基于UPLC-LTQ-Orbitrap-MS的小儿扶脾颗粒的化学成分研究

目的系统阐明中药复方小儿扶脾颗粒中的化学成分,建立一种对中药复方复杂成分快速鉴定的液质分析方法。方法采用超高效液相色谱-离子阱-静电场轨道阱质谱(UPLC-LTQ-Orbitrap-MS)对小儿扶脾颗粒成分进行分析,色谱柱为Waters HSS T3-C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm),流动相为0.1%甲酸水(A)-乙腈(B),梯度洗脱,体积流量0.3 mL/min。根据UPLC-LTQ-Orbitrap-MS扫描提供化合物的准确相对分子质量、多级质谱数据、质谱碎片离子信息等,参照对照品、文献报道等进行成分鉴定。结果共鉴定了小儿扶脾中颗粒共84个化学成分,主要包括黄酮类、糖苷类、酚酸及其酯类等,并对各成分的药材来源进行归属,同时根据质量规律和多级质谱裂解规律建立了快速鉴定黄酮类以及多甲氧基黄酮类化合物的方法。结论对小儿扶脾颗粒的化学成分进行了较为全面的分析,为其药效物质基础研究及质量控制提供了一定的理论依据。     

UPLC-MS/MS同时测定葛根芩连汤含药血清10个有效成分的含量

目的建立定量分析葛根芩连汤含药血清中的多个有效成分的方法。方法采用超高效液相色谱-三重四级杆质谱联用(UPLC-MS/MS)技术,色谱分离条件:Shim-pack XR-ODSⅢ(75 mm×2.0 mm,1.6μm)色谱柱,以5 mmol·L~(-1)甲酸铵-0.1%甲酸(A)与乙腈(B)为流动相梯度洗脱,流速为0.2 m L·min~(-1),柱温为35℃;质谱条件:采用电喷雾(ESI)离子源,在正离子模式下对各化合物进行多反应监测模式(MRM)检测。结果含药血清中10个有效成分的线性关系良好(r0.9900),日内精密度、日间精密度、稳定性的RSD值均小于15%,提取回收率、基质效应均符合方法学测定要求。结论本方法可快速、准确地同时检测大鼠血清中葛根芩连汤中10个有效成分的含量,为药理实验中葛根芩连汤含药血清提供质量控制方法。     

葛根芩连汤不同配伍对炙甘草指纹图谱中甘草酸的影响

目的:建立葛根芩连汤中炙甘草UPLC-MS/MS指纹图谱分析方法,研究葛根芩连汤不同配伍对炙甘草指纹图谱中甘草酸的影响。方法:采用超高效液相色谱-质谱联用技术(UPLC-MS/MS),选择ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(1.7μm,100 mm×2.1 mm),以乙腈-0.2%甲酸水作为流动相,梯度洗脱80 min,分别获得不同批次炙甘草及葛根芩连汤不同配伍组的色谱图。结果:建立了炙甘草UPLC-MS/MS指纹图谱,确定了12个共有峰,指认12号峰为甘草酸铵;黄连与炙甘草配伍对炙甘草指纹图谱中甘草酸影响显著。结论:成功建立了炙甘草UPLC-MS/MS指纹图谱分析方法,葛根芩连汤中黄连与炙甘草配伍会显著降低炙甘草中甘草酸的含量。     

LCMS-IT-TOF法分析黄芪赤风汤提取物的化学成分

目的:分析鉴别黄芪赤风汤提取物化学成分。方法:采用高效液相色谱-离子阱-飞行时间质谱法(LCMS-IT-TOF)对黄芪赤风汤提取物化学成分进行分析,采用Venusil MP-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),乙腈(A)-水(B)为流动相进行梯度洗脱,电喷雾离子源为质谱离子源,正、负离子检测模式,获得不同化合物的多级质谱数据。结果:根据高分辨质谱数据信息,结合对照品质谱信息及相关文献,共鉴定推断出41个化合物。结论:LCMS-IT-TOF可全面、快速分析黄芪赤风汤提取物中的化学成分,为其质量控制提供参考。     

