姜黄素对实验性肝纤维化大鼠肝组织中NF-κB及ERK-1 mRNA表达的影响

目的：探讨核转录因子-κB（NF-κB）及细胞外信号调节激酶（ERK）mRNA在CCL致实验性肝纤维化大鼠肝组织中的表达及姜黄素（curcumin．CUR）对它们的影响。方法：建立CCh致大鼠实验性肝纤维化模型，用免疫组化法比较正常组、模型组以及CUR组的Ot平滑肌肌动蛋白（α—SMA）表达，用RT—PCR法比较各组肝组织NF—κB以及ERK-1mRNA的表达。结果：模型组大鼠ERK—1及NF—KBmRNA的表达均增高，而CUR组α平滑肌肌动蛋白则较模型组低，NF—κB及ERK－1mRNA的表达也降低。结论：CUR可能通过抑制α—SMA的表达，减弱NF—κB诱导的肝星状细胞的活化以及抑制ERK－1的促肝星状细胞增殖．从而产生抗四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化的作用。     

活血注射液对ox-LDL诱导人脐静脉内皮细胞活化的影响

目的：观察活血注射液对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC) 的细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)的表达及与人单核细胞黏附作用的影响，并探讨核转录因子kappa B(NF-κB) 在其中的调控作用。方法：HUVEC与单核细胞的黏附率用蛋白定量法检测；ICAM-1，VCAM-1 mRNA和蛋白表达分别用RT-PCR技术和流式细胞仪检测；NF-κB p65的阳性细胞百分率和细胞核/浆染色的灰度比值用免疫细胞化学法测定。结果：ox-LDL作用HUVEC后12,24 h时，人单核细胞与HUVEC的黏附率显著升高, HUVEC中ICAM-1和VCAM-1的mRNA和蛋白表达水平也均明显升高, HUVEC的NF-κB p65的阳性细胞百分率和细胞核/浆染色的灰度比值明显增高，明显高于正常组(P<0.05，P<0.01)，而活血注射液可明显降低人单核细胞与HUVEC的黏附率和HUVEC ICAM-1，VCAM-1 mRNA和蛋白表达水平，以及显著降低HUVEC中NF-κB p65的阳性细胞百分率和细胞核/浆染色的灰度比值，与ox-LDL组相比均有显著性差异(P<0.05，P<0.01)，这种作用随着剂量的增加而增强。结论：活血注射液能通过下调内皮细胞表面ICAM-1，VCAM-1 mRNA和蛋白表达抑制单核-血管内皮细胞黏附,其可能机制是其通过抑制内皮细胞NF-κB p65的活性，从而发挥对血管内皮细胞的保护作用。     

草木犀正丁醇提取物对NF-κB和血红素氧合酶1表达的影响

目的:探讨草木犀的正丁醇提取物在炎症中的作用。方法:通过LPS干预RAW264.7细胞系建立炎症细胞模型,免疫细胞化学法检验NF-κB的表达及分布变化,实时荧光定量RT-PCR法检测血红素氧合酶1(HO-1)的基因表达,Western blot法测定HO-1的蛋白表达量。结果:免疫细胞化学法结果显示药物干预时胞质被染为棕色,NF-κB多分布在胞质未被激活;仅有LPS干预时,胞核被染为棕色,NF-κB集中分布在细胞核表达增强。药物提取物干预后HO-1的mRNA表达水平明显升高,且呈剂量依赖型关系;Western blot结果显示药物干预后HO-1的蛋白表达水平也明显升高。结论:草木犀的正丁醇提取物通过抑制NF-κB的激活,同时促进HO-1的释放而发挥一定的抗炎作用。     

姜黄素对感染性早产小鼠胎盘核转录因子-kappa B和基质金属蛋白酶-9 mRNA表达的影响

目的观察感染性早产小鼠胎盘核转录因子-kappa B p65(NF-κB p65)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA表达以及姜黄素的干预影响,探讨未来预防感染性早产的新措施。方法建立感染性早产小鼠模型,利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测姜黄素干预后各组小鼠胎盘NF-κB p65和MMP-9 mRNA表达的变化。结果CUR组的早产率明显降低,与LPS组相比有显著性差异(P=0.041)。LPS组与NS组相比,NF-κB p65和MMP-9 mRNA两者表达均显著升高(P均<0.05);CUR组和LPS组相比,两者表达均有显著性差异(P均<0.05)。结论姜黄素对感染性早产有防治作用,并且能降低早产小鼠胎盘NF-κB p65和MMP-9 mRNA的表达。     

