α-硫辛酸通过mTOR通路抑制缺血再灌注诱导的PC12细胞自噬性凋亡

目的研究α-硫辛酸(LA)对PC12细胞缺血再灌注损伤的保护作用及其分子机制。方法传代培养PC12细胞,PC12细胞缺氧/复氧(氧糖剥夺4 h,复氧18 h)模拟缺血再灌注损伤模型。实验分为正常组、缺氧/复氧组、缺氧/复氧+α-LA、缺氧/复氧+自噬抑制剂巴弗洛霉素(Baf)A1组。CCK8筛选α-LA的有效作用浓度;流式细胞术检测细胞凋亡变化;Western印迹检测细胞促凋亡蛋白B细胞淋巴瘤(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)、酶切caspase-3、自噬标志分子SQSTM-1/P62、LC3-Ⅱ/Ⅰ及mTOR通路的表达变化。结果缺氧/复氧显著降低PC12细胞的存活率(P<0.05),Western印迹结果显示Bax、酶切caspase-3、LC3-Ⅱ/Ⅰ的表达水平均显著升高(P<0.05),P62和p-mTOR的表达水平降低(P<0.05);与缺氧/复氧组比较,给予α-LA和Baf A1均能显著降低缺氧/复氧诱导的凋亡水平(P<0.05)。结论α-LA通过抑制缺氧/复氧诱导的过度自噬进而减少过度自噬诱导的细胞凋亡。     

aFGF对Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

目的 探讨酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)对β淀粉样肽25-35(Aβ25-35)诱导凋亡PC12细胞凋亡的保护作用.方法 采用MTT比色法分析细胞存活率,Hoechst 332582-PI荧光染色法检测细胞凋亡,RT-PCR方法 检测PC12细胞Bax和Bcl-2基因mRNA的表达,Western印迹检测PC12细胞Bax和Bcl-2蛋白表达.结果 不同剂量(10、20、30 mg/L)aFGF预处理PC12细胞1 h可剂量依赖性对抗Aβ25-35引起的细胞凋亡,提高PC12细胞的存活率,减少Aβ25-35引起的PC12细胞核固缩、凝聚和碎裂,降低Bax基因mRNA表达及蛋白表达,增加bcl-2基因mRNA表达及蛋白表达.结论 aFGF可剂量依赖性对抗Aβ25-35对PC12细胞的毒性作用,其机制可能与下调凋亡基因Bax和上调抗凋亡基因Bcl-2表达有关.     

软脉胶囊含药血清对PC12细胞缺氧损伤细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响

目的 通过软脉胶囊含药血清对PC12细胞缺氧损伤细胞凋亡及凋亡相关基因Bcl-2、Bax蛋白表达的影响,探讨软脉胶囊治疗血管性痴呆（VD）的机制.方法 采用TUNEL法和流式细胞仪检测PC12细胞的凋亡率及Bcl-2和Bax蛋白的表达率.结果 软脉胶囊含药血清可明显对抗缺氧引起的PC12细胞的凋亡率,使Bcl-2蛋白的表达率明显增加,同时使Bax蛋白表达率明显降低.结论 软脉胶囊对VD具有治疗作用.     

LanCL1过表达对氧糖剥夺诱导PC12细胞凋亡及Sirt3-PGC-1α通路的影响

目的分析硫化双丙氨酸环化酶样蛋白(LanCL)1在氧糖剥夺(OGD)PC12细胞中的表达,并研究LanCL1过表达对OGD诱导PC12细胞凋亡的影响及其对沉默调节蛋白(Sirt)3-过氧化物酶体增殖活化受体γ共激活因子(PGC)-1α通路的影响。方法体外培养PC12细胞,并将其分为4组,对照组为正常培养的PC12细胞;OGD组为OGD条件下培养的PC12细胞;pcDNA3.1组为OGD条件下培养转染pcDNA3.1空载体的PC12细胞;pcLanCL1组为OGD条件下培养转染pcDNA3.1-LanCL1的PC12细胞。分别采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞中LanCL1 mRNA表达量,采用Western印迹检测细胞中LanCL1、Sirt3、PGC-1α蛋白表达水平,分别采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和流式细胞仪检测细胞生存率和凋亡率。结果与对照组相比,OGD组细胞中LanCL1 mRNA和蛋白表达水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05);OGD组和pcDNA3.1组细胞存活率显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与OGD组和pcDNA3.1组相比,pcLanCL1组细胞存活率显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,OGD组和pcDNA3.1组细胞中Sirt3、PGC-1α蛋白水平显著降低(P<0.05);与OGD组和pcDNA3.1组相比,pcLanCL1组细胞中Sirt3、PGC-1α蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论过表达LanCL1能够促进OGD PC12细胞存活,抑制其凋亡,可能通过激活Sirt3-PGC-1α信号通路保护OGD诱导的PC12细胞损伤。     