基于UPLC-LTQ-Orbitrap高分辨质谱的中药瓜蒌化学成分分析

目的:基于超高效液相色谱-线性离子阱-静电场轨道阱高分辨质谱系统(UPLC-LTQ-Orbitrap-MS)分析鉴定中药瓜蒌的化学成分。方法:瓜蒌样品粉碎过筛后采用70%甲醇超声提取,Waters HSS T3-C18色谱柱(2. 1 mm×100 mm,1. 8μm),流动相0. 1%甲酸水溶液-甲醇梯度洗脱,流速0. 3 mL·min-1,采用电喷雾离子源(ESI),正、负离子分别进行一级、二级质谱数据采集。为了获得更多的化合物信息,根据色谱峰分离情况、质谱响应强度以及一级质谱解卷积后提取得到的准分子离子数量,优化样品提取条件、色谱及质谱参数。根据精确相对分子质量、离子碎片信息、相关对照品比对,并结合瓜蒌化学成分文献信息,对其中的化学成分进行分析鉴定。结果:从瓜蒌中共分析鉴定了91个化学成分,包括14个氨基酸类化合物,5个单萜类化合物,5个四环三萜类化合物,1个五环三萜类化合物,14个黄酮类化合物,17个有机酸类化合物,3个多糖类化合物,7个核苷类化合物,7个生物碱及含氮化合物,12个挥发性成分,1个植物甾醇,及其他5种化合物。结论:该方法具有高效分离、高灵敏检测优势,可较为全面地对瓜蒌中不同类型化合物进行分析鉴定,为瓜蒌药效物质基础及质量标准研究提供参考。     

LC-Q-TOF-MS及LC-IT-MS分析酸枣仁汤的化学成分

采用液相色谱-四级杆-飞行时间质谱（LC-Q-TOF-MS）及液相色谱-离子阱质谱（LC-IT-MS）系统剖析了酸枣仁汤中化学成分。色谱柱为Agilent Zorbax SB-C₁₈,Rapid Resolution HT（4.6 mm×50 mm,1.8 μm）;以乙腈（A）-0.05%甲酸溶液（B）为流动相,梯度洗脱;流速0.6 mL·min^-1;柱温30 ℃。共鉴定了酸枣仁汤中48个化合物,并对化合物的药材来源进行了归属,首次报道了方剂中的31个化合物。LC-Q-TOF-MS结合LC-IT-MS可以简便、快速地对酸枣仁汤中化学成分定性分析,本研究结果为酸枣仁汤质量控制和药效物质基础研究提供了一定的理论依据。     

葛根芩连汤的UPLC-MS/MS指纹图谱研究

目的建立葛根芩连汤的UPLC-MS/MS指纹图谱分析方法。方法以0.2%甲酸水-乙腈为流动相,梯度洗脱,色谱柱:ACQUITY UPLC BEH C_(18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm)。结果建立了葛根芩连汤的UPLC-MS/MS指纹图谱的共有模式,确定了39个共有峰,并利用UPLC-MS/MS及对照品定性鉴别了其中8个共有峰,对12批不同产地和品种的葛根芩连汤药材相似度进行了考察,其相似度在0.891~0.997之间。结论成功建立了葛根芩连汤的UPLC-MS/MS指纹图谱分析方法,其精密度、重复性及稳定性良好,为葛根芩连汤的质量控制、配伍机制、制备工艺研究提供参考。     

基于UPLC-LTQ-Orbitrap-MS 技术分析黄芩清肺汤中黄芩、栀子单煎与合煎的成分变化

目的研究黄芩清肺汤中黄芩、栀子配伍前后的成分变化,探讨二者配伍的合理性。方法采用超高效 液相色谱-离子阱-静电场轨道阱质谱联用（UPLC-LTQ-Orbitrap-MS）技术建立黄芩、栀子配伍前后的化学指纹 图谱,通过正交偏最小二乘判别法分析药对配伍前后的化学成分变化,并对筛选到的化学标记物进行鉴定。 结果黄芩、栀子合并液与合煎液化学成分存在明显差异,合煎后京尼平苷酸（geniposidic acid）、栀子苷 （gardenoside）等含量显著下降,黄芩素（baicalein）、槲皮素（quercetin）等含量显著升高。结论黄芩清肺汤中黄 芩、栀子配伍后,可促进多种活性成分在合煎液中的溶出,这些成分可能是黄芩、栀子配伍协同增效的物质 基础。     