参麦对“失血加内毒素”大鼠肝脏IKB和TIMP 1 mRNA的影响

目的观察参麦的抗休克效果,探讨其作用机制.方法大鼠随机分为实验对照组(control),双击组(HS+LPS),参麦注射液组(HS+LPS+SM).测定血清中NO含量,NOS活性以及肝脏IκB及TIMP 1 mRNA的表达.结果HS+LPS+SM组NOS活性,NO2/NO3含量显著低于LPS组(P＜0.05),HS+LPS+SM组IκB及TIMP1 mRNA表达明显增加.结论参麦可能是通过影响NOS活性降低NO的含量,并上调肝脏组织中IκB和TIMP 1 mRNA的表达,减轻内毒素引起的机体损伤.     

参麦对"失血加内毒素"大鼠肝脏IκB和TIMP1mRNA的影响

目的观察参麦的抗休克效果,探讨其作用机制.方法大鼠随机分为实验对照组(control),双击组(HS+LPS),参麦注射液组(HS+LPS+SM).测定血清中NO含量,NOS活性以及肝脏IκB及TIMP 1 mRNA的表达.结果HS+LPS+SM组NOS活性,NO2/NO3含量显著低于LPS组(P＜0.05),HS+LPS+SM组IκB及TIMP1 mRNA表达明显增加.结论参麦可能是通过影响NOS活性降低NO的含量,并上调肝脏组织中IκB和TIMP 1 mRNA的表达,减轻内毒素引起的机体损伤.     

薏苡仁提取物对肠癌细胞HCT116的抑制作用及Akt/NFκB/STAT_3通路的影响

目的:探讨薏苡仁提取物对肠癌细胞的抑制作用及作用机制。方法:通过CCK8细胞增殖实验检测薏苡仁提取物对HCT116细胞增殖的影响;通过Transwell细胞迁移实验检测薏苡仁提取物对HCT116细胞迁移能力的影响;通过实时荧光定量RT-PCR和Western blot检测Akt、p AKt和NFκB基因和蛋白表达。结果:薏苡仁提取物可以抑制肠癌细胞HCT116的增殖及迁移运动,其作用后Akt、p Akt和NFκB(p50)蛋白表达下调,AKT1和STAT3mRNA表达下调(P0.05)。结论:薏苡仁提取物通过抑制Akt/NFκB/STAT3通路而发挥抑制肠癌细胞增殖的作用。     

核因子кB对支气管哮喘大鼠淋巴细胞增殖和凋亡的调节作用及雷公藤甲素对其影响

目的 探讨核因子κB(NF—κB)是否参与支气管哮喘淋巴细胞增殖和凋亡的调节过程以及雷公藤甲素对哮喘淋巴细胞增殖和凋亡的调控作用是否通过NF—κB发挥。方法 分别给予哮喘大鼠模型NF—κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)和免疫抑制剂地塞米松及雷公藤甲素干预,进行病理检查、气道反应性测定,采用免疫荧光法检测肺组织和脾淋巴细胞NF—κB P65的表达,免疫组织化学法测定脾淋巴细胞增殖细胞核抗原(PCNA)、流式细胞术检测脾淋巴细胞凋亡,电泳迁移率改变试验测定NF—κB活性。结果 哮喘气道及脾淋巴细胞NF—κB的核表达量和活性均明显高于正常对照(均P<0.05);哮喘脾淋巴细胞的增殖率明显高于正常对照(P<0．05)。而凋亡率明显低于正常对照(P<0．05);NF—κB抑制剂PDTC的应用可使哮喘异常上调的NF-κB核表达量及活性下降,脾淋巴细胞增殖减少、凋亡增多：且NF—κB活性与脾淋巴细胞的增殖率呈显著正相关(r=0．89,P<0．05),而与其凋亡率呈显著负相关(r=0．54,P<0．05)。在体应用雷公藤甲素后,哮喘气道及脾淋巴细胞NF—KB的核表达量及活性、脾淋巴细胞的增殖率均明显下降(均P<0．05),而凋亡率明显增加(P<0．05),同时气道炎性细胞的浸润及气道高反应性亦明显减轻(均P<0．05),且气道嗜酸粒细胞的数量及气道的反应性与NF—κB活性呈显著正相关(r分别为0．79和0．68,P<0．05);雷公藤甲素的作用与地塞米松差异无显著性(P>0．05)。结论 (1)NF—KB通过促进淋巴细胞增殖并抑制其凋亡而参与哮喘炎症反应及气道高反应性的形成;(2)雷公藤甲素通过抑制NF—κB进而抑制淋巴细胞增殖,从而发挥抗哮喘气道炎症的作用,它抑制NF—κB的分子机制是否与糖皮质激素类似有待进一步研究。     