原花青素对a-淀粉样肽(25-35)诱导 PC12 细胞bax和bcl-2基因表达的影响

目的 探讨原花青素 (Procyanidins,PC) 对a-淀粉样肽(25-35)(Aa25～35) 诱导凋亡PC12细胞bax和bcl-2基因表达的影响.方法 采用MTT比色法分析细胞存活率,Hoechst33258-PI荧光染色观察细胞核凋亡的形态学改变,RT-PCR 检测bax和bcl-2基因 mRNA 表达,Western blot检测Bax和Bcl-2蛋白表达.结果 不同剂量PC预处理 PC12细胞 1 h,可剂量依赖性对抗Aa25～35引起的细胞凋亡,增加细胞存活率,减少Aa25～35引起的细胞核固缩、核碎裂,降低bax mRNA及Bax蛋白表达,增加bcl-2 mRNA及Bcl-2蛋白表达.结论 PC可剂量依赖性对抗Aa25～35诱导的 PC12细胞凋亡,其机制可能与下调凋亡基因bax和上调抗凋亡基因bcl-2表达有关.     

银杏叶内酯N对PC12细胞凋亡的保护作用

目的探讨银杏内酯N对过氧化氢(H2O2)诱导的PC12细胞凋亡的保护作用。方法用H2O2诱导PC12细胞损伤,刺激其凋亡,给予不同剂量的受试药物干预。用MTT法检测细胞存活率;用吖啶橙染色检测银杏内酯N对PC12细胞凋亡的作用;用流式细胞术检测银杏内酯N对PC12细胞活性氧(ROS)的影响,荧光定量RT-PCR法、Western印迹法分别检测Bcl-2、Bax mRNA和相应蛋白的表达。结果银杏内酯N可对抗H2O2诱导的PC12损伤,提高存活率和抑制凋亡,降低PC12细胞ROS水平,与模型组比较均有显著差异(P<0.05);Bcl-2蛋白及mRNA表达量升高,而Bax mRNA和Bax蛋白及表达量降低,与模型组比较均有显著差异(P<0.05),且呈一定的量效关系。结论银杏内酯N可对抗H2O2的神经毒性,其机制与调节凋亡相关基因及蛋白的表达有关。     

高糖环境对乏氧损伤大鼠海马神经元凋亡的影响及脑神康胶囊的干预作用

目的 研究高糖环境对体外培养的大鼠海马神经元乏氧损伤时凋亡的影响以及脑神康胶囊对损伤神经元的保护作用.方法 原代培养大鼠海马神经元,将细胞随机分成8组:对照组、高糖组、黄嘌呤(X)/黄嘌呤氧化酶(XO)组、川芎嗪组、生理盐水组、脑神康低、中、高剂量组.干预后测细胞存活率及凋亡率,采用Real-time PCR法检测各组海马神经元HIF-1α mRNA、Bcl-2 mRNA和Bax mRNA的表达及Bc-2/Bax比值.结果 与对照组相比,高糖组及X/XO组神经元存活率、Bcl-2 mRNA表达水平和Bcl-2/Bax的水平均显著下降,神经元凋亡率、HIF-1α mRNA和Bax mRNA表达水平均显著升高(均P<0.01);与X/XO组比较,川芎嗪组及脑神康各浓度组神经元存活率、Bcl-2 mRNA表达和Bcl-2/Bax的水平均明显上升,而神经元凋亡率、HIF-1α mRNA和Bax mRNA表达均明显下降.结论 脑神康胶囊能够明显抑制高糖环境下大鼠海马神经元的凋亡,对高糖环境下海马神经元的乏氧损伤有保护作用,其作用机制之一是下调HIF-1α mRNA表达、上调Bcl-2 mRNA表达、改善乏氧环境及抗细胞凋亡.     

