清肺口服液对3I、7b型腺病毒感染人胚肺成纤维细胞TNF-α蛋白表达的影响

目的:探讨清肺口服液含药血清对腺病毒3I、7b感染的人胚肺成纤维细胞之肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白表达的影响.方法:以3I、7b型腺病毒分别攻击体外培养的人胚肺成纤维细胞,制备清肺口服液含药血清,作用于该细胞,另设正常细胞组,病毒对照组,利巴韦林组,采用ELISA法检测不同组细胞上清液中TNF-α的含量,并进行比较.结果:病毒对照组较正常细胞组之TNF-α含量明显增多,清肺口服液含药血清组可显著降低3I、7b型腺病毒攻击后细胞TNF-α的浓度.结论:清肺口服液可低腺病毒感染所致人胚肺成纤维细胞TNF-α蛋白的高表达,这可能是其抗病毒作用的机制之一.     

清肺口服液对3I、7b型腺病毒感染人胚肺成纤维细胞TNF-α蛋白表达的影响

目的探讨清肺口服液含药血清对腺病毒3I、7b感染的人胚肺成纤维细胞之肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白表达的影响。方法以3I、7b型腺病毒分别攻击体外培养的人胚肺成纤维细胞,制备清肺口服液含药血清,作用于该细胞;另设正常细胞组、病毒对照组、利巴韦林组,采用ELISA法检测不同组细胞上清液中TNF-α的含量,并进行比较。结果病毒对照组较正常细胞组之TNF-α含量明显增多(P<0.01),含药血清组可显著降低3I、7b型腺病毒攻击后细胞TNF-α的浓度(P<0.01,P<0.05)。结论腺病毒感染可使人胚肺成纤维细胞TNF-α蛋白表达增高;清肺口服液可降低TNF-α的蛋白表达,这可能是其抗病毒作用的机制之一。     

清肺口服液对腺病毒3I、7b感染人胚肺成纤维细胞bcl-2mRNA表达的影响

目的:探讨清肺口服液含药血清对腺病毒3I、7b感染的人胚肺成纤维细胞(HPF)bcl-2mRNA表达的影响。方法:细胞分为正常细胞组、病毒对照组、空白血清组、利巴韦林组和含药血清组,除正常细胞组外,其余4组均以3I、7b型腺病毒分别攻击,并分别加入相应药物至各组细胞中,用原位杂交方法比较各组细胞bcl-2mRNA的表达。结果:病毒对照组较正常细胞组细胞中bcl-2mRNA表达降低(P<0.01),含药血清组比病毒对照组细胞bcl-2mRNA表达明显上升(P<0.01)。结论:腺病毒感染可使人胚肺成纤维细胞bcl-2mRNA表达降低。清肺口服液可增强bcl-2mRNA表达,从而抑制由腺病毒引发的细胞凋亡。这可能是其抗病毒作用机制之一。     

清肺口服液对3I、7b型腺病毒感染人胚肺成纤维细胞TGF-β1mRNA基因表达的影响

目的采用治疗小儿病毒性肺炎痰热闭肺证的有效中药制剂清肺口服液,研究其对腺病毒3I、7b感染的人胚肺成纤维细胞的转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA基因表达的影响.方法以3I、7b型腺病毒分别攻击体外培养的人胚肺成纤维细胞,用清肺口服液含药血清作用于该细胞,另设正常细胞组、病毒对照组、利巴韦林组,采用原位杂交法检测不同组细胞TGF-β1的mRNA基因表达,并进行比较.结果病毒对照组较正常细胞组的TGF-β1mRNA基因表达明显增强(P＜0.01),含药血清组可显著降低3I、7b型腺病毒攻击后细胞TGF-β1的mRNA表达(P＜0.01).结论腺病毒感染可使人胚肺成纤维细胞TGF-β1mRNA表达增高;清肺口服液可下调TGF-β1的mR-NA表达,这可能是其抗病毒作用的机制之一.     