丹皮酚通过抑制PI3K/AKT-NF-κB通路对LPS诱导的与平滑肌细胞共培养的大鼠血管内皮细胞的保护作用

该研究为观察丹皮酚(Pae)对脂多糖(LPS)诱导的与平滑肌细胞(SMC)共培养内皮细胞(VEC)的保护作用以及对磷脂酰肌醇3激酶(phosphoinositide-3-kinase,PI3K)/丝/苏氨酸激酶(ser-ine threonine kinase,AKT)/核因子κB(nucler factorkappa B,NF-κB)信号通路的影响。采用组织块预消化贴壁法原代培养大鼠血管内皮细胞和大鼠血管平滑肌细胞;用Transwell小室建立VEC-SMC共培养模型;LPS(100μg·L~(-1),7 h)诱导VEC损伤;MTT法检测VEC活性;LDH试剂盒检测细胞通透性;Western blot法检测Pae(15,30,60μmol·L~(-1),24 h)对LPS诱导损伤的共培养VEC的PI3K/AKT及NF-κB信号通路的表达;Western blot法检测VEC的细胞核p-P65表达的影响。研究证实不同浓度的Pae可显著性抑制LPS诱导的VEC损伤,提高细胞活性;并且Pae能够明显下调LPS诱导的PI3K,p-PI3K,AKT,p-AKT的表达;下调NF-κB的表达水平并降低P65蛋白的生物活性,下调p-P65蛋白的表达;下调P65的转移入核。Pae对LPS损伤的VEC有保护作用,可能通过抑制PI3K/AKT及NF-κB信号通路相关信号蛋白的表达。     

海带多糖L01对人脐静脉内皮细胞表达和分泌PAI-1的影响

目的探讨海带多糖L01对肾上腺素刺激人脐静脉内皮细胞(HUVEC)表达和分泌I型纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞系ECV-304,于培养基中加入肾上腺素和不同浓度的L01,分别培养24,48,72h,酶联免疫吸附分析(ELISA)法测定HUVEC培养上清液中的PAI-1水平;逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测HUVEC内PAI-1mRNA的表达,其扩增产物电泳后进行密度扫描及半定量分析。结果10μg/mL的肾上腺素可致48h和72h的HUVEC培养液中PAI-1水平显著升高(P<0.01,P<0.05),HUVEC内PAI-1mRNA表达上调。与肾上腺素组相比,不同浓度的L01于给药后48h和72h,均能显著降低培养液中PAI-1水平(P<0.01),减少HUVEC内PAI-1mRNA表达。结论L01可拮抗肾上腺素刺激HUVEC所致PAI-1分泌增加及其mRNA表达增加,提示其对血管内皮细胞具有一定的保护作用。     

In vivo and in vitro inhibitory effects of a traditional Chinese formulation on LPS-stimulated leukocyte-endothelial cell adhesion and VCAM-1 gene expression

Aim of the study

A traditional Chinese formulation Huang-Lian-Jie-Du-Tang (HLJDT) exerts anti-inflammatory effects. The present study aimed to investigate the effect of HLJDT on the LPS-stimulated leukocyte–endothelial cell adhesion and VCAM-1 gene expression both in vivo and in vitro.

Materials and methods

HLJDT was extracted from rhizoma coptidis, radix scutellariae, cortex phellodendri and fructus gardeniae in a weight rario of 1:1:1:1. In vivo leukocyte–endothelial cell adhesion was observed in rat lung after LPS stimulation (5 mg/kg, i.p.) with or without HLJDT (350 or 700 mg/kg, i.g.) pretreatment. The protein expression of vascular cell adhesion molecule 1 (VCAM-1) was analyzed by immunohistochemical method. In vitro leukocyte–endothelial cell adhesion was performed by examining the adhesion of THP-1 cells to LPS-stimulated human vascular endothelial cells with or without HLJDT pretreatment. The VCAM-1 expression at the RNA and protein levels was investigated by RT-PCR and western blot analysis, respectively. The activation of NF-κB was examined by the nuclear translocation of NF-κB by immunocytochemical method.