基于UPLC-LTQ-Orbitrap-MS及网络药理学的复方黄柏液治疗糖尿病足活性成分研究

该研究采用超高效液相色谱-线性离子阱-静电场轨道阱质谱(UPLC-LTQ-Orbitrap-MS)对复方黄柏液化学成分进行定性分析,色谱柱为Waters HSS T3-C_(18)色谱柱(2. 1 mm×100 mm,1. 8μm),流动相为0. 1%甲酸水(A)-乙腈(B),梯度洗脱,流速0. 3 mL·min~(-1)。根据化合物的母离子、子离子的质谱信息,对照品比对、文献信息进行成分鉴定。在此基础上,利用网络药理学研究方法,对复方黄柏液化学成分进行靶标预测、功能富集以及分子对接验证,筛选出与糖尿病足相关的活性成分、阐释其作用机制。结果表明,从复方黄柏液中共鉴定了138种化合物,包括:生物碱28种,黄酮类16种,苯乙醇苷类11种,环烯醚类9种,环已基乙醇衍生物11种,酚酸及衍生物28种,木脂素类3种,萜类4种,挥发油及其他28种。从中共筛选出36种与糖尿病足相关的活性成分。靶标功能富集结果表明复方黄柏液主要从调控炎症反应、生长因子等7个功能方面实现对糖尿病足的治疗。该研究结合LTQ-Orbitrap-MS质谱分析与网络药理学研究方法,为复方黄柏液的有效成分的识别、质量标志物的筛选以及解析其作用机制提供参考。     

UPLC-LTQ-Orbitrap-MS快速识别驱虫斑鸠菊中多酚类化合物

目的:对驱虫斑鸠菊乙醇提取物中的化学成分进行分析鉴定。方法:采用超高效液相色谱-线性离子阱/静电场轨道阱组合式高分辨质谱(UPLC-LTQ-Orbitrap-MS)联用技术,总结驱虫斑鸠菊中黄酮类和咖啡酰奎宁酸类化合物的质谱裂解规律,建立其乙醇提取物中多酚类成分的快速识别方法,并对其中的化学成分进行识别。结果:从其乙醇提取物中初步鉴定出43种多酚类化合物,其中包括30种黄酮类成分和13种酚酸类成分。结论:有26种化合物是首次在驱虫斑鸠菊中发现。     

葛根芩连汤及不同配伍组中生物碱类成分的肠外翻吸收研究

目的 应用肠外翻模型研究葛根芩连汤(葛根、黄芩、黄连和炙甘草)及其不同配伍组中4个生物碱类成分在大鼠不同肠段的吸收特征.方法 采用肠外翻模型,考察葛根芩连汤中黄连碱、药根碱、小檗碱、巴马汀4个生物碱类成分的肠吸收机制;同时考察不同肠段、药物浓度等因素对它们吸收的影响并比较各组分在全方和不同配伍组给药时的吸收变化情况.结果 各组分在不同肠段的吸收均为线性吸收,符合零级吸收速率.药根碱在各肠段的吸收方式除被动扩散外还存在主动转运.小檗碱、巴马汀的吸收速率常数(Ka)均随剂量的增加而增加,显示它们为被动扩散.黄连碱在空肠中的吸收表现为主动转运;而在十二指肠、回肠、结肠中表现为被动扩散.肠道不同部位的吸收实验表明,全方中小檗碱、巴马汀的最佳吸收部位为空肠;黄连碱、药根碱的最佳吸收部位为结肠.结论 比较不同配伍组的Ks,4个生物碱成分在全方中吸收最好,其他三个配伍组的吸收没有显著性差异.     

葛根芩连汤配方颗粒和传统汤剂的HPLC的指纹图谱对比研究

目的:采用高效液相(HPLC)比较研究葛根芩连汤配方颗粒剂和传统汤剂的指纹图谱差异。方法:首先选择3家不同医院A、B、C的葛根芩连汤配方颗粒剂和传统汤剂,配制对照品溶液和供试品溶液后,以优化的色谱条件进行HPLC指纹图谱研究。结果:HPLC中间精密度试验、重复性试验和稳定性试验均显示良好。葛根芩连汤颗粒剂HPLC指纹图谱发现前5 min K1、K2和K3的谱图差异较大,5 min后3家不同医院葛根芩连汤颗粒剂HPLC指纹图谱有10个相似的特征峰,其中K3特征峰的成分含量与K1和K2存在较大差异,尤其是1号峰和4号峰。K1和T1、K2和T2、K3和T3颗粒剂和传统汤剂的比较中,颗粒剂特征峰的含量较传统汤剂高。结论:葛根芩连汤配方不同医院颗粒剂和传统汤剂的HPLC指纹图谱存在一定差异。     