开肺化痰解毒法对人胚肺成纤维细胞Fas表达的影响

目的：研究开肺化痰法对腺病毒作用后的人胚肺成纤维细胞Fas表达的影响。方法：用31、7b型腺病毒攻击人胚肺成纤维细胞后，分别加入清肺口服液含药血清及利巴韦林注射液，用流式细胞仪检测各组细胞FAS蛋白的表达。结果：经31、7b型腺病毒攻击后，病毒组Fas(CD95)的表达较正常组明显降低，含药血清组、利巴韦林组与病毒组比较，Fas(CD95)的表达均明显升高，空白血清组与病毒组比较无显著性差异，含药血清组与利巴韦林组比较无显著性差异。腺病毒31型攻击后，含药血清组、利巴韦林组与正常细胞组比较有显著性差异。腺病毒7b型攻击后，含药血清组、利巴韦林组与正常细胞组比较无显著性差异。结论：31、7b型腺病毒对人胚肺成纤维细胞Fas的表达有一定的影响，腺病毒可能通过此机制延长其在细胞内的存活时间，以利于自身复制。清肺口服液含药血清对Fas的表达具有一定的调节作用，此作用可能是其清除病毒在体内的感染，对机体起保护作用的机制之一。     

清肺口服液对3I、7b型腺病毒感染人胚肺成纤维细胞TGF-β_1mRNA基因表达的影响

目的:采用治疗小儿病毒性肺炎痰热闭肺证的有效中药制剂清肺口服液,研究其对腺病毒3I、7b感染的人胚肺成纤维细胞的转化生长因子-β1（TGF-β1）mRNA基因表达的影响。方法: 以3I、7b型腺病毒分别攻击体外培养的人胚肺成纤维细胞,用清肺口服液含药血清作用于该细胞,另设正常细胞组、病毒对照组、利巴韦林组,采用原位杂交法检测不同组细胞TGF-β1的mRNA 基因表达,并进行比较。结果:病毒对照组较正常细胞组的TGF-β1mRNA基因表达明显增强（P <0．01）,含药血清组可显著降低3I、7b型腺病毒攻击后细胞TGF-β1的mRNA表达（P<0．01）。结论:腺病毒感染可使人胚肺成纤维细胞TGF-β1mRNA表达增高;清肺口服液可下调TGF-β1的mR- NA表达,这可能是其抗病毒作用的机制之一。     

清肺口服液对3Ⅰ、7b型腺病毒感染人胚肺成纤维细胞TNF-α蛋白表达的影响

目的：探讨清肺口服液合药血清对腺病毒3Ⅰ、7b感染的人胚肺成纤维细胞之肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白表达的影响。方法：以3Ⅰ、7b型腺病毒分别攻击体外培养的人胚肺成纤维细胞，制备清肺口服液合药血清，作用于该细胞，另设正常细胞组，病毒对照组，利巴韦林组，采用ELISA法检测不同组细胞上清液中TNF-α的含量，并进行比较。结果：病毒对照组较正常细胞组之TNF-α含量明显增多，清肺口服液合药血清组可显著降低3Ⅰ、7b型腺病毒攻击后细胞TNF-α的浓度。结论：清肺口服液可低腺病毒感染所致人胚肺成纤维细胞TNF-α蛋白的高表达，这可能是其抗病毒作用的机制之一。     

清肺口服液对3I、7b型腺病毒感染人胚肺成纤维细胞TGF-β1、PDGF-BB mRNA基因表达的影响

目的观察清肺口服液含药血清对腺病毒3I、7b感染的人胚肺成纤维细胞转化生长因子-β1（TGF—β1）、血小板衍生生长因子-BB（PDGF-BB）mRNA基因表达的影响。方法以3I、7b型腺病毒分别攻击体外培养的人胚肺成纤维细胞，制备清肺口服液含药血清，作用于该细胞，另设正常细胞组、病毒对照组、利巴韦林组，采用原位杂交法检测TGF—β1、PDGF—BB mRNA基因的表达，进行各组间比较。结果病毒对照组较正常细胞组的TGF-β1、PDGF-BB mRNA表达均明显升高（P〈0．01），含药血清组对3I、7b型攻击后的TGF-β1、PDGF-BB mRNA表达均有显著降低作用（P〈0．01）。结论清肺口服液可下调TGF—β1、PDGF—BB mRNA表达，这可能是其抗病毒作用的机制之一。     

清肺口服液对3I、7b型腺病毒感染人胚肺成纤维细胞转化生长因子-β1和血小板衍生生长因子-BB蛋白表达的影响

目的探讨清肺口服液含药血清对腺病毒3Ⅰ、7b感染的人胚肺成纤维细胞之转化生长因子β1(TGFβ1)、血小板衍生生长因子BB(PDGFBB)蛋白表达的影响。方法细胞分为正常细胞组、病毒对照组、空白血清组、利巴韦林组和含药血清组,除正常细胞组外,其余4组均以3Ⅰ、7b型腺病毒分别攻击之,并分别加入相应药物至各组细胞中;采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组细胞上清液中TGFβ1、PDGFBB的含量。结果病毒对照组较正常细胞组细胞中TGFβ1、PDGFBB含量均明显增多(P<0.01),含药血清组比病毒对照组的细胞TGFβ1、PDGFBB含量显著降低(P<0.01)。结论(1)腺病毒感染可使人胚肺成纤维细胞TGFβ1、PDGFBB蛋白表达增高;(2)清肺口服液可降低TGFβ1、PDGFBB细胞因子的蛋白表达,这可能是其抗病毒作用的机制之一。     