心复力颗粒诱导缺氧无血清条件下H9C2心肌细胞自噬发挥抗凋亡作用的实验研究

目的探讨中药复方心复力颗粒(XG)诱导缺氧无血清条件下H9C2心肌细胞自噬发挥抗凋亡的作用机制。方法将H9C2心肌细胞随机分为正常组、缺氧无血清组、XG(100～800μg/mL)组、3-甲基腺嘌呤(3-MA)组(5μmol/L)、XG(400μg/mL)+3-MA(5 mmol/L)组,在缺氧无血清培养条件下处理24 h后,Hoechst33342荧光染色观察细胞凋亡,单丹磺酰尸胺(MDC)染色观察自噬小体形成,Western blotting方法检测凋亡和自噬蛋白表达水平。结果 Western blotting结果显示,缺氧无血清条件明显抑制抗凋亡蛋白Bcl-2表达,促进凋亡蛋白Bax和Caspase-3表达。心复力颗粒处理后,可显著抑制细胞凋亡,Bcl-2表达上调,Bax和Caspase-3的表达下调,且呈浓度依赖性,在XG 400组作用最显著,与正常组比较,缺氧无血清组自噬小体明显减少,而在心复力颗粒各处理组中,随着药物浓度增加,自噬小体数量明显增加,在XG 400组最明显。同时LC3Ⅱ/LC3Ⅰ呈剂量依赖性增加,并在XG 400组表达水平达到峰值。用自噬特异性抑制剂3-MA处理细胞后,与缺氧无血清组比较,细胞凋亡明显增加,抗凋亡蛋白Bcl-2表达显著减少,而凋亡蛋白Bax和Caspase-3表达呈上升趋势。结论缺氧无血清培养条件可以引起明显的细胞凋亡和抑制细胞自噬;心复力颗粒干预后显著减少细胞凋亡同时诱导自噬发生,并呈现一定的浓度依赖性;心复力颗粒通过诱导细胞自噬下调细胞凋亡水平。心复力颗粒通过诱导缺氧无血清条件下的H9C2心肌细胞自噬,从而发挥抗凋亡作用,保护缺血心肌。     

刺囊酸对缺氧复氧诱导心肌细胞凋亡相关基因表达的影响

目的 研究刺囊酸预处理对原代培养的SD乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤诱导的心肌细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax及聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(PARP 89 kDa)表达的影响.方法 实验随机分为6组:对照组,缺氧复氧损伤组,缺氧预处理组及低、中、高剂量刺囊酸组(0.5 μmol/L、5μmol/L和50 μmol/L),分别予以缺氧3h后再复氧2h,检测细胞存活率、乳酸脱氢酶(LDH)活性,Western Blot杂交法检测心肌细胞Bcl-2、Bax及PARP(89 kDa)蛋白表达变化.结果 与对照组比较,缺氧复氧损伤组心肌细胞Bcl-2蛋白表达显著低于对照组(P＜0.01),Bax蛋白及PARP(89 kDa)表达显著高于对照组(P＜0.01),细胞存活率明显低于对照组(P＜0.05).与缺氧复氧损伤组比较,不同剂量的刺囊酸预处理能显著提高细胞存活率,降低LDH活性,呈剂量依赖性;中剂量刺囊酸显著增加Bcl-2蛋白表达(P＜0.05),抑制Bax及PARP(89 kDa)蛋白表达(P＜0.05).结论 刺囊酸预处理可通过上调Bcl-2蛋白表达,抑制PARP(89 kDa)及Bax蛋白表达,抑制细胞凋亡,对抗心肌细胞缺氧复氧损伤.     