ICP-AES法测定葛根芩连汤中微量元素

目的建立原子发射光谱法测定葛根芩连汤(葛根、黄连、黄芩、甘草)中微量元素的方法及探讨煎煮时间对微量元素析出的影响。方法采用HNO3-HClO4(4∶1)作消化液处理样品,用电感耦合等离子体原子发射光谱(ICP-AES)法同时测定葛根芩连汤60,90 min煎液中Ca,Mg,Zn,Fe,Mn,Cu,Sr,Co,Ni,Cd,Pb等11种微量元素的含有量。结果微量元素的检出限为0.001～0.272μg/mL,相对标准偏差为1.3%～3.8%(n=6),加样回收率在97.33%～102.92%。葛根芩连汤中未检测到Co、Ni、Cd和Pb 4种元素,60 min煎液中Ca、Mg、Zn、Fe、Mn、Cu和Sr的含有量分别为473.39、594.04、4.71、40.33、5.40、1.75、4.93μg/g。葛根芩连汤60 min和90 min煎液中微量元素的含有量基本没有差别。结论所建立的方法简便、准确、灵敏度高。从微量元素析出角度而言,葛根芩连汤宜煎煮60 min。     

基于系统药理学的葛根芩连汤治疗2型糖尿病作用机制探讨

目的:通过系统药理学方法探讨葛根芩连汤治疗2型糖尿病的作用机制及原理。方法:利用中药系统药理学分析平台(traditional Chinese medicine systems pharmacology database and analysis platform,TCMSP)数据库筛选葛根芩连汤有效成分和相关靶标蛋白;运用网络可视化软件Cytoscape 3.5.1构建葛根芩连汤"有效成分-靶标"相互作用网络进行拓扑学分析;借助STRING 10.5在线数据库进行蛋白质与蛋白质相互作用(protein-protein interaction networks,PPI)网络的构建与分析;通过Uniprot数据库获取靶标蛋白的基因名称,借助David数据库进行基因通路功能富集分析京都基因和基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG),研究葛根芩连汤治疗2型糖尿病的作用机制及原理。结果:葛根芩连汤的核心化合物有槲皮素(quercetin),山柰酚(kaempferol),β-谷甾醇(beta-sitosteroll)等,核心靶标前列腺素G/H合成酶2(prostaglandin G/H synthase 2)等;PPI网络图显示葛根芩连汤有效成分中关键蛋白主要有c-Jun氨基末端激酶(JUN),肿瘤坏死因子(TNF),fos蛋白(FOS),丝裂原活化蛋白激酶3(MAPK3)等;KEGG结果表明葛根芩连汤主要作用与肿瘤坏死因子信号通路(TNF signaling pathway),丝裂原活化蛋白激酶信号通路(MAPK signaling pathway)等信号通路有关。结论:葛根芩连汤主要通过多种途径,多种信号通路作用于多种靶点发挥其药物功效,起到抗炎功效,治疗2型糖尿病的作用。     

葛根芩连汤加味配合中药灌肠治疗溃疡性结肠炎临床研究

目的：观察葛根芩连汤加味配合中药灌肠治疗溃疡性结肠炎的临床疗效。方法：将72例溃疡性结肠炎患者随机平均分为治疗组和对照组,两组均给予葛根苓连汤加味治疗,治疗组在口服中药同时配合中药灌肠。结果：治疗组有效率90％,对照组有效率72％,治疗组明显高于对照组。结论：葛根芩连汤加味配合中药灌肠治疗溃疡性结肠炎疗效明显,不良反应小。     

葛根芩连汤治疗溃疡性结肠炎的临床试验类文献的概述

目的:对常用网络数据库中发表的葛根芩连汤治疗溃疡性结肠炎的临床试验文献进行系统研究,归纳葛根芩连汤治疗溃疡性结肠炎的中医证型、用药情况、临床疗效,安全性等,以期为临床治疗提供参考证据。方法:检索国家知识基础设施数据库(CNKI)、中国学术期刊数据库(CSPD)、中文科技期刊数据库(CCD)和PubMed中发表的葛根芩连汤治疗溃疡性结肠炎的临床试验类文章,由2名研究者进行筛选和数据提取,提取内容包括作者姓名、发表时间、地区、样本信息、干预措施、临床疗效、不良反应等基本特征并进行分析。结果:溃疡性结肠炎是一种严重的消化系统疾病,具有临床症状严重,病程长,复发率高的特点,严重威胁患者的健康。结论:葛根芩连汤治疗溃疡性结肠炎具有较好的疗效和安全性,可以为临床提供参考价值。     