清肺口服液多途径给药体外抗腺病毒3I 7b作用研究

目的:探讨清肺口服液体外抗腺病毒3I、7b作用及作用环节.方法:用100TCID50腺病毒3I、7b攻击体外培养的人胚肺成纤维细胞造成腺病毒感染模型,分别在感染前、感染时、感染后加入清肺口服液含药血清,同时设空白血清组、病毒唑组及正常细胞对照组,MTT法比较结果.结果:含药血清各组OD值显著大于病毒组及空白血清组,与病毒唑组无显著性差异.结论:清肺口服液具有多环节体外抗腺病毒作用.     

清肺口服液对3I、7b型腺病毒感染人胚肺成纤维细胞转化生长因子-β1和血小板衍生生长因子-BB蛋白表达的影响

目的探讨清肺口服液含药血清对腺病毒3Ⅰ、7b感染的人胚肺成纤维细胞之转化生长因子-β1(TGF-β1)、血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)蛋白表达的影响。方法细胞分为正常细胞组、病毒对照组、空白血清组、利巴韦林组和含药血清组,除正常细胞组外,其余4组均以3Ⅰ、7b型腺病毒分别攻击之,并分别加入相应药物至各组细胞中;采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组细胞上清液中TGF-β1、PDGF—BB的含量。结果病毒对照组较正常细胞组细胞中TGF-β1、PDGF-BB含量均明显增多(P<0．01),含药血清组比病毒对照组的细胞TGF-β1、PDGF—BB含量显著降低(P<0．01)。结论(1)腺病毒感染可使人胚肺成纤维细胞TGF-β1、PDGF—BB蛋白表达增高;(2)清肺口服液可降低TGF-β1、PDGF—BB细胞因子的蛋白表达,这可能是其抗病毒作用的机制之一。     

化痰散结方对人肺癌细胞Fas-FasL和TNFR1信号通路的影响

目的观察化痰散结方含药血清,对人肺癌 SPC-A1细胞 Fas-FasL 和 TNFR1的表达的影响。方法通过血清药理学方法,选择不同浓度的含化痰散结方的兔血清,与人肺癌细胞 SPC-A1共同孵育不同时间后,应用倒置相差显微镜对细胞生长和凋亡状况进行形态学观察,应用 SABC 法检测 SPC-A1细胞 Fas 和FasL 的表达。用原位杂交方法检测 SPC-A1细胞 TNFR1的表达。结果人肺癌细胞经含化痰散结方的兔血清作用后,由贴壁生长而逐渐脱落,外形变圆,体积缩小,折光性增加;SABC 法显示,化痰散结方含药血清可上调 SPC-A1细胞 Fas(P<0.05),而且可下调 SPC-A1细胞 FasL 的表达(P<0.05)。原位杂交方法显示,含药血清组 SPc-A1细胞 TNFR1的表达明显高于不含药血清组(P<0.01)。结论化痰散结方含药血清可诱导人肺癌细胞凋亡,其机制可能与上调 SPC-A1细胞 Fas、下调其 FasL 以及上调 TNFR1有关。     

至生胶囊调节食管癌造模大鼠细胞凋亡及Fas, FasL蛋白表达的研究

目的:观察至生胶囊对食管癌造模大鼠细胞凋亡及Fas,FasL蛋白表达的影响,从分子生物学角度分析其作用机制。方法:选用健康Wistar大鼠,除空白组外,其余大鼠均ip甲基戊基亚硝胺(MANA)5 mg.kg-1,1次/周,连续18周造模。末次注射后将造模大鼠随机分为模型组、至生胶囊高(0.75 g.kg-1)、中(0.5 g.kg-1)、低(0.25 g.kg-1)剂量组、西药替加氟组(20 mg.kg-1),ig,1次/d,连续4周。原位末端标记法(TUNEL)检测对食管癌癌细胞凋亡的促进作用;免疫组化法检测大鼠食管细胞中Fas,FasL蛋白的表达。结果:至生胶囊可明显促进食管癌细胞的凋亡,高、中、低剂量组、化疗组均促进凋亡,与模型组比较均有统计学意义(P<0.05),高、中剂量组疗效明显优于化疗组、低剂量组(P<0.05),且呈一定量效关系。各药物治疗组Fas表达阳性率均有不同程度的升高,FasL表达阳性率均有不同程度的降低。结论:至生胶囊能促进食管癌细胞凋亡,其作用机制可能与其提高Fas表达、降低FasL表达有关;至生胶囊促进食管癌细胞凋亡及调节Fas,FasL表达的作用存在一定的量效关系,至生胶囊高剂量此种作用优于替加氟。     