长链非编码RNA H19对缺血性脑卒中神经元SH-SY5Y细胞活力与自噬影响的探究

目的探究长链非编码RNA(LncRNA)H19对缺血性脑卒中神经元系SH-SY5Y细胞活力和凋亡的影响,并探究其和神经元自噬过程的相关性。方法选用神经元SH-SY5Y细胞系,进行氧糖剥夺/复氧建模(OGD/R),依据缺氧时间的不同(4h,8h和12h),分为缺氧4h组、缺氧8h组和缺氧12h组,同时建立未经过缺氧处理的对照组(n=3),测定细胞活力,采用实时PCR检测LncRNA H19表达水平。另外,将细胞在普通培养液中培养24h,取对数生长期的SH-SY5Y细胞分为正常对照(N)组、OGD/R组、OGD/R+H19siRNA组以及OGD/R+对照siRNA(NC)组,OGD/R缺氧出时间为8h,采用Western blot检测微管相关蛋白1转链3(LC3)Ⅱ、Beclin1及P62蛋白定量。结果缺氧8h组和缺氧12h组细胞活力明显低于对照组和缺氧4h组,缺氧8h组LncRNA H19表达水平明显低于对照组(P<0.05)。与N组比较,OGD/R组、NC组和H19siRNA组LC3Ⅱ(0.88±0.13、0.90±0.15和0.48±0.05 vs 0.50±0.08,P<0.05)及OGD/R组和NC组Beclin1表达(0.91±0.11和0.86±0.11 vs 0.28±0.04,P<0.05)明显增加,OGD/R组和NC组P62蛋白表达显著降低,差异有统计学意义(0.50±0.09和0.44±0.08 vs 0.88±0.12,P<0.05)。结论 LncRNA H19的表达上调;LncRNA H19的上调显著增加细胞活性,降低其死亡率;LncRNA H19参与神经元自噬过程,可能对于缺血性脑卒中起保护作用。     

Ad-Gax转染对缺氧性大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡及其相关基因表达的影响

目的观察Gax基因转染对缺氧性肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）凋亡及其相关基因表达的影响。方法腺病毒介导Gax转染体外原代培养的PASMCs。透射电镜观察细胞凋亡形态;原位细胞凋亡检测法观察Ad-Gax转染前后在常氧和缺氧处理2h,6h、12h、24h、48h大鼠PASMCs凋亡情况;免疫细胞化学法测PASMCsBcl-2、Bax蛋白表达。结果透射电镜观察到Ad-Gax转染后PASMCs产生凋亡现象。未转染缺氧刺激前后,均无或可见极少量的阳性细胞;Ad-Gax转染后,如无缺氧刺激,也无或仅可见少量的阳性细胞,予缺氧刺激后,阳性细胞显著增多,尤其在转染后24～48h更明显。转染组常氧、缺氧2h,6h、12h、24h、48h细胞凋亡百分率均显著高于未转染组（P〈0．01）。Ad-Gax转染前,与常氧时比较,缺氧刺激PASMCs后,Bax蛋白表达略为升高但无统计学意义;而Bcl-2蛋白表达显著升高,差异有统计学意义（P〈0．05）。Ad-Gax转染PASMCs后,缺氧刺激使Bcl-2蛋白表达显著降低（P〈0．01）,Bax蛋白表达显著增高（P〈0．01）。转染组细胞凋亡率与Bcl-2／Bax比值呈负相关（r=-0．53,P〈0．01）。结论Ad-Gax转染可诱导缺氧性PASMCs凋亡,其机制可能是通过上调Bax蛋白和下调Bcl-2蛋白的表达,尤其是通过降低Bcl-2／Bax比值实现的。     

二氮嗪联合环孢菌素A减轻突触核蛋白片段对PC12细胞凋亡的作用机制

目的探讨线粒体ATP敏感钾离子通道开放剂二氮嗪、线粒体膜渗透性转换孔抑制剂环孢菌素A,以及两者协同对α-突触核蛋白片段的非淀粉样成分(NAC)致PC12多巴胺能细胞凋亡的分子机制。方法采用25μmol/L的NAC对PC12细胞进行诱导建立帕金森病细胞模型,分为对照组、NAC处理组(NAC组)、NAC+二氮嗪干预组(干预1组)、NAC+环孢菌素A干预组(干预2组)、NAC+二氮嗪+环孢菌素A干预组(干预3组)。二氮嗪、环孢菌素A及两者协同对其干预48h,用流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测细胞色素C、Bcl-2、Bax、Bcl-2/Bax比值情况。结果与对照组比较,NAC组细胞凋亡率、细胞色素C明显升高,Bcl-2、Bcl-2/Bax比值明显降低(P<0.01),Bax未见明显变化(P>0.05);与NAC组比较,干预1组、干预2组、干预3组细胞凋亡率、细胞色素C明显降低,Bcl-2、Bcl-2/Bax比值明显升高(P<0.01),Bax未见明显变化(P>0.05)。结论二氮嗪、环孢菌素A及两者协同作用通过抑制线粒体凋亡通路相关蛋白的表达来拮抗NAC的细胞凋亡作用。     

