平台(TCMSP)筛选出当归和菟丝子的活性成分和潜在靶点;查询NCBI数据库获得PCOS疾病靶点,找到药物和疾病的共靶点;通过David数据库和Omicshare数据库对共靶点进行基因功能GO富集分析和KEGG富集分析;采用Cytoscape软件构建成分-靶标-通路网络。结果:从"当归-菟丝子"药对中筛选得到42个候选活性分子,作用于719个靶点,其中与PCOS重合的22个疾病靶点主要涉及炎性反应、细胞因子、雌激素、胰岛素抵抗等生物学过程中的多条信号通路。结论:当归-菟丝子药对治疗PCOS是通过补肾活血化瘀达到抗炎、抗肿瘤、调节血脂、促进微循环及改善胰岛素抵抗,通过多成分、多靶点、多途径之间的协同作用来恢复机体的平衡,与现代治疗PCOS的作用机制相符合。     

补肾调冲法诱发排卵的临床研究

目的：观察补肾调冲法对治疗功能性无排卵患者的保排卵作用。方法：将60例无排卵患者随机分成2组各30例。治疗组根据补肾调冲法则，以自拟补肾益冲汤（熟地黄、当归、白芍、山茱萸、黄精、紫河车粉、鹿角胶、续断、菟丝子、巴戟天、淫羊霍、香附）和活血调冲汤（当归、川芎、红花、桃仁、皂角刺、泽兰、赤芍、牡丹皮、穿山甲、党参、菟丝子、枸杞子、黄芪）按月经不同阶段治疗；对照组以克罗米芬、己烯雌酚、安宫黄体酮治疗。疗程均为6个月经周期。B超观察排卵情况、血雌二醇（E2）、孕酮（P）及主卵泡增长等指标。结果：2组患者E2和P水平显著提高，主卵泡直径明显增大，治疗前后比较，差异有显著性意义（P＜0．01）；2组治疗后比较，差异无显著性意义（P＞0．05）。治疗组180个周期，出现排卵90个周期，痊愈率达76．7％；对照组180个周期，出现排卵92个周期，痊愈率达83．3％。2组总和效率比较，差异无显著性意义（P＜0．05）。结论：补肾调冲法具有较好的促进E2和P正常分泌、使主卵泡直径增大和诱发排卵的作用。     

正交试验法研究补阳还五汤中保护OGD损伤PC12细胞的主要药味

目的:研究补阳还五汤中保护缺氧缺糖(oxygen-glucose deprivation,OGD)损伤PC12细胞的主要药味。方法:将补阳还五汤中7种单味药(黄芪、赤芍、当归尾、地龙、川芎、桃仁、红花)作为实验因素,每个因素选取有或无2个水平,按L8(27)正交试验表设计8种拆方。普通级新西兰兔分为9组,空白血清组和8个拆方含药血清组,分别ig蒸馏水和临床等效剂量5倍的拆方药液,24 h内连续ig 3次后,提取血清。运用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)和微量酶标法,以细胞活力和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放量为指标,观察10%补阳还五汤及其拆方含药血清对OGD损伤18h的PC12细胞的影响。结果:PC12细胞OGD损伤后,其LDH释放量增加(P<0.01),补阳还五汤能显著抑制OGD损伤PC12细胞的LDH释放量(P<0.01)。正交试验结果显示,含黄芪、当归尾、赤芍的拆方组其细胞活力显著增加(P<0.01),LDH释放量显著降低(P<0.01);而含桃仁的拆方组其细胞活力显著下降(P<0.01),含地龙的拆方组其LDH释放量显著升高(P<0.01);红花、川芎对细胞活力及LDH释放量的作用不明显。结论:补阳还五汤对OGD损伤PC12细胞具有保护作用,其中黄芪、当归尾、赤芍是保护OGD损伤PC12细胞的主要药味,桃仁、地龙可加重PC12细胞OGD损伤,红花、川芎对细胞的作用不明显。     

当归饮片及其煎剂HPLC指纹图谱的相关性研究

目的 研究当归饮片及其煎剂指纹图谱的相关性.方法 采用HPLC法分析指纹图谱.结果 传统煎煮法制备的当归煎剂基本能检出当归的大部分特征峰,但不同特征峰的提取率差异较大.结论 本研究为当归、当归煎剂、含当归复方煎剂的指纹图谱研究提供了一定参考.     