中药异位宁对子宫内膜异位症模型大鼠Fas/FasL基因表达影响的实验研究

目的：通过研究异位宁对Fas/FasL蛋白表达的影响来阐述异位宁治疗子宫内膜异位症的作用机制。方法：取雌性Wistar大鼠,随机分为5组,正常对照组、模型对照组、异位宁高、低剂量组及西药丹那唑对照组;造模成功后各给药组灌胃给药1个月后,观察各组子宫内膜局部组织中Fas及FasL蛋白的表达情况。结果：治疗后异位宁高、低剂量组以及西药对照组Fas、FasL表达增多,染色较深,与模型组比较有显著性差异（P〈0.05）。结论：异位宁具有诱导Fas、FasL基因表达,提高异位内膜凋亡能力,使异位病灶得以萎缩、消失的作用。     

病毒性心肌炎小鼠T淋巴细胞凋亡的调控与清心胶囊的干预作用

目的:观察病毒性心肌炎(VMC)T细胞凋亡与凋亡蛋白表达的变化以及清心胶囊对这一环节的干预作用.方法:复制VMCBALB/c小鼠模型,给予清心胶囊治疗后,采用光镜和透射电镜观察心肌病理改变,Annexin v/PI 双染色流式细胞术和透射电镜观察T淋巴细胞凋亡;流式细胞术检测Fas、FasL、bcl-2及Bax蛋白在T细胞上的表达.结果:(1)模型组小鼠心肌病变明显,治疗组心肌病理改变明显减轻,正常组心肌无明显病理改变.(2)与正常组比较,VMC小鼠脾T细胞的凋亡率均显著升高(P＜0.01);与模型组比较,治疗组小鼠脾T细胞的凋亡率均显著降低(P＜0.01),但与正常组比较,仍有显著性差异(P＜0.01).透射电镜下可见正常T细胞和凋亡T细胞的典型形态,模型组T细胞凋亡增多.(3)与正常组比较,模型组小鼠脾T细胞Fas、FasL表达均显著升高(P＜0.01),bcl-2表达均显著降低(P＜0.01);与模型组比较,治疗组小鼠脾T细胞FasL表达均显著降低(P＜0.01),bcl-2表达均显著升高(P＜0.01、),Fas表达无统计学差异(P＞0.05);与正常组比较,治疗组小鼠脾T细胞FasL表达无显著性差异(P＞0.05),Fas、bcl-2表达仍有显著性差异(P＜0.05);而Bax表达各组间均无显著性差异(P＞0.05).结论:VMC发病过程中存在T细胞过度凋亡现象,这与Fas、FasL表达升高和bcl-2表达降低有关;清心胶囊能够显著抑制T细胞的过度凋亡,与其下调FasL表达和上调bcl-2表达有关.     

补中益气汤对甲状腺功能减退大鼠心肌细胞凋亡及 Fas, FasL和Caspase-3蛋白表达的影响

目的:研究补中益气汤对甲状腺功能减退(甲减)大鼠心肌细胞凋亡及Fas,FasL和Caspase-3蛋白表达的影响.方法:采用Kolaja法制备大鼠甲状腺功能减退模型.健康Wistar大鼠120只随机分成正常对照组、模型组、补中益气汤组(18.9 g·kg-1)、左旋甲状腺素钠L-T4组(9.45μg·kg-1),各组灌胃给药56 d.光镜和电镜下观察心肌形态学和超微结构变化,TUNEL法检测心肌凋亡细胞,免疫组化检测凋亡相关基因蛋白Fas,FasL,Caspase-3的表达,ELISA法测定血清促甲状腺激素(TSH),放射免疫分析法测定血清总三碘甲状腺原氨酸(Tr3)及总甲状腺素(TT4).结果:与正常组相比,模型组心肌细胞凋亡指数及Fas,FasL,Caspase-3的表达均达高峰,心肌细胞结构损伤严重,经治疗后补中益气汤组(12.10±0.73)和L-T4组(29.26±2.10)的心肌细胞凋亡指数降低,Fas,FasL及Caspase-3的阳性表达均下降,且补中益气汤组的疗效优于L-T4组(P＜0.05).结论:甲减引起心肌细胞凋亡增多,Fas,FasL,Caspase-3表达升高,而补中益气汤可明显降低心肌细胞凋亡指数,下调Fas,FasL及Caspase-3的表达,说明补中益气汤对甲减的心肌损害有干预保护作用.     