小RAN干扰Trx1促进大鼠缺血再灌注损伤的星形胶质细胞凋亡、抑制其增殖及作用机制

目的研究硫氧还蛋白(Trx)1在氧糖剥夺(OGD)损伤后对星形胶质细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法将体外培养原代星形胶质细胞分为对照组、OGD模型组、小干扰(si)RNA-NC组、siRNA-Trx1组,采用携带Trx1的siRNA星形胶质细胞抑制Trx1表达后进行OGD/复氧(R)干预,氧糖剥夺6 h,复氧24 h,对照组为正常培养的星形胶质细胞。实时荧光定量PCR(qPCR)检测干扰效果。噻唑蓝(MTT)实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,免疫印迹试验检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3、活化的(Cleaved)Caspase-3、B细胞淋巴瘤/白血病(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)水平。结果与对照组相比,OGD模型组、siRNA-NC组、siRNA-Trx1组Trx1 mRNA表达水平显著增加(P0.05),Bcl-2蛋白显著下降(P0.05),Cleaved Caspase-3、Bax蛋白水平显著增加(P0.05);与OGD模型组相比,siRNA-NC组星形胶质细胞的增殖、凋亡及凋亡蛋白水平无显著变化(P0.05),siRNA-Trx1组细胞的增殖显著降低(P0.05),凋亡显著增加(P0.05),Bcl-2蛋白水平显著降低(P0.05),Cleaved Caspase-3、Bax蛋白水平显著增加(P0.05)。结论 Trx1可促进氧糖剥夺损伤的星形胶质细胞增殖、抑制其凋亡,其作用机制可能与调控Bcl-2/Bax/Cleaved Caspase-3信号通路有关。     

神经节苷脂联合尼莫地平对脑缺血半暗带细胞凋亡及凋亡蛋白Bcl-2/Bax的影响

目的 观察神经节苷脂GM1联合尼莫地平治疗对大鼠脑缺血再灌注损伤后缺血半暗带神经细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax的影响.方法 36只清洁级健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、药物治疗组.线栓法制备大脑中动脉Bcl-2/Bax缺血再灌注模型(MCAO模型),缺血2 h再灌注6 h,12 h,24 h,72 h.采用TUNEL法检测神经细胞凋亡,免疫组织化学法染色检测Bcl-2、Bax蛋白,并进行统计学分析.结果 与模型组比较,药物治疗组神经细胞凋亡计数随再灌注时间的延长显著减少(P<0.05).药物治疗组随再灌注时间延长,缺血半暗带区Bcl-2表达逐渐增强、以及Bax表达逐渐减弱,缺血2 h再灌注12 h后,Bcl-2/Bax比值达到高峰,与模型组比较有统计学意义(P<0.05).结论 在脑缺血半暗带区,神经节苷脂联合尼莫地平干预治疗,通过上调Bcl-2表达,以及下调Bax表达,能够减少神经细胞凋亡,从而发挥神经细胞保护作用.     