葛根芩连汤加减对糖尿病肾病血管内皮细胞因子及尿蛋白排泄率的影响

目的:探讨葛根芩连汤加减对湿热型糖尿病肾病的临床疗效,同时观察其对患者血管内皮细胞因子及尿蛋白排泄率的影响。方法:选取70例湿热型糖尿病肾病患者,随机分为对照组及观察组,各35例。2组患者均接受内科常规治疗,观察组在对照组治疗基础上加用葛根芩连汤加减,2组均连续治疗8周,治疗前后均对2组患者中医证候积分、尿微量白蛋白排泄率(m Alb)、24 h尿蛋白定量(Upro/24 h)、血肌酐(Scr)、糖基化血红蛋白(Hb Alc)、尿素氮(BUN)、餐后2 h血糖(FPG)、三酰甘油(TG)以及外周血管内皮生长因子(VEGF)水平进行检测。结果:治疗后2组患者中医证候积分均有所下降,其中观察组下降的趋势更为明显(P0.05);葛根芩连汤加减能够更明显得下调糖尿病肾病患者m Alb、Upro/24 h、Scr、BUN、Hb Alc、FPG、TG的水平,2组比较差异有统计学意义(P0.05);2组治疗后VEGF均较治疗前下降,其中加用观察组患者下降的幅度更大(P0.05)。结论:葛根芩连汤加减对湿热型糖尿病肾病有理想疗效,可明显改善患者临床症状,纠正脂代谢紊乱,且通过阻断VEGF的分泌可能可以实现治疗糖尿病肾病的目的。     

葛根芩连汤治疗肠道湿热型急性放射性直肠炎的临床研究

目的:观察葛根芩连汤治疗肠道湿热型急性放射性直肠炎的临床疗效。方法:选择放疗出现急性放射性直肠炎并临床辨证分型为肠道湿热型局部晚期直肠癌患者30例,随机分为思密达组15例(口服思密达1g,日3次,连服14天)和中药组15例(口服葛根芩连汤,日1剂,连服14天),后观察比较两组治愈、好转、总有效率及相关症状改善情况。结果:中药组总有效率(CR+PR)为86.67%,思密达组总有效率(CR+PR)为53.33%(P<0.05)。结论:葛根芩连汤治疗肠道湿热型急性放射性直肠炎疗效确切,值得临床推广应用。     

基于液质联用技术的经典名方羌活胜湿汤标准煎液的化学成分分析

采用UHPLC-Q Exactive Orbitrap MS技术,对经典名方羌活胜湿汤的化学成分进行综合分析。以Waters^TM UPLC^TM HSS T3 C₁₈(2.1 mm×100 mm,1.7μm)为色谱柱,乙腈-0.1%甲酸水为流动相,梯度洗脱,在正负离子模式下采集羌活胜湿汤全方、单味药、阴性方的质谱数据。根据高分辨质谱提供的精确相对分子质量和碎片离子信息,结合对照品比对和相关文献报道对羌活胜湿汤的化学成分进行分析。共分析鉴定出141个化合物,包括氨基酸、寡糖、寡肽及其衍生物等极性成分18个,酚酸类19个,香豆素类44个,黄酮和色原酮类18个,皂苷类13个,苯酞类17个,其他类12个。该研究综合分析鉴定了羌活胜湿汤的化学成分,为羌活胜湿汤的质量控制以及药效物质基础的深入研究提供了实验依据。     

不同批号葛根芩连微丸中葛根素、黄芩苷和盐酸小檗碱的同步测定及含量比较

目的建立HPLC同时测定葛根芩连微丸中葛根素、黄芩苷、盐酸小檗碱3种有效成分的含量的方法,并比较三个批次葛根芩连微丸此三种主要活性成分的含量。方法色谱柱为铂金ODS(250 mm×4.6 mm,5μm)柱,流动相为乙腈-水(含0.025%磷酸+0.035%三乙胺),梯度洗脱,流速1 ml.min-1,检测波长270 nm,柱温30℃。结果葛根素在0.0358～1.430 8μg范围内与峰面积具有良好的线性关系(r=1),平均回收率为101.2%,RSD=0.60%(n=6);黄芩苷在0.0191～0.7631μg范围内与峰面积/10 000具有良好的线性关系(r=1),平均回收率为100.36%,RSD=1.38%(n=6);盐酸小檗碱在0.049 9～1.998 0μg范围内与峰面积/10 000具有良好的线性关系(r=1),平均回收率为102.16%,RSD=0.36%(n=6);三批微丸中葛根素,黄芩苷和盐酸小檗碱含量的均值分别为16.11mg/g,11.01 mg/g和17.22 mg/g。结论方法准确、灵敏、重现性好,阴性无干扰,可用于葛根芩连微丸中3种有效成分的同步测定;葛根芩连微丸3批之间3种成分含量差异显著。