黄芪失笑散对急性心肌梗死大鼠Fas、FasL表达的影响

目的:观察不同剂量黄芪失笑散对急性心肌梗死大鼠梗死边缘区细胞凋亡及Fas、FasL蛋白表达的影响.方法:取雄性SD大鼠60只,随机分为黄芪失笑散高剂量组、黄芪失笑散中剂量组、黄芪失笑散低剂量组、模型组和对照组.连续灌胃7d后,结扎冠状动脉左前降支造成急性心肌梗死模型,对照组不结扎.手术后4.5h留取心脏标本,采用原位末端标记染色法(TUNEL)检测细胞凋亡指数,采用Western blot法检测Fas、FasL蛋白表达量.结果:与对照组比较,黄芪失笑散各组可明显降低心肌细胞凋亡指数和Fas、FasL的蛋白表达量(P＜0.01).不同剂量组间差异无统计学意义(P＞0.05),且黄芪失笑散大剂量组效果最好.结论:黄芪失笑散能够保护急性心肌梗死大鼠的缺血心肌,其作用机制可能与降低梗死边缘区Fas、FasL蛋白表达水平从而抑制心肌细胞凋亡有关.     

消瘿合剂对自身免疫性甲状腺炎大鼠甲状腺Fas/FasL的影响

目的从自杀相关因子及其配体(Fas/Fas L)角度探讨消瘿合剂对自身免疫性甲状腺炎的作用机制。方法 SD大鼠58只,除正常组10只大鼠外,其余48只大鼠建立实验性自身免疫性甲状腺炎(EAT)大鼠模型,随机分为模型组、雷公藤多苷对照组和消瘿合剂低剂量、高剂量组。采用放免法(RIA)检测血清甲状腺球蛋白抗体(Tg Ab)水平;免疫组化法检测甲状腺上皮细胞Fas、Fas L表达。结果与正常组比较,模型组Tg Ab升高(P0.05);与模型组比较,雷公藤多苷组、消瘿合剂高剂量组能显著降低Tg Ab(P0.05)。与正常组比较,模型组Fas、Fas L表达阳性面积差异均有统计学意义(P0.01);与模型组比较,干预各组均能使Fas、Fas L表达降低,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01)。在降低Fas表达方面,消瘿合剂高剂量组、低剂量组与雷公藤多苷组比较,差异有统计学意义(P0.01);在降低Fas L表达方面,与雷公藤多苷组比较,消瘿合剂高剂量组差异无统计学意义(P0.05),消瘿合剂低剂量组差异有统计学意义(P0.01)。结论消瘿合剂治疗自身免疫性甲状腺炎的细胞凋亡机制可能是通过降低甲状腺上皮细胞Fas、Fas L表达达到的。     

艾灸对类风湿关节炎大鼠的治疗作用及其机制探讨

目的：观察艾灸对类风湿关节炎大鼠的治疗作用及其机制。方法：将 100 只雄性Wistar大鼠随机分为5组。每组20只,除正常组外,其余4组大鼠制备类风湿关节炎模型。造模成功后,正常组和模型组不予任何治疗。艾灸组予艾条悬灸;香烟组予香烟悬灸,艾油组予艾叶精油穴位涂抹。连续治疗15d 后,比较各组大鼠体重、趾围、胸腺指数及脾指数变化,免疫组化方法检测大鼠关节滑膜中Fas/FasL 蛋白的表达。结果：艾灸组大鼠体重增加,关节肿胀减轻,胸腺指数提高、脾指数下降,关节滑膜中 Fas/FasL 蛋白的表达增加。在改善上述指标方面,艾灸组、香烟组较艾油组明显;艾灸组在Fas/FasL 蛋白表达方面优于香烟组。结论：艾灸治疗能显著改善大鼠类风湿关节炎症状,调节关节滑膜中 Fas/FasL 蛋白的表达,诱导滑膜细胞凋亡,这可能是艾灸发挥温通作用的有效机制之一。