黄芪注射液减轻缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元凋亡的机制

目的探讨黄芪注射液减轻缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元凋亡的作用机制。方法取体外无血清原代培养8 d的大鼠海马神经元,采用随机数表法分为A组:正常对照组、B组:模型组(缺氧缺糖/复氧复糖组)、C组:黄芪注射液溶剂对照组、D组:黄芪注射液组、E组:二甲基亚砜(DMSO)组、F组:Bax抑制剂组、G组:Bax激动剂组、H组:Bax抑制剂+黄芪注射液组、I组:Bax激动剂+黄芪注射液组。各组除A组均经0.5 h缺氧缺糖,分别采用免疫组化法和RT-PCR法对复氧复糖后0、0.5、2、6、24、72、120 h的Bcl-2、Bax及Caspase-3 mRNA的表达进行检测和比较。结果各组海马神经元除0 h外,其他时间点的Bcl-2水平均高于A组,且各组Bcl-2水平均随时间延长而增高,2 h达到顶峰。除0 h外,其他各时间点H组大鼠海马神经元的Bcl-2水平均显著高于其他组(P<0.05),其次为F组、D组、I组、G组、E组、B/C组、A组,且B组与C组无显著差异(P>0.05)。各组大鼠海马神经元除0 h外,其他各时间点的Bax水平均低于A、B组,且各组均随时间延长而增高,6 h达到顶峰,各组大鼠海马神经元除0 h外,其他各时间点的Caspase-3 mRNA阳性神经元百分率均高于A组,且各组均随时间延长而增高,24 h达到顶峰。除0 h外,其他各时间点B组Bcl-2水平和Caspase-3 mRNA阳性神经元百分率均显著高于其他组(P<0.05),其次为E组、G组、I组、D组、F组、H组,且B组与C组各时间点比较无显著差异(P>0.05)。结论黄芪注射液能够抑制缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元Bax蛋白的表达,提高Bcl-2蛋白表达,抑制缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元凋亡;且Bax激动剂能够加速缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元凋亡,Bax抑制剂能够减轻缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元凋亡。     

HSP70蛋白在神经元样PC12细胞氧糖剥夺后的表达变化

目的 探讨神经细胞氧糖剥夺(OGD)造模后PC12细胞凋亡和热休克蛋白(HSP)70水平,评价OGD模型.方法 利用PC12细胞,经NGF刺激诱导向神经细胞分化,利用OGD建立神经细胞OGD模型;利用MTT法、共聚焦显微镜鉴定PC12细胞转化为神经元样细胞及OGD模型的建立,Western印迹检测OGD后HSP70蛋白的表达.结果 应用终浓度50 ng/ml NGF的DMEM完全培养基培养PC12细胞,随培养时间的增加细胞呈典型的神经元形态.微管相关蛋白(MAP)2免疫荧光细胞化学染色呈强阳性;建立OGD后神经元出现不同程度的损伤、坏死及凋亡,随OGD时间延长存活率逐渐降低、凋亡率升高、HSP70蛋白表达增加.结论 NGF有效地诱导PC12细胞转化为神经细胞,OGD可以有效诱导HSP70表达.     

Bcl-2和Bax在多巴胺诱导PC12细胞凋亡中的作用

目的探讨多巴胺诱导PC12细胞凋亡的可能机制。方法流式细胞仪检测PC12细胞的凋亡率及Bcl-2和Bax蛋白的表达率。结果多巴胺诱导PC12细胞凋亡,两者间呈明显的量效和时效关系。0.45mmol/L多巴胺作用24h,细胞的凋亡率为53.3%±3.1%。在凋亡过程中,Bcl-2蛋白表达显著降低,Bax蛋白表达随之增高。诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)抑制剂和半胱氨酸蛋白酶3(CPP32)抑制剂对抗多巴胺诱导PC12细胞的凋亡作用与Bcl-2蛋白增加、Bax蛋白降低有关。结论Bcl-2和Bax蛋白是多巴胺诱导PC12细胞凋亡的重要调节蛋白,iNOS和CPP32在凋亡过程中可能具有重要作用。     