Results

In vivo, HLJDT dose-dependently reduced the number of leukocytes adhered to endothelium and VCAM-1 protein expression in lung venules of LPS-challenged rats. In vitro, HLJDT dose-dependently decreased the number of THP-1 cells adhered to LPS-stimulated endothelial cells and the expression of VCAM-1 both at the RNA and protein levels. The LPS-induced nuclear translocation of NF-kappa B in endothelial cells was also dose-dependently inhibited by HLJDT.

Conclusions

The present study demonstrated an additional mechanism underlying the anti-inflmmatory effect of HLJDT by inhibiting the leukocyte–endothelial cell adhesion and VCAM-1 gene expression. The inhibition of NF-kappa B activation by HLJDT might suggest a profound anti-inflammatory consequences.     

丹参注射液抑制H2 O2诱导的平滑肌细胞增殖的作用机制

目的 :观察丹参对H2 O2 诱导的离体大鼠主动脉平滑肌细胞 (VSMC)、增殖细胞核抗原 (PCNA)、核转录因子 (NF κB)蛋白表达和细胞增殖周期时相的影响 ,以探讨其可能的作用机制。方法 :以H2 O2 作为外源性活性氧(ROS)刺激VSMC增殖 ,用免疫细胞化学法检测培养的VSMC中PCNA和NF κB的表达 ,同时用流式细胞术测定细胞周期。结果 :H2 O2 可使VSMC胞核内PCNA和NF κB蛋白表达呈强阳性 ,并明显增加S期细胞百分比 (与对照组相比 ,P <0 0 5或P <0 0 1) ,加入丹参干预后 ,PCNA和NF κB蛋白表达明显受抑制 ,G0 /G1期细胞百分比升高 ,S期细胞百分比下降。结论 :抑制PCNA和NF κB蛋白表达 ,阻止细胞进入有丝分裂期可能是丹参抑制H2 O2 诱导的VSMC增殖的重要机制之一。     

银杏叶提取物抑制轻度修饰低密度脂蛋白诱导的血管内皮细胞与单核细胞粘附的

目的：观察银杏叶提取物（EGb）对轻度修饰低密度脂蛋白（MM-LDL）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）与人类单核细胞系U937粘附功能的影响。方法：利用计数法观察HUVEC与U937细胞的粘附率;用ELISA方法检测MM-LDL作用后HUVEC膜表面粘附分子血管细胞附分子-1（VCAM-1）、细胞间粘附分子-1（ICAM-1）及P选择素（P-selectin）的表达。结果：MM-LDL（75ug/ml）作用HUVEC 4h后,其对U937细胞粘附明显增加（P<0.01）,HUVEC膜表面未见VCAM-1、ICAM-1、及P-selectin表达上调,作为阳性对照重组肿瘤坏因子a(rTNFa）5.0ng/ml可显著诱导以上3种粘附分子表达。中药EGb剂量依赖性地抑制MM-LDL诱导HUVEC与U937细胞粘附。结论：EGb能保护HUVEC,减少 MM-LDL对其活化,可能有利于延缓动脉粥样硬化（AS）早期进展。MM-LDL诱导的HUVEC与U937粘附不是通过ICAM-1,VCAM-1及P-selectin介导的。     

大蒜精油抑制白细胞介素—1α诱导的单核细胞—内皮细胞粘？…

目的：观察大蒜精油（ＥＧＯ）对白细胞介素－１α（ＩＬ－１α）诱导的人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）上血管细胞粘附分子－１（ＶＣＡＭ－１）表达及单核细胞粘附率的影响。     