不同炮制方式对当归中有效成分含量的影响

目的：考察不同炮制方式对当归中有效成分含量的影响。方法：采用水蒸气蒸馏法测定挥发油含量;利用HPLC测定阿魏酸含量,流动相甲醇-1%乙酸水溶液（45：55）,检测波长321 nm;通过磷钼钨酸-干酪素比色法测定总鞣质含量。结果：当归经炮制后,挥发油和阿魏酸含量均有不同程度的降低,顺序为生当归（0.683%,0.075%）>酒炙当归（0.590%,0.068%）>土炒当归（0.397%,0.024%）>当归炭（0.125%,0.012%）;酒炙当归中总鞣质含量低于生当归,而其他炮制品中总鞣质含量明显高于生当归,排序为当归炭（0.702%）>土炒当归（0.491%）>生当归（0.352%）>酒炙当归（0.339%）。结论：不同炮制方式对当归中有效成分含量存在一定影响。     

臭氧与硫熏处理后当归品质变化情况的比较

目的:比较臭氧处理及硫熏处理后当归品质的变化情况,为臭氧处理作为硫熏处理替代技术的可行性分析提供参考。方法:采用间歇臭氧处理及硫磺熏蒸的方法分别处理当归药材,通过RP-HPLC测定当归中阿魏酸含量,流动相乙腈-0.085%磷酸水溶液(17∶83),检测波长316 nm;采用水蒸气蒸馏法提取当归挥发油,通过GC-MS检测当归挥发油中化学成分;以微生物含量为指标,评价不同处理方式对当归储藏周期的影响。结果:臭氧处理及硫熏处理都会影响当归中阿魏酸的含量,较未处理当归样品中的质量分数分别降低了23.72%和34.43%;臭氧处理及硫熏处理当归后会导致挥发油颜色发生变化,且挥发油体积较未处理的样品分别降低了53.85%和76.92%,挥发油化学成分数量和种类均发生了较大的变化,主成分蒿本内酯分别降低了10.65%和9.32%;经储藏周期试验发现,臭氧处理后当归中的微生物含量较硫熏处理后的样品少。结论:当归经臭氧处理后化学成分变化程度较硫熏处理小,有望成为当归硫熏处理的替代技术。     

当归肉桂配伍后阿魏酸生物利用度的研究

目的:研究温里药肉桂与活血药当归配伍后,对当归效应成分阿魏酸生物利用度的影响,探讨活血温里复方的药物配伍机制。方法:将肉桂与当归配伍后灌胃小鼠,采用RP-HPLC测定小鼠血浆中阿魏酸的血药浓度,以单用当归为对照,计算复方中阿魏酸的相对生物利用度。结果:阿魏酸在小鼠体内的药代学过程符合一室模型,肉桂与当归配伍后,当归肉桂复方中阿魏酸的平均相对生物利用度为226.75%。肉桂复方与单药当归的Cmax,AUC0~∞存在差异,而tmax无差异。结论:温里药肉桂与活血药当归配伍,能提高当归主要效应成分阿魏酸的生物利用度,从复方效应成分生物利用度的角度揭示了活血温里复方配伍的科学内涵。     

不同产地当归中阿魏酸、藁本内酯及总多糖含量比较

目的通过测定不同产地当归中阿魏酸、藁本内酯和总多糖的含量,探讨产地对当归药材质量的影响及当归道地性的科学依据。方法采用高效液相色谱法和比色法,测定甘肃、云南、四川、陕西等地所产当归中阿魏酸、藁本内酯和总多糖的含量。结果在4个产地的当归中,阿魏酸、藁本内酯和总多糖的含量均以甘肃产当归为最高。结论甘肃产当归质量较好,甘肃当归的道地性是有科学依据的。