JNK/MAPK通路在结核杆菌感染的巨噬细胞凋亡、自噬中的作用机制研究

目的探讨c-Jun N端激酶(JNK)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路在结核杆菌感染的巨噬细胞凋亡、自噬中的作用机制研究。方法体外培养小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞建立卡介苗结核分枝杆菌(BCG)细胞感染模型,将BCG感染的RAW264.7细胞使用JNK抑制剂SP600125处理,将细胞随机分为对照组、BCG组、对照+SP600125组、BCG+SP600125组;PCR法检测Bax、Bcl-2、caspase-3表达情况;吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)染色检测各组细胞自噬情况;噻唑蓝法(MTT法)检测各组细胞存活率变化情况;流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;蛋白印迹分析法检测各组细胞JNK、p-JNK、LC3、Beclin-1、P62蛋白表达变化。结果与对照组相比,BCG组RAW264.7细胞中JNK蛋白及磷酸化表达水平、细胞自噬水平、凋亡率、Bax、caspase-3 mRNA表达水平、LC3、Beclin-1蛋白表达水平显著升高,细胞存活率、Bcl-2 mRNA表达水平、P62蛋白表达水平显著降低,差异有统计学意义(P0.05);与BCG组相比,BCG+SP600125组JNK蛋白及磷酸化表达水平、细胞自噬水平、凋亡率、Bax、caspase-3 mRNA表达水平及LC3、Beclin-1蛋白表达水平显著降低,细胞存活率、Bcl-2 mRNA表达水平、P62蛋白表达水平显著升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论结核杆菌感染可抑制巨噬细胞增殖、诱导巨噬细胞凋亡与自噬,可能与激活JNK/MAPK通路有关。     

脑通汤对缺氧/复氧大鼠海马神经元Bcl-2、Bax和Caspase-3表达的影响

目的探讨脑通汤对缺氧/复氧(H/R)大鼠海马神经元Bcl-2、Bax和半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3表达的影响及防治海马神经元凋亡的作用机制。方法取培养9 d的海马神经元,随机分为正常细胞组、H/R模型组、正常血清组、脑通汤大、中、小剂量含药血清组。除正常细胞组以外,各组均缺氧24 h再复氧2 h造模。采用免疫组化检测海马神经元Bcl-2、Bax蛋白表达;实时荧光定量PCR法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3基因的表达。结果免疫组化显示:与正常细胞比较,模型组Bcl-2蛋白表达下降、Bax蛋白表达明显升高、Bcl-2/Bax比值下调(P0.05)。与模型组比较,脑通汤大、中、小剂量含药血清组Bcl-2蛋白表达及Bcl-2/Bax比值明显增高,Bax蛋白表达明显下降,呈剂量依赖性(P0.05);但正常血清组上述指标无显著变化(P0.05)。实时荧光定量PCR显示:Bcl-2、Bax mRNA趋势同蛋白表达一致,Caspase-3 mRNA趋势同Bax mRNA表达一致。结论脑通汤可通过上调Bcl-2蛋白及基因表达和Bcl-2/Bax比值,抑制Bax及Caspase-3的过度表达,从而抑制H/R海马神经元凋亡。     

调控自噬对H9c2心肌细胞缺氧／复氧损伤的影响

目的探讨调控自噬水平对H9c2心肌细胞缺氧／复氧（H／R）损伤的影响及意义。方法将H9c2心肌细胞缺氧2h／复氧4h,建立H／R损伤模型。以3-甲基腺嘌呤（3-MA）为自噬特异抑制剂和雷帕霉素为自噬增强剂,试验随机分为四组：正常对照组（C组）、H／R组、H／R＋100mol／L3-MA组（M＋H／R组）、H／R＋100nmol／L雷帕霉素（R＋H／R组）,应用MTT法检测细胞活力,透射电镜检测心肌细胞自噬小体,流式细胞技术检测细胞凋亡比例,Westernblot法检测自噬相关蛋白LC3、Beclin1,凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及下游活性片段Caspase-9、Caspase-3蛋白表达。结果H／R组明显诱导H9c2心肌细胞自噬发生、细胞活力下降、凋亡增加（P〈O．01）．Westernblot检测发现,Bax、Caspase-9、Caspase-3活性片段蛋白表达明显增加,Bcl-2表达明显抑制,Bax／Bcl-2比值、活化蛋白Caspase-3、Caspase-9表达增加（P〈O．01）;M＋H／R组H／R损伤作用明显减弱,线粒体凋亡通路及下游蛋白表达抑制（P〈O．01）;而R＋H／R组线粒体凋亡通路进一步激活,促进细胞凋亡发生（P〈O．01）。结论自噬在H9c2心肌细胞H／R损伤中起到致命性作用,抑制自噬可保护心肌细胞H,R氧化应激损伤,其机制与抑制线粒体凋亡通路有关。