三七总皂苷对氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞的细胞间黏附分子-1的影响

目的 研究三七总皂苷对氧化型低密度脂蛋白(ox LDL )损伤血管内皮细胞的保护作用,以探讨其治疗动脉硬化闭塞症 (ASO)的机制。方法 以培养原代人脐静脉内皮细胞（HUVEC）作为靶细胞, 用ox LDL造成HUVEC损伤模型,以三七总皂苷进行干预。光镜下观察细胞形态变化,MTT法检测细胞活性;采用蛋白定量法检测HUVEC与单核细胞的黏附率;用流式细胞仪测定HUVEC的细胞间黏附分子-1（ICAM-1）的蛋白表达。结果 ox-LDL作用HUVEC后12、24 h时,HUVEC损伤明显,细胞活性显著降低,人单核细胞与HUVEC的黏附率显著升高, HUVEC的ICAM 1的蛋白表达水平也明显升高, 均明显高于正常对照组(P＜0.05,P＜0.01),而三七总皂苷能使ox-LDL损伤的HUVEC形态趋于正常,活性增强,并明显降低人单核细胞与HUVEC的黏附率,显著降低ICAM-1蛋白的表达水平,与ox-LDL组比较差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01),这种作用随着剂量的增加而增强。结论 三七总皂苷能通过下调内皮细胞表面黏附分子的表达抑制单核－血管内皮细胞黏附,从而发挥对血管内皮细胞的保护作用,这可能是其治疗ASO的机制之一。     

扶正抑瘤颗粒对乳腺癌核转录因子-kB及细胞周期的影响

目的：研究扶正抑瘤颗粒(FYK)对乳腺癌肿瘤组织核转录因子-κB(NF-κB)和细胞周期的影响及其临床意义。方法：55例乳腺癌患者，随机分为治疗组和对照组，两组均用常规化疗，治疗组同时口服FYK，1个月后取肿瘤组织用流式细胞仪检测NF-κB的表达情况及肿瘤细胞周期各时相的比例。结果：治疗组与对照组比较，NF-κB的表达明显提高(P＜0．01)；G0／1期细胞比例明显升高(P＜0．01)，S期细胞比例及细胞增殖指数(P1)明显下降(P＜0．01)。结论：FYK可提高乳腺癌组织NF-κB表达水平；能升高G0／1期细胞比例，降低S期细胞比例及PI值，对乳腺癌患者的预后起积极作用。     

Protocatechuic Aldehyde Inhibits Lipopolysaccharide‐induced Human Umbilical Vein Endothelial Cell Apoptosis via Regulation of Caspase‐3

Apoptosis of vascular endothelial cells results in the loss of endothelial integrity, and is a risk factor of atherosclerosis (AS). Lipopolysaccharide (LPS) stimulates inflammation during AS. The current study examined the effect of a potent water‐soluble antioxidant, protocatechuic aldehyde (PCA; derived from the Chinese herb Salvia miltiorrhiza) on apoptosis in human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) stimulated with LPS. The LPS (15 µg/ml) stimulation for 30 h resulted in significant HUVEC apoptosis, as detected by Hoechst 33258 staining and Annexin V analysis. The PCA (0.25–1.0 mmol/L, 12 h) inhibited LPS‐induced HUVEC apoptosis in a dose‐dependent manner. Lipopolysaccharide induced caspase‐3 activation, but had no significant effect on caspase‐2, Bcl‐2/Bax, cytochrome c, caspase‐9 and granzyme B expression. Protocatechuic aldehyde (0.25–1.0 mmol/L) significantly inhibited caspase‐3 activation in a dose‐dependent manner. A specific caspase‐3 inhibitor also protected against LPS‐induced apoptosis; however, no cooperative effect of PCA and the inhibitor was observed in this study. Collectively, these results indicate that PCA inhibits LPS‐induced apoptosis in HUVECs through a mechanism that involves caspase‐3. Copyright © 2012 John Wiley & Sons, Ltd.     

左旋四氢巴马汀对脂多糖诱导人脐静脉内皮细胞黏附分子表达的影响

目的:观察左旋四氢巴马汀(l-THP)对脂多糖(lipopolysaccharides, LPS)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和E选择素(E-selectin)表达的影响,探讨l-THP的抗炎作用.方法:分离纯化人脐静脉内皮细胞,与LPS或LPS加不同浓度l-THP共育,用流式细胞仪检测细胞表面黏附分子表达的变化. 结果: l-THP (250 mg·L-1)显著降低LPS诱导的ICAM-1和E-selectin表达(P<0. 05).l-THP(50 mg·L-1)抑制E-selectin表达(P<0. 05), 然而对ICAM-1的表达无明显影响(P>0. 05).l-THP (10 mg·L-1)对2种黏附分子表达均无明显影响(P>0. 05).50 mg·L-1地塞米松(DXM)完全抑制LPS诱导上述2种黏附分子的表达(P<0. 05).结论:左旋四氢巴马汀能减少LPS诱导的ICAM-1和E-selectin表达,提示l-THP可开发成炎症治疗药物.